丝裂霉素C在制备抗抑郁药物中的应用

丝裂霉素c在制备抗抑郁药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种丝裂霉素c在制备抗抑郁药物中的应用。


背景技术：

2.抑郁症是世界第四大疾病，我国对抑郁症的医疗防治还处在识别率低的局面，地级市以上的医院对其识别率不足20%，只有不到10%的患者接受了相关的药物治疗；此外，抑郁症的发病（和自杀事件）已开始出现低龄（大学，乃至中小学生群体）化趋势。
3.目前一线抗抑郁药物主要包括氟西汀、帕罗西汀、舍曲林、氟伏沙明和西酞普兰，靶向五羟色胺和去甲肾上腺素途径。虽然在一定程度上可以缓解抑郁症状，但是存在停止治疗后易复发等局限性。因而，获取一种能够通过降低炎症水平缓解抑郁且副作用小的药物至关重要。
4.丝裂霉素c是从头状链霉菌培养液中分离提取的一种广谱抗肿瘤抗生素，对多种癌症有抗癌作用，其作用原理是通过解聚细胞内的dna，同时阻碍其复制，进而抑制肿瘤细胞分裂。抗生素的抗菌、抗感染活性已经在临床上广为应用，除此之外，抗生素还具有一系列神经保护功能，比如预防神经感染的发生，防止线粒体介导的细胞色素c的释放，阻止小神经胶质细胞的激活和降低谷氨酸蓄积导致的细胞毒性等。抗生素对于部分类型的神经类疾病以及精神失常具有潜在的治疗意义，例如脑缺血造成的神经损伤类精神疾病、抑郁症和精神分裂症等。目前尚未有丝裂霉素c在抗抑郁方面的报道。
5.申请公布号cn201610118928.9的中国发明专利申请公开了用于抗肿瘤的人参总皂苷提取物与丝裂霉素c联合用药方案，提供人参总皂苷提取物在体外人非小细胞肺癌细胞株a549和肝癌细胞株hepg2中增强丝裂霉素c和顺铂的抗非小细胞肺癌和肝癌的药效，同时在体内a549裸鼠移植瘤模型上进行了验证，而对于丝裂霉素c通过抑制炎症抗抑郁的治疗效果并不清楚，与本专利所述权利要求无关。


技术实现要素：

6.本技术的目的在于提供一种丝裂霉素c在制备抗抑郁药物中的应用，旨在解决缺乏一种能够通过降低炎症水平缓解抑郁症状且副作用小的药物的现有技术问题。
7.第一方面，本技术提供了丝裂霉素c在制备抗抑郁药物中的应用。
8.进一步，所述丝裂霉素c通过提高大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤pc12细胞活力或下调炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6的表达水平，降低炎症反应进而发挥抗抑郁作用。
9.进一步，下调炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6的表达水平的步骤中，包括：所述丝裂霉素c与所述白细胞介素-1β的氨基酸lys-65、ser-43、leu-62、tyr-90、pro-87或所述白细胞介素-6的氨基酸ala-152、arg-154中的至少一种氨基酸结合，进而调节白细胞介素-1β或白细胞介素-6的表达量或其编码蛋白的浓度。
10.进一步，所述丝裂霉素c作为所述抗抑郁药物的唯一活性成分。
11.进一步，所述抗抑郁药物包括丝裂霉素c药学上可接受的盐、共晶、立体异构体、前药、溶剂化物、代谢产物中的至少一种。
12.进一步，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅料。
13.进一步，所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂、稳定剂、香味剂、甜味剂、色素中的至少一种。
14.进一步，所述抗抑郁药物可被制成任意一种药学上可接受的剂型，所述剂型包括乳液、霜剂、丸剂、滴丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、涂剂、巴布剂、喷雾剂、口服液、汤剂、注射剂、缓释制剂或控释制剂中的任意一种。
15.进一步，所述丝裂霉素c的药物浓度为2.5~100 nm。
16.第二方面，本技术提供了一种抗抑郁药物，所述抗抑郁药物包括丝裂霉素c或其药学上可接受的盐、共晶、立体异构体、前药、溶剂化物、代谢产物。
17.本技术第一方面提供的丝裂霉素c在制备抗抑郁药物中的应用。丝裂霉素c能够有效抑制因皮质酮诱导引起的pc12细胞炎症水平升高，缓解炎症反应。皮质酮诱导的抑郁模型可模拟抑郁症的病理过程，能反映抗抑郁的真实疗效，为抗抑郁提供新的策略和临床研究依据，进一步为指导抑郁症临床用药提供依据。
18.本技术第二方面提供的抗抑郁药物，所述抗抑郁药物包括丝裂霉素c或其药学上可接受的盐、共晶、立体异构体、前药、溶剂化物、代谢产物。在使用过程中，丝裂霉素c能够有效抑制因皮质酮诱导引起的pc12细胞炎症水平升高，缓解炎症反应，进而达到抗抑郁效果；本专利为抗抑郁提供新的治疗策略并进一步指导抑郁症的临床合理用药。
附图说明
19.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
20.其中：图1为丝裂霉素c在不同浓度下对pc12细胞活力的影响；图2为丝裂霉素c在不同浓度下对皮质酮诱导的pc12细胞损伤的细胞活力的影响；图3为丝裂霉素c在不同浓度下对皮质酮诱导的pc12细胞炎症因子白细胞介素-1β水平的影响；图4为丝裂霉素c在不同浓度下对皮质酮诱导的pc12细胞炎症因子白细胞介素-6水平的影响；图5为丝裂霉素c与炎症因子白细胞介素-1β分子对接的结果；图6为丝裂霉素c与炎症因子白细胞介素-6分子对接的结果。
具体实施方式
21.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他
实施例，都属于本发明保护的范围。
22.本技术实施例第一方面提供了丝裂霉素c在制备抗抑郁药物中的应用。
23.本技术实施例第一方面提供的丝裂霉素c在制备抗抑郁药物中的应用。丝裂霉素c能够有效抑制因皮质酮诱导引起的pc12细胞炎症水平升高，缓解炎症反应。皮质酮诱导的抑郁模型可模拟抑郁症的病理过程，能反映药物抗抑郁的疗效，本专利可为抗抑郁提供新的治疗策略并进一步指导抑郁症的临床合理用药。
24.在一些实施例中，丝裂霉素c分子式为c
15h18
n4o5，分子量为334.3，结构如式（i）所示：式（i）。
25.在一些实施例中，所述丝裂霉素c通过提高大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤pc12细胞活力或下调炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6的表达水平，降低炎症反应进而发挥抗抑郁作用。
26.在一些实施例中，所述药物通过降低炎症反应来抗抑郁。
27.在一些实施例中，所述降低炎症反应是提高大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤pc12细胞活力。
28.在一些实施例中，所述降低炎症反应是下调炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6的表达水平。
29.在一些实施例中，下调炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6的表达水平的步骤中，包括：所述丝裂霉素c与所述白细胞介素-1β的氨基酸lys-65、ser-43、leu-62、tyr-90、pro-87或所述白细胞介素-6的氨基酸ala-152、arg-154中的至少一种氨基酸结合，进而调节白细胞介素-1β或白细胞介素-6的表达量或其编码蛋白的浓度。
30.在一些实施例中，所述丝裂霉素c作为所述抗抑郁药物的唯一活性成分。
31.在一些实施例中，所述抗抑郁药物包括丝裂霉素c药学上可接受的盐、共晶、立体异构体、前药、溶剂化物、代谢产物中的至少一种。
32.在一些实施例中，所述抗抑郁药物还包括药学上可接受的辅料。
33.在一些实施例中，所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、润滑剂、稳定剂、香味剂、甜味剂、色素中的至少一种。
34.在一些实施例中，所述抗抑郁药物可被制成任意一种药学上可接受的剂型，所述剂型包括乳液、霜剂、丸剂、滴丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、涂剂、巴布剂、喷雾剂、口服液、汤剂、注射剂、缓释制剂或控释制剂中的任意一种。
35.在一些实施例中，所述丝裂霉素c的药物浓度为2.5~100 nm。
36.本技术实施例第二方面提供了一种抗抑郁药物，所述抗抑郁药物包括丝裂霉素c或其药学上可接受的盐、共晶、立体异构体、前药、溶剂化物、代谢产物。
37.本技术实施例第二方面提供的抗抑郁药物，所述抗抑郁药物包括丝裂霉素c或其药学上可接受的盐、共晶、立体异构体、前药、溶剂化物、代谢产物。在使用过程中，丝裂霉素c能够有效抑制因皮质酮诱导引起的pc12细胞炎症水平升高，缓解炎症反应，进而达到抗抑郁效果；为抗抑郁提供新的策略和临床研究依据，进一步为指导抑郁症临床用药提供依据。
38.下面提供具体实施例进行说明。
39.实施例中使用的细胞系：pc12细胞购自上海中乔新舟生物科技有限公司，培养体系用含10％胎牛血清和1%双抗的rpmi-1640培养基，于37℃，5％co2细胞培养箱中培养。
40.实施例中使用的药物：丝裂霉素c，由上海源叶生物科技有限公司提供，产品批号：t43319。
41.实施例1（一）实验方法使用的皮质酮诱导的pc12细胞损伤模型，为公认较理想的抑郁症体外模型，可模拟抑郁症的病理状态，适用于考察丝裂霉素c抗抑郁的作用特点。
42.本发明采用cck8法，评价了丝裂霉素c对皮质酮损伤pc12细胞的保护活性。pc12细胞经胰酶消化后用完全培养基制成每毫升含细胞个数为1
×
105的悬液，接种于96孔培养板，每孔100μl，放入37℃，5％co2孵箱培养。24h后弃去细胞液，空白组加入完全培养基，给药组加入浓度分别为0.1, 0.5, 2.5, 5,10,20, 40, 80, 160 μm丝裂霉素c的完全培养基，每个浓度设6个复孔；孵育24h后每孔再加入10μl cck8溶液，继续培养1.5 h后，450nm下用酶标仪测定各孔的吸光值（od值），计算各组的细胞存活率。
43.同上铺板培养24h后，弃去细胞液，空白组和模型组加入完全培养基，给药组加入浓度分别为2.5, 5, 10, 25, 50, 100nm丝裂霉素c的完全培养基，每个浓度设3个复孔；孵育24h后弃培养基，空白组加入完全培养基，模型组和给药组加入含150μm皮质酮的完全培养基；孵育24h后每孔再加入10μl cck8溶液，继续培养1.5 h后，450nm下用酶标仪测定各孔的吸光值（od值），计算各组的细胞存活率。
44.pc12细胞经胰酶消化后用完全培养基制成每毫升含细胞个数为1
×
105的悬液，接种于24孔培养板，每孔500μl，放入37℃，5％co2孵箱培养。24h后弃去细胞液，空白组和模型组加入完全培养基，给药组加入浓度分别为2.5, 5, 10nm丝裂霉素c的完全培养基，每个浓度设3个复孔。孵育24h后弃培养基，空白组加入完全培养基，模型组和给药组加入含150μm皮质酮的完全培养基，孵育24h后取细胞上清液elisa法检测炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6水平。
45.通过pdb数据库下载白细胞介素-1β和白细胞介素-6的3d结构的pdb文件；从pubchem数据库获取丝裂霉素c2d结构的mol2文件；运用autodocktools和openbabel软件完成化合物3d结构转化、化合物及靶蛋白格式转换、配体提取与格式转换、蛋白质进行去水、加氢等预处理操作，通过autodock软件对丝裂霉素c和白细胞介素-1β、白细胞介素-6分别进行分子对接，确定其结合靶点。
46.（二）实验结果2.1丝裂霉素c浓度低于0.5μm时对pc12细胞无明显毒性。
47.丝裂霉素c对pc12细胞活力影响结果见图1（
***
p《0.001vs空白对照组）。结果表明，当浓度低于0.5μm时，丝裂霉素c对pc12细胞无明显的细胞毒性，为后续实验中丝裂霉素c的使用浓度提供了安全范围参考。
48.2.2丝裂霉素c能显著改善皮质酮诱导的pc12细胞损伤。
49.丝裂霉素c对皮质酮损伤pc12细胞的保护作用结果见图2（
###
p《0.001vs空白对照组；
**
p《0.01，
***
p《0.001vs模型组）。结果表明，在2.5, 5, 10, 25 nm浓度下，给药组的细胞存活率较模型组均有一定程度升高，存在显著性差异，说明该化合物能有效缓解皮质酮诱导的pc12细胞损伤。
50.2.3丝裂霉素c能显著降低皮质酮诱导的pc12细胞炎症水平。
51.丝裂霉素c对皮质酮诱导的pc12细胞炎症因子白细胞介素-1β影响结果见图3，对炎症因子白细胞介素-6影响结果见图4（
#
p《0.05，
##
p《0.01vs空白对照组；
*
p《0.05vs模型组）。模型组与空白对照组相比，炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6水平显著升高；而与模型组相比，丝裂霉素c给药组炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6有明显的下降，表现显著差异性；说明采用丝裂霉素c给药处理，对皮质酮损伤的pc12细胞有明显抗炎效果。
52.2.4丝裂霉素c与炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6可稳定结合。
53.丝裂霉素c与白细胞介素-1β分子对接结果见图5，丝裂霉素c与白细胞介素-6分子对接结果见图6。丝裂霉素c与白细胞介素-1β的lys-65、ser-43、leu-62、tyr-90及pro-87或白细胞介素-6的氨基酸ala-152及arg-154存在相互作用，进一步验证了丝裂霉素c能够结合于白细胞介素-1β和白细胞介素-6，发挥抗炎作用进而抗抑郁。
54.综上，本技术提供的丝裂霉素c在制备抗抑郁药物中的应用，丝裂霉素c能够有效抑制因皮质酮诱导引起的pc12细胞炎症水平升高，缓解炎症反应。皮质酮诱导的抑郁模型可模拟抑郁症的病理过程，该模型可用于抗抑郁药物的药效评价和机制探究。本专利可为抑郁症的临床用药提供科学依据。
55.以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。