一种小鼠毛囊干细胞的分离培养方法与流程

技术特征：
1.一种小鼠毛囊干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：s1，分离小鼠毛囊组织；所述小鼠为出生24小时内的小鼠s2，酶解消化组织；s3，差速贴壁筛选毛囊干细胞；s4，小鼠毛囊干细胞的培养和传代；其中，所述s1，分离小鼠毛囊组织的方法为：s11，剪取小鼠触须皮肤组织，放入组织暂存液，置于冰上；s12，酒精洗涤触须皮肤组织，组织清洗液浸泡；s13，在体式显微镜下解剖出完整的毛囊组织，加入组织暂存液，置于冰上。2.根据权利要求1所述的一种小鼠毛囊干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述s1，分离小鼠毛囊组织的方法为：s11，剪取小鼠触须皮肤组织，放入离心管中，加入组织暂存液，离心管置于冰上；s12，触须皮肤组织使用75％酒精漂洗3次，每次30秒，使用组织清洗液再次浸泡3次，每次2-3分钟；s13，将触须部组织修剪成0.5cm
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0.5cm大小，在体式显微镜下剪除上端毛干及毛球部，解剖出完整的毛囊组织，放入离心管中，加入组织暂存液，离心管置于冰上。3.根据权利要求1或2所述的一种小鼠毛囊干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述组织暂存液为dmem基础培养基、5％青链霉素、50μg/ml庆大霉素的混合；所述组织清洗液为pbs、5％青链霉素、50μg/ml庆大霉素的混合。4.根据权利要求1所述的一种小鼠毛囊干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述s2，酶解消化组织的方法为：s21，中性蛋白酶消化；s22，胰蛋白酶与乙二胺四乙酸钠消化。5.根据权利要求1或4所述的一种小鼠毛囊干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述s2，酶解消化组织的方法为：s21，中性蛋白酶消化：用dmem基础培养基漂洗毛囊组织，加入dispaseii溶液，4℃冰箱中过夜消化，离心后舍弃上清液，用dmem基础培养基漂洗；s22，胰蛋白酶与乙二胺四乙酸钠消化：加入0.125％trypsin-0.01％edta溶液，37℃水浴震荡消化，静置，吸取上清液，置于含dmem基础培养基 10％fbs离心管中；余下的未消化的毛囊组织重复上次操作，直到移液器吹打，肉眼可见毛囊组织被分解成絮状物,得到细胞混合溶液。6.根据权利要求1所述的一种小鼠毛囊干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述s3，差速贴壁筛选毛囊干细胞的方法为：s31，过滤组织块、洗涤所述细胞混合溶液；s32，用ⅳ型胶原蛋白包被细胞培养皿，将洗涤后的细胞混合液用k-fsm无血清培养基重悬后接种于所述包被细胞培养皿中，置于37℃，5％co2培养箱中培养，2h后更换为培养基为含10％fbs的k-fsm培养基，得到p0代细胞。7.根据权利要求1所述的一种小鼠毛囊干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述s4，小鼠毛囊干细胞的培养和传代的方法为：
s41，将分离得到p0代细胞用含10％fbs的k-fsm培养基在37℃、5％co2培养箱中继续培养至细胞密度达到80％以上；s42,弃去培养上清，用pbs或生理盐水清洗；s43,加入胰酶，37℃消化；s44，显微镜下观察大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，加入k-fsm完全培养基终止消化，并收集细胞悬液；s45，细胞悬液离心，弃上清；s46，用k-fsm完全培养基重悬细胞并接种于新的t25瓶中，得到p1代细胞。

技术总结
本发明涉及一种毛囊干细胞分离培养技术，属于生物技术领域。所述方法包括以下步骤：S1，分离小鼠毛囊组织；所述小鼠为出生24小时内的小鼠；S2，酶解消化组织；S3，差速贴壁筛选毛囊干细胞；S4，小鼠毛囊干细胞的培养和传代。该方法综合了显微分离技术、酶解法、差速贴壁筛选法，比传统的毛囊干细胞分离方法更适用于小鼠毛囊组织的分离提取，来获取纯度更高、活性更好，干性更强的小鼠毛囊干细胞。干性更强的小鼠毛囊干细胞。


技术研发人员：胡清云 刘彩云
受保护的技术使用者：湖南丰晖生物科技有限公司
技术研发日：2022.05.31
技术公布日：2022/7/15