HIV病毒抗体/抗原诊断试剂盒及其制备方法与流程

hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒及其制备方法
技术领域
1.本发明属于hiv病毒抗体/抗原诊断技术领域，特别是涉及一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒及其制备方法。


背景技术：

2.获得性免疫缺陷综合征，又称艾滋病(aids)，是由人类免疫缺陷病毒 (hiv)感染所引起的一种免疫缺陷性疾病。由于该病目前尚无有效的治疗方法和预防疫苗，目前正以大约1.4万人受感染的速度扩大流行。hiv感染诊断进而识别出早期感染的人群是aids预防控制工作的首要任务。因此，建立敏感实用的检测方法对于检测、诊断或血液筛查，控制艾滋病的流行就显得非常重要。
3.现有检测hiv的方法有聚合酶链式反应、hiv抗体检测和p24抗原检测。其缺点是现有的诊断试剂盒是只能检测抗体或抗原中的一种，二者不能同时检测，使检测的窗口期较长，并容易出现漏检情况。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒及其制备方法，解决了现有检测hiv的方法有聚合酶链式反应、hiv抗体检测和p24抗原检测。其缺点是现有的诊断试剂盒是只能检测抗体或抗原中的一种，二者不能同时检测，使检测的窗口期较长，并容易出现漏检情况的技术问题。
5.为达上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
6.一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒，包括以下组分：
7.用hiv抗原和p24单克隆抗体包被的预包被酶联板、用生物素(biotin) 标记的兔抗p24多克隆抗体、用酶标记的hiv抗原、洗涤液、显色液a、显色液b、终止液、稀释液；
8.阴性对照，阴性对照液为正常人血清；
9.hiv抗体阳性对照血清；
10.p24抗原阳性对照血清。
11.可选的，酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，洗涤液选用含有吐温的磷酸盐缓冲液的洗涤液，显色液a选用含有过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液的显色液，显色液b选用含有四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液显色液。
12.可选的，酶所作用的化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，终止液选用含有硫酸溶液的终止液，稀释液选用含有磷酸盐缓冲液的样品稀释液。
13.可选的，1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2
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螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3
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磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、cspd或 cdp-star。
14.可选的，hiv重组抗原为gp41、gp120或gp36。
15.可选的，终止液为2m硫酸，样品稀释液为含有酪蛋白的磷酸盐缓冲液。
16.可选的，hiv抗体阳性对照血清为含有hiv抗体的人血清，p24抗原阳性对照血清为
二氧乙烷、3-(2
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螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3
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磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、cspd或cdp-star；
36.洗涤液，洗涤液选用含有吐温的磷酸盐缓冲液的洗涤液；
37.显色液a，显色液a选用含有过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液的显色液；
38.显色液b，显色液b选用含有四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液显色液；
39.终止液，终止液选用含有硫酸溶液的终止液，终止液为2m硫酸，样品稀释液为含有酪蛋白的磷酸盐缓冲液；
40.稀释液，稀释液选用含有磷酸盐缓冲液的样品稀释液；
41.阴性对照，阴性对照液为正常人血清；
42.hiv抗体阳性对照血清，hiv抗体阳性对照血清为含有hiv抗体的人血清；
43.p24抗原阳性对照血清，p24抗原阳性对照血清为含p24蛋白的人血清。
44.一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
45.s1，将包被用hiv抗原和鼠抗p24单克隆抗体加至碳酸盐缓冲液中混匀，加至酶联板内，每孔100微升，孵育过夜；
46.s2，先用洗涤液洗涤酶联板，再加入含有酪蛋白的tris缓冲液，在37℃温度下孵育2小时；
47.s3，弃去酶联板孔内液体，干燥酶联板，完成用hiv抗原和p24单克隆抗体包被的预包被酶联板的制作；
48.s4，将兔抗p24多克隆抗体和生物素进行标记，即为生物素标记的兔抗p24多克隆抗体；
49.s5，将标记用hiv重组抗原和酶用改良过碘酸钠法结合在一起，即为用酶标记的hiv抗原结合物。
50.本发明通过将兔抗p24多克隆抗体用酶标记，从而起到信号放大作用，大大提高了p24抗原检测的灵敏度，用于检测hiv感染者血中的p24抗原、 hiv抗体，较现用技术只能检测hiv抗体的方法，缩短了检测的窗口期，显著提高了检测准确率、灵敏度，减小了输血后hiv感染的机率。
51.上述实施例可以相互结合。
52.本发明不局限于上述实施方式，任何人应得知在本发明的启示下做出的结构变化，均落入本发明的保护范围之内。
53.本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。


技术特征：
1.一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒，其特征在于，包括以下组分：用hiv抗原和p24单克隆抗体包被的预包被酶联板、用生物素(biotin)标记的兔抗p24多克隆抗体、用酶标记的hiv抗原、洗涤液、显色液a、显色液b、终止液、稀释液；阴性对照，阴性对照液为正常人血清；hiv抗体阳性对照血清；p24抗原阳性对照血清。2.如权利要求1所述的一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒，其特征在于，酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，洗涤液选用含有吐温的磷酸盐缓冲液的洗涤液，显色液a选用含有过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液的显色液，显色液b选用含有四甲基联苯胺的柠檬酸盐缓冲液显色液。3.如权利要求1所述的一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒，其特征在于，酶所作用的化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺，终止液选用含有硫酸溶液的终止液，稀释液选用含有磷酸盐缓冲液的样品稀释液。4.如权利要求3所述的一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒，其特征在于，1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2
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螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3
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磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、cspd或cdp-star。5.如权利要求1所述的一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒，其特征在于，hiv重组抗原为gp41、gp120或gp36。6.如权利要求1所述的一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒，其特征在于，终止液为2m硫酸，样品稀释液为含有酪蛋白的磷酸盐缓冲液。7.如权利要求1所述的一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒，其特征在于，hiv抗体阳性对照血清为含有hiv抗体的人血清，p24抗原阳性对照血清为含p24蛋白的人血清。8.一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：s1，将包被用hiv抗原和鼠抗p24单克隆抗体加至碳酸盐缓冲液中混匀，加至酶联板内；s2，先用洗涤液洗涤酶联板，再加入含有酪蛋白的tris缓冲液；s3，弃去酶联板孔内液体，干燥酶联板，完成用hiv抗原和p24单克隆抗体包被的预包被酶联板的制作；s4，将兔抗p24多克隆抗体和生物素进行标记，即为生物素标记的兔抗p24多克隆抗体；s5，将标记用hiv重组抗原和酶用改良过碘酸钠法结合在一起，即为用酶标记的hiv抗原结合物。9.如权利要求8所述的一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，s1中还包括每孔100微升，孵育过夜。10.如权利要求8所述的一种hiv病毒抗体/抗原诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，s2中还包括在37℃温度下孵育2小时。

技术总结
本发明公开了一种HIV病毒抗体/抗原诊断试剂盒及其制备方法，涉及HIV病毒抗体/抗原诊断技术领域。本发明包括用HIV抗原和P24单克隆抗体包被的预包被酶联板、用生物素(Biotin)标记的兔抗P24多克隆抗体、用酶标记的HIV抗原、洗涤液、显色液A、显色液B、终止液、稀释液，阴性对照，阴性对照液为正常人血清；HIV抗体阳性对照血清；P24抗原阳性对照血清。本发明通过将兔抗P24多克隆抗体用酶标记，从而起到信号放大作用，大大提高了P24抗原检测的灵敏度，用于检测HIV感染者血中的P24抗原、HIV抗体，较现用技术只能检测HIV抗体的方法，缩短了检测的窗口期，显著提高了检测准确率、灵敏度，减小了输血后HIV感染的机率。后HIV感染的机率。后HIV感染的机率。


技术研发人员：庄伟亮
受保护的技术使用者：江苏诺迈博生物医药科技有限公司
技术研发日：2022.04.01
技术公布日：2022/7/15