il-2缀合物和治疗自身免疫性疾病的使用方法
1.本技术要求2019年9月10日提交的美国临时申请号62/898,478、2019年9月14日提交的美国临时申请号62/900,488、2019年11月5日提交的美国临时申请号62/930,987、2019年12月23日提交的美国临时申请号62/953,075和2020年6月22日提交的美国临时申请号63/042,393的优先权权益，将其中每一个的内容出于所有目的通过引用以其整体并入本文。序列表
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背景技术：
和
技术实现要素：
3.不同的t细胞群调节免疫系统以维持免疫稳态和耐受性。例如，调节性t(treg)细胞通过防止病理性自身反应性来防止免疫系统的不适当反应。在一些情形下，不同t细胞群的调节为疾病或适应证的治疗提供了选择。
4.本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(i)的结构替代：其中：z是ch2并且y是y是ch2并且z是z是ch2并且y是或者y是ch2并且z是w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且
x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步提供了il-2缀合物，其中z是ch2并且y是本文进一步提供了il-2缀合物，其中y是ch2并且z是本文进一步提供了il-2缀合物，其中z是ch2并且y是或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步提供了il-2缀合物，其中z是ch2并且y是并且w是具有选自15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中y是ch2并且z是本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有选自5kda、10kda、20kda、30kda、40kda或50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有5kda的平均分子量。在这里和自始至终，z和y的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有30kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、
a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。
5.本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(i)的结构替代：其中：z是ch2并且y是y是ch2并且z是
z是ch2并且y是或者y是ch2并且z是w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步提供了il-2缀合物，其中z是ch2并且y是本文进一步提供了il-2缀合物，其中y是ch2并且z是本文进一步提供了il-2缀合物，其中z是ch2并且y是本文进一步提供了il-2缀合物，其中z是ch2并且y是并且w是具有选自15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中y是ch2并且z是本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有选自5kda、10kda、20kda、30kda、40kda或50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有5kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有30kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供
了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。
6.本文描述了包含seq id no:34-48和199-213中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg]具有式(ii)或式(iii)的结构或者式(ii)和式(iii)的混合物：
其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在这里和自始至终，式(ii)和/或(iii)的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_peg]是式(ii)和式(iii)的混合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_peg]具有式(ii)的结构：在这里和自始至终，式(ii)的结构包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:34-48中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda
或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:199-213中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:35或200的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_peg]具有式(iii)的结构：式(iii)。在这里和自始至终，式(iii)的结构包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:34-48中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。
本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:199-213中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中w是线性或分支peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中w是线性peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中w是分支peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中w是甲氧基peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性或分支的。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性的。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是分支的。
[0007]
本文描述了包含seq id no:49-63和214-228中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]具有式(ii)或式(iii)的结构或者式(ii)和式(iii)的混合物：物，其中[azk_peg50kda]具有式(ii)或式(iii)的结构或者式(ii)和式(iii)的混合物：其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且
x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:49-63中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:214-228中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:50或215的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]具有式(ii)的结构：式(ii)。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:49-63中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:214-228中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:50或215的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]具有式(iii)的结构：式(iii)。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:49-63中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:214-228中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:50或215的氨基酸序列。
[0008]
本文描述了包含seq id no:64-78和229-243中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg30kda]具有式(ii)或式(iii)的结构，或者是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：
其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:64-78中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:229-243中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:65或230的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_peg30kda]具有式(ii)的结构：式(ii)。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:64-78中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:229-243中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:65或230的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_peg30kda]具有式(iii)的结构：
式(iii)。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:64-78中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:229-243中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:65或230的氨基酸序列。
[0009]
本文描述了包含seq id no:34-48和199-213中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率为约1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率大于1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在
所述il-2缀合物中构成[azk_peg]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率小于1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是线性或分支peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是线性peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是分支peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是甲氧基peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性或分支的。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性的。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是分支的。
[0010]
本文描述了包含seq id no:49-63和214-228中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg50kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率为约1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg50kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率大于1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg50kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率小于1:1。
[0011]
本文描述了包含seq id no:64-78和229-243中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg30kda]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：
其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg30kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率为约1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg30kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率大于1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg30kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率小于1:1。
[0012]
本文描述了包含seq id no:154-168和109-123中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]具有式(iv)或式(v)的结构或者式(iv)和式(v)的混合物：
其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在这里和自始至终，式(iv)和/或(v)的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]是式(iv)和式(v)的混合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]具有式(iv)的结构：式(iv)。在这里和自始至终，式(iv)的结构包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:109-123中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描
述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:155或110的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda和30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]具有式(v)的结构：在这里和自始至终，式(v)的结构包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:109-123中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:155或110的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有5kda的平均分子量的peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有35kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有40kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有45kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有50kda的平均分子量。本文进一步提供了il-2缀合物，其中peg基团具有55kda的平均分子量。本文进一步提供
了il-2缀合物，其中peg基团具有60kda的平均分子量。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是线性或分支peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是线性peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是分支peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是甲氧基peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性或分支的。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性的。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是分支的。
[0013]
本文描述了包含seq id no:169-183和124-138中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg50kda]具有式(iv)或式(v)的结构或者式(iv)和式(v)的混合物：其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:169-183中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:124-138中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:170或125的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_l1_peg50kda]具有式(iv)的结构：
式(iv)。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:169-183中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:124-138中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:170或125的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_l1_peg50kda]具有式(v)的结构：式(v)。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:169-183中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:124-138中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:170或125的氨基酸序列。
[0014]
本文描述了包含seq id no:184-198和139-153中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg30kda]具有式(iv)或式(v)的结构，或者是式(iv)和式(v)的结构的混合物：其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：
x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:184-198中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:139-153中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:185或140的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_l1_peg30kda]具有式(iv)的结构：式(iv)。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:184-198中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:139-153中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:185或140的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中[azk_l1_peg30kda]具有式(v)的结构：式(v)。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:184-198中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:139-153中任一个的氨基酸序列。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:185或140的氨基酸序列。
[0015]
本文描述了包含seq id no:154-168和109-123中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：
其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率为约1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率大于1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率小于1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是线性或分支peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是线性peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是分支peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中w是甲氧基peg基团。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性或分支的。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性的。本文进一步描述了il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是分支的。
[0016]
本文描述了包含seq id no:169-183和124-138中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg50kda]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：
其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg50kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率为约1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg50kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率大于1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg50kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率小于1:1。
[0017]
本文描述了包含seq id no:184-198和139-153中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1 peg30kda]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：
其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg30kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率为约1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg30kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率大于1:1。本文进一步描述了il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg30kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率小于1:1。
[0018]
本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在这里和自始至终，式(vi)和/或(vii)的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自在所述il-2缀合物的氨基酸序列中是k8。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结
构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约75至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约100至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约200至约5000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约500至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约800。
[0019]
本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物替代：其中：
n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在这里和自始至终，式(viii)和/或(ix)的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位
置是t122。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约75至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约100至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约200至约5000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约500至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约800。
[0020]
本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物替代：其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:3内未被替代的氨基酸残基的共价键。在这里和自始至终，式(x)和/或(xi)的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式
(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约75至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约100至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约200至约5000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约500至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约800。
[0021]
本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:3内未被替代的氨基酸残基的共价键。在这里和自始至终，式(xii)和/或(xiii)的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。本文进一步描述了il-2
缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约75至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约100至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约200至约5000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约500至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约800。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约675至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1140。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约450。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约568。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约682。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约795。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约909。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1022。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1136。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1363。
[0022]
本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。
本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约75至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约100至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约200至约5000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约500至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约800。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约675至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1140。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约450。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约568。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约682。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约795。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约909。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1022。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1136。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1363。
[0023]
本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。在一些实施方案中，所述il-2缀合物是其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)
的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约75至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约100至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约200至约5000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约500至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约800。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约675至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1140。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约450。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约568。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约682。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约795。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约909。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1022。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1136。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1363。
[0024]
本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:4内未被替代的氨基酸残基的共价键。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。本文进一步描述了il-2缀合物，其中
式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约75至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约100至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约200至约5000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约500至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约800。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约675至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1140。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约450。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约568。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约682。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约795。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约909。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1022。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1136。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1363。
[0025]
本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:4内未被替代的氨基酸残基的共价键。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中
的位置是n26。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约75至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约100至约1000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约200至约5000。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约500至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约800。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约400至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1370。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约600至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约675至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约680至约1140。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约450。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约568。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约682。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约795。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约909。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1022。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1136。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1250。本文进一步描述了il-2缀合物，其中n是约1363。
[0026]
本文描述了包含seq id no:3或seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代：
其中：m是从0至20的整数；p是从0至20的整数；n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:3或seq id no:4内未被替代的氨基酸残基的共价键。在这里和自始至终，式(xiv)和/或(xv)的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中m、p、n和波浪线含义如上文所述。在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中m、p、n和波浪线含义如上文所述。
[0027]
在一些实施方案中，式(xiv)和式(xv)内手性中心的立体化学是外消旋的，是富含(r)的，是富含(s)的，基本上是(r)，基本上是(s)，是(r)或者是(s)。在一些实施方案中，式(xiv)和式(xv)内手性中心的立体化学是外消旋的。在一些实施方案中，式(xiv)和式(xv)内手性中心的立体化学是富含(r)的。在一些实施方案中，式(xiv)和式(xv)内手性中心的立体化学是富含(s)的。在一些实施方案中，式(xiv)和式(xv)内手性中心的立体化学基本上是(r)。在一些实施方案中，式(xiv)和式(xv)内手性中心的立体化学基本上是(s)。在一些实施方案中，式(xiv)和式(xv)内手性中心的立体化学是(r)。在一些实施方案中，式(xiv)和式(xv)内手性中心的立体化学是(s)。
[0028]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是从0至20、或从1至18、或从1至16、或从1至14、或从1至12、或从1至10、或从1至9、或从1至8、或从1至7、或从1至6、或从1至5、或从1至4、或从1至3、或从1至2。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是2。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是3。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)
和(xv)的化合物中的m是4。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是5。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是6。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是7。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是8。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是9。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是10。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是11。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是12。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是13。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是14。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是15。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是16。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是17。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是18。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是19。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是20。
[0029]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是从1至20、或从1至18、或从1至16、或从1至14、或从1至12、或从1至10、或从1至9、或从1至8、或从1至7、或从1至6、或从1至5、或从1至4、或从1至3、或从1至2。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是2。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是3。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是4。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是5。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是6。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是7。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是8。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是9。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是10。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是11。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是12。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是13。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是14。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是15。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的m是16。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是17。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是18。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是19。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的p是20。
[0030]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的n在从约5至约4600、或从约10至约4000、或从约20至约3000、或从约100至约3000、或从约100至约2900、或从约150至约2900、或从约125至约2900、或从约100至约2500、或从约100至约2000、
或从约100至约1900、或从约100至约1850、或从约100至约1750、或从约100至约1650、或从约100至约1500、或从约100至约1400、或从约100至约1300、或从约100至约1250、或从约100至约1150、或从约100至约1100、或从约100至约1000、或从约100至约900、或从约100至约750、或从约100至约700、或从约100至约600、或从约100至约575、或从约100至约500、或从约100至约450、或从约100至约至约350、或从约100至约275、或从约100至约230、或从约150至约475、或从约150至约340、或从约113至约340、或从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约340至约795、或从约341至约682、或从约568至约909、或从约227至约1500、或从约225至约2280、或从约460至约2160、或从约460至约2050、或从约341至约1820、或从约341至约1710、或从约341至约1250、或从约225至约1250、或从约341至约1250、或从约341至约1136、或从约341至约1023、或从约341至约910、或从约341至约796、或从约341至约682、或从约341至约568、或从约114至约1000、或从约114至约950、或从约114至约910、或从约114至约800、或从约114至约690、或从约114至约575的范围内。
[0031]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是从1至6的整数，p是从1至6的整数，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是从2至6的整数，p是从2至6的整数，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是从2至4的整数，p是从2至4的整数，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是1，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是3，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是4，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是5，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是6，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是7，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、
1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是8，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是9，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是10，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是11，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是12，p是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。
[0032]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的n是选自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546的整数。
[0033]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，当所述il-2缀合物包含seq id no:3时，式(xiv)和(xv)的结构或者式(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置
是l18。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xiv)的结构的量与式(xv)的结构的量的比率为约1:1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xiv)的结构的量与式(xv)的结构的量的比率大于1:1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xiv)的结构的量与式(xv)的结构的量的比率小于1:1。
[0034]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，当所述il-2缀合物包含seq id no:4时，式(xiv)和(xv)的结构或者式(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。
本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xiv)的结构的量与式(xv)的结构的量的比率为约1:1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xiv)的结构的量与式(xv)的结构的量的比率大于1:1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xiv)的结构的量与式(xv)的结构的量的比率小于1:1。
[0035]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中在seq id no:3中被替代的所述氨基酸残基选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130，并且其中n是从100至约1150、或从约100至约1100、或从约100至约1000、或从约100至约900、或从约100至约750、或从约100至约700、或从约100至约600、或从约100至约575、或从约100至约500、或从约100至约450、或从约100至约至约350、或从约100至约275、或从约100至约230、或从约150至约475、或从约150至约340、或从约113至约340、或从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约340至约795、或从约341至约682、或从约568至约909、或从约227至约1500、或从约225至约2280、或从约460至约2160、或从约460至约2050、或从约341至约1820、或从约341至约1710、或从约341至约1250、或从约225至约1250、或从约341至约1250、或从约341至约1136、或从约341至约1023、或从约341至约910、或从约341至约796、或从约341至约682、或从约341至约568、或从约114至约1000、或从约114至约950、或从约114至约910、或从约114至约800、或从约114至约690、或从约114至约575的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的n是选自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、
1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546的整数。
[0036]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中在seq id no:3中被替代的所述氨基酸残基选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131，并且其中n是从100至约1150、或从约100至约1100、或从约100至约1000、或从约100至约900、或从约100至约750、或从约100至约700、或从约100至约600、或从约100至约575、或从约100至约500、或从约100至约450、或从约100至约至约350、或从约100至约275、或从约100至约230、或从约150至约475、或从约150至约340、或从约113至约340、或从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约340至约795、或从约341至约682、或从约568至约909、或从约227至约1500、或从约225至约2280、或从约460至约2160、或从约460至约2050、或从约341至约1820、或从约341至约1710、或从约341至约1250、或从约225至约1250、或从约341至约1250、或从约341至约1136、或从约341至约1023、或从约341至约910、或从约341至约796、或从约341至约682、或从约341至约568、或从约114至约1000、或从约114至约950、或从约114至约910、或从约114至约800、或从约114至约690、或从约114至约575的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xiv)和(xv)的化合物中的n是选自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546的整数。
[0037]
本文描述了包含seq id no:3或seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中n是使得peg部分的分子量在从约1,000道尔顿至约200,000道尔顿、或从约2,000道尔顿至约150,000道尔顿、或从约3,000道尔顿至约125,000道尔顿、或从约4,000道尔顿至约100,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约100,000道尔顿、或从约6,000道尔顿至约90,000道尔顿、或从约7,000道尔顿至约80,000道尔顿、或从约8,000道尔顿至约70,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约70,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约65,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约60,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约6,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约7,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约7,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约7,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约8,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约8,500道尔顿至约40,000道尔顿、或从约8,500道尔顿至约35,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约35,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约30,000道尔顿、或从约9,500道尔顿至约35,000道尔顿、或从约9,500道尔顿至约30,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约35,000道尔顿、或从约10,
000道尔顿至约30,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约35,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约30,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约35,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约30,000道尔顿范围内的整数。本文描述了包含seq id no:3或seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中n是使得peg部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约60,000道尔顿、约70,000道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约100,000道尔顿、约125,000道尔顿、约150,000道尔顿、约175,000道尔顿或约200,000道尔顿的整数。本文描述了包含seq id no:3或seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中n是使得peg部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿或约50,000道尔顿的整数。
[0038]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中在seq id no:3中被替代的所述氨基酸残基是h15，并且其中m是从1至6的整数，p是从1至6的整数，并且n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910的整数。
[0039]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中在seq id no:3中被替代的所述氨基酸残基是h15，并且其中m是从1至6的整数，p是从1至6的整数，并且n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910的整数。在一些实施方案中，n是从约500至约1000。在一些实施方案中，n是从约550至约800。在一些实施方案中，n是约681。
[0040]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中在seq id no:4中被替代的所述氨基酸残基是h16，并且其中m是从1至6的整数，p是从1至6的整数，并且n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910的整数。
[0041]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xiv)或(xv)的结构或者(xiv)和(xv)的混合物替代，其中在seq id no:4中被替代的所述氨基酸残基是h16，并且其中m是从1至6的整数，p是从1至6的整数，并且n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xiv)和(xv)的化合物中，m是2，p是2，并且n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910的整数。在一些实施方案中，n是从约500至约1000。在一些实施方案中，n是从约550至约800。在一些实施方案中，n是约681。
[0042]
本文描述了包含seq id no:3或seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代：其中：m是从0至20的整数；n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:3或seq id no:4内未被替代的氨基酸残基的共价键。在这里和自始至终，式(xvi)和/或(xvii)的实施方案还包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中m、p、n和波浪线含义如上文所述。在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中m、p、n和波浪线含义如上文所述。
[0043]
在一些实施方案中，式(xvi)和式(xvii)内手性中心的立体化学是外消旋的，是富含(r)的，是富含(s)的，基本上是(r)，基本上是(s)，是(r)或者是(s)。在一些实施方案中，式(xvi)和式(xvii)内手性中心的立体化学是外消旋的。在一些实施方案中，式(xvi)和式
(xvii)内手性中心的立体化学是富含(r)的。在一些实施方案中，式(xvi)和式(xvii)内手性中心的立体化学是富含(s)的。在一些实施方案中，式(xvi)和式(xvii)内手性中心的立体化学基本上是(r)。在一些实施方案中，式(xvi)和式(xvii)内手性中心的立体化学基本上是(s)。在一些实施方案中，式(xvi)和式(xvii)内手性中心的立体化学是(r)。在一些实施方案中，式(xvi)和式(xvii)内手性中心的立体化学是(s)。
[0044]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是从1至20、或从1至18、或从1至16、或从1至14、或从1至12、或从1至10、或从1至9、或从1至8、或从1至7、或从1至6、或从1至5、或从1至4、或从1至3、或从1至2。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是2。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是3。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是4。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是5。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是6。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是7。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是8。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是9。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是10。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是11。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是12。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是13。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是14。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是15。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是16。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是17。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是18。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是19。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的m是20。
[0045]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的n在从约5至约4600、或从约10至约4000、或从约20至约3000、或从约100至约3000、或从约100至约2900、或从约150至约2900、或从约125至约2900、或从约100至约2500、或从约100至约2000、或从约100至约1900、或从约100至约1850、或从约100至约1750、或从约100至约1650、或从约100至约1500、或从约100至约1400、或从约100至约1300、或从约100至约1250、或从约100至约1150、或从约100至约1100、或从约100至约1000、或从约100至约900、或从约100至约750、或从约100至约700、或从约100至约600、或从约100至约575、或从约100至约500、或从约100至约450、或从约100至约至约350、或从约100至约275、或从约100至约230、或从约150至约475、或从约150至约340、或从约113至约340、或从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约340至约795、或从约341至约682、或从约568至约909、或从约227至约1500、或从约225至约2280、或从约460至约2160、或从约460至约2050、或从约341至约1820、或从约341至约1710、或从约341至约1250、或从约225至约1250、或从约341至约
1250、或从约341至约1136、或从约341至约1023、或从约341至约910、或从约341至约796、或从约341至约682、或从约341至约568、或从约114至约1000、或从约114至约950、或从约114至约910、或从约114至约800、或从约114至约690、或从约114至约575的范围内。
[0046]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是从1至6的整数，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是从2至6的整数，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是从2至4的整数，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是1，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是2，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是3，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是4，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是5，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是6，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是7，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是8，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是9，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是10，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是11，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、
795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是12，并且n是选自113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是2，并且n是选自680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136和1137的整数。
[0047]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的n是选自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546的整数。
[0048]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的结构或者式(xvi)和(xvii)的混合物在包含seq id no:3的il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的结构或者式(xvi)和(xvii)的混合物在seq id no:3的il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。本文进一步描述了il-2
缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xvi)的结构的量与式(xvii)的结构的量的比率为约1:1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xvi)的结构的量与式(xvii)的结构的量的比率大于1:1。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，构成所述il-2缀合物的总量的式(xvi)的结构的量与式(xvii)的结构的量的比率小于1:1。
[0049]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中在seq id no:3中被替代的所述氨基酸残基选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130，并且其中n是从100至约1150、或从约100至约1100、或从约100至约1000、或从约100至约900、或从约100至约750、或从约100至约700、或从约100至约600、或从约100至约575、或从约100至约500、或从约100至约450、或从约100至约至约350、或从约100至约275、或从约100至约230、或从约150至约475、或从约150至约340、或从约113至约340、或从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约340至约795、或从约341至约682、或从约568至约909、或从约227至约1500、或从约225至约2280、或从约460至约2160、或从约460至约2050、或从约341至约1820、或从约341至约1710、或从约341至约1250、或从约225至约1250、或从约341至约1250、或从约341至约1136、或从约341至约1023、或从约341至约910、或从约341至约796、或从约341至约682、或从约341至约568、或从约114至约1000、或从约114至约950、或从约114至约910、或从约114至约800、或从约114至约690、或从约114至约575的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的n是选自2、5、10、11、22、23、113、114、227、228、340、341、454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137、1249、1250、1251、1362、1363、1364、1476、1477、1478、1589、1590、1591、1703、1704、1705、1817、1818、1819、1930、1931、1932、2044、2045、2046、2158、2159、2160、2271、2272、2273、2839、2840、2841、2953、2954、2955、3408、3409、3410、3976、3977、3978、4544、4545和4546的整数。
[0050]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中在seq id no:3中被替代的所述氨基酸残基选自h15，并且其中n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137
和1249的整数。
[0051]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中在seq id no:3中被替代的所述氨基酸残基选自h15，并且其中n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910的整数。
[0052]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中在seq id no:3中被替代的所述氨基酸残基是h15，并且其中n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的化合物中的n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910的整数。在一些实施方案中，n是从约500至约1000。在一些实施方案中，n是从约550至约800。在一些实施方案中，n是约681。
[0053]
在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，式(xvi)和(xvii)的结构或者式(xvi)和(xvii)的混合物在包含seq id no:4的il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。本文
进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。本文进一步描述了il-2缀合物，其中式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。
[0054]
本文描述了包含seq id no:3或seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中n是使得peg部分的分子量在从约1,000道尔顿至约200,000道尔顿、或从约2,000道尔顿至约150,000道尔顿、或从约3,000道尔顿至约125,000道尔顿、或从约4,000道尔顿至约100,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约100,000道尔顿、或从约6,000道尔顿至约90,000道尔顿、或从约7,000道尔顿至约80,000道尔顿、或从约8,000道尔顿至约70,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约70,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约65,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约60,000道尔顿、或从约5,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约6,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约7,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约7,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约7,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约8,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约8,500道尔顿至约40,000道尔顿、或从约8,500道尔顿至约35,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约35,000道尔顿、或从约9,000道尔顿至约30,000道尔顿、或从约9,500道尔顿至约35,000道尔顿、或从约9,500道尔顿至约30,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约35,000道尔顿、或从约10,000道尔顿至约30,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约35,000道尔顿、或从约15,000道尔顿至约30,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约50,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约45,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约40,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约35,000道尔顿、或从约20,000道尔顿至约30,000道尔顿范围内的整数。本文描述了包含seq id no:3或seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中n是使得peg部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约60,000道尔顿、约70,000道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约100,000道尔顿、约125,000道尔顿、约150,000道尔顿、约175,000道尔顿或约200,000道尔顿的整数。本文描述了包含seq id no:3或seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残
基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中n是使得peg部分的分子量为约5,000道尔顿、约7,500道尔顿、约10,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿或约50,000道尔顿的整数。
[0055]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中在seq id no:4中的所述氨基酸残基是h16，m是从1至6的整数，并且n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是2，并且n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909、910、1021、1022、1023、1135、1136、1137和1249的整数。
[0056]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中在seq id no:4中被替代的所述氨基酸残基是h16，并且其中m是从1至6的整数，并且n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是2，并且n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910的整数。
[0057]
在一些实施方案中，本文描述了包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xvi)或(xvii)的结构或者(xvi)和(xvii)的混合物替代，其中在seq id no:4中被替代的所述氨基酸残基是e61，并且其中m是从1至6的整数，并且n是从约450至约800、或从约454至约796、或从约454至约682、或从约568至约909的整数。在本文所述的il-2缀合物的一些实施方案中，在式(xvi)和(xvii)的化合物中，m是2，并且n是选自454、455、568、569、680、681、682、794、795、796、908、909和910的整数。在一些实施方案中，n是从约500至约1000。在一些实施方案中，n是从约550至约800。在一些实施方案中，n是约681。
[0058]
本文描述了治疗受试者的自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病选自移植物抗宿主病(gvhd)、特应性皮炎、克罗恩病、斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、青少年/儿童1型糖尿病、幼年型特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、crest综合征、干燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风、韦格纳肉芽肿病、艾迪生病(肾上腺功能不全)、桥本甲状腺炎、自身免疫性肝炎、不孕症/不育症、anca相关性血管炎、银屑病关节炎、乳糜泻、溃疡性结肠炎、硬化性苔藓和白塞病。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病选自移植物抗宿主病(gvhd)、特应性皮炎、克罗恩病、1型糖尿病、多发性硬化、类风湿性关节炎、重症肌无力、原发性胆汁性肝硬化、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肾小球肾炎、特发性血小板减少性紫癜、系统性红斑狼疮、硬皮病、crest综合征、银
屑病、乳糜泻、溃疡性结肠炎、天疱疮、银屑病关节炎和不孕症/不育症。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是移植物抗宿主病(gvhd)。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是特应性皮炎。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是克罗恩病。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是1型糖尿病。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是多发性硬化。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是类风湿性关节炎。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是重症肌无力。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是原发性胆汁性胆管炎或原发性胆汁性肝硬化。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是非酒精性脂肪性肝炎(nash)。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是肾小球肾炎。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是特发性血小板减少性紫癜。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是系统性红斑狼疮。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是硬皮病。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是crest综合征。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是不孕症/不育症。本文进一步描述了方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每周一次、每两周一次、每三周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次或每8周一次。本文进一步描述了方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每周一次、每两周一次、每三周一次或每4周一次。本文进一步描述了方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每周一次。本文进一步描述了方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每两周一次。本文进一步描述了方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每三周一次。本文进一步描述了方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每四周一次。本文进一步描述了方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者在所述受试者的血液中展现出增加的类风湿因子浓度。本文进一步描述了方法，其中所述受试者的血液中所述增加的类风湿因子浓度为约14iu/ml或更高或者约15iu/ml或更高。本文进一步描述了方法，其中所述受试者的血液中所述增加的类风湿因子浓度为约14iu/ml或更高。本文进一步描述了方法，其中所述受试者的血液中所述增加的类风湿因子浓度为约15iu/ml或更高。
[0059]
本文描述了治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括：(a)确定所述受试者的血液中的类风湿因子浓度；以及(b)如果所述受试者的血液中的类风湿因子浓度大于约14iu/ml，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。本文进一步描述了方法，其中如果所述受试者的血液中的类风湿因子浓度大于约15iu/ml，则将治疗有效量的所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者。
[0060]
本文描述了治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括如果确定所述受试者的血液中的类风湿因子浓度大于约14iu/ml，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。
[0061]
本文描述了治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括如果确定所述受试者的血液中的类风湿因子浓度大于约15iu/ml，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。本文进一步提供了方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。本文进一步描述了方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述
il-2缀合物之前使用魏氏沉降率方法(westergren rate method)确定所述受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。本文进一步描述了方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前使用温氏沉降率方法(wintrobe rate method)确定所述受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。本文进一步提供了方法，其中所述受试者是50岁以下的女性并且展现出大于约20mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步提供了方法，其中所述受试者是50岁以上的女性并且展现出大于约30mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步提供了方法，其中所述受试者是50岁以下的男性并且展现出大于约15mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步提供了方法，其中所述受试者是50岁以上的男性并且展现出大于20mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步提供了方法，其中所述受试者是儿童并且展现出大于约10mm/hr的魏氏沉降率。
[0062]
本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病的方法，所述方法包括：(a)确定所述受试者的红细胞沉降率(esr)；以及(b)如果确定esr异常，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。本文进一步描述了方法，其中使用温氏沉降率方法确定所述受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。本文进一步描述了方法，其中使用魏氏沉降率方法确定所述受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。本文进一步描述了方法，其中所述受试者是50岁以下的女性并且展现出大于约20mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步描述了方法，其中所述受试者是50岁以上的女性并且展现出大于约30mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步描述了方法，其中所述受试者是50岁以下的男性并且展现出大于约15mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步描述了方法，其中所述受试者是50岁以上的男性并且展现出大于20mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步描述了方法，其中所述受试者是儿童并且展现出大于约10mm/hr的魏氏沉降率。本文进一步提供了方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者在所述受试者的血液中展现出增加的c反应蛋白(crp)浓度。本文进一步描述了方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者在血液中展现出大于10mg/l的c反应蛋白(crp)浓度。
[0063]
本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病的方法，所述方法包括：(a)确定所述受试者的血液中的c反应蛋白(crp)浓度；以及(b)如果确定所述受试者的血液中的c反应蛋白(crp)浓度异常，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。本文进一步描述了方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者在血液中展现出大于10mg/l的c反应蛋白(crp)浓度。
[0064]
本文描述了治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括：(a)确定所述受试者的血液中的抗环瓜氨酸肽(抗ccp)浓度；以及(b)如果确定所述受试者的血液中的类风湿因子浓度异常，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。本文进一步描述了方法，其中如果确定所述受试者的血液中的抗环瓜氨酸肽(抗ccp)浓度大于约20iu/ml，则将治疗有效量的所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者。
[0065]
本文描述了治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括如果确定所述受试者的血液中的抗环瓜氨酸肽(抗ccp)浓度异常，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。
[0066]
本文描述了治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括如果确定所述受试者的血液中的抗环瓜氨酸肽(抗ccp)浓度大于约20iu/ml，则向所述有需要的受
试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是银屑病。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是乳糜泻。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病是溃疡性结肠炎。本文进一步描述了方法，其中所述自身免疫性疾病天疱疮。
[0067]
本文描述了减轻或消除有需要的受试者的模式为、表示为和/或特征为迟发型超敏反应(dth)的自身免疫性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的il-2缀合物。
附图说明
[0068]
本发明的新颖特征具体阐述于所附权利要求中。将通过参考阐述了利用本发明原理的说明性实施方案的以下具体实施方式和附图获得对本发明的特征和优点的更好的理解，在所述附图中：
[0069]
图1示出了示例性非天然氨基酸。此图改编自young等人,“beyond the canonical 20 amino acids:expanding the genetic lexicon,”j.of biological chemistry 285(15):11039-11044(2010)的图2。
[0070]
图2a-图2b说明了示例性非天然氨基酸。图2a说明了示例性赖氨酸衍生物。图2b说明了示例性苯丙氨酸衍生物。
[0071]
图3a-图3d说明了示例性非天然氨基酸。这些非天然氨基酸(uaa)已经在蛋白质中进行基因编码(图3a-uaa#1-42；图3b-uaa#43-89；图3c-uaa#90-128；图3d-uaa#129-167)。图3a-图3d改编自dumas等人,chemical science 2015,6,50-69的表1。
[0072]
图4a-图4b示出了人lrs原代细胞中pstat5信号传导的示例性il-2变体的剂量反应曲线(图4a)以及小鼠ctll-2群体中的增殖反应(图4b)。
[0073]
图5a-图5c示出了来自实施例3的来自在discoverx(加利福尼亚州弗里蒙特)使用pathhunter il-2细胞因子受体测定对il-2缀合物的功能活性的筛选的图。图5a示出了从用il-2和il-2缀合物d20_30kd的测定产生的图。图5b示出了从用il-2缀合物h16_30kd和l19_30kd的测定产生的图。图5c示出了从用il-2缀合物n88_30kd和l12_30kd的测定产生的图。x轴：以pg/ml计；y轴：最大反应％。
[0074]
图6示出了来自实施例4的在c57/bl6小鼠中给药后il-2缀合物k9_30kd、l19_30kd、n88r/d109_30kd、h16_30kd、q126_30kd和n88_30kd(全部以0.9mg/kg给药)的血浆浓度曲线。
[0075]
图7示出了来自实施例4的在c57/bl6小鼠中给药il-2缀合物后treg(在单态细胞(singlet)中的％)的平均倍数变化。
[0076]
图8示出了来自实施例4的在c57/bl6小鼠中il-2缀合物的treg(cd3 cd4 cd25 foxp3 )细胞群在总细胞群(单态细胞)内的比例。
[0077]
图9a示出了来自实施例4的在c57/bl6小鼠中在单次剂量的il-2缀合物k9_30kd、l19_30kd、q126_30kd和h16_30kd后cd8 t细胞群(cd3 cd4-cd8 )在总细胞群(单态细胞)内的比例。
[0078]
图9b示出了来自实施例4的在c57/bl6小鼠中在单次剂量的il-2缀合物e100_30kd、n88r/d109_30kd、t123_30kd、n88_30kd和v91_30kd后cd8 t细胞(cd3 cd4-cd8 )群在
总细胞群(单态细胞)内的比例。
[0079]
图10示出了来自实施例5的在食蟹猴中给药后il-2缀合物的血浆浓度曲线。
[0080]
图11示出了来自实施例5的在给药il-2缀合物后在食蟹猴中treg细胞群在总血细胞群(单态细胞)内的比例。
[0081]
图12示出了来自实施例5的在给药il-2缀合物后在食蟹猴中cd8 t细胞群在总血细胞群(单态细胞)内的比例。
[0082]
图13示出了来自实施例6的在0.12mg/kg和0.67mg/kg剂量下在非人灵长类动物中h16_30kd变体的血浆浓度与时间的关系图，其中0.12mg/kg剂量显示为下部迹线，而0.67mg/kg剂量显示为上部迹线。
[0083]
图14示出了来自实施例6的在非人灵长类动物中h16_30kda变体和h16_50kda变体在0.12mg/kg剂量下以及h16_50kda变体在0.2mg/kg剂量下的血浆浓度与时间的关系图，其中30kda变体的迹线显示为下部迹线(正方形)，并且50kda变体的迹线显示为上部迹线(三角形)。
[0084]
图15示出了来自实施例6的在非人灵长类动物中h16_30kda变体在0.12mg/kg剂量下以及h16_50kda变体在0.2mg/kg剂量下的在单细胞中的t
reg
％与给药后时间的关系图，其中媒介物的迹线是下部迹线(正方形)，30kda变体的迹线以中间迹线显示，并且50kda变体的迹线以上部迹线显示。
[0085]
图16示出了实施例7的用于评估h16_50kd对c57bl/6小鼠的迟发型超敏反应(dth)的影响的研究设计。用钥孔戚血蓝蛋白(klh)(在第1天经由皮下注射致敏后第7天激发)诱导实施例7的小鼠的dth，并且以0.03mg/kg、0.1mg/kg和0.3mg/kg的剂量给药h16_50kd(第0天和第3天)。
[0086]
图17a-图17c示出了来自实施例7的c57bl/6小鼠的耳朵厚度测量值和血液免疫表型的变化。图17a示出了如与仅在第7天进行klh激发的小鼠相比增加的耳朵厚度的曲线下面积(auc)。图17b示出了c57bl/6小鼠在klh激发(第7天)之前以及然后随后在第8天、第9天和第10天的耳朵厚度测量值的变化。图17c示出了来自小鼠的全血样品中cd4 t细胞在cd25 foxp3 细胞群内的相对百分比随时间的变化。“仅klh”指示仅在第7天进行klh激发(在第1天未致敏)，并且仅给药媒介物。“媒介物”指示进行klh致敏(第1天)和激发(第7天)，并且仅给药媒介物。“0.03”指示进行klh致敏和激发，并且以0.03mg/kg的剂量给药h16_50kd。“0.1”指示进行klh致敏和激发，并且以0.1mg/kg的剂量给药h16_50kd。“0.3”指示进行klh致敏和激发，并且以0.3mg/kg的剂量给药h16_50kd。“csa”指示进行klh致敏和激发，并且给药环孢菌素a。还参见实施例7中的表10。
[0087]
图18a-图18c示出了来自实施例7的来自小鼠的全血样品中cd4 cd25 foxp3 细胞在cd45 细胞群内(图18a)、在tcrβ 细胞群内(图18b)以及在cd4 细胞群内(图18c)的相对百分比随时间的变化。
[0088]
图19示出了来自实施例7的来自小鼠的全血样品中在第10天cd4 cd25 foxp3 细胞的绝对计数。
具体实施方式
[0089]
细胞因子包括细胞信号传导蛋白的家族，如趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子、
肿瘤坏死因子以及在先天性和适应性免疫细胞稳态中发挥作用的其他生长因子。细胞因子是由免疫细胞(如巨噬细胞、b淋巴细胞、t淋巴细胞和肥大细胞、内皮细胞、成纤维细胞和不同的基质细胞)产生的。在一些情形下，细胞因子调节体液免疫反应与基于细胞的免疫反应之间的平衡。
[0090]
白介素是调节t和b淋巴细胞、单核细胞谱系的细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、巨核细胞和造血细胞的发育和分化的信号传导蛋白。白介素是由辅助性cd4 t和b淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞和其他组织驻留细胞产生的。
[0091]
白介素2(il-2)是一种多效性1型细胞因子，其结构包含15.5kda的四α-螺旋束。il-2的前体形式的长度为153个氨基酸残基，其中前20个氨基酸形成信号肽，并且残基21-153形成成熟形式。il-2主要由cd4 t细胞在抗原刺激后产生，以及在较小程度上由cd8 细胞、自然杀伤(nk)细胞、和自然杀伤t(nkt)细胞、激活的树突细胞(dc)和肥大细胞产生。il-2信号传导通过与il-2受体(il-2r)亚基il-2rα(也称为cd25)、il-2rβ(也称为cd122)和il-2rγ(也称为cd132)的特定组合的相互作用来进行。il-2与il-2rα的相互作用以约10-8
m的kd形成“低亲和力”il-2受体复合物。il-2与il-2rβ和il-2rγ的相互作用以约10-9
m的kd形成“中亲和力”il-2受体复合物。il-2与所有三种亚基il-2rα、il-2rβ和il-2rγ的相互作用以约》10-11
m的kd形成“高亲和力”il-2受体复合物。
[0092]
在一些情形下，经由“高亲和力”il-2rαβγ复合物的il-2信号传导调节调节性t细胞的激活和增殖。调节性t细胞或cd4
cd25
foxp3
调节性t(treg)细胞通过抑制效应细胞(如cd4
t细胞、cd8
t细胞、b细胞、nk细胞和nkt细胞)来介导免疫稳态的维持。在一些情形下，treg细胞是从胸腺产生(ttreg细胞)，或者是从外周的幼稚t细胞诱导(ptreg细胞)。在一些情况下，将treg细胞视为外周耐受的介体。实际上，在一项研究中，cd25耗尽的外周血cd4
t细胞的转移在裸鼠中产生多种自身免疫性疾病，而cd4
cd25
t细胞的共转移抑制自身免疫的发生(sakaguchi等人,“immunologic self-tolerance maintained by activated t cells expressing il-2 receptor alpha-chains(cd25),”j.immunol.155(3):1151-1164(1995))。treg细胞群的增加下调效应t细胞增殖并抑制自身免疫和t细胞抗肿瘤反应。
[0093]
在某些实施方案中，本文公开了通过细胞因子/细胞因子受体信号传导选择性上调一个或多个不同淋巴细胞群(例如，cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆细胞、nk细胞或nkt细胞)的方法。在一些情形下，细胞因子包括白介素、干扰素或肿瘤坏死因子。在一些情况下，细胞因子是细胞因子缀合物，例如白介素缀合物、干扰素缀合物或肿瘤坏死因子缀合物。在另外的情况下，本文描述的包括药物组合物和试剂盒，其包含本文所述的一种或多种细胞因子缀合物。
[0094]
在一些实施方案中，本文还描述了通过il-2/il-2r信号传导选择性上调cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆细胞、nk细胞和/或nkt细胞群的方法。在一些情形下，il-2是这样的il-2缀合物，其与“中亲和力”il-2rβγ复合物相互作用，任选地效力与il-2rαβγ复合物类似，并且具有相对于野生型il-2变弱的il-2rα相互作用。在一些实施方案中，本文进一步描述了通过使用本文所述的il-2缀合物治疗癌症的方法。在另外的实施方案中，本文描述了药物组合物和试剂盒，其包含本文所述的一种或多种il-2缀合物。在一些实施方案中，il-2缀合物包含缀合部分(例如，peg)，其在不影响药代动力学(包括所需的细胞因子-受体相互作用和免疫细胞扩增)的情况下促进在受试者中的“清除速率”或血浆半衰期的增加或
降低。细胞因子缀合物
[0095]
在一些实施方案中，本文描述了细胞因子缀合物。在一些情形下，细胞因子包括白介素、肿瘤坏死因子、干扰素、趋化因子、淋巴因子或生长因子。在一些情形下，细胞因子是白介素。在一些情况下，细胞因子是干扰素。在另外的情况下，细胞因子是肿瘤坏死因子。在进一步的情况下，细胞因子是生长因子。
[0096]
在一些实施方案中，本文描述了白介素缀合物。示例性白介素包括但不限于白介素2(il-2)。il-2缀合物
[0097]
本文描述了表1中所示的多肽。在一些实施方案中，本文所述的il-2缀合物例示于表1中。
[0098]
表1
x＝包含非天然氨基酸的位点。[azk]＝n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(其结构在图3c中公开为化合物90)，化学文摘社登记号为1167421-25-1。[azk_peg]＝经由dbco介导的点击化学稳定缀合至peg的n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸，以形成包含式(ii)或式(iii)的结构的化合物。例如，如果指定，peg50kd指示用甲氧基封端的线性聚乙二醇链，其平均分子量为50kda。从点击反应产生的位置异构体的比率为约1:1或大于1:1。术语“dbco”意指包含二苯并环辛炔基团的化学部分，如包括实施例1的方案1中说明的mpeg-dbco化合物。甲氧基peg基团的示例性结构说明于实施例1的方案1中的mpeg-dbco结构中。[azk_l1_peg]＝经由dbco介导的点击化学稳定缀合至peg的n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸，以形成包含式(iv)或式(v)的结构的化合物。例如，如果指定，peg50kd指示用甲氧基封端的线性聚乙二醇链，其平均分子量为50kda。从点击反应产生的位置异构体的比率为约1:1或大于1:1。术语“dbco”意指包含二苯并环辛炔基团的化学部分，如包括实施例1的方案1中说明的mpeg-dbco化合物。
[0099]
在一些实施方案中，本文描述了在氨基酸位置被修饰的il-2缀合物。在一些情形下，修饰是针对天然氨基酸。在一些情形下，修饰是针对非天然氨基酸。在一些情形下，本文描述了包含至少一种非天然氨基酸的分离且经修饰的il-2多肽。在一些情形下，il-2多肽是分离且经纯化的哺乳动物il-2，例如啮齿动物il-2蛋白或人il-2蛋白。在一些情况下，il-2多肽是人il-2蛋白。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:1包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:1的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:1的序列组成。在另外的情况下，il-2多肽与seq id no:2包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情况
下，il-2多肽包含seq id no:2的序列。在另外的情况下，il-2多肽由seq id no:2的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:3包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:3的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:3的序列组成。在另外的情况下，il-2多肽与seq id no:4包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情况下，il-2多肽包含seq id no:4的序列。在另外的情况下，il-2多肽由seq id no:4的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:34-48包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:34-48的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:34-48的序列组成。在另外的情况下，il-2多肽与seq id no:199-213包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情况下，il-2多肽包含seq id no:199-213的序列。在另外的情况下，il-2多肽由seq id no:199-213的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:49-63包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:49-63的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:49-63的序列组成。在另外的情况下，il-2多肽与seq id no:213-228包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在另外的情况下，il-2多肽包含seq id no:213-228的序列。在另外的情况下，il-2多肽由seq id no:213-228的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:64-78包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:64-78的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:64-78的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:229-243包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:229-243的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:229-243的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:154-168包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:154-168的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:154-168的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:109-123包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:109-123的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:109-123的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:169-183包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:169-183的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:169-183的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:123-138包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:123-138的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:123-138的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:184-198包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:184-198的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:184-198的序列组成。在一些情况下，il-2多肽与seq id no:139-153包含约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性。在一些情况下，il-2多肽包含seq id no:139-153的序列。在一些情况下，il-2多肽由seq id no:139-153的序列组成。
[0100]
在一些情形下，il-2多肽是截短型变体。在一些情形下，截短是n末端缺失。在其他情形下，截短是c末端缺失。在另外的情形下，截短包括n末端和c末端缺失两者。例如，截短
可以是从n末端或c末端或两个末端缺失至少或约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20个或更多个残基。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20个或更多个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约2个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约3个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约4个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约5个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约6个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约7个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约8个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约9个残基的n末端缺失。在一些情况下，il-2多肽包含至少或约10个残基的n末端缺失。
[0101]
在一些实施方案中，il-2多肽是功能活性片段。在一些情况下，功能活性片段包含il-2区域10-133、20-133、30-133、10-130、20-130、30-130、10-125、20-125、30-125、1-130或1-125，其中残基位置是参考在seq id no:1中的位置。在一些情况下，功能活性片段包含il-2区域10-133，其中残基位置是参考在seq id no:1中的位置。在一些情况下，功能活性片段包含il-2区域20-133，其中残基位置是参考在seq id no:1中的位置。在一些情况下，功能活性片段包含il-2区域30-133，其中残基位置是参考在seq id no:1中的位置。在一些情况下，功能活性片段包含il-2区域10-125，其中残基位置是参考在seq id no:1中的位置。在一些情况下，功能活性片段包含il-2区域20-125，其中残基位置是参考在seq id no:1中的位置。在一些情况下，功能活性片段包含il-2区域1-130，其中残基位置是参考在seq id no:1中的位置。在一些情况下，功能活性片段包含il-2区域1-125，其中残基位置是参考在seq id no:1中的位置。
[0102]
在一些实施方案中，本文描述了il-2缀合物，其包含分离、经纯化且经修饰的il-2多肽和缀合部分。在一些情形下，相对于野生型il-2多肽，il-2缀合物对il-2受体α(il-2rα)亚基具有降低的亲和力。在一些情况下，缀合部分结合至与il-2rα相互作用的氨基酸残基(例如，在il-2/il-2rα界面处)。在一些情况下，缀合部分结合至靠近il-2/il-2rα界面(例如，离il-2/il-2rα界面约约约或约)的氨基酸残基。如本文所用，il-2/il-2rα界面中涉及的残基包括与来自il-2rα亚基的残基形成疏水相互作用、氢键或离子相互作用的il-2残基。
[0103]
在一些情形下，缀合部分结合至选自氨基酸位置a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132或t133的氨基酸残基，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些情形下，氨基酸位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、
q126、s127、s130、t131、l132和t133。在一些情形下，氨基酸位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30和y31。在一些情形下，氨基酸位置选自k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。在一些情形下，氨基酸位置选自k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、k35、t37、m46、p47、k48、a50、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109。在一些情形下，氨基酸位置选自s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。在一些情形下，氨基酸位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。
[0104]
在一些情形下，il-2缀合物进一步包含另外的突变。在一些情况下，另外的突变在选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130的氨基酸位置处。在此类情况下，氨基酸与另外的缀合部分缀合，用于增加血清半衰期、稳定性或其组合。可替代地，在与另外的缀合部分结合之前，氨基酸首先突变为天然氨基酸，如赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸；或者突变为非天然氨基酸。
[0105]
在一些情形下，通过ed50值来衡量受体信号传导效力。在一些情形下，经修饰的il-2多肽提供激活il-2βγ信号传导复合物的第一ed50值和激活il-2αβγ信号传导复合物的第二ed50值，并且其中第一ed50值与第二ed50值之间的差异小于10倍。在一些情形下，经修饰的il-2多肽提供激活il-2βγ信号传导复合物的第一ed50值和激活il-2αβγ信号传导复合物的第二ed50值，并且其中第一ed50值与第二ed50值之间的差异小于5倍。在一些情况下，差异小于9倍、小于8倍、小于7倍、小于6倍、小于5倍、小于4倍、小于3倍、小于2倍或小于1倍。
[0106]
在一些实施方案中，缀合部分直接或经由接头肽间接与il-2多肽的n末端或c末端连接。在一些情况下，缀合部分(例如，聚合物、蛋白质或肽)在il-2的n末端或c末端并且直接或经由接头肽间接与il-2基因融合。在一些情形下，缀合部分与n末端或c末端氨基酸残基连接。在一些情形下，缀合部分与结合至n末端或c末端氨基酸残基的反应基团连接。
[0107]
在一些实施方案中，对il-2rα具有降低的结合亲和力的il-2缀合物能够扩增cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞群。在一些情况下，缀合部分削弱或阻断il-2与il-2rα的结合。
[0108]
在一些情况下，相对于野生型il-2多肽，通过经修饰的il-2多肽经由il-2rβγ复合物激活cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞群保留激活所述细胞群的显著效力。在一些情形下，通过经修饰的il-2多肽进行的激活等效于通过野生型il-2多肽进行的激活。在其他情形下，通过经修饰的il-2多肽进行的激活高于通过野生型il-2多肽进行的激活。在一些情况下，经修饰的il-2多肽对il-2rβγ复合物的受体信号传导效力高于野生型il-2多肽对il-2rβγ复合物的受体信号传导效力。
在一些情况下，经修饰的il-2多肽的受体信号传导效力比野生型il-2多肽的相应效力高至少1倍。在一些情况下，经修饰的il-2多肽的受体信号传导效力比野生型il-2多肽的相应效力高约或至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、150倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍或更高。在此类情况下，用于实现与野生型il-2多肽类似的激活cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞群的水平的经修饰的il-2多肽的剂量或浓度低于野生型il-2多肽所用的剂量或浓度。
[0109]
在一些实施方案中，通过经修饰的il-2多肽经由il-2rβγ复合物激活cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞群保留通过野生型il-2多肽激活所述细胞群的显著效力。在一些情况下，经修饰的il-2多肽对il-2rβγ复合物的受体信号传导效力低于野生型il-2多肽对il-2rβγ复合物的受体信号传导效力。在一些情况下，经修饰的il-2多肽的受体信号传导效力比野生型il-2多肽的相应效力低约或至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍或50倍。
[0110]
在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽展现出对il-2rβγ的第一受体信号传导效力和对il-2rαβγ的第二受体信号传导效力。在一些情形下，对il-2rβγ的第一受体信号传导效力是相对于野生型il-2多肽改善的效力。在一些情形下，对il-2rαβγ的第二受体信号传导效力是相对于野生型il-2多肽受损的效力。在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽展现出对il-2rβγ的第一受体信号传导效力和对il-2rαβγ的第二受体信号传导效力，并且其中第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少1倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少2倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少5倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少10倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少20倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少50倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少100倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少500倍或更高。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力高至少1000倍或更高。在一些情形下，经修饰的il-2多肽的第一受体信号传导效力高于野生型il-2多肽对il-2rβγ的受体信号传导效力，并且经修饰的il-2多肽的第二受体信号传导效力低于野生型il-2多肽对il-2rαβγ的受体信号传导效力。在一些情况下，两种受体信号传导效力都低于其在野生型il-2多肽中的相应效力。在其他情况下，两种受体信号传导效力都高于其在野生型il-2多肽中的相应效力。
[0111]
在一些实施方案中，il-2缀合物减少施用il-2缀合物的受试者的毒性不良事件。示例性毒性不良事件包括嗜酸性粒细胞增多症、毛细血管渗漏和血管渗漏综合征(vls)。在一些情形下，相对于施用野生型il-2或阿地白介素的第二受试者，il-2缀合物将受试者的毒性不良事件的发生率降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。在一些情形下，相对于施用野生型il-2或阿地白介素的第二受试者，il-2缀合物将受试者的毒性不良事件的严重程度降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、
70％、80％、90％、95％、99％或约100％。
[0112]
在一些情形下，毒性不良事件是嗜酸性粒细胞增多症。在一些情况下，相对于施用野生型il-2或阿地白介素的第二受试者，il-2缀合物将受试者的嗜酸性粒细胞增多症的发生率降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。在一些情况下，相对于施用野生型il-2或阿地白介素的第二受试者，il-2缀合物将受试者的嗜酸性粒细胞增多症的严重程度降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。
[0113]
在一些情形下，毒性不良事件是毛细血管渗漏。在一些情况下，相对于施用野生型il-2或阿地白介素的第二受试者，il-2缀合物将受试者的毛细血管渗漏的发生率降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。在一些情况下，相对于施用野生型il-2或阿地白介素的第二受试者，il-2缀合物将受试者的毛细血管渗漏的严重程度降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。
[0114]
在一些情形下，毒性不良事件是vls。在一些情况下，相对于施用野生型il-2或阿地白介素的第二受试者，il-2缀合物将受试者的vls的发生率降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。在一些情况下，相对于施用野生型il-2或阿地白介素的第二受试者，il-2缀合物将受试者的vls的严重程度降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或约100％。
[0115]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时或更长时间的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于1小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于2小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于3小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于4小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于5小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于6小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于7小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于8小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于9小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于10小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于12小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于18小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含大于24小时的血浆半衰期。
[0116]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少1小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少2小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少3小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少4小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少5小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2
缀合物包含至少6小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少7小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少8小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少9小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少10小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少12小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少18小时的血浆半衰期。在一些实施方案中，il-2缀合物包含至少24小时的血浆半衰期。
[0117]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含从约1小时至约7天、从约12小时至约7天、从约18小时至约7天、从约24小时至约7天、从约1小时至约5天、从约12小时至约5天、从约24小时至约5天、从约2天至约5天或从约2天至约3天的血浆半衰期。
[0118]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含从约1小时至约18小时、从约1小时至约12小时、从约2小时至约10小时、从约2小时至约8小时、从约4小时至约18小时、从约4小时至约12小时、从约4小时至约10小时、从约4小时至约8小时、从约6小时至约18小时、从约6小时至约12小时、从约6小时至约10小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至约18小时、从约8小时至约12小时或从约8小时至约10小时的血浆半衰期。
[0119]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含能够增殖和/或扩增cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、nk细胞、nkt细胞或其组合，但是不会造成有害影响(如细胞凋亡)的血浆半衰期。
[0120]
在一些实施方案中，相对于野生型il-2，il-2缀合物包含延长的血浆半衰期，例如延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。在一些实施方案中，相对于野生型il-2，il-2缀合物包含延长的血浆半衰期，例如延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间。
[0121]
在一些实施方案中，相对于野生型il-2，il-2缀合物包含延长的血浆半衰期，例如从约1小时至约18小时、从约1小时至约12小时、从约2小时至约10小时、从约2小时至约8小时、从约4小时至约18小时、从约4小时至约12小时、从约4小时至约10小时、从约4小时至约8小时、从约6小时至约18小时、从约6小时至约12小时、从约6小时至约10小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至约18小时、从约8小时至约12小时或从约8小时至约10小时。
[0122]
在一些实施方案中，相对于阿地白介素，il-2缀合物包含延长的血浆半衰期，例如延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。在一些实施方案中，相对于阿地白介素，il-2缀合物包含延长的血浆半衰期，例如延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间。
[0123]
在一些实施方案中，相对于阿地白介素，il-2缀合物包含延长的血浆半衰期，例如从约1小时至约18小时、从约1小时至约12小时、从约2小时至约10小时、从约2小时至约8小时、从约4小时至约18小时、从约4小时至约12小时、从约4小时至约10小时、从约4小时至约8小时、从约6小时至约18小时、从约6小时至约12小时、从约6小时至约10小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至约18小时、从约8小时至约12小时或从约8小时至约10小时。
[0124]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含具有降低的毒性的延长的血浆半衰期。在一些情形下，il-2缀合物包含具有降低的毒性的至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间的延长的血浆半衰期。在一些情形下，il-2缀合物包含具有降低的毒性的至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间的延长的血浆半衰期。在一些情形下，il-2缀合物包含具有降低的毒性的从约1小时至约18小时、从约1小时至约12小时、从约2小时至约10小时、从约2小时至约8小时、从约4小时至约18小时、从约4小时至约12小时、从约4小时至约10小时、从约4小时至约8小时、从约6小时至约18小时、从约6小时至约12小时、从约6小时至约10小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至约18小时、从约8小时至约12小时或从约8小时至约10小时的延长的血浆半衰期。在一些情况下，相对于野生型il2，降低的毒性降低至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍或更多倍。在一些情况下，相对于野生型il-2，降低的毒性降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多。
[0125]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含具有降低的毒性的延长的血浆半衰期。在一些情形下，il-2缀合物包含具有降低的毒性的至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间的延长的血浆半衰期。在一些情形下，il-2缀合物包含具有降低的毒性的至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间的延长的血浆半衰期。在一些情形下，il-2缀合物包含具有降低的毒性的从约1小时至约18小时、从约1小时至约12小时、从约2小时至约10小时、从约2小时至约8小时、从约4小时至约18小时、从约4小时至约12小时、从约4小时至约10小时、从约4小时至约8小时、从约6小时至约18小时、从约6小时至约12小时、从约6小时至约10小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至约18小时、从约8小时至约12小时或从约8小时至约10小时的延长的血浆半衰期。在一些情况下，相对于阿地白介素，降低的毒性降低至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍或更多倍。在一些情况下，相对于阿地白介素，降低的毒性降低至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％、400％、500％或更多。
[0126]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含缀合部分，其中缀合部分的大小(例如，体积或长度)增强血浆稳定性，但是不降低效力。在一些情形下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。在一些情形下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间。在一些情形下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长从约1小时至约18小时、从约1小时至约12小时、从约2小时至约10小时、从约2小时至约8小时、从约4小时至约18小时、从约4小时至约12小时、从约4小时至约10小时、从约4小时至约8小时、从约6小时至约18小时、从约6小时至约12小时、从约6小时至约10小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至约18小时、从约8小时至约12小时或从约8小时至约10小时。在一些情形下，相对于阿地白介素，缀合部分的大小将效力降低少于5％、4％、3％、
2％、1％或更少。
[0127]
在一些实施方案中，il-2缀合物包含缀合部分，其中缀合部分的大小(例如，体积或长度)增强血浆稳定性和效力。在一些情形下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时、2天、3天、4天、5天、6天、7天或更长时间。在一些情形下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、15小时、18小时、24小时或更长时间。在一些情形下，缀合部分的大小将血浆半衰期延长从约1小时至约18小时、从约1小时至约12小时、从约2小时至约10小时、从约2小时至约8小时、从约4小时至约18小时、从约4小时至约12小时、从约4小时至约10小时、从约4小时至约8小时、从约6小时至约18小时、从约6小时至约12小时、从约6小时至约10小时、从约6小时至约8小时、从约8小时至约18小时、从约8小时至约12小时或从约8小时至约10小时。在一些情形下，相对于阿地白介素，缀合部分的大小将效力进一步增强超过5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％或更多。
[0128]
在一些实施方案中，本文描述了il-2缀合物，其包含共价附接至缀合部分的非天然氨基酸，其中非天然氨基酸位于区域35-107中，并且其中区域35-107对应于seq id no:1的残基k35-y107。
[0129]
在一些实施方案中，本文描述了白介素2βγ受体(il-2rβγ)结合蛋白，其中所述结合蛋白对白介素2α受体(il-2rα)的结合亲和力小于野生型人il-2(hil-2)对白介素2α受体(il-2rα)的结合亲和力，其中所述结合蛋白对白介素2α受体(il-2rα)的结合亲和力小于野生型人il-2(hil-2)对白介素2α受体(il-2rα)的结合亲和力。在一些实施方案中，本文描述了白介素2βγ受体(il-2rβγ)结合蛋白，其中所述结合蛋白对白介素2α受体(il-2rα)的结合亲和力小于野生型人il-2(hil-2)对白介素2α受体(il-2rα)的结合亲和力，并且其中所述结合蛋白包含至少一种非天然氨基酸。在一些情形下，所述结合蛋白是经修饰的il-2多肽或其功能活性片段，其中经修饰的il-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。在一些情形下，所述至少一种非天然氨基酸位于区域35-107中，并且其中区域35-107对应于seq id no:1的残基k35-y107。
[0130]
在一些实施方案中，本文描述了il-2/il-2rβγ复合物，其包含含有突变的经修饰的il-2多肽和il-2rβγ，其中经修饰的il-2多肽对il-2rα具有降低的结合亲和力，并且其中降低的结合亲和力是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合亲和力相比。在一些情形下，经修饰的il-2多肽进一步包含共价附接至突变位点的缀合部分。在一些情形下，突变位点包含突变为天然氨基酸的氨基酸。在一些情况下，突变位点包含突变为半胱氨酸残基的氨基酸。在其他情况下，突变位点包含突变为赖氨酸残基的氨基酸。
[0131]
在一些实施方案中，本文描述了il-2/il-2rβγ复合物，其包含含有非天然氨基酸的经修饰的il-2多肽和il-2rβγ，其中经修饰的il-2多肽对il-2rα具有降低的结合亲和力，并且其中降低的结合亲和力是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合亲和力相比。在一些情形下，经修饰的il-2多肽进一步包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
[0132]
在一些实施方案中，本文描述了il-2/il-2rβγ复合物，其包含含有非天然氨基酸的经修饰的il-2多肽和il-2rβγ，其中经修饰的il-2多肽对il-2rα具有降低的受体信号传导效力，并且其中降低的受体信号传导效力是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的受体信号
传导效力相比。在一些情形下，经修饰的il-2多肽进一步包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
[0133]
在一些实施方案中，本文描述了cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞的激活剂，其选择性扩增细胞群中的cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、nk细胞、nkt细胞或其组合，其中所述激活剂包含含有至少一个突变的经修饰的白介素2(il-2)多肽。在一些情形下，突变是突变为天然氨基酸。在其他情形下，突变是突变为非天然氨基酸。在一些实施方案中，本文描述了cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞的激活剂，其选择性扩增细胞群中的cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、nk细胞、nkt细胞或其组合，其中所述激活剂包含含有至少一种非天然氨基酸的经修饰的白介素2(il-2)多肽。在一些情形下，当使所述激活剂与所述cd3 细胞群接触时，与接触野生型il-2多肽的cd3 细胞群中cd4 t调节性(treg)细胞的扩增相比，所述激活剂将cd4 treg细胞扩增少于20％、15％、10％、5％、1％或少于0.1％。在一些情形下，所述激活剂不扩增所述细胞群中的treg细胞。在一些情形下，所述细胞群是体内细胞群。在一些情形下，所述细胞群是体外细胞群。在一些情形下，所述细胞群是离体细胞群。
[0134]
在一些情形下，本文还描述了扩增cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞群的方法，所述方法包括使所述细胞群与治疗有效量的cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞激活剂接触，其中所述激活剂包含含有至少一个突变的经修饰的白介素2(il-2)多肽，从而扩增cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞群。在一些情形下，突变是突变为天然氨基酸。在其他情形下，突变是突变为非天然氨基酸。在一些情形下，本文还描述了扩增cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞群的方法，所述方法包括使所述细胞群与治疗有效量的cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞激活剂接触，其中所述激活剂包含含有至少一种非天然氨基酸的经修饰的白介素2(il-2)多肽，从而扩增cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞群。
[0135]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:1的残基位置35的k35处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-50,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受
体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0136]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:1的位置37的残基t37处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-50,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0137]
在一些情形下，缀合部分结合至选自氨基酸位置a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、k47、k48、a50、t51、e52、k53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、n89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、a125、q126、s127、s130、t131、l132和t133的氨基酸残基，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些情形下，氨基酸位置选自k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、r81、d84、s87、n88、v91、i92、l94、e95、e116、n119、r120、t123、a125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。在一些情形下，氨基酸位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、k47、k48、a50、t51、e52、k53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、p82、r83、n89、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109、e110、t111、a112和t113。在一些情形下，氨基酸位置选自k8、k9、l12、e15、h16、l19、d20、q22、m23、n26、d84、n88、e95和q126。在一些情形下，氨基酸位置选自k8、k9和h16。在一些情形下，氨基酸位置选自q22、n26、n88和q126。在一些情形下，氨基酸位置选自e15、d20、d84和e95。在一些情形下，氨基酸位置选自l12、l19和m23。在一些情形下，氨基酸位置选自q22和n26。在一些情况下，氨基酸位置在k8处。在一些情况下，氨基酸位置在k9处。在一些情况下，氨基酸位置在q11处。在一些情况下，氨基酸位置在l12处。在一些情况下，氨基酸位置在e15
处。在一些情况下，氨基酸位置在h16处。在一些情况下，氨基酸位置在l18处。在一些情况下，氨基酸位置在l19处。在一些情况下，氨基酸位置在d20处。在一些情况下，氨基酸位置在q22处。在一些情况下，氨基酸位置在m23处。在一些情况下，氨基酸位置在n26处。在一些情况下，氨基酸位置在r81处。在一些情况下，氨基酸位置在d84处。在一些情况下，氨基酸位置在s87处。在一些情况下，氨基酸位置在n88处。在一些情况下，氨基酸位置在v91处。在一些情况下，氨基酸位置在i92处。在一些情况下，氨基酸位置在l94处。在一些情况下，氨基酸位置在e95处。在一些情况下，氨基酸位置在e116处。在一些情况下，氨基酸位置在n119处。在一些情况下，氨基酸位置在r120处。在一些情况下，氨基酸位置在t123处。在一些情况下，氨基酸位置在a125处。在一些情况下，氨基酸位置在q126处。在一些情况下，氨基酸位置在s127处。在一些情况下，氨基酸位置在s130处。在一些情况下，氨基酸位置在t131处。在一些情况下，氨基酸位置在l132处。在一些情况下，氨基酸位置在t133处。
[0138]
在一些情形下，il-2缀合物进一步包含另外的突变。在此类情况下，氨基酸与另外的缀合部分缀合，用于增加血清半衰期、稳定性或其组合。可替代地，在与另外的缀合部分结合之前，氨基酸首先突变为天然氨基酸，如赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸；或者突变为非天然氨基酸。
[0139]
在一些实施方案中，相对于野生型il-2多肽，il-2缀合物对il-2rαβγ复合物的il-2受体β(il-2rβ)亚基、il-2受体γ(il-2rγ)亚基或其组合具有降低的结合亲和力。在一些情形下，相对于野生型il-2多肽，il-2缀合物对il-2受体β(il-2rβ)亚基、il-2受体γ(il-2rγ)亚基或其组合降低的亲和力为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或大于99％。在一些情况下，降低的亲和力为约10％。在一些情况下，降低的亲和力为约20％。在一些情况下，降低的亲和力为约40％。在一些情况下，降低的亲和力为约50％。在一些情况下，降低的亲和力为约60％。在一些情况下，降低的亲和力为约80％。在一些情况下，降低的亲和力为约90％。在一些情况下，降低的亲和力为约99％。在一些情况下，降低的亲和力大于99％。在一些情况下，降低的亲和力为约80％。在一些情况下，降低的亲和力为约100％。
[0140]
在一些实施方案中，相对于野生型il-2多肽，il-2缀合物对il-2受体β(il-2rβ)亚基、il-2受体γ(il-2rγ)亚基或其组合降低的结合亲和力为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍或更多倍。在一些情况下，降低的亲和力为约1倍。在一些情况下，降低的亲和力为约2倍。在一些情况下，降低的亲和力为约4倍。在一些情况下，降低的亲和力为约5倍。在一些情况下，降低的亲和力为约6倍。在一些情况下，降低的亲和力为约8倍。在一些情况下，降低的亲和力为约10倍。在一些情况下，降低的亲和力为约30倍。在一些情况下，降低的亲和力为约50倍。在一些情况下，降低的亲和力为约100倍。在一些情况下，降低的亲和力为约300倍。在一些情况下，降低的亲和力为约500倍。在一些情况下，降低的亲和力为约1000倍。在一些情况下，降低的亲和力超过1,000倍。
[0141]
在一些实施方案中，il-2缀合物具有减少的至il-2/il-2rβ复合物的il-2rγ亚基募集。在一些情况下，减少的募集是与通过不含非天然氨基酸的等效il-2多肽(例如，野生型il-2多肽)进行的il-2rγ亚基募集相比。在一些情况下，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效il-2多肽，il-2rγ亚基募集的减少为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、
80％、90％、95％、99％或大于99％减少。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约10％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约20％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约40％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约50％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约60％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约70％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约80％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约90％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约99％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少大于99％。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约100％。在一些情形下，il-2缀合物进一步具有il-2rα亚基募集的增加。
[0142]
在一些实施方案中，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效il-2多肽(例如，野生型il-2多肽)，il-2rγ亚基募集的减少为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍或更多倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约1倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约2倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约4倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约5倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约6倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约8倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约10倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约30倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约50倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约100倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约300倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约500倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少为约1000倍。在一些情况下，il-2rγ亚基募集的减少超过1,000倍。在一些情形下，il-2缀合物进一步具有il-2rα亚基募集的增加。
[0143]
在一些实施方案中，il-2缀合物具有至il-2多肽的il-2rα亚基募集的增加。在一些情况下，减少的募集是与通过不含非天然氨基酸的等效il-2多肽(例如，野生型il-2多肽)进行的il-2rα亚基募集相比。在一些情况下，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效il-2多肽，il-2rα亚基募集的增加为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或大于99％增加。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约10％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约20％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约40％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约50％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约60％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约70％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约80％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约90％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约99％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加大于99％。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约100％。在一些情形下，il-2缀合物进一步具有il-2rβ亚基和/或il-2rγ亚基的募集的减少。
[0144]
在一些实施方案中，相对于不含非天然氨基酸修饰的等效il-2多肽(例如，野生型il-2多肽)，il-2rα亚基募集的增加为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1,000倍或更多倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约1倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约2倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约4倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约5倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约6倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约8倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约10倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约30倍。
在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约50倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约100倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约300倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约500倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加为约1000倍。在一些情况下，il-2rα亚基募集的增加超过1,000倍。在一些情形下，il-2缀合物进一步具有il-2rβ亚基和/或il-2rγ亚基的募集的减少。
[0145]
在一些实施方案中，本文所述的il-2多肽具有对il-2rβγ的受体信号传导效力的降低。在一些情形下，相对于野生型il-2多肽，对il-2rβγ的受体信号传导效力的降低为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000倍或更多倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约2倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约5倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约10倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约20倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约30倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约40倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约50倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约100倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约200倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约300倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约400倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约500倍。在一些情况下，受体信号传导效力的降低为约1000倍。
[0146]
在一些情形下，通过ec50值来衡量受体信号传导效力。在一些情况下，受体信号传导效力的降低是ec50的增加。在一些情形下，相对于野生型il-2多肽，ec50的增加为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000倍或更多倍。
[0147]
在一些情形下，通过ed50值来衡量受体信号传导效力。在一些情况下，受体信号传导效力的降低是ed50的增加。在一些情形下，相对于野生型il-2多肽，ed50的增加为约1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、30倍、50倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000倍或更多倍。
[0148]
在一些实施方案中，与野生型il-2多肽的治疗窗相比，本文所述的il-2多肽具有扩大的治疗窗。在一些情形下，扩大的治疗窗是由于il-2多肽与白介素2受体βγ(il-2rβγ)之间的结合的降低、对il-2rβγ的受体信号传导效力的降低、il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集的减少或il-2rα亚基至il-2多肽的募集的增加所致。在一些情形下，il-2多肽不具有受损的白介素2αβγ受体(il-2rαβγ)的激活。
[0149]
在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽展现出对il-2βγ信号传导复合物的第一受体信号传导效力和对il-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号传导效力，并且其中第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间的差异为至少1倍。在一些情形下，差异为至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、1000倍或更多倍。在一些情形下，第一受体信号传导效力小于第二受体信号传导效力。在一些情形下，第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力低至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更低。在一些情况下，经修饰的il-2多肽对il-2βγ信号传导复合物的受体信号传导效力低于对il-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号传导效力。在一些情况下，经修饰的il-2多肽的第一受体信号传导效力比野生型il-2多肽的受体信号传导效力低
至少1倍。在一些情况下，经修饰的il-2多肽的第一受体信号传导效力比野生型il-2多肽的受体信号传导效力低至少2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍或500倍。在一些情况下，第一受体信号传导效力和第二受体信号传导效力都低于野生型il-2多肽的相应效力，但是第一受体信号传导效力低于第二受体信号传导效力。在一些情况下，第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间的差异增加经修饰的il-2多肽的治疗窗。
[0150]
在一些情形下，缀合部分削弱或阻断il-2对il-2rβγ的受体信号传导效力，或者减少il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集。
[0151]
在一些情形下，对il-2rβγ的受体信号传导效力降低的经修饰的il-2多肽能够扩增cd4 t调节性(treg)细胞。
[0152]
在一些实施方案中，通过经修饰的il-2/il-2rαβγ复合物进行的cd4 treg细胞增殖等效于或大于野生型il-2多肽进行的cd4 treg细胞增殖。
[0153]
在一些实施方案中，il-2/il-2rαβγ复合物诱导cd4 treg细胞增殖至足以在动物模型中调节病程的群体。
[0154]
在一些实施方案中，本文描述了白介素2αβγ受体(il-2rαβγ)结合蛋白，其中所述结合蛋白对白介素2βγ受体(il-2rβγ)的受体信号传导效力小于野生型人il-2(hil-2)对白介素2βγ受体(il-2rβγ)的受体信号传导效力，并且其中所述结合蛋白包含至少一种非天然氨基酸。在一些情况下，所述结合蛋白是经修饰的il-2多肽或其功能活性片段，其中经修饰的il-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。
[0155]
在一些实施方案中，本文描述了白介素2αβγ受体(il-2rαβγ)结合蛋白，其中通过所述结合蛋白进行的il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集小于野生型人il-2(hil-2)进行的il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集，并且其中所述结合蛋白包含至少一种非天然氨基酸。在一些情况下，所述结合蛋白是经修饰的il-2多肽或其功能活性片段，其中经修饰的il-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。
[0156]
在一些实施方案中，本文描述了白介素2αβγ受体(il-2rαβγ)结合蛋白，其中所述结合蛋白对白介素2βγ受体(il-2rβγ)的结合亲和力小于野生型人il-2(hil-2)对白介素2βγ受体(il-2rβγ)的结合亲和力，并且其中所述结合蛋白包含至少一种非天然氨基酸。在此类情况下，所述结合蛋白是经修饰的il-2多肽或其功能活性片段，其中经修饰的il-2多肽包含至少一种非天然氨基酸。
[0157]
在一些实施方案中，本文描述了il-2/il-2rαβγ复合物，其包含含有非天然氨基酸的经修饰的il-2多肽和il-2rαβγ，其中经修饰的il-2多肽对il-2rβγ具有降低的受体信号传导效力，并且其中降低的受体信号传导效力是与野生型il-2多肽与il-2rβγ之间的结合亲和力相比。在一些情况下，经修饰的il-2多肽进一步包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
[0158]
在一些实施方案中，本文描述了il-2/il-2rαβγ复合物，其包含含有非天然氨基酸的经修饰的il-2多肽和il-2rαβγ，其中通过经修饰的il-2多肽进行的il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集小于野生型il-2多肽进行的il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集。在一些情况下，经修饰的il-2多肽进一步包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
[0159]
在一些实施方案中，本文描述了il-2/il-2rαβγ复合物，其包含含有非天然氨基
酸的经修饰的il-2多肽和il-2rαβγ，其中经修饰的il-2多肽对il-2rβγ具有降低的结合亲和力，并且其中降低的结合亲和力是与野生型il-2多肽与il-2rβγ之间的结合亲和力相比。在一些实施方案中，本文描述了il-2/il-2rαβγ复合物，其包含含有非天然氨基酸的经修饰的il-2多肽和il-2rαβγ，其中通过经修饰的il-2多肽进行的il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集小于野生型il-2多肽进行的il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集。在一些情形下，经修饰的il-2多肽进一步包含共价附接至非天然氨基酸的缀合部分。
[0160]
在一些实施方案中，本文描述了选择性扩增细胞群中的cd4 treg细胞的cd4 treg细胞激活剂，其中所述激活剂包含含有至少一种非天然氨基酸的经修饰的il-2多肽。在一些情形下，当使所述激活剂与所述cd3 细胞群接触时，相对于与野生型il-2多肽接触的cd3 细胞群中cd8 效应t细胞和/或自然杀伤细胞的扩增，所述激活剂将cd3 细胞群中的cd8 效应t细胞和/或自然杀伤细胞扩增少于20％、15％、10％、5％、1％或0.1％。在一些情形下，所述细胞群是体内细胞群。在一些情形下，所述细胞群是体外细胞群。在一些情形下，所述细胞群是离体细胞群。
[0161]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置8的残基k8处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0162]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置15的残基h15处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰
期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0163]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置18的残基l18处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0164]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置19的残基d19处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2
多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0165]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置22的残基m22处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0166]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置25的残基n25处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生
型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0167]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置87的残基n87处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0168]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置99的残基e99处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0169]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置118的残基n118处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0170]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置122的残基t122处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0171]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置125的残基q125处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案
中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0172]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置126的残基s126处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0173]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置130的残基t130处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括
45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0174]
在一些实施方案中，在分别对应于seq id no:3的位置108和87的残基d108和n87处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0175]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置91的残基v91处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰
期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，也没有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。细胞因子缀合物前体
[0176]
本文描述了细胞因子缀合物前体，其包含突变型细胞因子(如il-2)，其中一个或多个氨基酸已经从野生型氨基酸突变。此类前体通常与本文所述的方法一起用于治疗疾病或病症。在一些实施方案中，细胞因子前体是未缀合的。此类突变不同地包括添加、缺失或取代。在一些实施方案中，突变包括取代为不同的天然氨基酸。在一些情形下，突变型细胞因子在氨基酸位置p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132处包含突变，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:3。在一些情形下，氨基酸位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。在一些情形下，氨基酸位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。在一些情形下，氨基酸位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90和e99。在一些情形下，氨基酸位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90和e99。在一些情形下，氨基酸位置选自m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108和n118。在一些情形下，氨基酸位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29和y30。在一些情形下，氨基酸位置选自e14、h15、l17和l18。在一些情形下，氨基酸位置选自s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10。在一些情形下，氨基酸位置选自d19、m22、n25和n87。在一些情况下，氨基酸位置在k8处。在一些情况下，氨基酸位置在h15处。在一些情况下，氨基酸位置在l18处。在一些情况下，氨基酸位置在d19处。在一些情况下，氨基酸位置在m22处。在一些情况下，氨基酸位置在n25处。在一些情况下，氨基酸位置在n87处。在一些情况下，氨基酸位置在e99处。在一些情况下，氨基酸位置在n118处。在一些情况下，氨基酸位置在t122处。在一些情况下，氨基酸位置在q125处。在一些情况下，氨基酸位置在s126处。在一些情况下，氨基酸位置在t130处。在一些情况下，氨基酸位置在n87和d108处。在一些情况下，氨基酸位置在v90处。在一些情况下，氨基酸位置在d108处。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含缀合部分，其中缀合部分附接至突变型细胞因子中突变的位点。
[0177]
本文所述的细胞因子突变体通常包含至天然氨基酸的一个或多个突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和至少一个突变。在一些实施方案中，细胞因
id no:3和q125d突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125q突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125g突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125h突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125m突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125f突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125p突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125s突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125t突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和q125v突变。
[0180]
本文所述的细胞因子突变体通常包含至天然氨基酸的一个或多个突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和至少一个突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18k突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18c突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18a突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18i突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18l突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18y突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18w突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18n突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18r突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18d突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18q突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18g突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18h突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18m突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18f突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18p突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18s突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18t突变。在一些实施方案中，细胞因子突变体包含seq id no:3和l18v突变。蛋白质或肽融合物
[0181]
在一些实施方案中，本文所述的细胞因子缀合物包含与肽或蛋白质融合的细胞因子(例如，il-2或其他细胞因子)(融合物)。在一些实施方案中，肽或蛋白质是抗体或抗体片段。在一些实施方案中，本文所述的细胞因子缀合物包含与抗体或其结合片段融合的细胞因子(例如，il-2或其他细胞因子)。在一些实施方案中，本文所述的细胞因子与多种蛋白质或肽融合。在一些实施方案中，细胞因子缀合物包含与蛋白质或肽的细胞因子融合物以及至少一个缀合部分。在一些情形下，抗体或其结合片段包括人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab'、二价fab2、f(ab)'3片段、单链可变片段(scfv)、双scfv、(scfv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的fv蛋白(dsfv)、单结构域抗体(sdab)、ig nar、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或者其经化学修饰的衍生物。在一些情形下，此类融合蛋白是通过翻译直接产生的。在一些实施方案中，融合物是使用化学或其他酶促连接方法产生的。在一些实施方案中，细胞因子缀合物包含由接头附接的融合的肽或蛋白质。在一些实施方案中，接头是肽。在一些实施方案中，细胞因子缀合物包含n末端肽或蛋白质融合物。在一些实施方案中，细胞因子缀合物包含c末端肽或蛋白质融合物。在一些情况下，与肽或蛋白质融合的细胞因子进一步缀合至下文所述的一个或多个缀合部分。
[0182]
在一些情形下，细胞因子缀合物包含与scfv、双scfv、(scfv)2、dsfv或sdab融合物的融合物。在一些情况下，融合物包含scfv。在一些情况下，细胞因子缀合物包含与双scfv的融合物。在一些情况下，细胞因子缀合物包含与(scfv)2的融合物。在一些情况下，细胞因子缀合物包含与dsfv的融合物。在一些情况下，细胞因子缀合物包含与sdab的融合物。在一些情况下，与scfv、双scfv、(scfv)2、dsfv或sdab融合的细胞因子进一步缀合至下文所述的一个或多个缀合部分。
[0183]
在一些情形下，细胞因子缀合物包含与抗体(例如，igg、iga、igm、ige或igd)的fc部分的融合物。在一些情形下，细胞因子缀合物包含与igg(例如，igg1、igg3或igg4)的fc部分的融合物。在一些情况下，与fc部分融合的细胞因子进一步缀合至下文所述的一个或多个缀合部分。
[0184]
在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽与抗体或其结合片段融合。在一些情况下，细胞因子多肽与人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab'、二价fab2、f(ab)'3片段、单链可变片段(scfv)、双scfv、(scfv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的fv蛋白(dsfv)、单结构域抗体(sdab)、ig nar、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或者其经化学修饰的衍生物融合。在另外的情况下，细胞因子多肽与抗体的fc部分融合。在另外的情况下，细胞因子多肽与igg(例如，igg1、igg3或igg4)的fc部分融合。在一些情况下，与抗体或其结合片段融合的细胞因子进一步缀合至下文所述的一个或多个缀合部分。
[0185]
在一些情况下，il-2多肽与抗体或其结合片段融合。在一些情况下，il-2多肽与人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab'、二价fab2、f(ab)'3片段、单链可变片段(scfv)、双scfv、(scfv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的fv蛋白(dsfv)、单结构域抗体(sdab)、ig nar、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或者其经化学修饰的衍生物融合。在另外的情况下，il-2多肽与抗体的fc部分融合。在另外的情况下，il-2多肽与igg(例如，igg1、igg3或igg4)的fc部分融合。在一些情况下，与抗体或其结合片段融合的il-2多肽进一步缀合至下文所述的一个或多个缀合部分。天然和非天然氨基酸
[0186]
在一些实施方案中，在与缀合部分结合(或反应)之前，本文所述的氨基酸残基(例如，在细胞因子如il-2内)突变为赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸。例如，赖氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的侧链可以与本文所述的缀合部分结合。在一些情形下，氨基酸残基突变为半胱氨酸、赖氨酸或组氨酸。在一些情况下，氨基酸残基突变为半胱氨酸。在一些情况下，氨基酸残基突变为赖氨酸。在一些情况下，氨基酸残基突变为组氨酸。在一些情况下，氨基酸残基突变为酪氨酸。在一些情况下，氨基酸残基突变为色氨酸。在一些实施方案中，非天然氨基酸不与缀合部分缀合。在一些实施方案中，本文所述的细胞因子包含非天然氨基酸，其中细胞因子缀合至蛋白质，其中附接点不是所述非天然氨基酸。
[0187]
在一些实施方案中，在与缀合部分结合之前，本文所述的氨基酸残基(例如，在细胞因子如il-2内)突变为非天然氨基酸。在一些情况下，突变为非天然氨基酸防止或最小化
免疫系统的自身抗原反应。如本文所用，术语“非天然氨基酸”或“非经典氨基酸”是指除了天然存在于蛋白质中的20种氨基酸以外的氨基酸。非天然氨基酸的非限制性例子包括：对乙酰基-l-苯丙氨酸、对碘-l-苯丙氨酸、对甲氧基苯丙氨酸、o-甲基-l-酪氨酸、对炔丙氧基苯丙氨酸、对炔丙基-苯丙氨酸、l-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、o-4-烯丙基-l-酪氨酸、4-丙基-l-酪氨酸、三-o-乙酰基-glcnacp-丝氨酸、l-多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸、邻叠氮基-l-苯丙氨酸、间叠氮基-l-苯丙氨酸、对叠氮基-l-苯丙氨酸、对酰基-l-苯丙氨酸、对苯甲酰基-l-苯丙氨酸、对二羟硼基苯丙氨酸、o-炔丙基酪氨酸、l-磷酸丝氨酸、膦酰丝氨酸、膦酰酪氨酸、对溴苯丙氨酸、硒代半胱氨酸、对氨基-l-苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸、n6-(2-叠氮基乙氧基)-羰基-l-赖氨酸(azk；其化学结构在图3c中显示为化合物90)、酪氨酸氨基酸的非天然类似物；谷氨酰胺氨基酸的非天然类似物；苯丙氨酸氨基酸的非天然类似物；丝氨酸氨基酸的非天然类似物；苏氨酸氨基酸的非天然类似物；烷基、芳基、酰基、叠氮基、氰基、卤基、肼、酰肼、羟基、烯基、炔基、醚、硫醇、磺酰基、硒基、酯、硫代酸、硼酸酯(borate)、硼酸酯(boronate)、磷酸基、膦酰基、膦、杂环、烯酮、亚胺、醛、羟胺、酮基或氨基取代的氨基酸或其组合；具有光可激活交联剂的氨基酸；自旋标记的氨基酸；荧光氨基酸；金属结合氨基酸；含有金属的氨基酸；放射性氨基酸；光笼化和/或光可异构氨基酸；含有生物素或生物素类似物的氨基酸；含有酮基的氨基酸；包含聚乙二醇或聚醚的氨基酸；重原子取代的氨基酸；化学可切割或光可切割氨基酸；具有延长侧链的氨基酸；含有毒性基团的氨基酸；糖取代的氨基酸；碳连接的含糖氨基酸；氧化还原活性氨基酸；含有a-羟基的酸；氨基硫代酸；α,α二取代的氨基酸；β-氨基酸；除了脯氨酸或组氨酸以外的环状氨基酸；以及除了苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸以外的芳香族氨基酸。
[0188]
在一些实施方案中，非天然氨基酸包含选择性反应基团或用于位点选择性标记靶多肽的反应基团。在一些情形下，化学是双正交反应(例如，生物相容性和选择性反应)。在一些情况下，化学是cu(i)催化或“无铜”炔-叠氮三唑形成反应、施陶丁格连接(staudinger ligation)、逆电子需求的狄尔斯-阿尔德(inverse-electron-demand diels-alder，iedda)反应、“光-点击”化学或金属介导的过程(如烯烃复分解和铃木-宫浦(suzuki-miyaura)或薗头(sonogashira)交叉偶联)。
[0189]
在一些实施方案中，非天然氨基酸包含光反应性基团，其在用例如uv辐照时交联。
[0190]
在一些实施方案中，非天然氨基酸包括光笼化氨基酸。
[0191]
在一些情形下，非天然氨基酸是对位取代、间位取代或邻位取代的氨基酸衍生物。
[0192]
在一些情形下，非天然氨基酸包括对乙酰基-l-苯丙氨酸、邻叠氮甲基-l-苯丙氨酸、间叠氮甲基-l-苯丙氨酸、对叠氮甲基-l-苯丙氨酸(pamf)、对碘-l-苯丙氨酸、o-甲基-l-酪氨酸、对甲氧基苯丙氨酸、对炔丙基氧基苯丙氨酸、邻炔丙基-苯丙氨酸、间炔丙基-苯丙氨酸、对炔丙基-苯丙氨酸、l-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、o-4-烯丙基-l-酪氨酸、4-丙基-l-酪氨酸、三-o-乙酰基-glcnacp-丝氨酸、l-多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸、对叠氮基-l-苯丙氨酸、对酰基-l-苯丙氨酸、对苯甲酰基-l-苯丙氨酸、l-磷酸丝氨酸、膦酰丝氨酸、膦酰酪氨酸、对溴苯丙氨酸、对氨基-l-苯丙氨酸或异丙基-l-苯丙氨酸。
[0193]
在一些情况下，非天然氨基酸是3-氨基酪氨酸、3-硝基酪氨酸、3,4-二羟基-苯丙氨酸或3-碘酪氨酸。
[0194]
在一些情况下，非天然氨基酸是苯基硒代半胱氨酸。
[0195]
在一些情形下，非天然氨基酸是含有二苯甲酮、酮、碘化物、甲氧基、乙酰基、苯甲酰基或叠氮化物的苯丙氨酸衍生物。
[0196]
在一些情形下，非天然氨基酸是含有二苯甲酮、酮、碘化物、甲氧基、乙酰基、苯甲酰基或叠氮化物的赖氨酸衍生物。
[0197]
在一些情形下，非天然氨基酸包含芳香族侧链。
[0198]
在一些情形下，非天然氨基酸不包含芳香族侧链。
[0199]
在一些情形下，非天然氨基酸包含叠氮基。
[0200]
在一些情形下，非天然氨基酸包含迈克尔(michael)受体基团。在一些情形下，迈克尔受体基团包含能够通过1,2-加成反应形成共价键的不饱和部分。在一些情形下，迈克尔受体基团包括缺电子的烯烃或炔烃。在一些情形下，迈克尔受体基团包括但不限于α、β不饱和的：酮、醛、亚砜、砜、腈、亚胺或芳香族化合物。
[0201]
在一些情形下，非天然氨基酸是脱氢丙氨酸。
[0202]
在一些情形下，非天然氨基酸包含醛或酮基团。
[0203]
在一些情形下，非天然氨基酸是包含醛或酮基团的赖氨酸衍生物。
[0204]
在一些情形下，非天然氨基酸是在β、γ或δ位置处包含一个或多个o、n、se或s原子的赖氨酸衍生物。在一些情形下，非天然氨基酸是在γ位置处包含o、n、se或s原子的赖氨酸衍生物。
[0205]
在一些情形下，非天然氨基酸是赖氨酸衍生物，其中εn原子被氧原子替代。
[0206]
在一些情形下，非天然氨基酸是赖氨酸衍生物，其不是天然存在的经翻译后修饰的赖氨酸。
[0207]
在一些情形下，非天然氨基酸是包含侧链的氨基酸，其中从α位置起的第六个原子包含羰基。在一些情形下，非天然氨基酸是包含侧链的氨基酸，其中从α位置起的第六个原子包含羰基，并且从α位置起的第五个原子是氮。在一些情形下，非天然氨基酸是包含侧链的氨基酸，其中从α位置起的第七个原子是氧原子。
[0208]
在一些情形下，非天然氨基酸是包含硒的丝氨酸衍生物。在一些情形下，非天然氨基酸是硒代丝氨酸(2-氨基-3-氢硒代丙酸)。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-3-((2-((3-(苄氧基)-3-氧代丙基)氨基)乙基)硒基)丙酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-3-(苯基硒基)丙酸。在一些情形下，非天然氨基酸包含硒，其中硒的氧化导致形成包含烯烃的非天然氨基酸。
[0209]
在一些情形下，非天然氨基酸包含环辛炔基。
[0210]
在一些情形下，非天然氨基酸包含反式环辛烯基。
[0211]
在一些情形下，非天然氨基酸包含降冰片烯基。
[0212]
在一些情形下，非天然氨基酸包含环丙烯基。
[0213]
在一些情形下，非天然氨基酸包含二氮杂环丙烯基团。
[0214]
在一些情形下，非天然氨基酸包含四嗪基团。
[0215]
在一些情形下，非天然氨基酸是赖氨酸衍生物，其中侧链氮被氨甲酰化。在一些情形下，非天然氨基酸是赖氨酸衍生物，其中侧链氮被酰化。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-boc-n6-甲基赖氨酸。在一些
情形下，非天然氨基酸是n6-乙酰基赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是吡咯赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-三氟乙酰基赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(苄氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(对碘苄氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(对硝基苄氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-脯氨酰基赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(环戊基氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(环戊烷羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(四氢呋喃-2-羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(3-乙炔基四氢呋喃-2-羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(2-叠氮基环戊基氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(2-叠氮基乙氧基)-羰基-赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(2-硝基苄氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-{[(2-环辛炔基氧基)羰基]氨基}己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(2-氨基丁-3-炔酰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-6-((2-氨基丁-3-炔酰基)氧基)己酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(烯丙氧基羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(丁烯基-4-氧基羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(戊烯基-5-氧基羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((丁-3-炔-1-基氧基)羰基)-赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((戊-4-炔-1-基氧基)羰基)-赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(噻唑烷-4-羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-8-氧代壬酸。在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-8-氧代辛酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(2-氧代乙酰基)赖氨酸。
[0216]
在一些情形下，非天然氨基酸是n6-丙酰基赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-丁酰基赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(丁-2-烯酰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((二环[2.2.1]庚-5-烯-2-基氧基)羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((螺[2.3]己-1-烯-5-基甲氧基)羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-(((4-(1-(三氟甲基)环丙-2-烯-1-基)苄基)氧基)羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((二环[2.2.1]庚-5-烯-2-基甲氧基)羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是半胱氨酰基赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((1-(6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙氧基)羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((2-(3-甲基-3h-二氮杂环丙烯-3-基)乙氧基)羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((3-(3-甲基-3h-二氮杂环丙烯-3-基)丙氧基)羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((间硝基苄氧基)n6-甲基羰基)赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((二环[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基)羰基)-赖氨酸。在一些情形下，非天然氨基酸是n6-((环庚-3-烯-1-基氧基)羰基)-l-赖氨酸。
[0217]
在一些情形下，非天然氨基酸是2-氨基-3-(((((苄氧基)羰基)氨基)甲基)硒基)丙酸。
[0218]
在一些实施方案中，通过重新目的化的琥珀、蛋白石或赭石终止密码子将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。
[0219]
在一些实施方案中，通过4个碱基的密码子将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。
[0220]
在一些实施方案中，通过重新目的化的稀有的有义密码子将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。
[0221]
在一些实施方案中，通过包含非天然核酸的合成密码子将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。在一些情形下，通过正交的经修饰的合成酶/trna对将非天然氨基酸掺入细胞因子中。此类正交对包含非天然合成酶，其能够将非天然氨基酸装载到非天然trna上，同时最小化a)其他内源性氨基酸装载到非天然trna上和b)非天然氨基酸装载到其他内源性trna上。此类正交对包含能够通过非天然合成酶进行装载，同时避免通过内源性合成酶装载a)其他内源性氨基酸的trna。在一些实施方案中，从各种生物体(如细菌、酵母、古细菌或人来源)鉴定此类对。在一些实施方案中，正交合成酶/trna对包含来自单一生物体的组分。在一些实施方案中，正交合成酶/trna对包含来自两种不同生物体的组分。在一些实施方案中，正交合成酶/trna对包含在修饰之前促进两种不同氨基酸的翻译的组分。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的丙氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的精氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的天冬酰胺合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的天冬氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的半胱氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的谷氨酰胺合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的谷氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的丙氨酸甘氨酸。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的组氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的亮氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的异亮氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的赖氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的甲硫氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的苯丙氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的脯氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的丝氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的苏氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的色氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的酪氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的缬氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的磷酸丝氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的丙氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的精氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的天冬酰胺trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的天冬氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的半胱氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的谷氨酰胺trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的谷氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的丙氨酸甘氨酸。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的组氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的亮氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的异亮氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的赖氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的甲硫氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的苯丙氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的脯氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的丝氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的苏氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的色氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的酪氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的缬氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的磷酸丝氨酸trna。
[0222]
在一些实施方案中，通过氨酰基(aars或rs)-trna合成酶-trna对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。示例性aars-trna对包括但不限于詹氏甲烷球菌(methanococcus jannaschii)(mj-tyr)aars/trna对、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌(b.stearothermophilus)trna
cua
对、大肠杆菌leurs(ec-leu)/嗜热脂肪芽孢杆菌trna
cua
对和吡咯赖氨酰-trna对。在一些情形下，通过mj-tyrrs/trna对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。可以通过mj-tyrrs/trna对掺入的示例性uaa包括但不限于对位取代的苯丙氨酸衍生物，如对氨基苯丙氨酸和对甲氧基苯丙氨酸；间位取代的酪氨酸衍生物，如3-氨基酪氨酸、3-硝基酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸和3-碘酪氨酸；苯基硒代半胱氨酸；对硼苯丙氨酸；以及邻硝基苄基酪氨酸。
[0223]
在一些情形下，通过ec-tyr/trna
cua
或ec-leu/trna
cua
对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。可以通过ec-tyr/trna
cua
或ec-leu/trna
cua
对掺入的示例性uaa包括但不限于含有苯甲酮、酮、碘化物或叠氮化物取代基的苯丙氨酸衍生物；o-炔丙基酪氨酸；α-氨基辛酸、o-甲基酪氨酸、o-硝基苄基半胱氨酸；和3-(萘-2-基氨基)-2-氨基-丙酸。
[0224]
在一些情形下，通过吡咯赖氨酰-trna对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。在一些情况下，pylrs获自古细菌，例如获自产甲烷的古细菌。在一些情况下，pylrs获自巴氏甲烷八叠球菌(methanosarcina barkeri)、马氏甲烷八叠球菌(methanosarcina mazei)或乙酸甲烷八叠球菌(methanosarcina acetivorans)。可以通过吡咯赖氨酰-trna对掺入的示例性uaa包括但不限于酰胺和氨基甲酸酯取代的赖氨酸，如2-氨基-6-((r)-四氢呋喃-2-甲酰胺基)己酸、n-ε-d-脯氨酰基-l-赖氨酸和n-ε-环戊基氧基羰基-l-赖氨酸；n-ε-丙烯酰基-l-赖氨酸；n-ε-[(1-(6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙氧基)羰基]-l-赖氨酸；和n-ε-(1-甲基环丙-2-烯甲酰胺基)赖氨酸。在一些实施方案中，可以通过使用马氏甲烷八叠球菌(m.mazei)pyl trna制备本文公开的il-2缀合物，马氏甲烷八叠球菌pyl trna通过巴氏甲烷八叠球菌(m.barkeri)吡咯赖氨酰-trna合成酶(mb pylrs)选择性装载非天然氨基酸，如n6-(2-叠氮基乙氧基)-羰基-l-赖氨酸(azk)。其他方法是本领域普通技术人员已知的，如zhang等人,nature 2017,551(7682):644-647中公开的那些。
[0225]
在一些情形下，通过us 9,988,619和us 9,938,516中公开的合成酶将非天然氨基酸掺入本文所述的细胞因子(例如，il多肽)中。可以通过此类合成酶掺入的示例性uaa包括对甲基叠氮基-l-苯丙氨酸、芳烷基、杂环基、杂芳烷基非天然氨基酸等。在一些实施方案中，此类uaa包含吡啶基、吡嗪基、吡唑基、三唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基或其他杂环。在一些实施方案中，此类氨基酸包含叠氮化物、四嗪或能够与偶联配偶体(如水溶性部分)缀合的其他化学基团。在一些实施方案中，此类合成酶被表达并用于将uaa在体内掺入细胞因子中。在一些实施方案中，使用无细胞翻译系统，使用此类合成酶来将uaa掺入细胞因子中。
[0226]
在一些情形下，通过天然存在的合成酶将非天然氨基酸掺入本文所述的细胞因子(例如，il多肽)中。在一些实施方案中，通过对一种或多种氨基酸营养缺陷的生物体将非天然氨基酸掺入细胞因子中。在一些实施方案中，对应于营养缺陷型氨基酸的合成酶能够将非天然氨基酸装载到相应的trna上。在一些实施方案中，非天然氨基酸是硒代半胱氨酸或其衍生物。在一些实施方案中，非天然氨基酸是硒代甲硫氨酸或其衍生物。在一些实施方案中，非天然氨基酸是芳香族氨基酸，其中芳香族氨基酸包含芳基卤化物，如碘化物。在实施
方案中，非天然氨基酸在结构上与营养缺陷型氨基酸类似。
[0227]
在一些情形下，非天然氨基酸包括图1所说明的非天然氨基酸。
[0228]
在一些情形下，非天然氨基酸包括赖氨酸或苯丙氨酸衍生物或类似物。在一些情形下，非天然氨基酸包括赖氨酸衍生物或赖氨酸类似物。在一些情形下，非天然氨基酸包括吡咯赖氨酸(pyl)。在一些情形下，非天然氨基酸包括苯丙氨酸衍生物或苯丙氨酸类似物。在一些情形下，非天然氨基酸是wan等人,“pyrrolysyl-trna synthetase:an ordinary enzyme but an outstanding genetic code expansion tool,”biochim biophys acta 1844(6):1059-4070(2014)中描述的非天然氨基酸。在一些情形下，非天然氨基酸包括图2(例如，图2a和图2b)所说明的非天然氨基酸。
[0229]
在一些实施方案中，非天然氨基酸包括图3a-图3d(改编自dumas等人,chemical science 2015,6,50-69的表1)所说明的非天然氨基酸。
[0230]
在一些实施方案中，掺入本文所述的细胞因子(例如，il多肽)中的非天然氨基酸公开于us 9,840,493；us 9,682,934；us 2017/0260137；us 9,938,516；或us 2018/0086734中。可以通过此类合成酶掺入的示例性uaa包括对甲基叠氮基-l-苯丙氨酸、芳烷基、杂环基和杂芳烷基以及赖氨酸衍生物非天然氨基酸。在一些实施方案中，此类uaa包含吡啶基、吡嗪基、吡唑基、三唑基、噁唑基、噻唑基、噻吩基或其他杂环。在一些实施方案中，此类氨基酸包含叠氮化物、四嗪或能够与偶联配偶体(如水溶性部分)缀合的其他化学基团。在一些实施方案中，uaa包含经由烷基接头附接至芳香族部分的叠氮化物。在一些实施方案中，烷基接头是c
1-c
10
接头。在一些实施方案中，uaa包含经由烷基接头附接至芳香族部分的四嗪。在一些实施方案中，uaa包含经由氨基附接至芳香族部分的四嗪。在一些实施方案中，uaa包含经由烷基氨基附接至芳香族部分的四嗪。在一些实施方案中，uaa包含经由烷基链附接至氨基酸侧链的末端氮(例如，赖氨酸衍生物的n6，或包含较短烷基侧链的衍生物的n5、n4或n3)的叠氮化物。在一些实施方案中，uaa包含经由烷基链附接至氨基酸侧链的末端氮的四嗪。在一些实施方案中，uaa包含经由烷基接头附接至酰胺的叠氮化物或四嗪。在一些实施方案中，uaa是3-氨基丙氨酸、丝氨酸、赖氨酸或其衍生物的含有叠氮化物或四嗪的氨基甲酸酯或酰胺。在一些实施方案中，将此类uaa在体内掺入细胞因子中。在一些实施方案中，将此类uaa在无细胞系统中掺入细胞因子中。缀合部分
[0231]
在某些实施方案中，本文公开了结合至上述一种或多种细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)的缀合部分。在一些情形下，缀合部分是扰乱细胞因子与其受体的相互作用的分子。在一些情形下，缀合部分是在与细胞因子键合时使得细胞因子缀合物能够调节免疫反应的任何分子。在一些情形下，缀合部分经由共价键结合至细胞因子。在一些情形下，本文所述的细胞因子附接至具有三唑基团的缀合部分。在一些情形下，本文所述的细胞因子附接至具有二氢哒嗪或哒嗪基团的缀合部分。在一些情形下，缀合部分包括水溶性聚合物。在其他情形下，缀合部分包括蛋白质或其结合片段。在另外的情形下，缀合部分包括肽。在另外的情形下，缀合部分包括核酸。在另外的情形下，缀合部分包括小分子。在另外的情形下，缀合部分包括生物缀合物(例如，tlr激动剂，如tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8或tlr9激动剂；或合成配体，如pam3cys、cfa、malp2、pam2cys、fsl-1、hib-ompc、聚肌苷酸:聚胞苷酸、聚腺苷酸:聚尿苷酸、agp、mpl a、rc-529、mdf2β、cfa或鞭毛蛋白)。在一些情
况下，缀合部分增加血清半衰期和/或改善稳定性。在一些情况下，缀合部分降低细胞因子与一个或多个细胞因子受体结构域或亚基的相互作用。在另外的情况下，缀合部分阻断细胞因子与具有其一种或多种同源受体的一个或多个细胞因子结构域或亚基的相互作用。在一些实施方案中，本文所述的细胞因子缀合物包含多个缀合部分。在一些实施方案中，缀合部分附接至细胞因子肽中的非天然或天然氨基酸。在一些实施方案中，细胞因子缀合物包含附接至天然氨基酸的缀合部分。在一些实施方案中，细胞因子缀合物附接至细胞因子肽中的非天然氨基酸。在一些实施方案中，缀合部分附接至细胞因子肽的n或c末端氨基酸。多种组合位点公开于本文中，例如，第一缀合部分附接至细胞因子肽中的非天然或天然氨基酸，并且第二缀合部分附接至细胞因子肽的n或c末端氨基酸。在一些实施方案中，单个缀合部分附接至细胞因子肽(例如，订书钉状物(staple))的多个残基。在一些实施方案中，缀合部分附接至细胞因子肽的n和c末端氨基酸两者。水溶性聚合物
[0232]
在一些实施方案中，本文所述的缀合部分是水溶性聚合物。在一些情形下，水溶性聚合物是非肽的、无毒的且生物相容的。如本文所用，如果如临床医生(例如，医师)、毒理学家或临床开发专家所评价的，与结合活组织(例如，施用至患者)单独使用物质或与另一种物质(例如，活性剂，如细胞因子部分)一起使用所述物质相关的有益效果超过任何有害影响，则认为所述物质是生物相容的。在一些情形下，水溶性聚合物进一步是非免疫原性的。在一些情形下，如果物质在体内的预期用途未产生不希望的免疫反应(例如，抗体形成)，或者如果产生了免疫反应，如临床医生(例如，医师)、毒理学家或临床开发专家所评价的，这种反应被认为临床上不显著或不重要，则所述物质被认为是非免疫原性的。
[0233]
在一些情形下，水溶性聚合物的特征为具有从约2至约300个末端。示例性的水溶性聚合物包括但不限于聚(亚烷基二醇)(如聚乙二醇(“peg”)、聚(丙二醇)(“ppg”)、乙二醇与丙二醇的共聚物等)、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)(pva)、聚丙烯酰胺(paam)、聚(n-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)(phpma)、聚二甲基丙烯酰胺(pdaam)、聚磷腈、聚噁唑啉(“poz”)(其描述于wo 2008/106186中)、聚(n-丙烯酰基吗啉)以及任何前述项的组合。
[0234]
在一些情况下，水溶性聚合物并不限于特定结构。在一些情况下，水溶性聚合物是线性的(例如，封端的，例如，烷氧基peg或双官能peg)、分支的或多臂的(例如，叉状peg或附接至多元醇核心的peg)、树枝状(或星形)架构，其各自具有或不具有一个或多个可降解连接。此外，水溶性聚合物的内部结构可以以任何数量的不同重复模式来组织，并且可以选自均聚物、交替共聚物、无规共聚物、嵌段共聚物、交替三聚物、无规三聚物和嵌段三聚物。
[0235]
在一些情形下，水溶性聚合物表示为重复聚合单元的长度，例如聚乙二醇单元的数量n。在一些情形下，水溶性聚合物具有以下结构：其中波浪线指示附接至接头、反应基团或非天然氨基酸，并且n是1-5000。在一些情形下，水溶性聚合物具有以下结构：
其中波浪线指示附接至接头、反应基团或非天然氨基酸，“cap”指示封端基团(例如，如-och3、-o(c
1-c6烷基)、-sme、-s(c
1-c6烷基)、-co2h、-co2(c
1-c6烷基)、-conh2、-conh(c
1-c6烷基)、-con(c
1-c6烷基)2、-nh2、-sh或oh)，并且n是1-5000。在一些实施方案中，n是100-2000、200-1000、300-750、400-600、450-550、400-2000、750-3000或100-750。在一些实施方案中，n是约100、200、300、400、500、600、700、800、900或约1000。在一些实施方案中，n是至少100、200、300、400、500、600、700、800、900或至少1000。在一些实施方案中，n不超过100、200、300、400、500、600、700、800、900或不超过1000。在一些实施方案中，n表示为水溶性聚合物的平均长度。
[0236]
在一些实施方案中，il-2缀合物中水溶性聚合物的重均分子量为从约100道尔顿至约150,000道尔顿。示例性范围包括例如在大于5,000道尔顿至约100,000道尔顿范围内、在从约6,000道尔顿至约90,000道尔顿范围内、在从约10,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在大于10,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在从约20,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在从约53,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在从约25,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内、在从约29,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内、在从约35,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内和在从约40,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内的重均分子量。
[0237]
水溶性聚合物的示例性重均分子量包括约100道尔顿、约200道尔顿、约300道尔顿、约400道尔顿、约500道尔顿、约600道尔顿、约700道尔顿、约750道尔顿、约800道尔顿、约900道尔顿、约1,000道尔顿、约1,500道尔顿、约2,000道尔顿、约2,200道尔顿、约2,500道尔顿、约3,000道尔顿、约4,000道尔顿、约4,400道尔顿、约4,500道尔顿、约5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿和约75,000道尔顿。还可以使用具有任何前述项的总分子量的分支形式的水溶性聚合物(例如，由两个20,000道尔顿的聚合物构成的分支的40,000道尔顿的水溶性聚合物)。在一个或多个实施方案中，缀合物将不具有直接或间接附接有重均分子量小于约6,000道尔顿的peg的任何peg部分。
[0238]
peg通常将包含许多(och2ch2)单体[或(ch2ch2o)单体，这取决于如何定义peg]。如本文所用，重复单元的数量由“(och2ch2)
n”中的下标“n”来标识。因此，(n)的值通常落入一个或多个以下范围内：从2至约3400、从约100至约2300、从约100至约2270、从约136至约2050、从约225至约1930、从约450至约1930、从约1200至约1930、从约568至约2727、从约660至约2730、从约795至约2730、从约795至约2730、从约909至约2730和从约1,200至约1,900。对于分子量已知的任何给定聚合物，可以通过用聚合物的总重均分子量除以重复单体的分子量来确定重复单元的数量(即，“n”)。
[0239]
在一些情形下，水溶性聚合物是封端聚合物，即至少一个末端用相对惰性的基团(如低级c
1-6
烷氧基或羟基)封端的聚合物。当聚合物是peg时，例如，可以使用甲氧基-peg
(通常称为mpeg)，其是peg的线性形式，其中聚合物的一个末端是甲氧基(-och3)基团，而另一个末端是羟基或可以被任选地化学修饰的其他官能团。
[0240]
在一些实施方案中，构成本文公开的il-2缀合物的peg基团是线性或分支peg基团。在一些实施方案中，peg基团是线性peg基团。在一些实施方案中，peg基团是分支peg基团。在一些实施方案中，peg基团是甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是线性或分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有从约100道尔顿至约150,000道尔顿的平均分子量的线性或分支peg基团。示例性范围包括例如在大于5,000道尔顿至约100,000道尔顿范围内、在从约6,000道尔顿至约90,000道尔顿范围内、在从约10,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在大于10,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在从约20,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在从约53,000道尔顿至约85,000道尔顿范围内、在从约25,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内、在从约29,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内、在从约35,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内和在从约40,000道尔顿至约120,000道尔顿范围内的重均分子量。peg基团的示例性重均分子量包括约100道尔顿、约200道尔顿、约300道尔顿、约400道尔顿、约500道尔顿、约600道尔顿、约700道尔顿、约750道尔顿、约800道尔顿、约900道尔顿、约1,000道尔顿、约1,500道尔顿、约2,000道尔顿、约2,200道尔顿、约2,500道尔顿、约3,000道尔顿、约4,000道尔顿、约4,400道尔顿、约4,500道尔顿、约5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、约75,000道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约95,000道尔顿和约100,000道尔顿。在一些实施方案中，peg基团是具有如上文所公开的平均分子量的线性peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有如上文所公开的平均分子量的分支peg基团。在一些实施方案中，构成本文公开的il-2缀合物的peg基团是具有限定的分子量
±
10％或15％或20％或25％的线性或分支peg基团。例如，本公开文本的范围内包括包含具有30,000da
±
3000da、或30,000da
±
4,500da、或30,000da
±
6,000da的分子量的peg基团的il-2缀合物。
[0241]
在一些实施方案中，构成本文公开的il-2缀合物的peg基团是具有从约5,000道尔顿至约60,000道尔顿的平均分子量的线性或分支peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、约75,000道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约95,000道尔顿和约100,000道尔顿的平均分子量的线性或分支peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的线性或分支peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约30,
000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的线性或分支peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的线性peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的分支peg基团。
[0242]
在一些实施方案中，构成本文公开的il-2缀合物的peg基团是具有从约5,000道尔顿至约60,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、约75,000道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约95,000道尔顿和约100,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约10,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约20,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约30,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约50,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约60,000道尔顿的平均分子量的线性甲氧基peg基团。在一些实施方案中，构成本文公开的il-2缀合物的peg基团是具有限定的分子量
±
10％或15％或20％或25％的线性甲氧基peg基团。例如，本公开文本的范围内包括包含具有30,000da
±
3000da、或30,000da
±
4,500da、或30,000da
±
6,000da的分子量的线性甲氧基peg基团的il-2缀合物。
[0243]
在一些实施方案中，构成本文公开的il-2缀合物的peg基团是具有从约5,000道尔顿至约60,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约5,500道尔顿、约6,000道尔顿、约7,000道尔顿、约7,500道尔顿、约8,000道尔顿、约9,000道尔顿、约10,000道尔顿、约11,000道尔顿、约12,000道尔顿、约13,000道尔顿、约14,000道尔顿、约15,000道尔顿、约20,000道尔顿、约22,500道尔顿、约25,000道尔顿、约30,000道尔顿、约35,000道尔顿、约40,000道尔顿、约45,000道尔顿、约50,000道尔顿、约55,000道尔顿、约60,000道尔顿、约65,000道尔顿、约70,000道尔顿、约75,000道尔顿、约80,000道尔顿、约90,000道尔顿、约95,000道尔顿和约100,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均
分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿、约10,000道尔顿、约20,000道尔顿、约30,000道尔顿、约50,000道尔顿或约60,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约5,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约10,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约20,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约30,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约50,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，peg基团是具有约60,000道尔顿的平均分子量的分支甲氧基peg基团。在一些实施方案中，构成本文公开的il-2缀合物的peg基团是具有限定的分子量
±
10％或15％或20％或25％的分支甲氧基peg基团。例如，本公开文本的范围内包括包含具有30,000da
±
3000da、或30,000da
±
4,500da、或30,000da
±
6,000da的分子量的分支甲氧基peg基团的il-2缀合物。
[0244]
在一些实施方案中，示例性的水溶性聚合物包括但不限于来自quanta biodesign,ltd的线性或分支的离散peg(dpeg)；来自nektar therapeutics的线性、分支或叉状peg；以及来自jenkem technology的y形peg衍生物。
[0245]
在一些实施方案中，本文所述的细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至选自聚(亚烷基二醇)(如聚乙二醇(“peg”)、聚(丙二醇)(“ppg”)、乙二醇与丙二醇的共聚物等)、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)(pva)、聚丙烯酰胺(paam)、聚二甲基丙烯酰胺(pdaam)、聚(n-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)(phpma)、聚磷腈、聚噁唑啉(“poz”)、聚(n-丙烯酰基吗啉)及其组合的水溶性聚合物。在一些情形下，细胞因子多肽缀合至peg(例如，聚乙二醇化)。在一些情形下，细胞因子多肽缀合至ppg。在一些情形下，细胞因子多肽缀合至poz。在一些情形下，细胞因子多肽缀合至pvp。
[0246]
在一些实施方案中，本文所述的il-2多肽缀合至选自聚(亚烷基二醇)(如聚乙二醇(“peg”)、聚(丙二醇)(“ppg”)、乙二醇与丙二醇的共聚物等)、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)(pva)、聚丙烯酰胺(paam)、聚二甲基丙烯酰胺(pdaam)、聚(n-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)(phpma)、聚磷腈、聚噁唑啉(“poz”)、聚(n-丙烯酰基吗啉)及其组合的水溶性聚合物。在一些情形下，il-2多肽缀合至peg(例如，聚乙二醇化)。在一些情形下，il-2多肽缀合至ppg。在一些情形下，il-2多肽缀合至poz。在一些情形下，il-2多肽缀合至pvp。
[0247]
在一些情形下，水溶性聚合物包括聚甘油(pg)。在一些情况下，聚甘油是超分支pg(hpg)(例如，如imran等人“influence of architecture of high molecular weight linear and branched polyglycerols on their biocompatibility and biodistribution,”biomaterials 33:9135-9147(2012)所述)。在其他情况下，聚甘油是线
性pg(lpg)。在另外的情况下，聚甘油是多官能(midfunctional)pg、线性-嵌段-超分支pg(例如，如wurm等人,“squaric acid mediated synthesis and biological activity of a library of linear and hyperbranched poly(glycerol)-protein conjugates,”biomacromolecules 13:1161-1171(2012)所述)或侧链官能pg(例如，如li等人,“synthesis of linear polyether polyol derivatives as new materials for bioconjugation,”bioconjugate chem.20:780-789(2009)所述)。
[0248]
在一些情形下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至pg，例如hpg、lpg、多官能pg、线性-嵌段-超分支pg或侧链官能pg。在一些情形下，细胞因子是il-2多肽。在一些情况下，il-2多肽缀合至pg、多官能pg、线性-嵌段-超分支pg。
[0249]
在一些实施方案中，水溶性聚合物是可降解的合成peg替代物。示例性的可降解的合成peg替代物包括但不限于聚[低聚(乙二醇)甲基丙烯酸甲酯](poegma)；通过基于远螯或双末端官能化的peg的大分子单体的聚合产生的骨架被修饰的peg衍生物；包含含有可降解连接的共聚单体的peg衍生物，如聚[(环氧乙烷)-共-(亚甲基环氧乙烷)][p(eo-共-meo)]；环烯酮缩醛，如与oegma共聚的5,6-苯并-2-亚甲基-1,3-二氧杂环庚烷(bmdo)、2-亚甲基-1,3-二氧杂环庚烷(mdo)和2-亚甲基-4-苯基-1,3-二氧戊环(mpdl)；或聚(ε-己内酯)-接枝-聚(环氧乙烷)(pcl-g-peo)。
[0250]
在一些情形下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至可降解的合成peg替代物，例如像poegm；通过基于远螯或双末端官能化的peg的大分子单体的聚合产生的骨架被修饰的peg衍生物；p(eo-共-meo)；环烯酮缩醛，如与oegma共聚的bmdo、mdo和mpdl；或pcl-g-peo。在一些情形下，细胞因子是il-2多肽。在一些情况下，il-2多肽缀合至可降解的合成peg替代物，例如像poegm；通过基于远螯或双末端官能化的peg的大分子单体的聚合产生的骨架被修饰的peg衍生物；p(eo-共-meo)；环烯酮缩醛，如与oegma共聚的bmdo、mdo和mpdl；或pcl-g-peo。
[0251]
在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚(两性离子)。示例性聚(两性离子)包括但不限于聚(甲基丙烯酸磺基甜菜碱)(psbma)、聚(甲基丙烯酸羧基甜菜碱)(pcbma)和聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰胆碱)(pmpc)。在一些情形下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至聚(两性离子)，如psbma、pcbma或pmpc。在一些情况下，细胞因子是il-2多肽。在一些情况下，il-2多肽缀合至聚(两性离子)，如psbma、pcbma或pmpc。
[0252]
在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚碳酸酯。示例性聚碳酸酯包括但不限于5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环己烷-5-甲酸五氟苯酯(mtc-oc6f5)。在一些情形下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至聚碳酸酯，如mtc-oc6f5。在一些情况下，细胞因子是il-2多肽。在一些情况下，il-2多肽缀合至聚碳酸酯，如mtc-oc6f5。
[0253]
在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚合物杂化物，例如像聚碳酸酯/peg聚合物杂化物、肽/蛋白质-聚合物缀合物或含羟基和/或两性离子衍生化聚合物(例如，含羟基和/或两性离子衍生化peg聚合物)。在一些情形下，本文所述的细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至聚合物杂化物，如聚碳酸酯/peg聚合物杂化物、肽/蛋白质-聚合物缀合物或含羟基和/或两性离子衍生化聚合物(例如，含羟基和/或两性离子衍生化peg聚合物)。在一些情况下，细胞因子是il-2多肽。在一些情况下，il-2多肽缀合至聚合物杂化物，如聚碳酸酯/peg聚合物杂化物、肽/蛋白质-聚合物缀合物或含羟基和/或两性离子衍生化聚合
物(例如，含羟基和/或两性离子衍生化peg聚合物)。
[0254]
在一些情形下，水溶性聚合物包括多糖。示例性多糖包括但不限于葡聚糖、聚唾液酸(psa)、透明质酸(ha)、直链淀粉、肝素、硫酸乙酰肝素(hs)、糊精或羟乙基淀粉(hes)。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至多糖。在一些情况下，il-2多肽缀合至葡聚糖。在一些情况下，il-2多肽缀合至psa。在一些情况下，il-2多肽缀合至ha。在一些情况下，il-2多肽缀合至直链淀粉。在一些情况下，il-2多肽缀合至肝素。在一些情况下，il-2多肽缀合至hs。在一些情况下，il-2多肽缀合至糊精。在一些情况下，il-2多肽缀合至hes。
[0255]
在一些情况下，水溶性聚合物包括聚糖。聚糖的示例性类别包括n-连接聚糖、o-连接聚糖、糖脂、o-glcnac和糖胺聚糖。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至聚糖。在一些情况下，il-2多肽缀合至n-连接聚糖。在一些情况下，il-2多肽缀合至o-连接聚糖。在一些情况下，il-2多肽缀合至糖脂。在一些情况下，il-2多肽缀合至o-glcnac。在一些情况下，il-2多肽缀合至糖胺聚糖。
[0256]
在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚噁唑啉聚合物。聚噁唑啉聚合物是一种线性合成聚合物，并且与peg类似，包含低多分散性。在一些情形下，聚噁唑啉聚合物是特征为平均分子量的多分散的聚噁唑啉聚合物。在一些情况下，聚噁唑啉聚合物的平均分子量包括例如1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、10,000、12,000、20,000、35,000、40,000、50,000、60,000、100,000、200,000、300,000、400,000或500,000da。在一些情形下，聚噁唑啉聚合物包括聚(2-甲基2-噁唑啉)(pmoz)、聚(2-乙基2-噁唑啉)(peoz)或聚(2-丙基2-噁唑啉)(ppoz)。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至聚噁唑啉聚合物。在一些情况下，il-2多肽缀合至聚噁唑啉聚合物。在一些情况下，il-2多肽缀合至pmoz。在一些情况下，il-2多肽缀合至peoz。在一些情况下，il-2多肽缀合至ppoz。
[0257]
在一些情形下，水溶性聚合物包括聚丙烯酸聚合物。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至聚丙烯酸聚合物。在一些情况下，il-2多肽缀合至聚丙烯酸聚合物。
[0258]
在一些情形下，水溶性聚合物包括多胺。多胺是包含两个或更多个伯氨基的有机聚合物。在一些实施方案中，多胺包括分支多胺、线性多胺或环状多胺。在一些情况下，多胺是低分子量线性多胺。示例性多胺包括腐胺、尸胺、亚精胺、精胺、乙二胺、1,3-二氨基丙烷、六亚甲基二胺、四乙基亚甲基二胺和哌嗪。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至多胺。在一些情况下，il-2多肽缀合至多胺。在一些情况下，il-2多肽缀合至腐胺、尸胺、亚精胺、精胺、乙二胺、1,3-二氨基丙烷、六亚甲基二胺、四乙基亚甲基二胺或哌嗪。
[0259]
在一些情形下，水溶性聚合物描述于美国专利号7,744,861、8,273,833和7,803,777中。在一些情形下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至美国专利号7,744,861、8,273,833或7,803,777中描述的接头。在一些情况下，il-2多肽缀合至美国专利号7,744,861、8,273,833或7,803,777中描述的接头。脂质
[0260]
在一些实施方案中，本文所述的缀合部分是脂质。在一些情形下，脂质是脂肪酸。
在一些情况下，脂肪酸是饱和脂肪酸。在其他情况下，脂肪酸是不饱和脂肪酸。示例性脂肪酸包括但不限于包含从约6至约26个碳原子、从约6至约24个碳原子、从约6至约22个碳原子、从约6至约20个碳原子、从约6至约18个碳原子、从约20至约26个碳原子、从约12至约26个碳原子、从约12至约24个碳原子、从约12至约22个碳原子、从约12至约20个碳原子或从约12至约18个碳原子的脂肪酸。在一些情况下，脂质与一种或多种血清蛋白结合，从而增加血清稳定性和/或血清半衰期。
[0261]
在一些实施方案中，脂质缀合至il-2。在一些情形下，脂质是脂肪酸，例如饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸。在一些情况下，脂肪酸是从约6至约26个碳原子、从约6至约24个碳原子、从约6至约22个碳原子、从约6至约20个碳原子、从约6至约18个碳原子、从约20至约26个碳原子、从约12至约26个碳原子、从约12至约24个碳原子、从约12至约22个碳原子、从约12至约20个碳原子或从约12至约18个碳原子。在一些情况下，脂肪酸的长度包含约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个碳原子。在一些情况下，脂肪酸包括己酸(caproic acid/hexanoic acid)、庚酸(enanthic acid/heptanoic acid)、辛酸(caprylic acid/octanoic acid)、壬酸(pelargonic acid/nonanoic acid)、癸酸(capric acid/decanoic acid)、十一酸(十一烷酸)、月桂酸(十二烷酸)、十三酸(十三烷酸)、肉豆蔻酸(十四烷酸)、十五酸(十五烷酸)、棕榈酸(十六烷酸)、十七酸(十七烷酸)、硬脂酸(十八烷酸)、十九酸(十九烷酸)、花生酸(二十烷酸)、二十一酸(二十一烷酸)、山萮酸(二十二烷酸)、二十三酸(二十三烷酸)、木蜡酸(二十四烷酸)、二十五酸(二十五烷酸)或蜡酸(二十六烷酸)。
[0262]
在一些实施方案中，il-2脂质缀合物增加血清稳定性和/或血清半衰期。蛋白质
[0263]
在一些实施方案中，本文所述的缀合部分是蛋白质或其结合片段。示例性蛋白质包括白蛋白、转铁蛋白或甲状腺素转运蛋白。在一些情形下，蛋白质或其结合片段包括抗体或其结合片段。在一些情况下，细胞因子缀合物包含蛋白质或其结合片段。在一些情况下，包含蛋白质或其结合片段的il-2缀合物具有增加的血清半衰期和/或稳定性。在一些情况下，包含蛋白质或其结合片段的il-2缀合物具有减少的il-2与一个或多个il-2r亚基的相互作用。在另外的情况下，蛋白质或其结合片段阻断il-2与一个或多个il-2r亚基的相互作用。
[0264]
在一些实施方案中，缀合部分是白蛋白。白蛋白是水溶性球状蛋白家族。它通常在血浆中发现，占所有血浆蛋白的约55％-60％。人血清白蛋白(hsa)是一种585个氨基酸的多肽，其中三级结构分为三个结构域：结构域i(氨基酸残基1-195)、结构域ii(氨基酸残基196-383)和结构域iii(氨基酸残基384-585)。每个结构域进一步包含结合位点，其可以与内源配体(如长链和中链脂肪酸、胆红素或氯化血红素)或外源化合物(如杂环或芳香族化合物)可逆或不可逆地相互作用。
[0265]
在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至白蛋白。在一些情况下，细胞因子多肽缀合至人血清白蛋白(hsa)。在另外的情况下，细胞因子多肽缀合至白蛋白的功能片段。
[0266]
在一些情形下，il-2多肽缀合至白蛋白。在一些情况下，il-2多肽缀合至人血清白蛋白(hsa)。在另外的情况下，il-2多肽缀合至白蛋白的功能片段。
[0267]
在一些实施方案中，缀合部分是转铁蛋白。转铁蛋白是一种679个氨基酸的多肽，其大小为约80kda，并且包含两个fe
3
结合位点，其中一个在n末端结构域并且另一个在c末端结构域。在一些情形下，人转铁蛋白的半衰期为约7-12天。
[0268]
在一些情形下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至转铁蛋白。在一些情况下，细胞因子多肽缀合至人转铁蛋白。在另外的情况下，细胞因子多肽缀合至转铁蛋白的功能片段。
[0269]
在一些情形下，il-2多肽缀合至转铁蛋白。在一些情况下，il-2多肽缀合至人转铁蛋白。在另外的情况下，il-2多肽缀合至转铁蛋白的功能片段。
[0270]
在一些实施方案中，缀合部分是甲状腺素转运蛋白(ttr)。甲状腺素转运蛋白是一种位于血清和脑脊液中的转运蛋白，其转运甲状腺激素甲状腺素(t4)和结合至视黄醇的视黄醇结合蛋白。
[0271]
在一些情形下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至甲状腺素转运蛋白(经由其一个末端或经由内部铰链区)。在一些情况下，细胞因子多肽缀合至甲状腺素转运蛋白的功能片段。
[0272]
在一些情形下，il-2多肽缀合至甲状腺素转运蛋白(经由其一个末端或经由内部铰链区)。在一些情况下，il-2多肽缀合至甲状腺素转运蛋白的功能片段。
[0273]
在一些实施方案中，缀合部分是抗体或其结合片段。在一些情形下，抗体或其结合片段包括人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab'、二价fab2、f(ab)'3片段、单链可变片段(scfv)、双scfv、(scfv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的fv蛋白(dsfv)、单结构域抗体(sdab)、ig nar、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或者其经化学修饰的衍生物。
[0274]
在一些情形下，缀合部分包括scfv、双scfv、(scfv)2、dsfv或sdab。在一些情况下，缀合部分包括scfv。在一些情况下，缀合部分包括双scfv。在一些情况下，缀合部分包括(scfv)2。在一些情况下，缀合部分包括dsfv。在一些情况下，缀合部分包括sdab。
[0275]
在一些情形下，缀合部分包含抗体(例如，igg、iga、igm、ige或igd)的fc部分。在一些情形下，部分包含igg(例如，igg1、igg3或igg4)的fc部分。
[0276]
在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至抗体或其结合片段。在一些情况下，细胞因子多肽缀合至人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab'、二价fab2、f(ab)'3片段、单链可变片段(scfv)、双scfv、(scfv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的fv蛋白(dsfv)、单结构域抗体(sdab)、ig nar、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或者其经化学修饰的衍生物。在另外的情况下，细胞因子多肽缀合至抗体的fc部分。在另外的情况下，细胞因子多肽缀合至igg(例如，igg1、igg3或igg4)的fc部分。
[0277]
在一些情况下，il-2多肽缀合至抗体或其结合片段。在一些情况下，il-2多肽缀合至人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab'、二价fab2、f(ab)'3片段、单链可变片段(scfv)、双scfv、(scfv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的fv蛋白(dsfv)、单结构域
抗体(sdab)、ig nar、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或者其经化学修饰的衍生物。在另外的情况下，il-2多肽缀合至抗体的fc部分。在另外的情况下，il-2多肽缀合至igg(例如，igg1、igg3或igg4)的fc部分。
[0278]
在一些实施方案中，il-2多肽缀合至水溶性聚合物(例如，peg)和抗体或其结合片段。在一些情况下，抗体或其结合片段包括人源化抗体或其结合片段、鼠抗体或其结合片段、嵌合抗体或其结合片段、单克隆抗体或其结合片段、单价fab'、二价fab2、f(ab)'3片段、单链可变片段(scfv)、双scfv、(scfv)2、双抗体、微抗体、纳米抗体、三抗体、四抗体、humabody、二硫键稳定的fv蛋白(dsfv)、单结构域抗体(sdab)、ig nar、骆驼科动物抗体或其结合片段、双特异性抗体或其结合片段或者其经化学修饰的衍生物。在一些情况下，抗体或其结合片段包括scfv、双scfv、(scfv)2、dsfv或sdab。在一些情况下，抗体或其结合片段包括scfv。在一些情况下，抗体或其结合片段将il-2缀合物指导至目的靶细胞，并且水溶性聚合物增强稳定性和/或血清半衰期。
[0279]
在一些情形下，一种或多种il-2多肽-水溶性聚合物(例如，peg)缀合物进一步结合至抗体或其结合片段。在一些情形下，il-2缀合物与抗体的比率为约1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1或12:1。在一些情况下，il-2缀合物与抗体的比率为约1:1。在其他情况下，il-2缀合物与抗体的比率为约2:1、3:1或4:1。在另外的情况下，il-2缀合物与抗体的比率为约6:1或更高。
[0280]
在一些实施方案中，所述一种或多种il-2多肽-水溶性聚合物(例如，peg)缀合物直接结合至抗体或其结合片段。在其他情形下，il-2缀合物通过接头间接结合至抗体或其结合片段。示例性接头包括同双官能接头、异双官能接头、基于马来酰亚胺的接头、零迹线接头、自杀式接头、间隔物等。
[0281]
在一些实施方案中，抗体或其结合片段直接或间接结合至il-2多肽-水溶性聚合物(例如，peg)缀合物的il-2多肽部分。在此类情况下，抗体与il-2多肽的缀合位点在将不会阻碍il-2多肽与il-2rβγ的结合的位点处。在另外的情况下，抗体与il-2多肽的缀合位点在部分阻断il-2多肽与il-2rβγ的结合的位点处。在另外的情况下，抗体与il-2多肽的缀合位点在将会阻碍或进一步阻碍il-2多肽与il-2rα的结合的位点处。在其他实施方案中，抗体或其结合片段直接或间接结合至il-2多肽-水溶性聚合物(例如，peg)缀合物的水溶性聚合物部分。肽
[0282]
在一些实施方案中，本文所述的缀合部分是肽。在一些情形下，肽是非结构化肽。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至肽。在一些情况下，包含肽的il-2缀合物具有增加的血清半衰期和/或稳定性。在一些情况下，包含肽的il-2缀合物具有减少的il-2与一个或多个il-2r亚基的相互作用。在另外的情况下，肽阻断il-2与一个或多个il-2r亚基的相互作用。
[0283]
在一些情形下，缀合部分是xten
tm
肽(amunix operating inc.)，并且修饰被称为xten化。xten化是编码目的多肽的核酸与编码xten
tm
肽(amunix operating inc.)的核酸的基因融合，xten
tm
肽是一种非结构化亲水性长肽，其包含不同百分比的六种氨基酸：ala、glu、gly、ser和thr。在一些情形下，基于诸如表达、遗传稳定性、溶解度、抗聚集性、与目的多肽组合时增强的半衰期、增加的效力和/或增加的体外活性等特性来选择xten
tm
肽。在一
些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至xten肽。在一些情况下，il-2多肽缀合至xten肽。
[0284]
在一些情形下，缀合部分是富含甘氨酸的高氨基酸聚合物(hap)，并且修饰被称为hap化。hap化是编码目的多肽的核酸与编码富含甘氨酸的高氨基酸聚合物(hap)的核酸的基因融合。在一些情形下，hap聚合物包含(gly4ser)n重复基序，并且有时长度为约50、100、150、200、250、300个或更多个残基。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至hap。在一些情况下，il-2多肽缀合至hap。
[0285]
在一些实施方案中，缀合部分是pas多肽，并且修饰被称为pas化。pas化是编码目的多肽的核酸与编码pas多肽的核酸的基因融合。pas多肽是由pro、ala和ser残基组成的亲水性不带电多肽。在一些情形下，pas多肽的长度为至少约100、200、300、400、500或600个氨基酸。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至pas多肽。在一些情况下，il-2多肽缀合至pas多肽。
[0286]
在一些实施方案中，缀合部分是弹性蛋白样多肽(elp)，并且修饰被称为elp化。elp化是编码目的多肽的核酸与编码弹性蛋白样多肽(elp)的核酸的基因融合。elp包含vpgxg重复基序，其中x是除脯氨酸之外的任何氨基酸。在一些情况下，细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)多肽缀合至elp。在一些情况下，il-2多肽缀合至elp。
[0287]
在一些实施方案中，缀合部分是ctp肽。ctp肽包括30或31个氨基酸残基的肽(fqssss*kappps*lpsps*rlpgps*dtpilpq(seq id no:248)或fqdssss*kappps*lpsps*rlpgps*dtpilpq(seq id no:249))，其中s*表示o-糖基化位点(opko)。在一些情形下，ctp肽与细胞因子多肽(例如，il-2多肽)基因融合。在一些情况下，细胞因子多肽(例如，il-2多肽)缀合至ctp肽。
[0288]
在一些实施方案中，通过谷氨酰化修饰细胞因子(例如，il-2多肽)。谷氨酰化(或聚谷氨酰化)是谷氨酸的可逆翻译后修饰，其中谷氨酸的γ-羧基与游离谷氨酸的氨基形成肽样键，其中α-羧基延伸到聚谷氨酸链中。
[0289]
在一些实施方案中，通过明胶样蛋白(glk)聚合物修饰细胞因子(例如，il-2多肽)。在一些情形下，glk聚合物包含gly-xaa-yaa的多个重复，其中xaa和yaa分别主要包括脯氨酸和4-羟基脯氨酸。在一些情况下，glk聚合物进一步包含氨基酸残基pro、gly、glu、qln、asn、ser和lys。在一些情况下，glk聚合物的长度为约20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、150个残基或更长。另外的缀合部分
[0290]
在一些情形下，缀合部分包含细胞外生物标记物。在一些情形下，细胞外生物标记物是肿瘤抗原。在一些情形下，示例性细胞外生物标记物包括cd19、psma、b7-h3、b7-h6、cd70、cea、cspg4、egfrviii、epha3、epcam、egfr、erbb2(her2)、fap、frα、gd2、gd3、lewis-y、间皮素、muc1、muc 16、ror1、tag72、vegfr2、cd11、gr-1、cd204、cd16、cd49b、cd3、cd4、cd8和b220。在一些情形下，缀合部分键合或缀合至细胞因子(例如，il-2)。在一些情况下，缀合部分基因融合在例如细胞因子(例如，il-2)的n末端或c末端。
[0291]
在一些情形下，缀合部分包含来自翻译后修饰的分子。在一些情形下，翻译后修饰的例子包括肉豆蔻酰化、棕榈酰化、异戊二烯化(isoprenylation或prenylation)(例如，法尼基化或香叶酰香叶酰化)、糖基磷脂酰肌醇化、酰化(例如，o-酰化、n-酰化、s-酰化)、烷基
化(例如，烷基(如甲基或乙基)的添加)、酰胺化、糖基化、羟基化、碘化、核苷酸添加、氧化、磷酸化、琥珀酰化、硫酸化、糖化、氨甲酰化、谷氨酰化或脱酰胺。在一些情形下，通过诸如肉豆蔻酰化、棕榈酰化、异戊二烯化(isoprenylation或prenylation)(例如，法尼基化或香叶酰香叶酰化)、糖基磷脂酰肌醇化、酰化(例如，o-酰化、n-酰化、s-酰化)、烷基化(例如，烷基(如甲基或乙基)的添加)、酰胺化、糖基化、羟基化、碘化、核苷酸添加、氧化、磷酸化、琥珀酰化、硫酸化、糖化、氨甲酰化、谷氨酰化或脱酰胺等翻译后修饰来修饰细胞因子(例如，il-2)。缀合接头
[0292]
在一些实施方案中，用于将缀合部分缀合或结合至本文所述的细胞因子多肽(例如，il-2多肽)的有用的功能性反应基团包括例如零阶或更高阶接头。在一些情形下，掺入本文所述的白介素中的非天然氨基酸包含功能性反应基团。在一些情形下，接头包含与掺入本文所述的白介素中的非天然氨基酸反应的功能性反应基团。在一些情形下，缀合部分包含与掺入本文所述的白介素中的非天然氨基酸反应的功能性反应基团。在一些情形下，缀合部分包含与本文所述的接头(任选地预附接至细胞因子肽)反应的功能性反应基团。在一些实施方案中，接头包含与本文所述的细胞因子肽中的天然氨基酸反应的反应基团。在一些情况下，更高阶接头包括双官能接头，如同双官能接头或异双官能接头。示例性同双官能接头包括但不限于lomant试剂二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)(dsp)、3'3'-二硫代双(磺基琥珀酰亚胺基丙酸酯)(dtssp)、辛二酸二琥珀酰亚胺酯(dss)、双(磺基琥珀酰亚胺基)辛二酸酯(bs)、酒石酸二琥珀酰亚胺酯(dst)、酒石酸二磺基琥珀酰亚胺酯(磺基dst)、乙二醇双(琥珀酰亚胺基琥珀酸酯)(egs)、戊二酸二琥珀酰亚胺酯(dsg)、n,n
′‑
二琥珀酰亚胺基碳酸酯(dsc)、己二亚氨酸二甲酯(dma)、庚二亚氨酸二甲酯(dmp)、辛二亚氨酸二甲酯(dms)、二甲基-3,3
′‑
二硫代双丙亚氨酸酯(dtbp)、1,4-二-3
′‑
(2
′‑
吡啶基二硫代)丙酰胺基)丁烷(dpdpb)、双马来酰亚胺基己烷(bmh)、含有芳基卤的化合物(dfdnb)(例如像1,5-二氟-2,4-二硝基苯或1,3-二氟-4,6-二硝基苯)、4,4'-二氟-3,3'-二硝基苯砜(dfdnps)、双[β-(4-叠氮基水杨酰胺基)乙基]二硫化物(based)、甲醛、戊二醛、1,4-丁二醇二缩水甘油醚、己二酸二酰肼、碳酰肼、邻甲苯胺、3,3'-二甲基联苯胺、联苯胺、α,α
′‑
对二氨基联苯、二碘-对二甲苯磺酸、n,n
′‑
亚乙基-双(碘乙酰胺)或n,n
′‑
六亚甲基-双(碘乙酰胺)。
[0293]
在一些实施方案中，双官能接头包括异双官能接头。示例性异双官能接头包括但不限于胺反应性和巯基交联剂，如n-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(spdp)、长链n-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(lc-spdp)、水溶性长链n-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(磺基-lc-spdp)、琥珀酰亚胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基二硫代)甲苯(smpt)、磺基琥珀酰亚胺基-6-[α-甲基-α-(2-吡啶基二硫代)甲苯酰胺基]己酸酯(磺基-lc-smpt)、琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(smcc)、磺基琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(磺基-smcc)、间马来酰亚胺基苯甲酰基-n-羟基琥珀酰亚胺酯(mbs)、间马来酰亚胺基苯甲酰基-n-羟基磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-mbs)、n-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(siab)、磺基琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(磺基-siab)、琥珀酰亚胺基-4-(对马来酰亚胺基苯基)丁酸酯(smpb)、磺基琥珀酰亚胺基-4-(对马来酰亚胺基苯基)丁酸酯(磺基-smpb)、n-(γ-马来
酰亚胺基丁酰氧基)琥珀酰亚胺酯(gmbs)、n-(γ-马来酰亚胺基丁酰氧基)磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-gmbs)、琥珀酰亚胺基6-((碘乙酰基)氨基)己酸酯(siax)、琥珀酰亚胺基6-[6-(((碘乙酰基)氨基)己酰基)氨基]己酸酯(siaxx)、琥珀酰亚胺基4-(((碘乙酰基)氨基)甲基)环己烷-1-甲酸酯(siac)、琥珀酰亚胺基6-((((4-碘乙酰基)氨基)甲基)环己烷-1-羰基)氨基)己酸酯(siacx)、对硝基苯基碘乙酸酯(npia)；羰基反应性和巯基反应性交联剂，如4-(4-n-马来酰亚胺基苯基)丁酸酰肼(mpbh)、4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧基-酰肼-8(m2c2h)、3-(2-吡啶基二硫代)丙酰基酰肼(pdph)；胺反应性和光反应性交联剂，如n-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸(nhs-asa)、n-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基水杨酸(磺基-nhs-asa)、磺基琥珀酰亚胺基-(4-叠氮基水杨酰胺基)己酸酯(磺基-nhs-lc-asa)、磺基琥珀酰亚胺基-2-(ρ-叠氮基水杨酰胺基)乙基-1,3'-二硫代丙酸酯(sasd)、n-羟基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基苯甲酸酯(hsab)、n-羟基磺基琥珀酰亚胺基-4-叠氮基苯甲酸酯(磺基-hsab)、n-琥珀酰亚胺基-6-(4'-叠氮基-2'-硝基苯基氨基)己酸酯(sanpah)、磺基琥珀酰亚胺基-6-(4'-叠氮基-2'-硝基苯基氨基)己酸酯(磺基-sanpah)、n-5-叠氮基-2-硝基苯甲酰氧基琥珀酰亚胺(anb-nos)、磺基琥珀酰亚胺基-2-(间叠氮基-邻硝基苯甲酰胺基)-乙基-1,3'-二硫代丙酸酯(sand)、n-琥珀酰亚胺基-4(4-叠氮基苯基)1,3'-二硫代丙酸酯(sadp)、n-磺基琥珀酰亚胺基(4-叠氮基苯基)-1,3'-二硫代丙酸酯(磺基-sadp)、磺基琥珀酰亚胺基4-(ρ-叠氮基苯基)丁酸酯(磺基-sapb)、磺基琥珀酰亚胺基2-(7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酰胺)乙基-1,3'-二硫代丙酸酯(saed)、磺基琥珀酰亚胺基7-叠氮基-4-甲基香豆素-3-乙酸酯(磺基-samca)、ρ-硝基苯基重氮基丙酮酸酯(ρnpdp)、ρ-硝基苯基-2-重氮基-3,3,3-三氟丙酸酯(pnp-dtp)；巯基反应性和光反应性交联剂，如1-(ρ-叠氮基水杨酰胺基)-4-(碘乙酰胺基)丁烷(asib)、n-[4-(ρ-叠氮基水杨酰胺基)丁基]-3'-(2'-吡啶基二硫代)丙酰胺(apdp)、二苯甲酮-4-碘乙酰胺、二苯甲酮-4-马来酰亚胺；羰基反应性和光反应性交联剂，如ρ-叠氮基苯甲酰基酰肼(abh)；羧酸酯反应性和光反应性交联剂，如4-(ρ-叠氮基水杨酰胺基)丁胺(asba)；以及精氨酸反应性和光反应性交联剂，如ρ-叠氮基苯基乙二醛(apg)。
[0294]
在一些情形下，反应性官能团包括对存在于结合部分上(例如，缀合部分上或il-2上)的亲电基团具有反应性的亲核基团。示例性亲电基团包括羰基，如醛、酮、羧酸、酯、酰胺、烯酮、酰卤或酸酐。在一些实施方案中，反应性官能团是醛。示例性亲核基团包括酰肼、肟、氨基、肼、氨硫脲、肼羧酸酯和芳酰肼。在一些实施方案中，掺入本文所述的白介素中的非天然氨基酸包含亲电基团。
[0295]
在一些实施方案中，接头是可切割接头。在一些实施方案中，可切割接头是二肽接头。在一些实施方案中，二肽接头是缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)、苯丙氨酸-赖氨酸(phe-lys)、缬氨酸-丙氨酸(val-ala)和缬氨酸-赖氨酸(val-lys)。在一些实施方案中，二肽接头是缬氨酸-瓜氨酸。
[0296]
在一些实施方案中，接头是肽接头，其包含例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、30、35、40、45、50个或更多个氨基酸。在一些情形下，肽接头包含至多2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、30、35、40、45、50个或更少的氨基酸。在另外的情况下，肽接头包含约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25、30、35、40、45或50个氨基酸。
[0297]
在一些实施方案中，接头包含自杀式接头部分。在一些实施方案中，自杀式接头部
分包含对氨基苄醇(pab)、对氨基苄氧基羰基(pabc)或者其衍生物或类似物。在一些实施方案中，接头包含二肽接头部分和自杀式接头部分。在一些实施方案中，自杀式接头部分如美国专利号9089614和wipo申请号wo 2015038426中所述。
[0298]
在一些实施方案中，可切割接头是葡糖苷酸。在一些实施方案中，可切割接头是酸可切割接头。在一些实施方案中，酸可切割接头是肼。在一些实施方案中，可切割接头是可还原接头。
[0299]
在一些实施方案中，接头包含马来酰亚胺基团。在一些情形下，马来酰亚胺基团也被称为马来酰亚胺间隔物。在一些情形下，马来酰亚胺基团进一步包含己酸，从而形成马来酰亚胺基己酰基(mc)。在一些情况下，接头包括马来酰亚胺基己酰基(mc)。在一些情况下，接头是马来酰亚胺基己酰基(mc)。在其他情形下，马来酰亚胺基团包括马来酰亚胺基甲基，如上述琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(smcc)或磺基琥珀酰亚胺基-4-(n-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(磺基-smcc)。
[0300]
在一些实施方案中，马来酰亚胺基团是自稳定马来酰亚胺。在一些情形下，自稳定马来酰亚胺利用二氨基丙酸(dpr)掺入碱性氨基，使之与马来酰亚胺相邻，以提供硫代琥珀酰亚胺环水解的分子内催化，从而通过逆迈克尔反应进行消除反应以消除马来酰亚胺。在一些情形下，自稳定马来酰亚胺是lyon等人,“self-hydrolyzing maleimides improve the stability and pharmacological properties of antibody-drug conjugates,”nat.biotechnol.32(10):1059-1062(2014)中描述的马来酰亚胺基团。在一些情形下，接头包括自稳定马来酰亚胺。在一些情形下，接头是自稳定马来酰亚胺。
[0301]
本文描述了具有式(i)的结构的il-2缀合物：其中：z是ch2并且y是或者y是ch2并且z是w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda和50kda的平均分子量的peg基团；并且x是重组人il-2的氨基酸位置，其中氨基酸位置是参考在seq id no:1中的位置；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，z是
ch2并且y是在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，y是ch2并且z是在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有选自5kda、10kda、30kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有5kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有20kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有40kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有55kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有60kda的平均分子量。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是k9。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是h16。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是l19。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是d20。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是m23。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是n26。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是t41。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是n88。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是e100。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是n119。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是t123。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是q126。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是s127。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是t131。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是在变体n88r情况下的109。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是v91。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、e100、n119、t123、q126、s127、t131、d109和v91。在式(i)的il-2缀合物的一些实施方案中，x选自k9、h16、m23和q126。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:34-48中任一个的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:199-213。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:49-63。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:213-228。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:64-78。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:229-245。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:154-168。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:109-123。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:169-183。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:123-138。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:184-198。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no.:139-153。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:3的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:4的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:5的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:6的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:7的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:8的序列。在一些实施方案中，式(i)
的il-2缀合物包含seq id no:9的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:10的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:11的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:12的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:13的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:14的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:15的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:16的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:17的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:18的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:19的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:20的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:21的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:22的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:23的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:24的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:25的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:26的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:27的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:28的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:29的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:30的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:31的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:32的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:33的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:34的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:35的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:36的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:37的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:38的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:39的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:40的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:41的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:42的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:43的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:44的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:45的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:46的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:47的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:48的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:49的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:50的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:51的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:52的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:53的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:54的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:55的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:56的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:57的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:58的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:59的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:60的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包
2缀合物包含seq id no:113的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:114的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:115的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:116的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:117的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:118的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:119的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:120的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:121的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:122的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:123的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:124的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:125的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:126的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:127的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:128的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:129的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:130的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:131的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:132的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:133的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:134的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:135的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:136的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:137的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:138的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:139的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:140的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:141的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:142的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:143的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:144的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:145的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:146的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:147的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:148的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:149的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:150的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:151的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:152的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:153的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:154的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:155的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:156的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:157的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:158的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:159的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:160的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:161的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:162的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:163的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含
seq id no:164的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:165的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:166的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:167的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:168的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:169的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:170的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:171的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:172的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:173的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:174的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:175的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:176的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:177的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:178的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:179的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:180的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:181的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:182的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:183的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:184的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:185的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:186的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:187的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:188的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:189的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:190的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:191的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:192的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:193的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:194的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:195的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:196的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:197的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:198的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:199的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:190的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:191的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:192的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:193的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:194的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:195的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:196的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:197的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:198的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:199的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:200的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:201的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:202的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:203的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:204的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:
205的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:206的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:207的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:208的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:209的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:210的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:211的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:212的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:213的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:214的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:215的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:216的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:217的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:218的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:219的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:210的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:211的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:212的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:213的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:214的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:215的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:216的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:217的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:218的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:219的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:220的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:221的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:222的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:223的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:224的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:225的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:226的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:227的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:228的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:229的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:230的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:231的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:232的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:233的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:234的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:235的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:236的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:237的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:238的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:239的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:240的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:241的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:242的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:243的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:244的序列。在一些实施方案中，式(i)的il-2缀合物包含seq id no:245的序列。
[0302]
本文描述了具有式(ii)的结构的il-2缀合物：其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda和50kda的平均分子量的peg基团；并且x是重组人il-2中选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、e100、n119、t123、q126、s127、t131、d109和v91的具有以下结构的氨基酸位置：其中氨基酸位置对应于在seq id no:1中的位置。
[0303]
本文描述了具有式(iii)的结构的il-2缀合物：其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda和50kda的平均分子量的peg基团；并且x是重组人il-2中选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、e100、n119、t123、q126、s127、t131、d109和v91的具有以下结构的氨基酸位置：其中氨基酸对应于在seq id no:1中的位置。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置k9。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置k9。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置h16。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置h16。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置l19。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置l19。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，
x是重组人il-2的位置d20。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d20。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置m23。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置m23。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置n26。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n26。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置n88。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n88。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置e100。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置e100。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置n119。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n119。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置t123。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t123。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置q126。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置q126。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置s127。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置s127。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置t131。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t131。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置d109。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d109。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置v91。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置v91。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置k9。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置h16。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置l19。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d20。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置m23。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n26。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n88。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置e100。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位
置n119。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t123。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置q126。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置s127。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t131。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d109。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置v91。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置k9。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置h16。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置l19。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d20。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置m23。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n26。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n88。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置e100。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n119。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t123。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置q126。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置s127。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t131。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d109。在式(ii)或式(iii)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置v91。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:34-48中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:199-213中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:49-63中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:214-228中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:64-78中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:229-245中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:154-168中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:109-123中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:169-183中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:124-138中任一个的序
列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:184-198中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq no:139-153中任一个的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:3的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:4的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:5的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:6的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:7的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:8的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:9的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:10的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:11的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:12的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:13的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:14的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:15的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:16的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:17的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:18的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:19的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:20的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:21的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:22的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:23的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:24的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:25的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:26的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:27的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:28的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:29的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:70的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:71的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:72的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:73的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:74的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:75的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:76的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:77的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:78的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:79的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:80的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:81的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:82的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:83的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:84的序列。在一些实施方案
中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:85的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:86的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:87的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:88的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:89的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:90的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:91的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:92的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:93的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:94的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:95的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:96的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:97的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:98的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:99的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:100的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:101的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:102的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:103的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:104的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:105的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:106的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:107的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:108的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:109的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:110的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:111的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:112的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:113的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:114的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:115的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:116的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:117的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:118的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:119的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:120的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:121的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:122的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:123的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:124的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:125的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:126的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:127的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:128的序列。在一些实施方案中，式
(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:129的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:130的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:131的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:132的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:133的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:134的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:135的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:136的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:137的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:138的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:139的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:140的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:141的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:142的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:143的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:144的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:145的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:146的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:147的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:148的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:149的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:150的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:151的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:152的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:153的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:154的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:155的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:156的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:157的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:158的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:159的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:160的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:161的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:162的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:163的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:164的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:165的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:166的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:167的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:168的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:169的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:170的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:171的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:172的序列。在一些实施
方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:173的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:174的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:175的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:176的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:177的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:178的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:179的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:180的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:181的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:182的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:183的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:184的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:185的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:186的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:187的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:188的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:189的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:190的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:191的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:192的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:193的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:194的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:195的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:196的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:197的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:198的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:199的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:200的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:201的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:202的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:203的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:204的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:205的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:206的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:207的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:208的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:209的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:210的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:211的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:212的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:213的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:214的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:215的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:216的序列。在
一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:217的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:218的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:219的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:220的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:221的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:222的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:223的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:224的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:225的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:226的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:227的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:228的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:229的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:230的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:231的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:232的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:233的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:234的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:235的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:236的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:237的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:238的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:239的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:240的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:241的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:242的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:243的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:244的序列。在一些实施方案中，式(ii)或式(iii)的il-2缀合物包含seq id no:245的序列。本文描述了式(i)、式(ii)或式(iii)的药物组合物。在一些实施方案中，式(i)、式(ii)或式(iii)的药物组合物包含含有seq id no:3-29和70-84中任一个的序列。在一些实施方案中，式(i)、式(ii)或式(iii)的药物组合物包含含有seq id no:3中任一个的序列。在一些实施方案中，式(i)、式(ii)或式(iii)的药物组合物包含含有seq id no:4中任一个的序列。
[0304]
本文描述了具有式(iv)的结构的il-2缀合物：其中w是具有选自5kda、10kda和30kda的平均分子量的peg基团；并且
x是重组人il-2中选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、e100、n119、t123、q126、s127、t131、d109和v91的具有以下结构的氨基酸位置：其中氨基酸位置对应于在seq id no:1中的位置。
[0305]
本文描述了具有式(v)的结构的il-2缀合物：其中w是具有选自5kda、10kda和30kda的平均分子量的peg基团；并且x是重组人il-2中选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、e100、n119、t123、q126、s127、t131、d109和v91的具有以下结构的氨基酸位置：其中氨基酸对应于在seq id no:1中的位置。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置k9。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置k9。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置h16。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置h16。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置l19。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置l19。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置d20。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d20。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置m23。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置m23。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置n26。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n26。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置n88。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n88。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置e100。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2
的位置e100。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置n119。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n119。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置t123。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t123。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置q126。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置q126。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置s127。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置s127。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置t131。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t131。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置d109。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d109。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，x是重组人il-2的位置v91。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有50kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置v91。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置k9。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置h16。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置l19。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d20。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置m23。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n26。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n88。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置e100。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n119。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t123。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置q126。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置s127。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t131。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d109。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有10kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置v91。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置k9。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置h16。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有
30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置l19。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d20。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置m23。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n26。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n88。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置e100。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置n119。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t123。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置q126。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置s127。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置t131。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置d109。在式(iv)或式(v)的il-2缀合物的一些实施方案中，peg基团具有30kda的平均分子量并且x是重组人il-2的位置v91。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:34-48中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:199-213中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:49-63中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:214-228中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:64-78中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:229-245中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:154-168中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:109-123中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:169-183中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:124-138中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:184-198中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq no:139-153中任一个的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:3的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:4的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:5的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:6的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:7的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:8的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:9的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:10的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:11的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:12的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:13的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:14的序列。在一些实
施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:15的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:16的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:17的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:18的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:19的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:20的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:21的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:22的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:23的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:24的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:25的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:26的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:27的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:28的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:29的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:70的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:71的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:72的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:73的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:74的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:75的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:76的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:77的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:78的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:79的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:80的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:81的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:82的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:83的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:84的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:85的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:86的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:87的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:88的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:89的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:90的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:91的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:92的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:93的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:94的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:95的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:96的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:97的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:98的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:99的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含
seq id no:100的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:101的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:102的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:103的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:104的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:105的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:106的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:107的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:108的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:109的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:110的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:111的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:112的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:113的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:114的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:115的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:116的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:117的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:118的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:119的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:120的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:121的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:122的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:123的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:124的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:125的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:126的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:127的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:128的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:129的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:130的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:131的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:132的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:133的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:134的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:135的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:136的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:137的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:138的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:139的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:140的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:141的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:142的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:143的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:144的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:145的序列。在一些
实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:146的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:147的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:148的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:149的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:150的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:151的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:152的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:153的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:154的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:155的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:156的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:157的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:158的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:159的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:160的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:161的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:162的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:163的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:164的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:165的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:166的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:167的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:168的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:169的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:170的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:171的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:172的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:173的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:174的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:175的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:176的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:177的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:178的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:179的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:180的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:181的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:182的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:183的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:184的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:185的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:186的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:187的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:188的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:189的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:190的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀
合物包含seq id no:191的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:192的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:193的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:194的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:195的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:196的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:197的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:198的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:199的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:200的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:201的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:202的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:203的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:204的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:205的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:206的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:207的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:208的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:209的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:210的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:211的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:212的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:213的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:214的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:215的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:216的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:217的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:218的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:219的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:220的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:221的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:222的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:223的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:224的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:225的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:226的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:227的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:228的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:229的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:230的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:231的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:232的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:233的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:234的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:235的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:236的序列。在一些
实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:237的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:238的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:239的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:240的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:241的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:242的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:243的序列。在一些实施方案中，式(iv)或式(v)的il-2缀合物包含seq id no:244的序列。
[0306]
本文描述了式(i)、式(iv)或式(v)的药物组合物。在一些实施方案中，式(i)、式(iv)或式(v)的药物组合物包含含有seq id no:3、4和5-244中任一个的序列。在一些实施方案中，式(i)、式(iv)或式(v)的药物组合物包含含有seq id no:3中任一个的序列。本文描述了式(i)、式(vi)或式(vii)的药物组合物。在一些实施方案中，式(i)、式(vi)或式(vii)的药物组合物包含含有seq id no:3、4和5-244中任一个的序列。在一些实施方案中，式(i)、式(vi)或式(vii)的药物组合物包含含有seq id no:3中任一个的序列。本文描述了式(i)、式(viii)或式(ix)的药物组合物。在一些实施方案中，式(i)、式(viii)或式(ix)的药物组合物包含含有seq id no:3、4和5-244中任一个的序列。在一些实施方案中，式(i)、式(viii)或式(ix)的药物组合物包含含有seq id no:3中任一个的序列。本文描述了式(i)、式(x)或式(xi)的药物组合物。在一些实施方案中，式(i)、式(x)或式(xi)的药物组合物包含含有seq id no:3、4和5-244中任一个的序列。在一些实施方案中，式(i)、式(x)或式(xi)的药物组合物包含含有seq id no:3中任一个的序列。本文描述了式(xii)、式(xiii)或式(v)的药物组合物。在一些实施方案中，式(i)、式(xii)或式(xiii)的药物组合物包含含有seq id no:3、4和5-244中任一个的序列。在一些实施方案中，式(i)、式(xii)或式(xiii)的药物组合物包含含有seq id no:3中任一个的序列。
[0307]
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括包含二烯和亲二烯体的逆电子需求环加成反应。在一些实施方案中，二烯包括四嗪。在一些实施方案中，亲二烯体包括烯烃。在一些实施方案中，亲二烯体包括炔烃。在一些实施方案中，炔烃是应变炔烃。在一些实施方案中，烯烃是应变二烯。在一些实施方案中，炔烃是反式环辛炔。在一些实施方案中，炔烃是环辛烯。在一些实施方案中，烯烃是环丙烯。在一些实施方案中，烯烃是氟环丙烯。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应导致形成经由在环中包含两个氮原子的6元环杂环附接至接头或缀合部分的细胞因子肽。
[0308]
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括烯烃复分解反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括烯烃和炔烃与钌催化剂的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括两种烯烃与钌催化剂的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括两种炔烃与钌催化剂的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括烯烃或炔烃与钌催化剂和包含烯丙基的氨基酸的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括烯烃或炔烃与钌催化剂和包含烯丙基硫醚或硒醚的氨基酸的反应。在一些实施方案中，钌催化剂是hoveda-grubbs第2代催化剂。在一些实施方案中，烯烃复分解反应包括一种或多种应变烯烃或炔烃的反应。
[0309]
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括交叉偶联反应。在一些实施方案中，交叉偶联反应包含过渡金属催化剂，如铱、金、钌、铑、钯、镍、铂或其他过渡金
属催化剂和一种或多种配体。在一些实施方案中，过渡金属催化剂是水溶性的。在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括铃木-宫浦交叉偶联反应。在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括芳基卤(或三氟甲磺酸酯或甲苯磺酸酯)、芳基硼酸或烯基硼酸和钯催化剂的反应。在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括薗头交叉偶联反应。在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括芳基卤(或三氟甲磺酸酯或甲苯磺酸酯)、炔烃和钯催化剂的反应。在一些实施方案中，交叉偶联反应导致接头或缀合部分经由碳-碳键附接至细胞因子肽。
[0310]
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括在缀合之前反应基团的脱保护或“解笼”反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括用光使反应基团解笼，然后进行缀合反应。在一些实施方案中，反应基团受包含一个或多个硝基的芳烷基部分保护。在一些实施方案中，反应基团的解笼产生游离胺、硫化物或其他反应基团。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括用过渡金属催化剂使反应基团解笼，然后进行缀合反应。在一些实施方案中，过渡金属催化剂包含钯和一种或多种配体。在一些实施方案中，反应基团受烯丙基部分保护。在一些实施方案中，反应基团受烯丙基氨基甲酸酯保护。在一些实施方案中，反应基团受炔丙基部分保护。在一些实施方案中，反应基团受氨基甲酸炔丙酯保护。在一些实施方案中，反应基团受亲二烯体保护，其中暴露于二烯(如四嗪)导致反应基团的脱保护。
[0311]
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括配体引导的反应，其中配体(任选地附接至反应基团)促进反应基团与细胞因子肽之间的缀合位点。在一些实施方案中，在细胞因子肽与反应基团反应期间或之后切割配体。在一些实施方案中，细胞因子肽的缀合位点是天然氨基酸。在一些实施方案中，细胞因子肽的缀合位点是赖氨酸、半胱氨酸或丝氨酸。在一些实施方案中，细胞因子肽的缀合位点是本文所述的非天然氨基酸。在一些实施方案中，反应基团包括离去基团，如贫电子的芳基或杂芳基。在一些实施方案中，反应基团包括离去基团，如通过细胞因子肽置换的贫电子烷基。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括自由基捕获剂与自由基物质的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括氧化自由基加成反应。在一些实施方案中，自由基捕获剂是芳胺。在一些实施方案中，自由基物质是酪氨酰自由基。在一些实施方案中，通过钌催化剂(如[ru(bpy)3])和光产生自由基物质。
[0312]
酶促反应任选地用于本文所述的缀合反应。示例性酶促缀合包括sorta介导的缀合、tgs介导的缀合或fge介导的缀合。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括末端1-氨基-2-硫基与硫酯的天然蛋白质连接(npl)，以形成酰胺键。
[0313]
本文描述了多种缀合反应用于使接头或缀合部分与细胞因子肽反应，其中反应是用细胞因子肽中的天然(“经典”)氨基酸来进行。在一些实施方案中，天然氨基酸在野生型序列中发现的缀合位置处被发现，或者可替代地，所述位置已经发生突变。在一些实施方案中，缀合反应包括在半胱氨酸残基处形成二硫键。在一些实施方案中，缀合反应包括半胱氨酸或赖氨酸的1,4迈克尔加成反应。在一些实施方案中，缀合反应包括半胱氨酸的氰基苯并噻唑连接。在一些实施方案中，缀合反应包括与丙酮(acetone)部分(如1,3-二氯-2-丙酮(propionone))的交联。在一些实施方案中，缀合反应包括1,4迈克尔加成至通过半胱氨酸与o-均三甲苯磺酰基羟胺反应形成的脱氢丙氨酸。在一些实施方案中，缀合反应包括酪氨
酸与三唑啉二酮(tad)或tad衍生物的反应。在一些实施方案中，缀合反应包括色氨酸与类卡宾铑的反应。使用方法自身免疫性疾病或障碍
[0314]
在一些实施方案中，本文还描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)。在一些情形下，il-2缀合物包含分离且经纯化的il-2多肽和缀合部分，其中相对于野生型il-2多肽，il-2缀合物对il-2受体β(il-2rβ)亚基、il-2受体γ(il-2rγ)亚基或其组合具有降低的亲和力。在一些情形下，il-2缀合物包含分离且经纯化的il-2多肽；以及缀合部分，所述缀合部分在选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、k47、k48、a50、t51、e52、k53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、n89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、a125、q126、s127、s130、t131、l132和t133的氨基酸残基处与分离且经纯化的il-2多肽结合，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些情形下，氨基酸残基选自k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、r81、d84、s87、n88、v91、i92、l94、e95、e116、n119、r120、t123、a125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。在一些情形下，氨基酸残基选自k8、k9、l12、e15、h16、l19、d20、q22、m23、n26、d84、n88、e95和q126。在一些情形下，氨基酸残基选自k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、r80、d83、s86、n87、v90、i91、l93、e94、e115、n118、r119、t122、a124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。在一些情形下，氨基酸残基选自k8、k9、l12、e15、h16、l19、d20、q22、m23、n26、d84、n88、e95和q126，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:3。在一些情况下，il-2缀合物与il-2rαβγ复合物相互作用，但是对il-2rβ和il-2rγ亚基的亲和力降低，或者将减少il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集。在一些情况下，相对于野生型il-2多肽，经修饰的il-2多肽维持对il-2rα的结合亲和力。在此类情况下，il-2/il-2rαβγ复合物刺激或增强cd4 treg细胞的扩增。在另外的情况下，经修饰的il-2多肽增加经由il-2rβγ复合物激活teff和/或nk细胞所需的剂量，从而扩大经由il-2rαβγ复合物激活treg细胞的剂量范围(或扩大经由il-2rαβγ复合物激活treg细胞的il-2治疗窗)。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的表1所述的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no:34-48中任一个的序列的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:199-213中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:49-63中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:213-228中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗
有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:64-78中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:229-243中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:154-168中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:109-123中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:169-183中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:123-138中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:184-198中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。在一些实施方案中，本文描述了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的包含seq id no.:139-153中的任一个的式(i)的细胞因子缀合物。
[0315]
在一些情形下，自身免疫性疾病或障碍包括斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、幼年型特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳肉芽肿病。
[0316]
在一些情况下，将细胞因子(例如，白介素、ifn或tnf)缀合物施用至患有斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、幼年型特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳肉芽肿病的受试者。
[0317]
在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、幼年型特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、干燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风或韦格纳肉芽肿病的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有1型糖尿病的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有格雷夫斯病的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有多发性硬化的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有银屑病的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有类风湿性关节炎的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有干燥综合征的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有系统性红斑狼疮的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至患有葡萄膜炎的受试者。在一些情况下，将il-2缀合物施用至
患有韦格纳肉芽肿病的受试者。
[0318]
在一些情况下，将细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)施用至受试者用于治疗移植物抗宿主病(gvhd)。
[0319]
在一些实施方案中，将本公开文本的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)施用至受试者用于治疗移植排斥。
[0320]
在一些实施方案中，将本公开文本的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)施用至受试者用于治疗接触性过敏反应。
[0321]
迟发型超敏反应(dth)(也称为iv型超敏反应)是由抗原特异性效应t淋巴细胞介导的炎症反应。炎症反应的特征为局部皮肤肿胀、红斑、硬结和细胞浸润。通过用抗原(如牛血清白蛋白(bsa)、钥孔戚血蓝蛋白(klh)或卵白蛋白(ova))免疫可以主动诱导dth。抗原特异性t淋巴细胞的过继转移也可以用于引发dth反应。dth提供了评估化合物在慢性免疫反应和/或慢性炎症的动物模型中的作用的手段。dth还可以用于测量药剂对抑制受试者对抗原的急性反应的影响。在两个单独的阶段完成dth反应的发生：初始致敏阶段和引发阶段。当受试者暴露于特定抗原时，初始致敏阶段发生。后一阶段可以在例如致敏后5-12天开始，其中通过例如皮下爪垫注射或皮内耳朵注射相同的抗原来激发先前致敏的受试者。
[0322]
可以将本文所述的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)施用至患有模式为、表示为和/或特征为dth反应的自身免疫性病症的受试者。因此，在一些实施方案中，本文描述了减轻或消除有需要的受试者的模式为、表示为和/或特征为dth反应的自身免疫性病症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)。在一些实施方案中，本文描述了减轻或消除有需要的受试者的dth的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所述的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)。在一些实施方案中，向有需要的受试者施用治疗有效量的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)，以防止或减少dth反应的发生或者以防止或减少模式为、表示为和/或特征为dth反应的病症的发生。
[0323]
在一些实施方案中，将另外的治疗剂进一步施用至受试者。在一些情况下，将另外的治疗剂与细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)同时施用。在其他情况下，将另外的治疗剂和细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)依序施用，例如，在另外的治疗剂之前施用细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)，或者在施用另外的治疗剂之后施用细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)。
[0324]
用于治疗自身免疫性疾病或障碍的示例性的另外的治疗剂包括但不限于皮质类固醇，如泼尼松、布地奈德或泼尼松龙；钙调磷酸酶抑制剂，如环孢菌素或他克莫司；mtor抑制剂，如西罗莫司或依维莫司；imdh抑制剂，如硫唑嘌呤、来氟米特或麦考酚酯；生物制品，如阿巴西普、阿达木单抗、阿那白滞素、赛妥珠单抗、依那西普、戈利木单抗、英利昔单抗、依奇珠单抗(ixekizumab)、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、优特克单抗或维多珠单抗；以及单克隆抗体，如巴利昔单抗、达克珠单抗或莫罗单抗(muromonab)。
[0325]
在一些情况下，将细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与选自以下的另外的治疗剂一起施用：皮质类固醇，如泼尼松、布地奈德或泼尼松龙；钙调磷酸酶抑制剂，如环孢菌素或他克莫司；mtor抑制剂，如西罗莫司或依维莫司；imdh抑制剂，如硫唑嘌呤、来氟米特或麦考酚酯；生物制品，如阿巴西普、阿达木单抗、阿那白滞素、赛妥珠单抗、依那西普、戈利木单
抗、英利昔单抗、依奇珠单抗、那他珠单抗、利妥昔单抗、苏金单抗、托珠单抗、优特克单抗或维多珠单抗；以及单克隆抗体，如巴利昔单抗、达克珠单抗或莫罗单抗。另外的治疗剂
[0326]
在一些实施方案中，将另外的治疗剂进一步施用至受试者。在一些情况下，将另外的治疗剂与细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)同时施用。在其他情况下，将另外的治疗剂和il-2缀合物依序施用，例如，在另外的治疗剂之前施用细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)，或者在施用另外的治疗剂之后施用细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)。
[0327]
在一些情况下，另外的治疗剂包括化学治疗剂、免疫治疗剂、靶向疗法、放射疗法或其组合。说明性的另外的治疗剂包括但不限于nsaid((1)水杨酸衍生物：乙酰水杨酸(阿司匹林)、二氟尼柳和柳氮磺胺吡啶；(2)对氨基苯酚衍生物：对乙酰氨基酚；(3)芬那酯：甲芬那酸、甲氯芬那酸、氟芬那酸；(4)丙酸衍生物：布洛芬、萘普生、非诺洛芬、酪洛芬、氟比洛芬、奥沙普秦；和(5)烯醇酸(昔康)衍生物：吡罗昔康、替诺昔康)；cox-2抑制剂(塞来昔布、罗非昔布、伐地昔布、氯美昔布、帕瑞昔布和依托昔布(etoricoxib))；糖皮质激素泼尼松/泼尼松龙、甲泼尼龙和氟化糖皮质激素(如地塞米松和倍他米松)；cdmard(常规改善病情抗风湿药：甲氨蝶呤、来氟米特、金化合物、柳氮磺胺吡啶、硫唑嘌呤、环磷酰胺、抗疟药、d-青霉胺、环孢菌素)；抗tnf(英利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、戈利木单抗、培赛利珠单抗(certolizumab pegol))。
[0328]
在一些情况下，将细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与选自皮质类固醇(如泼尼松、甲泼尼龙或地塞米松)的另外的治疗剂一起施用。
[0329]
在一些情形下，将本文所述的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与免疫检查点抑制剂一起施用。示例性检查点抑制剂包括：
[0330]
pd-l1抑制剂，如genentech的mpdl3280a(rg7446)、来自bioxcell的抗小鼠pd-l1抗体克隆10f.9g2(目录号be0101)、来自bristol-meyer's squibb的抗pd-l1单克隆抗体mdx-1105(bms-936559)和bms-935559、msb0010718c、小鼠抗pd-l1克隆29e.2a3、astrazeneca的medi4736、阿特珠单抗(也称为)、贝伐珠单抗(bavelizumab)(也称为)和阿维鲁单抗(avelumab)(也称为)；
[0331]
pd-l2抑制剂，如glaxosmithkline的amp-224(amplimmune)和rhigm12b7；
[0332]
pd-1抑制剂，如来自bioxcell的抗小鼠pd-1抗体克隆j43(目录号be0033-2)、来自bioxcell的抗小鼠pd-1抗体克隆rmp1-14(目录号be0146)、小鼠抗pd-1抗体克隆eh12、merck的mk-3475抗小鼠pd-1抗体(健痊得、派姆单抗、兰洛利珠单抗(lambrolizumab))、anaptysbio的称为anb011的抗pd-1抗体、抗体mdx-1 106(ono-4538)、bristol-myers squibb的人igg4单克隆抗体纳武单抗(bms-936558、mdx1106)、astrazeneca的amp-514和amp-224以及来自curetech ltd的匹地利珠单抗(pidilizumab)(ct-011)；
[0333]
ctla-4抑制剂，如bristol meyers squibb的抗ctla-4抗体伊匹单抗(也称为mdx-010、bms-734016和mdx-101)、来自millipore的抗ctla4抗体克隆9h10、pfizer的曲美木单抗(tremelimumab)(cp-675,206、替西木单抗(ticilimumab))和来自abcam的抗ctla4抗体克隆bni3；
[0334]
lag3抑制剂，如来自ebioscience的抗lag-3抗体克隆ebioc9b7w(c9b7w)、来自
lifespan biosciences的抗lag3抗体ls-b2237、来自immutep的imp321(immufact)、抗lag3抗体bms-986016和lag-3嵌合抗体a9h12；
[0335]
b7-h3抑制剂，如mga271；
[0336]
kir抑制剂，如利瑞鲁单抗(lirilumab)(iph2101)；
[0337]
cd137抑制剂，如乌瑞鲁单抗(urelumab)(bms-663513，bristol-myers squibb)、pf-05082566(抗4-1bb、pf-2566，pfizer)或xmab-5592(xencor)；
[0338]
ps抑制剂，如巴维昔单抗(bavituximab)；
[0339]
以及针对tim3、cd52、cd30、cd20、cd33、cd27、ox40、gitr、icos、btla(cd272)、cd160、2b4、lair1、tight、light、dr3、cd226、cd2或slam的抑制剂，如抗体或其片段(例如，单克隆抗体、人抗体、人源化抗体或嵌合抗体)、rnai分子或小分子。
[0340]
在一些情形下，将细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与派姆单抗、纳武单抗、曲美木单抗或伊匹单抗组合施用。
[0341]
在一些情形下，将本文所述的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与抗体(如阿仑单抗、曲妥珠单抗、替伊莫单抗、本妥昔单抗、恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtansine)或博纳吐单抗)一起施用。
[0342]
在一些情形下，将细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与选自受体激动剂的另外的治疗剂一起施用。在一些情形下，受体激动剂包括toll样受体(tlr)配体。在一些情况下，tlr配体包括tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8或tlr9。在一些情况下，tlr配体包括合成配体，例如像pam3cys、cfa、malp2、pam2cys、fsl-1、hib-ompc、聚肌苷酸:聚胞苷酸、聚腺苷酸:聚尿苷酸、agp、mpl a、rc-529、mdf2β、cfa或鞭毛蛋白。在一些情况下，将细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与选自tlr1、tlr2、tlr3、tlr4、tlr5、tlr6、tlr7、tlr8和tlr9的一种或多种tlr激动剂一起施用。在一些情况下，将细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与选自pam3cys、cfa、malp2、pam2cys、fsl-1、hib-ompc、聚肌苷酸:聚胞苷酸、聚腺苷酸:聚尿苷酸、agp、mpl a、rc-529、mdf2β、cfa和鞭毛蛋白的一种或多种tlr激动剂一起施用。
[0343]
在一些实施方案中，细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)用于自体和/或同种异体t细胞转移的离体激活和/或扩增。在此类情况下，使用细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)来激活和/或扩增包含自体和/或同种异体t细胞的样品，并且在将样品施用至有需要的受试者之前，任选地从样品中去除细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)。
[0344]
在一些实施方案中，将细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)与手术组合施用。过继细胞疗法的开发
[0345]
在一些实施方案中，本文公开了产生可用于治疗有需要的受试者的本文所述的疾病或病症(例如，增殖性疾病或病症、病原体感染和/或自身免疫性疾病或病症)的过继细胞疗法组合物的方法，所述方法包括：a)提供从有需要的受试者获得的免疫细胞；b)使免疫细胞与经修饰的il-2多肽、il-2缀合物、il-2rβγ结合蛋白或免疫细胞的激活剂接触，其中免疫细胞包括cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆细胞、cd8 细胞毒性t细胞、抑制t细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞。在一些实施方案中，将免疫细胞工程化以另外表达嵌合抗原受体(car)。在一些情形下，经修饰的il-2多肽、il-2缀合物、il-2rβγ结合蛋白或免疫细胞的激活剂构成本文公开的制品。在一些情形下，产生过继细胞疗法的方法是使用本文公开的试剂盒来进行。在一些实施方案中，通过施用治疗有效量的过继细胞疗法，用
过继细胞疗法治疗受试者。在一些情形下，受试者被诊断患有疾病或病症。在一些情形下，过继细胞疗法可有效治疗受试者的疾病或病症。在一些情形下，疾病或病症包括自身免疫性疾病。在一些实施方案中，il-2缀合物是seq id no.5-244中的任一个的缀合物。
[0346]
在一些情形下，peg的分子量可有效改善il-2多肽或il-2缀合物作为用于过继细胞疗法的试剂的制造过程。在一些实施方案中，peg的分子量改善il-2多肽或il-2缀合物的溶解度。在一些情形下，peg的分子量改善制造过继细胞疗法的纯化过程。在一些情形下，peg的分子量改善il-2多肽或il-2缀合物的稳定性。
[0347]
在一些实施方案中，本文公开了治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病或障碍的方法，所述方法包括向受试者施用本文所述的过继细胞疗法。在一些情形下，使用本文所述的方法开发过继细胞疗法。在一些情形下，除本文所述的细胞因子缀合物(例如，il-2缀合物)之外，将过继细胞疗法施用至受试者。在一些情形下，在过继细胞疗法之前施用细胞因子缀合物。在一些情形下，在过继细胞疗法之后施用细胞因子缀合物。在一些情形下，过继细胞疗法可有效扩增受试者的免疫细胞群(例如，cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆细胞、nk细胞和/或nkt细胞群、treg细胞群)。缀合化学
[0348]
使用各种缀合反应来缀合掺入本文所述的细胞因子肽中的接头、缀合部分和非天然氨基酸。此类缀合反应通常与水性条件相容，如“生物正交”反应。在一些实施方案中，缀合反应由化学试剂(如催化剂)、光或者在接头、缀合部分或非天然氨基酸上发现的反应性化学基团来介导。在一些实施方案中，缀合反应由酶来介导。在一些实施方案中，本文所用的缀合反应描述于gong,y.,pan,l.tett.lett.2015,56,2123中。在一些实施方案中，本文所用的缀合反应描述于chen,x.；wu.y-w.org.biomol.chem.2016,14,5417中。
[0349]
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括1,3-偶极环加成反应。在一些实施方案中，1,3-偶极环加成反应包括叠氮化物与膦的反应(“点击”反应)。在一些实施方案中，缀合反应由铜催化。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应产生包含经由三唑附接的接头或缀合部分的细胞因子肽。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮化物与应变烯烃的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮化物与应变炔烃的反应。在一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮化物与环炔(例如dbco)的反应。
[0350]
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括：其中x是包含非天然氨基酸的il-2缀合物中的位置，如在seq id no:5至19和79至93中的任一个中。在一些实施方案中，缀合部分包括水溶性聚合物。在一些实施方案中，反应基团包括炔烃或叠氮化物。在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括：
其中x是包含非天然氨基酸的il-2缀合物中的位置，如在seq id no:5至19和79至93中的任一个中。在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括：其中x是包含非天然氨基酸的il-2缀合物中的位置，如在seq id no:5至19和79至93中的任一个中。在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括：其中x是包含非天然氨基酸的il-2缀合物中的位置，如在seq id no:5至19和79至93中的任一个中。
[0351]
在本文所述的一些实施方案中，本文所述的缀合反应包括叠氮化物部分(如含于含有源自n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(azk)的氨基酸残基的蛋白质中的叠氮化物部分)与应变环炔(如源自dbco的应变环炔，dbco是包含二苯并环辛炔基团的化学部分)之间的环加成反应。包含dbco部分的peg基团是可商购的或者可以通过本领域普通技术人员已知的方法来制备。
[0352]
本文所述的缀合反应(如点击反应)可以产生单一位置异构体或位置异构体混合物。在一些情形下，位置异构体的比率为约1:1。在一些情形下，位置异构体的比率为约2:1。在一些情形下，位置异构体的比率为约1.5:1。在一些情形下，位置异构体的比率为约1.2:1。在一些情形下，位置异构体的比率为约1.1:1。在一些情形下，位置异构体的比率大于1:1。细胞因子多肽产生
[0353]
在一些情形下，重组产生或化学合成本文所述的il-2缀合物，其含有天然氨基酸突变或非天然氨基酸突变。在一些情形下，例如通过宿主细胞系统或在无细胞系统中重组产生本文所述的il-2缀合物。
[0354]
在一些情形下，通过宿主细胞系统重组产生il-2缀合物。在一些情况下，宿主细胞
是真核细胞(例如，哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞或植物细胞)或原核细胞(例如，革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌)。在一些情况下，真核宿主细胞是哺乳动物宿主细胞。在一些情况下，哺乳动物宿主细胞是稳定的细胞系，或者是将目的遗传物质掺入其自身基因组中并且具有在多代细胞分裂后表达所述遗传物质的产物的能力的细胞系。在其他情况下，哺乳动物宿主细胞是瞬时细胞系，或者是未将目的遗传物质掺入其自身基因组中并且不具有在多代细胞分裂后表达所述遗传物质的产物的能力的细胞系。
[0355]
示例性哺乳动物宿主细胞包括293t细胞系、293a细胞系、293ft细胞系、293f细胞、293h细胞、a549细胞、mdck细胞、cho dg44细胞、cho-s细胞、cho-k1细胞、expi293f
tm
细胞、flp-in
tm
t-rex
tm
293细胞系、flp-in
tm-293细胞系、flp-in
tm-3t3细胞系、flp-in
tm-bhk细胞系、flp-in
tm-cho细胞系、flp-in
tm-cv-1细胞系、flp-in
tm-jurkat细胞系、freestyle
tm
293-f细胞、freestyle
tm
cho-s细胞、griptite
tm
293msr细胞系、gs-cho细胞系、heparg
tm
细胞、t-rex
tm
jurkat细胞系、per.c6细胞、t-rex
tm-293细胞系、t-rex
tm-cho细胞系和t-rex
tm-hela细胞系。
[0356]
在一些实施方案中，真核宿主细胞是昆虫宿主细胞。示例性昆虫宿主细胞包括果蝇(drosophila)s2细胞、sf9细胞、sf21细胞、high five
tm
细胞和细胞。
[0357]
在一些实施方案中，真核宿主细胞是酵母宿主细胞。示例性酵母宿主细胞包括毕赤酵母(pichia pastoris)酵母菌株，如gs115、km71h、smd1168、smd1168h和x-33；以及酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)酵母菌株，如invsc1。
[0358]
在一些实施方案中，真核宿主细胞是植物宿主细胞。在一些情形下，植物细胞包括来自藻类的细胞。示例性植物细胞系包括来自莱茵衣藻(chlamydomonas reinhardtii)137c或细长聚球藻(synechococcus elongatus)ppc 7942的株系。
[0359]
在一些实施方案中，宿主细胞是原核宿主细胞。示例性原核宿主细胞包括bl21、mach1
tm
、dh10b
tm
、top10、dh5α、dh10bac
tm
、omnimax
tm
、megax
tm
、dh12s
tm
、inv110、top10f’、invαf、top10/p3、ccdb survival、pir1、pir2、stbl2
tm
、stbl3
tm
或stbl4
tm
。
[0360]
在一些情形下，用于产生本文所述的il-2多肽的合适的多核酸分子或载体包括源自真核或原核来源的任何合适的载体。示例性多核酸分子或载体包括来自细菌(例如，大肠杆菌(e.coli))、昆虫、酵母(例如，毕赤酵母)、藻类或哺乳动物来源的载体。细菌载体包括例如pacyc177、pask75、pbad载体系列、pbadm载体系列、pet载体系列、petm载体系列、pgex载体系列、phat、phat2、pmal-c2、pmal-p2、pqe载体系列、prset a、prset b、prset c、ptrchis2系列、pza31-luc、pze21-mcs-1、pflag ats、pflag cts、pflag mac、pflag shift-12c、ptac-mat-1、pflag ctc或ptac-mat-2。
[0361]
昆虫载体包括例如pfastbac1、pfastbac dual、pfastbac et、pfastbac hta、pfastbac htb、pfastbac htc、pfastbac m30a、pfastbact m30b、pfastbac、m30c、pvl1392、pvl1393、pvl1393 m10、pvl1393 m11、pvl1393 m12、flag载体(如ppolh-flag1或ppolh-mat 2)或mat载体(如ppolh-mat1或ppolh-mat2)。
[0362]
酵母载体包括例如pdest
tm
14载体、pdest
tm
15载体、pdest
tm
17载体、pdest
tm
24载体、pyes-dest52载体、pbad-dest49 目的载体、pao815毕赤酵母属(pichia)载体、pfld1毕赤酵母载体、pgapza、b和c毕
赤酵母载体、ppic3.5k毕赤酵母属载体、ppic6 a、b和c毕赤酵母属载体、ppic9k毕赤酵母属载体、ptef1/zeo、pyes2酵母载体、pyes2/ct酵母载体、pyes2/nt a、b和c酵母载体或pyes3/ct酵母载体。
[0363]
藻类载体包括例如pchlamy-4载体或mcs载体。
[0364]
哺乳动物载体包括例如瞬时表达载体或稳定表达载体。示例性哺乳动物瞬时表达载体包括p3xflag-cmv 8、pflag-myc-cmv 19、pflag-myc-cmv 23、pflag-cmv 2、pflag-cmv 6a,b,c、pflag-cmv 5.1、pflag-cmv 5a,b,c、p3xflag-cmv 7.1、pflag-cmv 20、p3xflag-myc-cmv 24、pcmv-flag-mat1、pcmv-flag-mat2、pbicep-cmv 3或pbicep-cmv 4。示例性哺乳动物稳定表达载体包括pflag-cmv 3、p3xflag-cmv 9、p3xflag-cmv 13、pflag-myc-cmv 21、p3xflag-myc-cmv 25、pflag-cmv 4、p3xflag-cmv 10、p3xflag-cmv 14、pflag-myc-cmv 22、p3xflag-myc-cmv 26、pbicep-cmv 1或pbicep-cmv 2。
[0365]
在一些情形下，使用无细胞系统产生本文所述的细胞因子(例如，il-2)多肽。在一些情况下，无细胞系统包含来自细胞的胞质和/或核组分的混合物，并且适合于体外核酸合成。在一些情形下，无细胞系统利用原核细胞组分。在其他情形下，无细胞系统利用真核细胞组分。核酸合成是在基于例如果蝇细胞、非洲爪蟾(xenopus)卵、古细菌或hela细胞的无细胞系统中获得的。示例性无细胞系统包括大肠杆菌s30提取系统、大肠杆菌t7 s30系统、或xpresscf和xpresscf 。
[0366]
无细胞翻译系统不同地包含组分，如质粒、mrna、dna、trna、合成酶、释放因子、核糖体、伴侣蛋白、翻译起始和延伸因子、天然和/或非天然氨基酸和/或用于蛋白质表达的其他组分。任选地修饰此类组分以提高产量、增加合成速率、增加蛋白质产物保真度或掺入非天然氨基酸。在一些实施方案中，本文所述的细胞因子是使用us 8,778,631；us 2017/0283469；us 2018/0051065；us 2014/0315245；或us 8,778,631中描述的无细胞翻译系统合成的。在一些实施方案中，无细胞翻译系统包含经修饰的释放因子，或者甚至从系统去除一种或多种释放因子。在一些实施方案中，无细胞翻译系统包含降低的蛋白酶浓度。在一些实施方案中，无细胞翻译系统包含具有重新分配的密码子的经修饰的trna，所述密码子用于编码非天然氨基酸。在一些实施方案中，在无细胞翻译系统中使用本文所述的合成酶用于掺入非天然氨基酸。在一些实施方案中，在添加至无细胞翻译系统中之前，使用酶促或化学方法用非天然氨基酸对trna进行预加载。在一些实施方案中，无细胞翻译系统的组分是从经修饰的生物体(如经修饰的细菌、酵母或其他生物体)获得的。
[0367]
在一些实施方案中，细胞因子(例如，il-2)多肽是作为环状排列的形式经由表达宿主细胞或通过无细胞系统产生的。
[0368]
包含非天然氨基酸的细胞因子多肽的产生
[0369]
正交或扩展的遗传密码可以用于本公开文本中，其中分配细胞因子(例如，il-2)多肽的核酸序列中存在的一个或多个特定密码子来编码非天然氨基酸，使得可以通过使用正交trna合成酶/trna对将其遗传地掺入细胞因子(例如，il-2)中。正交trna合成酶/trna对能够用非天然氨基酸装载trna，并且能够响应于密码子将该非天然氨基酸掺入多肽链中。
[0370]
在一些情形下，密码子是密码子琥珀、赭石、蛋白石或四联体密码子。在一些情况下，密码子对应于将用于携带非天然氨基酸的正交trna。在一些情况下，密码子是琥珀。在
其他情况下，密码子是正交密码子。
[0371]
在一些情形下，密码子是四联体密码子，其可以由正交核糖体ribo-q1解码。在一些情况下，四联体密码子如neumann等人,“encoding multiple unnatural amino acids via evolution of a quadruplet-decoding ribosome,”nature,464(7287):441-444(2010)中所说明。
[0372]
在一些情形下，本公开文本中使用的密码子是重编码的密码子，例如被可替代密码子替代的同义密码子或稀有密码子。在一些情况下，重编码的密码子如napolitano等人,“emergent rules for codon choice elucidated by editing rare arginine codons in escherichia coli,”pnas,113(38):e5588-5597(2016)中所述。在一些情况下，重编码的密码子如ostrov等人,“design,synthesis,and testing toward a 57-codon genome,”science 353(6301):819-822(2016)中所述。
[0373]
在一些情形下，利用非天然核酸，导致将一种或多种非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il-2)中。示例性非天然核酸包括但不限于尿嘧啶-5-基，次黄嘌呤-9-基(i)，2-氨基腺嘌呤-9-基，5-甲基胞嘧啶(5-me-c)，5-羟甲基胞嘧啶，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基衍生物和其他烷基衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基衍生物和其他烷基衍生物，2-硫尿嘧啶，2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶，6-偶氮基尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶，8-卤代、8-氨基、8-巯基、8-硫烷基、8-羟基和其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代(特别是5-溴)、5-三氟甲基和其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤，7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮腺嘌呤以及3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。某些非天然核酸，如5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和n-2取代的嘌呤、n-6取代的嘌呤、o-6取代的嘌呤、2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶、5-丙炔基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、增加双链体形成稳定性的那些、通用核酸、疏水性核酸、混杂核酸、尺寸扩大的核酸、氟化核酸、5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶以及n-2、n-6和0-6取代的嘌呤，包括2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶(5-me-c)，5-羟甲基胞嘧啶，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基衍生物、其他烷基衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基衍生物和其他烷基衍生物，2-硫尿嘧啶，2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶，5-卤代胞嘧啶，5-丙炔基(-c≡c-ch3)尿嘧啶，5-丙炔基胞嘧啶，嘧啶核酸的其他炔基衍生物，6-偶氮基尿嘧啶，6-偶氮基胞嘧啶，6-偶氮基胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶，8-卤代、8-氨基、8-巯基、8-硫烷基、8-羟基和其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代(特别是5-溴)、5-三氟甲基、其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤，7-甲基腺嘌呤，2-f-腺嘌呤，2-氨基-腺嘌呤，8-氮杂鸟嘌呤，8-氮杂腺嘌呤，7-脱氮鸟嘌呤，7-脱氮腺嘌呤，3-脱氮鸟嘌呤，3-脱氮腺嘌呤，三环嘧啶，吩噁嗪胞苷([5,4-b][l,4]苯并噁嗪-2(3h)-酮)，吩噻嗪胞苷(1h-嘧啶并[5,4-b][l,4]苯并噻嗪-2(3h)-酮)，g夹，吩噁嗪胞苷(例如9-(2-氨基乙氧基)-h-嘧啶并[5,4-b][l,4]苯并噁嗪-2(3h)-酮)，咔唑胞苷(2h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-酮)，吡啶并吲哚胞苷(吡啶并[3',2':4,5]吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-酮)，其中嘌呤或嘧啶碱基被其他杂环替代的那些，7-脱氮-腺嘌呤，7-脱氮鸟苷，2-氨基吡啶，2-吡啶酮，氮杂胞嘧啶，5-溴胞嘧啶，溴尿嘧啶，5-氯胞嘧啶，氯化胞嘧啶，环胞嘧啶，胞嘧啶阿拉伯糖苷，5-氟胞嘧啶，氟嘧啶，氟尿嘧啶，5,6-二氢胞嘧啶，5-碘胞嘧啶，羟基脲，碘尿嘧啶，5-硝基胞嘧
啶，5-溴尿嘧啶，5-氯尿嘧啶，5-氟尿嘧啶和5-碘尿嘧啶，2-氨基-腺嘌呤，6-硫代-鸟嘌呤，2-硫代-胸腺嘧啶，4-硫代-胸腺嘧啶，5-丙炔基-尿嘧啶，4-硫代-尿嘧啶，n4-乙基胞嘧啶，7-脱氮鸟嘌呤，7-脱氮-8-氮杂鸟嘌呤，5-羟基胞嘧啶，2'-脱氧尿苷，2-氨基-2'-脱氧腺苷，以及描述于美国专利号3,687,808；4,845,205；4,910,300；4,948,882；5,093,232；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,645,985；5,681,941；5,750,692；5,763,588；5,830,653和6,005,096；wo 99/62923；kandimalla等人,(2001)bioorg.med.chem.9:807-813；the concise encyclopedia of polymer science and engineering,kroschwitz,j.i.编辑,john wiley&sons,1990,858-859；englisch等人,angewandte chemie,international edition,1991,30,613；和sanghvi,第15章,antisense research and applications,crooke和lebleu编辑,crc press,1993,273-288中的那些。另外的碱基修饰可以在例如美国专利号3,687,808；englisch等人,angewandte chemie,international edition,1991,30,613；和sanghvi,第15章,antisense research and applications,第289-302页,crooke和lebleu编辑,crc press,1993中找到。
[0374]
包含各种杂环碱基和各种糖部分(和糖类似物)的非天然核酸是本领域可获得的，并且在一些情况下，核酸包括不同于天然存在的核酸的五种主要碱基组分的一种或几种杂环碱基。例如，在一些情况下，杂环碱基包括尿嘧啶-5-基、胞嘧啶-5-基、腺嘌呤-7-基、腺嘌呤-8-基、鸟嘌呤-7-基、鸟嘌呤-8-基、4-氨基吡咯并[2.3-d]嘧啶-5-基、2-氨基-4-氧代吡咯并[2,3-d]嘧啶5-基、2-氨基-4-氧代吡咯并[2.3-d]嘧啶-3-基，其中嘌呤经由9位、嘧啶经由1位、吡咯并嘧啶经由7位且吡唑并嘧啶经由1位附接至核酸的糖部分。
[0375]
在一些实施方案中，核苷酸类似物还在磷酸酯部分被修饰。经修饰的磷酸酯部分包括但不限于在两个核苷酸之间的连接处被修饰的那些，并且含有例如硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其他烷基膦酸酯(包括3'-亚烷基膦酸酯)和手性膦酸酯、次膦酸酯、氨基磷酸酯(包括3'-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯、硫羰基氨基磷酸酯)、硫羰烷基膦酸酯、硫羰烷基磷酸三酯和硼烷磷酸酯。应理解，两个核苷酸之间的这些磷酸酯或经修饰的磷酸酯连接是通过3'-5'连接或2'-5'连接，并且所述连接含有相反的极性，如3'-5'至5'-3'或2'-5'至5'-2'。还包括各种盐、混合盐和游离酸形式。许多美国专利传授了如何制备和使用含有经修饰的磷酸酯的核苷酸，并且包括但不限于3,687,808；4,469,863；4,476,301；5,023,243；5,177,196；5,188,897；5,264,423；5,276,019；5,278,302；5,286,717；5,321,131；5,399,676；5,405,939；5,453,496；5,455,233；5,466,677；5,476,925；5,519,126；5,536,821；5,541,306；5,550,111；5,563,253；5,571,799；5,587,361；和5,625,050。
[0376]
在一些实施方案中，非天然核酸包括2',3'-二脱氧-2',3'-二脱氢-核苷(pct/us2002/006460)、5'-取代的dna和rna衍生物(pct/us2011/033961；saha等人,j.org chem.,1995,60,788-789；wang等人,bioorganic&medicinal chemistry letters,1999,9,885-890；和mikhailov等人,nucleosides&nucleotides,1991,10(1-3),339-343；leonid等人,1995,14(3-5),901-905；和eppacher等人,helvetica chimica acta,2004,87,3004-3020；pct/jp2000/004720；pct/jp2003/002342；pct/jp2004/013216；pct/jp2005/020435；
pct/jp2006/315479；pct/jp2006/324484；pct/jp2009/056718；pct/jp2010/067560)或者制备为具有经修饰的碱基的单磷酸酯的5'-取代的单体(wang等人,nucleosides nucleotides&nucleic acids,2004,23(1&2),317-337)。
[0377]
在一些实施方案中，非天然核酸包括在糖环的5'位和2'位处的修饰(pct/us94/02993)，如5'-ch
2-取代的2'-o-保护的核苷(wu等人,helvetica chimica acta,2000,83,1127-1143和wu等人,bioconjugate chem.1999,10,921-924)。在一些情况下，非天然核酸包括酰胺连接的核苷二聚体，其已经被制备用于掺入寡核苷酸中，其中二聚体中3'连接的核苷(5'至3')包含2'-och3和5'-(s)-ch3(mesmaeker等人,synlett,1997,1287-1290)。非天然核酸可以包括2'-取代的5'-ch2(或o)修饰的核苷(pct/us92/01020)。非天然核酸可以包括5'-亚甲基膦酸酯dna和rna单体和二聚体(bohringer等人,tet.lett.,1993,34,2723-2726；collingwood等人,synlett,1995,7,703-705；和hutter等人,helvetica chimica acta,2002,85,2777-2806)。非天然核酸可以包括具有2'-取代的5'-膦酸酯单体(us2006/0074035)和其他经修饰的5'-膦酸酯单体(wo1997/35869)。非天然核酸可以包括5'-修饰的亚甲基膦酸酯单体(ep614907和ep629633)。非天然核酸可以包括在5'和/或6'位包含羟基的5'或6'-膦酸酯核糖核苷类似物(chen等人,phosphorus,sulfur and silicon,2002,777,1783-1786；jung等人,bioorg.med.chem.,2000,8,2501-2509；gallier等人,eur.j.org.chem.,2007,925-933；和hampton等人,j.med.chem.,1976,19(8),1029-1033)。非天然核酸可以包括5'-膦酸酯脱氧核糖核苷单体和具有5'-磷酸酯基团的二聚体(nawrot等人,oligonucleotides,2006,16(1),68-82)。非天然核酸可以包括具有6'-膦酸酯基团的核苷，其中5'或/和6'位未被取代或者被硫代叔丁基(sc(ch3)3)(及其类似物)；亚甲基氨基(ch2nh2)(及其类似物)或氰基(cn)(及其类似物)取代(fairhurst等人,synlett,2001,4,467-472；kappler等人,j.med.chem.,1986,29,1030-1038；kappler等人,j.med.chem.,1982,25,1179-1184；vrudhula等人,j.med.chem.,1987,30,888-894；hampton等人,j.med.chem.,1976,19,1371-1377；geze等人,j.am.chem.soc,1983,105(26),7638-7640；和hampton等人,j.am.chem.soc,1973,95(13),4404-4414)。
[0378]
在一些实施方案中，非天然核酸还包括糖部分的修饰。在一些情况下，核酸含有其中糖基团已经被修饰的一种或多种核苷。此类糖修饰的核苷可以赋予增强的核酸酶稳定性、增加的结合亲和力或一些其他有益的生物学特性。在某些实施方案中，核酸包含经化学修饰的呋喃核糖环部分。经化学修饰的呋喃核糖环的例子包括而不限于添加取代基(包括5'和/或2'取代基；两个环原子桥接形成二环核酸(bna)；用s、n(r)或c(r1)(r2)替代核糖基环氧原子(r＝h、c
1-c
12
烷基或保护基团)；及其组合。经化学修饰的糖的例子可以在wo 2008/101157、us 2005/0130923和wo 2007/134181中找到。
[0379]
在一些情形下，经修饰的核酸包含经修饰的糖或糖类似物。因此，除核糖和脱氧核糖之外，糖部分可以是戊糖、脱氧戊糖、己糖、脱氧己糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖或糖“类似物”环戊基。糖可以呈吡喃糖基或呋喃糖基形式。糖部分可以是核糖、脱氧核糖、阿拉伯糖或2'-o-烷基核糖的呋喃糖苷，并且糖可以以[α]或[β]异头构型附接至相应的杂环碱基。糖修饰包括但不限于2'-烷氧基-rna类似物、2'-氨基-rna类似物、2'-氟-dna和2'-烷氧基-或氨基-rna/dna嵌合体。例如，糖修饰可以包括2'-o-甲基-尿苷或2'-o-甲基-胞苷。糖修饰包括2'-o-烷基-取代的脱氧核糖核苷和2'-o-乙二醇样核糖核苷。这些糖或糖类似
物以及其中此类糖或类似物附接至杂环碱基(核酸碱基)的相应“核苷”的制备是已知的。还可以进行糖修饰并且将其与其他修饰组合。
[0380]
糖部分的修饰包括核糖和脱氧核糖的天然修饰以及非天然修饰。糖修饰包括但不限于在2'位处的以下修饰：oh；f；o-、s-或n-烷基；o-、s-或n-烯基；o-、s-或n-炔基；或o-烷基-o-烷基，其中烷基、烯基和炔基可以是取代或未取代的c1至c
10
烷基或c2至c
10
烯基和炔基。2'糖修饰还包括但不限于-o[(ch2)no]
m ch3、-o(ch2)noch3、-o(ch2)nnh2、-o(ch2)nch3、-o(ch2)nonh2和-o(ch2)non[(ch2)n ch3)]2，其中n和m是从1至约10。
[0381]
2'位处的其他修饰包括但不限于：c1至c
10
低级烷基、取代的低级烷基、烷芳基、芳烷基、o-烷芳基、o-芳烷基、sh、sch3、ocn、cl、br、cn、cf3、ocf3、soch3、so
2 ch3、ono2、no2、n3、nh2、杂环烷基、杂环烷芳基、氨基烷基氨基、聚烷基氨基、取代的甲硅烷基、rna切割基团、报告基团、嵌入剂、用于改善寡核苷酸的药代动力学特性的基团或用于改善寡核苷酸的药效学特性的基团以及具有类似特性的其他取代基。还可以在糖的其他位置(特别是在3'末端核苷酸或2'-5'连接的寡核苷酸中糖的3'位和5'末端核苷酸的5'位)处进行类似的修饰。经修饰的糖还包括在桥环氧处含有修饰(如ch2和s)的那些。核苷酸糖类似物也可以具有糖模拟物，如环丁基部分代替戊呋喃糖基糖。许多美国专利传授了此类经修饰的糖结构的制备，并且详述并描述了一系列的碱基修饰，所述美国专利如美国专利号4,981,957；5,118,800；5,319,080；5,359,044；5,393,878；5,446,137；5,466,786；5,514,785；5,519,134；5,567,811；5,576,427；5,591,722；5,597,909；5,610,300；5,627,053；5,639,873；5,646,265；5,658,873；5,670,633；4,845,205；5,130,302；5,134,066；5,175,273；5,367,066；5,432,272；5,457,187；5,459,255；5,484,908；5,502,177；5,525,711；5,552,540；5,587,469；5,594,121；5,596,091；5,614,617；5,681,941；和5,700,920，将其中的每一个通过引用以其整体并入本文。
[0382]
具有经修饰的糖部分的核酸的例子包括而不限于包含5'-乙烯基、5'-甲基(r或s)、4'-s、2'-f、2'-och3和2'-o(ch2)2och3取代基的核酸。2'位处的取代基还可以选自烯丙基、氨基、叠氮基、硫代、o-烯丙基、o-(c
1-c
1o
烷基)、ocf3、o(ch2)2sch3、o(ch2)
2-o-n(rm)(rn)和o-ch
2-c(＝o)-n(rm)(rn)，其中rm和rn各自独立地是h或者取代或未取代的c
1-c
10
烷基。
[0383]
在某些实施方案中，本文所述的核酸包括一种或多种二环核酸。在某些此类实施方案中，二环核酸包含4'与2'核糖基环原子之间的桥。在某些实施方案中，本文提供的核酸包括一种或多种二环核酸，其中桥包含4'至2'二环核酸。此类4'至2'二环核酸的例子包括但不限于下式之一：4'-(ch2)-o-2'(lna)；4'-(ch2)-s-2'；4'-(ch2)
2-o-2'(ena)；4'-ch(ch3)-o-2'和4'-ch(ch2och3)-o-2'及其类似物(参见美国专利号7,399,845)；4'-c(ch3)(ch3)-o-2'及其类似物(参见wo 2009/006478、wo 2008/150729、us 2004/0171570、美国专利号7,427,672、chattopadhyaya等人,j.org.chem.,209,74,118-134和wo2008/154401)。还参见例如：singh等人,chem.commun.,1998,4,455-456；koshkin等人,tetrahedron,1998,54,3607-3630；wahlestedt等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.,2000,97,5633-5638；kumar等人,bioorg.med.chem.lett.,1998,8,2219-2222；singh等人,j.org.chem.,1998,63,10035-10039；srivastava等人,j.am.chem.soc.,2007,129(26)8362-8379；elayadi等人,curr.opinion invens.drugs,2001,2,558-561；braasch等人,chem.biol,2001,8,1-7；oram等人,curr.opinion mol.ther.,2001,3,239-243；美国专利号4,849,513；5,015,733；
5,118,800；5,118,802；7,053,207；6,268,490；6,770,748；6,794,499；7,034,133；6,525,191；6,670,461；和7,399,845；国际公开号wo 2004/106356、wo 1994/14226、wo 2005/021570、wo 2007/090071和wo 2007/134181；美国专利公开号us 2004/0171570、us 2007/0287831和us 2008/0039618；美国临时申请号60/989,574、61/026,995、61/026,998、61/056,564、61/086,231、61/097,787和61/099,844；以及国际申请号pct/us2008/064591、pct us2008/066154、pct us2008/068922和pct/dk98/00393。
[0384]
在某些实施方案中，核酸包括连接的核酸。核酸可以使用任何核酸间连接而连接在一起。核酸间连接基团的两个主要类别是通过磷原子的存在或不存在来定义的。代表性的含磷的核酸间连接包括但不限于磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸酯(p＝s)。代表性的不含磷的核酸间连接基团包括但不限于亚甲基甲基亚氨基(-ch
2-n(ch3)-o-ch
2-)、硫代二酯(-o-c(o)-s-)、硫羰基氨基甲酸酯(-o-c(o)(nh)-s-)；硅氧烷(-o-si(h)
2-o-)；和n,n*-二甲基肼(-ch
2-n(ch3)-n(ch3))。在某些实施方案中，可以将具有手性原子的核酸间连接制备为外消旋混合物，制备为单独的对映体，例如烷基膦酸酯和硫代磷酸酯。非天然核酸可以含有单一修饰。非天然核酸可以在所述部分之一内或不同部分之间含有多种修饰。
[0385]
对核酸的骨架磷酸修饰包括但不限于甲基膦酸酯、硫代磷酸酯、氨基磷酸酯(桥接或非桥接)、磷酸三酯、二硫代磷酸酯(phosphorodithioate)、二硫代磷酸酯(phosphodithioate)和硼烷磷酸酯，并且可以以任何组合使用。还可以使用其他非磷酸酯连接。
[0386]
在一些实施方案中，骨架修饰(例如，甲基膦酸酯、硫代磷酸酯、氨基磷酸酯和二硫代磷酸酯核苷酸间连接)可以赋予经修饰的核酸免疫调节活性和/或增强其体内稳定性。
[0387]
在一些情形下，磷衍生物(或经修饰的磷酸酯基团)附接至糖或糖类似物部分，并且可以是单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、烷基膦酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、氨基磷酸酯等。含有经修饰的磷酸酯连接或非磷酸酯连接的示例性多核苷酸可以在peyrottes等人,1996,nucleic acids res.24:1841-1848；chaturvedi等人,1996,nucleic acids res.24:2318-2323；和schultz等人,(1996)nucleic acids res.24:2966-2973；matteucci,1997,“oligonucleotide analogs:an overview”in oligonucleotides as therapeutic agents,(chadwick和cardew编辑)john wiley and sons,new york,ny；zon,1993,“oligonucleoside phosphorothioates”in protocols for oligonucleotides and analogs,synthesis and properties,humana press,第165-190页；miller等人,1971,jacs 93:6657-6665；jager等人,1988,biochem.27:7247-7246；nelson等人,1997,joc 62:7278-7287；美国专利号5,453,496；和micklefield,2001,curr.med.chem.8:1157-1179中找到。
[0388]
在一些情况下，骨架修饰包括用可替代部分(如阴离子基团、中性基团或阳离子基团)替代磷酸二酯连接。此类修饰的例子包括：阴离子核苷间连接；n3'至p5'氨基磷酸酯修饰；硼烷磷酸酯dna；原寡核苷酸；中性核苷间连接，如甲基膦酸酯；酰胺连接的dna；亚甲基(甲基亚氨基)连接；甲缩醛(formacetal)和硫代甲缩醛连接；含有磺酰基的骨架；吗啉代寡聚物；肽核酸(pna)；以及带正电荷的脱氧核糖核酸胍(dng)寡聚物(micklefield,2001,current medicinal chemistry 8:1157-1179)。经修饰的核酸可以包含嵌合或混合的骨
架，其包含一种或多种修饰(例如，磷酸酯连接的组合，如磷酸二酯和硫代磷酸酯连接的组合)。
[0389]
磷酸酯的取代基包括例如短链烷基或环烷基核苷间连接、混合的杂原子和烷基或环烷基核苷间连接或者一个或多个短链杂原子或杂环核苷间连接。这些包括具有以下的那些：吗啉代连接(部分地由核苷的糖部分形成)；硅氧烷骨架；硫化物、亚砜和砜骨架；甲酰乙酰基(formacetyl)和硫代甲酰乙酰基骨架；亚甲基甲酰乙酰基和硫代甲酰乙酰基骨架；含烯烃的骨架；氨基磺酸酯骨架；亚甲基亚氨基和亚甲基肼基骨架；磺酸酯和磺酰胺骨架；酰胺骨架；以及具有混合n、o、s和ch2组成部分的其他骨架。许多美国专利公开了如何制备和使用这些类型的磷酸酯替代物，并且包括但不限于美国专利号5,034,506；5,166,315；5,185,444；5,214,134；5,216,141；5,235,033；5,264,562；5,264,564；5,405,938；5,434,257；5,466,677；5,470,967；5,489,677；5,541,307；5,561,225；5,596,086；5,602,240；5,610,289；5,602,240；5,608,046；5,610,289；5,618,704；5,623,070；5,663,312；5,633,360；5,677,437；和5,677,439。还应理解，在核苷酸取代基中，核苷酸的糖和磷酸部分都可以被例如酰胺型连接(氨基乙基甘氨酸)(pna)替代。美国专利号5,539,082；5,714,331；和5,719,262传授了如何制备和使用pna分子，将其中的每一个通过引用并入本文。还参见nielsen等人,science,1991,254,1497-1500。还可以将其他类型的分子(缀合物)与核苷酸或核苷酸类似物连接，以增强例如细胞摄取。缀合物可以与核苷酸或核苷酸类似物化学连接。此类缀合物包括但不限于脂质部分，如胆固醇部分(letsinger等人,proc.natl.acad.sci.usa,1989,86,6553-6556)；胆酸(manoharan等人,bioorg.med.chem.let.,1994,4,1053-1060)；硫醚，例如己基-s-三苯甲基硫醇(manoharan等人,ann.ky.acad.sci.,1992,660,306-309；manoharan等人,bioorg.med.chem.let.,1993,3,2765-2770)；硫代胆固醇(oberhauser等人,nucl.acids res.,1992,20,533-538)；脂肪链，例如十二烷二醇或十一烷基残基(saison-behmoaras等人,em5oj,1991,10,1111-1118；kabanov等人,febs lett.,1990,259,327-330；svinarchuk等人,biochimie,1993,75,49-54)；磷脂，例如二-十六烷基-rac-甘油或三乙基铵l-二-o-十六烷基-rac-甘油-s-h-膦酸酯(manoharan等人,tetrahedron lett.,1995,36,3651-3654；shea等人,nucl.acids res.,1990,18,3777-3783)；聚胺或聚乙二醇链(manoharan等人,nucleosides&nucleotides,1995,14,969-973)；或金刚烷乙酸(manoharan等人,tetrahedron lett.,1995,36,3651-3654)；棕榈基部分(mishra等人,biochem.biophys.acta,1995,1264,229-237)；或十八烷基胺或己氨基-羰基-羟胆固醇部分(crooke等人,j.pharmacol.exp.ther.,1996,277,923-937)。许多美国专利传授了此类缀合物的制备，并且包括但不限于美国专利号4,828,979；4,948,882；5,218,105；5,525,465；5,541,313；5,545,730；5,552,538；5,578,717；5,580,731；5,580,731；5,591,584；5,109,124；5,118,802；5,138,045；5,414,077；5,486,603；5,512,439；5,578,718；5,608,046；4,587,044；4,605,735；4,667,025；4,762,779；4,789,737；4,824,941；4,835,263；4,876,335；4,904,582；4,958,013；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,082,830；5,112,963；5,214,136；5,245,022；5,254,469；5,258,506；5,262,536；5,272,250；5,292,873；5,317,098；5,371,241；5,391,723；5,416,203；5,451,463；5,510,475；5,512,667；5,514,785；5,565,552；5,567,810；5,574,142；5,585,481；5,587,371；5,595,726；5,597,696；5,
599,923；5,599,928和5,688,941。
[0390]
在一些情况下，非天然核酸进一步形成非天然碱基对。能够在体内条件下形成非天然dna或rna碱基对(ubp)的示例性非天然核苷酸包括但不限于tpt3、dtpt3、5sics、d5sics、nam、dnam、cnmo、dcnmo及其组合。能够形成可以用于制备本文公开的il-2缀合物的非天然ubp的非天然核苷酸的其他例子可以在dien等人,j am chem soc.,2018,140:16115-16123；feldman等人,j am chem soc,2017,139:11427-11433；ledbetter等人,j am chem soc.,2018,140:758-765；dhami等人,nucleic acids res.2014,42:10235-10244；malyshev等人,nature,2014,509:385-388；betz等人,j am chem soc.,2013,135:18637-18643；lavergne等人,j am chem soc.2013,135:5408-5419；和malyshev等人proc natl acad sci usa,2012,109:12005-12010中找到。在一些实施方案中，非天然核苷酸包括：
[0391]
在一些实施方案中，可以用于制备本文公开的il-2缀合物的非天然核苷酸可以源自下式的化合物：其中r2选自氢、烷基、烯基、炔基、甲氧基、甲硫醇、甲烷硒基、卤素、氰基和叠氮基；并且波浪线指示与核糖基或2'-脱氧核糖基的键，其中核糖基或2'-脱氧核糖基部分的5'-羟基呈游离形式，或者任选地键合至单磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯基团。
[0392]
在一些实施方案中，可以用于制备本文公开的il-2缀合物的非天然核苷酸可以源
自自在一些实施方案中，可以用于制备本文公开的il-2缀合物的非天然核苷酸包括合物的非天然核苷酸包括合物的非天然核苷酸包括或其盐。
[0393]
在一些实施方案中，非天然碱基对产生在dumas等人,“designing logical codon reassignment-expanding the chemistry in biology,”chemical science,6:50-69(2015)中所述的非天然氨基酸。
[0394]
在一些实施方案中，通过包含非天然核酸的合成密码子将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。在一些情形下，通过正交的经修饰的合成酶/trna对将非天然氨基酸掺入细胞因子中。此类正交对包含非天然合成酶，其能够将非天然氨基酸装载到非天然trna上，同时最小化a)其他内源性氨基酸装载到非天然trna上和b)非天然氨基酸装载到其他内源性trna上。此类正交对包含能够通过非天然合成酶进行装载，同时避免通过内源性合成酶装载a)其他内源性氨基酸的trna。在一些实施方案中，从各种生物体(如细菌、酵母、古细菌或人来源)鉴定此类对。在一些实施方案中，正交合成酶/trna对包含来自单一生物体的组分。在一些实施方案中，正交合成酶/trna对包含来自两种不同生物体的组分。在一些实施方案中，正交合成酶/trna对包含在修饰之前促进两种不同氨基酸的翻译的组分。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的丙氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的精氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的天冬酰胺合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的天冬氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的半胱氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的谷氨酰胺合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的谷氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的丙氨酸甘氨酸。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的组氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的亮氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的异亮氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的赖氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的甲硫氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的苯丙氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的脯氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的丝氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的苏氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的色氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的酪氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的缬氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交合成酶是经修饰的磷酸丝氨酸合成酶。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的丙氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的精氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的天冬酰胺trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的天冬氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的半胱氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的谷氨酰胺trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的谷氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的丙氨酸甘氨酸。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的组氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的亮氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的异亮氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的赖氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的甲硫氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的苯丙氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的脯氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的丝氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的苏氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的色氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的酪氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的缬氨酸trna。在一些实施方案中，正交trna是经修饰的磷酸丝氨酸trna。
[0395]
在一些实施方案中，通过氨酰基(aars或rs)-trna合成酶-trna对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。示例性aars-trna对包括但不限于詹氏甲烷球菌(mj-tyr)aars/trna对、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌trna
cua
对、大肠杆菌leurs(ec-leu)/嗜热脂肪芽孢杆菌trna
cua
对和吡咯赖氨酰-trna对。在一些情形下，通过mj-tyrrs/trna对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。可以通过mj-tyrrs/trna对掺入的示例性uaa包括但不限于对位取代的苯丙氨酸衍生物，如对氨基苯丙氨酸和对甲氧基苯丙氨酸；间位取代的酪氨酸衍生物，如3-氨基酪氨酸、3-硝基酪氨酸、3,4-二羟基苯丙氨酸和3-碘酪氨酸；苯基硒代半胱氨酸；对硼苯丙氨酸；以及邻硝基苄基酪氨酸。
[0396]
在一些情形下，通过ec-tyr/trna
cua
或ec-leu/trna
cua
对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。可以通过ec-tyr/trna
cua
或ec-leu/trna
cua
对掺入的示例性uaa包括但不限于含有苯甲酮、酮、碘化物或叠氮化物取代基的苯丙氨酸衍生物；o-炔丙基酪氨酸；α-氨基辛酸、o-甲基酪氨酸、o-硝基苄基半胱氨酸；和3-(萘-2-基氨基)-2-氨基-丙酸。
[0397]
在一些情形下，通过吡咯赖氨酰-trna对将非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il多肽)中。在一些情况下，pylrs获自古细菌，例如获自产甲烷的古细菌。在一些情况下，pylrs获自巴氏甲烷八叠球菌、马氏甲烷八叠球菌或乙酸甲烷八叠球菌。可以通过吡咯赖氨酰-trna对掺入的示例性uaa包括但不限于酰胺和氨基甲酸酯取代的赖氨酸，如2-氨基-6-((r)-四氢呋喃-2-甲酰胺基)己酸、n-ε-d-脯氨酰基-l-赖氨酸和n-ε-环戊基氧基羰基-l-赖氨酸；n-ε-丙烯酰基-l-赖氨酸；n-ε-[(1-(6-硝基苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)乙氧基)羰基]-l-赖氨酸；和n-ε-(1-甲基环丙-2-烯甲酰胺基)赖氨酸。在一些实施方案中，可以通过使用马氏甲烷八叠球菌trna制备本文公开的il-2缀合物，马氏甲烷八叠球菌trna通过巴氏甲烷八叠球菌吡咯赖氨酰-trna合成酶(mb pylrs)选择性装载非天然氨基酸，如n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(azk)。其他方法是本领域普通技术人员已知的，如zhang等人,nature 2017,551(7682):644-647中公开的那些。
[0398]
在一些情形下，通过us 9,988,619和us 9,938,516中公开的合成酶将非天然氨基酸掺入本文所述的细胞因子(例如，il多肽)中。
[0399]
在合适的培养基中培养或维持引入了本文公开的构建体或载体的宿主细胞，使得产生trna、trna合成酶和目的蛋白质。培养基还包含一种或多种非天然氨基酸，使得目的蛋白质掺入所述一种或多种非天然氨基酸。在一些实施方案中，来自细菌、植物或藻类的核苷三磷酸转运蛋白(ntt)也存在于宿主细胞中。在一些实施方案中，通过使用表达ntt的宿主细胞制备本文公开的il-2缀合物。在一些实施方案中，用于宿主细胞中的核苷酸核苷三磷酸转运蛋白可以选自tpntt1、tpntt2、tpntt3、tpntt4、tpntt5、tpntt6、tpntt7、tpntt8(假微型海链藻(t.pseudonana))、ptntt1、ptntt2、ptntt3、ptntt4、ptntt5、ptntt6(三角褐指藻(p.tricornutum))、gsntt(嗜硫原始红藻(galdieria sulphuraria))、atntt1、atntt2(拟南芥(arabidopsis thaliana))、ctntt1、ctntt2(沙眼衣原体(chlamydia trachomatis))、pamntt1、pamntt2(嗜阿米巴原衣原体(protochlamydia amoebophila))、ccntt(caedibacter caryophilus)、rpntt1(普氏立克次体(rickettsia prowazekii))。在一些实施方案中，ntt选自ptntt1、ptntt2、ptntt3、ptntt4、ptntt5和ptntt6。在一些实施方案中，ntt是ptntt1。在一些实施方案中，ntt是ptntt2。在一些实施方案中，ntt是ptntt3。在一些实施方案中，ntt是ptntt4。在一些实施方案中，ntt是ptntt5。在一些实施方案中，ntt
是ptntt6。可以使用的其他ntt公开于zhang等人,nature 2017,551(7682):644-647；malyshev等人nature 2014(509(7500),385-388；和zhang等人proc natl acad sci usa,2017,114:1317-1322中。
[0400]
正交trna合成酶/trna对用非天然氨基酸装载trna，并且响应于密码子将所述非天然氨基酸掺入多肽链中。示例性aars-trna对包括但不限于詹氏甲烷球菌(mj-tyr)aars/trna对、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌trna
cua
对、大肠杆菌leurs(ec-leu)/嗜热脂肪芽孢杆菌trna
cua
对和吡咯赖氨酰-trna对。可以根据本公开文本使用的其他aars-trna对包括源自马氏甲烷八叠球菌的那些，描述于feldman等人,j am chem soc.,2018 140:1447-1454；和zhang等人proc natl acad sci usa,2017,114:1317-1322中的那些。
[0401]
在一些实施方案中提供了在表达ntt和trna合成酶的细胞系统中制备本文公开的il-2缀合物的方法。在本文所述的一些实施方案中，ntt选自ptntt1、ptntt2、ptntt3、ptntt4、ptntt5和ptntt6，并且trna合成酶选自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌和马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，ntt是ptntt1，并且trna合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，ntt是ptntt2，并且trna合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，ntt是ptntt3，并且trna合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，ntt是ptntt3，并且trna合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，ntt是ptntt4，并且trna合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，ntt是ptntt5，并且trna合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。在一些实施方案中，ntt是ptntt6，并且trna合成酶源自詹氏甲烷球菌、大肠杆菌tyrrs(ec-tyr)/嗜热脂肪芽孢杆菌或马氏甲烷八叠球菌。
[0402]
在一些实施方案中，可以在细胞(如大肠杆菌)中制备本文公开的il-2缀合物，所述细胞包含(a)核苷三磷酸转运蛋白ptntt2(包括截短型变体，其中全长蛋白质的前65个氨基酸残基缺失)；(b)包含双链寡核苷酸的质粒，所述双链寡核苷酸编码具有所需氨基酸序列的il-2变体并且含有包含第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸的非天然碱基对，以在将掺入非天然氨基酸(如n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(azk))的所需位置提供密码子；(c)编码源自马氏甲烷八叠球菌并且包含非天然核苷酸以提供公认的反密码子(针对il-2变体的密码子)来代替其天然序列的trna的质粒；以及(d)编码巴氏甲烷八叠球菌来源的吡咯赖氨酰-trna合成酶(mb pylrs)的质粒，其可以是编码trna的相同质粒或不同质粒。在一些实施方案中，细胞进一步补充有包含一种或多种非天然碱基的脱氧核糖三磷酸酯。在一些实施方案中，细胞进一步补充有包含一种或多种非天然碱基的核糖三磷酸酯。在一些实施方案中，细胞进一步补充有一种或多种非天然氨基酸，如n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(azk)。在一些实施方案中，编码所需il-2变体的氨基酸序列的双链寡核苷酸在例如编码具有seq id no:4的蛋白质(il-2_c125s)的序列的位置9、16、19、20、23、26、88、91、100、109、119、123、126、127或131处，或者在编码具有seq id no:3的蛋白质(阿地白介素)的序列的位置8、15、18、19、22、25、87、90、99、108、118、122、125、126或130处含有密码
子axc，其中x是非天然核苷酸。在一些实施方案中，细胞进一步包含质粒，所述质粒可以是蛋白质表达质粒或另一种质粒，其编码来自马氏甲烷八叠球菌的正交trna基因，所述正交trna基因包含axc匹配的反密码子gyt代替其天然序列，其中y是互补的并且可以与密码子中的非天然核苷酸相同或不同的非天然核苷酸。在一些实施方案中，密码子中的非天然核苷酸与反密码子中的非天然核苷酸不同且互补。在一些实施方案中，密码子中的非天然核苷酸与反密码子中的非天然核苷酸相同。在一些实施方案中，双链寡核苷酸中的非天然碱基对的第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸可以源自在一些实施方案中，双链寡核苷酸中的非天然碱基对的第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸可以源自在一些实施方案中，第一和第二非天然核苷酸的三磷酸酯包括的三磷酸酯包括或其盐。在一些实施方案中，第一和第二非天然核苷酸的三磷酸酯包括
或其盐。在一些实施方案中，包含第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸的mrna来源的双链寡核苷酸可以包含含有源自的非天然核苷酸的密码子。在一些实施方案中，马氏甲烷八叠球菌trna可以包含含有非天然核苷酸的反密码子，其识别包含mrna的非天然核苷酸的密码子。马氏甲烷八叠球菌trna中的反密码子可以包含源自码子可以包含源自的非天然核苷酸。在一些实施方案中，mrna包含源自的非天然核苷酸。在一些实施方案中，mrna包含源自的非天然核苷酸。在一些实施方案中，
mrna包含源自的非天然核苷酸。在一些实施方案中，trna包含源自的非天然核苷酸。在一些实施方案中，trna包含源自的非天然核苷酸。在一些实施方案中，trna包含源自的非天然核苷酸。在一些实施方案中，mrna包含源自的非天然核苷酸，并且trna包含源自的非天然核苷酸。在一些实施方案中，mrna包含源自的非天然核苷酸，并且trna包含源自的非天然核苷
酸。将宿主细胞在含有适当营养素的培养基中培养，并且补充有以下物质：(a)包含一种或多种非天然碱基的脱氧核糖核苷三磷酸酯，所述非天然碱基是编码具有密码子的细胞因子基因的一种或多种质粒的复制所必需的；(b)包含一种或多种非天然碱基的核糖核苷三磷酸酯，所述非天然碱基是以下的转录所必需的：(i)对应于细胞因子的编码序列并且含有包含一种或多种非天然碱基的密码子的mrna，和(ii)含有包含一种或多种非天然碱基的反密码子的trna；以及(c)待掺入目的细胞因子的多肽序列中的一种或多种非天然氨基酸。然后将宿主细胞维持在允许目的蛋白质表达的条件下。
[0403]
所表达的包含一种或多种非天然氨基酸(例如azk)的所得蛋白质可以通过本领域普通技术人员已知的方法来纯化，然后可以允许其与炔烃(如包含具有如本文所公开的所需平均分子量的peg链的dbco)在本领域普通技术人员已知的条件下反应，以提供本文公开的il-2缀合物。其他方法是本领域普通技术人员已知的，如zhang等人,nature 2017,551(7682):644-647；wo 2015157555；wo 2015021432；wo 2016115168；wo 2017106767；wo 2017223528；wo 2019014262；wo 2019014267；wo 2019028419；和wo2019/028425中公开的那些。
[0404]
可替代地，通过将本文所述的核酸构建体引入宿主细胞中来制备包含一种或多种非天然氨基酸的细胞因子(例如，il-2)多肽，所述核酸构建体包含trna和氨酰基trna合成酶并且包含具有因子或多种框内正交(终止)密码子的目的核酸序列。将宿主细胞在含有适当营养素的培养基中培养，补充有(a)包含一种或多种非天然碱基的脱氧核糖核苷三磷酸酯，所述非天然碱基是编码具有新密码子和反密码子的细胞因子基因的一种或多种质粒的复制所需的；(b)对应于以下的mrna的转录所需的核糖核苷三磷酸酯：(i)含有密码子的细胞因子序列，和(ii)含有反密码子的正交trna；以及(c)一种或多种非天然氨基酸。然后将宿主细胞维持在允许目的蛋白质表达的条件下。响应于非天然密码子，将一种或多种非天然氨基酸掺入多肽链中。例如，将一种或多种非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il-2)多肽中。可替代地，可以在蛋白质中的两个或更多个位点处将两种或更多种非天然氨基酸掺入细胞因子(例如，il-2)多肽中。
[0405]
一旦在宿主细胞中产生了掺入一种或多种非天然氨基酸的细胞因子(例如，il-2)多肽，便可以通过本领域已知的多种技术(包括酶促、化学和/或渗透裂解和物理破坏)从宿主细胞提取多肽。可以通过本领域已知的标准技术(如制备型离子交换色谱法、疏水色谱法、亲和色谱法或本领域普通技术人员已知的任何其他合适的技术)纯化细胞因子(例如，il-2)多肽。
[0406]
合适的宿主细胞可以包括细菌细胞(例如，大肠杆菌，bl21(de3))，但是最合适的宿主细胞是真核细胞，例如昆虫细胞(例如果蝇，如黑腹果蝇(drosophila melanogaster))、酵母细胞、线虫(例如秀丽隐杆线虫(c.elegans))、小鼠(例如小家鼠(mus musculus))或哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢细胞(cho)或cos细胞、人293t细胞、hela细胞、nih 3t3细胞和小鼠红白血病(mel)细胞)或人细胞或其他真核细胞。其他合适的宿主细胞是本领域技术人员已知的。合适地，宿主细胞是哺乳动物细胞，如人细胞或昆虫细胞。在一些实施方案中，合适的宿主细胞包括大肠杆菌。
[0407]
通常可以在本发明的实施方案中使用的其他合适的宿主细胞是在实施例部分中提到的那些。可以经由常规转化或转染技术将载体dna引入宿主细胞中。如本文所用，术语
forms,marcel decker,new york,n.y.,1980，和pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems,第七版(lippincott williams&wilkins1999)。
[0413]
在一些情况下，将药物组合物配制为免疫脂质体，其包含与脂质体的脂质双层直接或间接结合的多种il-2缀合物。示例性脂质包括但不限于脂肪酸；磷脂；固醇，如胆固醇；鞘脂，如鞘磷脂；糖鞘脂，如神经节苷脂、红细胞糖苷脂和脑苷脂；表面活性剂胺，如硬脂酰胺、油胺和亚油胺。在一些情形下，脂质包括阳离子脂质。在一些情形下，脂质包括磷脂。示例性磷脂包括但不限于磷脂酸(“pa”)、磷脂酰胆碱(“pc”)、磷脂酰甘油(“pg”)、磷脂酰乙醇胺(“pe”)、磷脂酰肌醇(“pi”)、和磷脂酰丝氨酸(“ps”)、鞘磷脂(包括脑鞘磷脂)、卵磷脂、溶血卵磷脂、溶血磷脂酰乙醇胺、脑苷脂、二花生酰基磷脂酰胆碱(“dapc”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰胆碱(“ddpc”)、二反油酰基磷脂酰胆碱(“depc”)、二月桂酰基磷脂酰胆碱(“dlpc”)、二亚油酰基磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(“dmpc”)、二油酰基磷脂酰胆碱(“dopc”)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(“dppc”)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(“dspc”)、1-棕榈酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱(“popc”)、二花生酰基磷脂酰甘油(“dapg”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰甘油(“ddpg”)、二反油酰基磷脂酰甘油(“depg”)、二月桂酰基磷脂酰甘油(“dlpg”)、二亚油酰基磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(“dmpg”)、二油酰基磷脂酰甘油(“dopg”)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(“dppg”)、二硬脂酰基磷脂酰甘油(“dspg”)、1-棕榈酰基-2-油酰基-磷脂酰甘油(“popg”)、二花生酰基磷脂酰乙醇胺(“dape”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰乙醇胺(“ddpe”)、二反油酰基磷脂酰乙醇胺(“depe”)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(“dlpe”)、二亚油酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(“dmpe”)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(“dope”)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(“dppe”)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(“dspe”)、1-棕榈酰基-2-油酰基-磷脂酰乙醇胺(“pope”)、二花生酰基磷脂酰肌醇(“dapi”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰肌醇(“ddpi”)、二反油酰基磷脂酰肌醇(“depi”)、二月桂酰基磷脂酰肌醇(“dlpi”)、二亚油酰基磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰基磷脂酰肌醇(“dmpi”)、二油酰基磷脂酰肌醇(“dopi”)、二棕榈酰基磷脂酰肌醇(“dppi”)、二硬脂酰基磷脂酰肌醇(“dspi”)、1-棕榈酰基-2-油酰基-磷脂酰肌醇(“popi”)、二花生酰基磷脂酰丝氨酸(“daps”)、二癸酰基-l-α-磷脂酰丝氨酸(“ddps”)、二反油酰基磷脂酰丝氨酸(“deps”)、二月桂酰基磷脂酰丝氨酸(“dlps”)、二亚油酰基磷脂酰丝氨酸、二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸(“dmps”)、二油酰基磷脂酰丝氨酸(“dops”)、二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸(“dpps”)、二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸(“dsps”)、1-棕榈酰基-2-油酰基-磷脂酰丝氨酸(“pops”)、二花生酰基鞘磷脂、二癸酰基鞘磷脂、二反油酰基鞘磷脂、二月桂酰基鞘磷脂、二亚油酰基鞘磷脂、二肉豆蔻酰基鞘磷脂、鞘磷脂、二油酰基鞘磷脂、二棕榈酰基鞘磷脂、二硬脂酰基鞘磷脂以及1-棕榈酰基-2-油酰基-鞘磷脂。
[0414]
在一些情形下，药物配制品进一步包括ph调节剂或缓冲剂，其包括酸，如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱，如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠、乳酸钠和三羟甲基氨基甲烷；以及缓冲液，如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。以使组合物的ph维持在可接受范围内所需的量包括此类酸、碱和缓冲液。
[0415]
在一些情形下，药物配制品以使组合物的渗透压在可接受范围内所需的量包括一种或多种盐。此类盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的那些，合适的盐包括氯化钠、
氯化钾、硫代硫酸钠、亚硫酸氢钠和硫酸铵。
[0416]
在一些实施方案中，药物配制品包括但不限于糖(如海藻糖、蔗糖、甘露醇、麦芽糖、葡萄糖)或盐(如磷酸钾、柠檬酸钠、硫酸铵)和/或其他药剂(如肝素)，以增加多肽的溶解度和体内稳定性。
[0417]
在一些情形下，药物配制品进一步包括用于稳定化合物的稀释剂，因为它们可以提供更稳定的环境。溶解于缓冲溶液中的盐(其也可以提供ph控制或维持)在本领域中用作稀释剂，包括但不限于磷酸盐缓冲盐水溶液。在某些情形下，稀释剂增加组合物的体积以有助于压缩或产生足够的均匀共混物体积用于胶囊填充。此类化合物可以包括例如乳糖、淀粉、甘露醇、山梨醇、右旋糖、微晶纤维素(如)、磷酸氢钙、磷酸氢钙二水合物、磷酸三钙、磷酸钙、无水乳糖、喷雾干燥的乳糖、预胶化淀粉、可压缩糖(如(amstar))、甘露醇、羟丙基甲基纤维素、醋酸硬脂酸羟丙基甲基纤维素、基于蔗糖的稀释剂、糖果剂的糖、硫酸二氢钙一水合物、硫酸钙二水合物、乳酸钙三水合物、葡萄糖结合剂(dextrate)、谷物水解固形物、直链淀粉、粉状纤维素、碳酸钙、甘氨酸、高岭土、甘露醇、氯化钠、肌醇、膨润土等。在一些实施方案中，本文公开的il-2缀合物可以用于药物配制品中，所述药物配制品包含组氨酸、山梨醇和聚山梨醇酯80或者提供稳定配制品且可以施用至有需要的受试者的任何组合。在一个实施方案中，本文公开的il-2缀合物可以呈现为合适的容器(如小瓶)中的成品药，如下：il-2缀合物(约2mg至约10mg)；l-组氨酸(约0.5mg至约2mg)；l-组氨酸盐酸盐(约1mg至约2mg)；山梨醇(约20mg至约80mg)；和聚山梨醇酯80(约0.1mg至约0.2mg)；具有足量的注射用水以提供适用于所公开方法中的液体配制品。
[0418]
在一些情况下，药物配制品包括崩解剂(disintegration agent)或崩解剂(disintegrant)以促进物质的分解或崩解。术语“崩解”包括剂型在与胃肠液接触时的溶解和分散两者。崩解剂的例子包括淀粉，例如天然淀粉(如玉米淀粉或马铃薯淀粉)、预胶化淀粉(如national 1551或)或羟基乙酸淀粉钠(如或)；纤维素，如木制品、甲基结晶纤维素(例如，ph101、ph102、ph105、p100、ming 和)、甲基纤维素、交联羧甲纤维素或交联纤维素(如交联羧甲纤维素钠交联羧甲基纤维素或交联交联羧甲纤维素)；交联淀粉，如羟基乙酸淀粉钠；交联聚合物，如交聚维酮、交联聚乙烯基吡咯烷酮；海藻酸盐，如海藻酸或海藻酸的盐(如海藻酸钠)；黏土，如hv(硅酸镁铝)；胶质，如琼脂、瓜尔胶、槐豆胶、卡拉牙胶、果胶或黄蓍胶；羟基乙酸淀粉钠；膨润土；天然海绵；表面活性剂；树脂，如阳离子交换树脂；柑橘渣；十二烷基硫酸钠；十二烷基硫酸钠与淀粉的组合等。
[0419]
在一些情形下，药物配制品包括填充剂，如乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉、右旋糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露醇、山梨醇、氯化钠、聚乙二醇等。
[0420]
润滑剂和助流剂也任选地包括在本文所述的药物配制品中，用于防止、减少或抑制材料的粘附或摩擦。示例性润滑剂包括例如硬脂酸、氢氧化钙、滑石粉、硬脂酰富马酸钠、烃(如矿物油，或氢化植物油，如氢化大豆油)、高级脂肪酸及其碱金属和碱土金
属盐(如铝、钙、镁、锌、硬脂酸、硬脂酸钠)、甘油、滑石粉、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇(例如，peg-4000)或甲氧基聚乙二醇(如carbowax
tm
)、油酸钠、苯甲酸钠、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇、十二烷基硫酸镁或十二烷基硫酸钠、胶体二氧化硅(如syloid
tm
、)、淀粉(如玉米淀粉)、硅油、表面活性剂等。
[0421]
增塑剂包括用于软化微囊化材料或薄膜包衣以使其脆性降低的化合物。合适的增塑剂包括例如聚乙二醇(如peg 300、peg 400、peg 600、peg 1450、peg 3350和peg800)、硬脂酸、丙二醇、油酸、三乙基纤维素和三醋汀。增塑剂也可以起分散剂或润湿剂的作用。
[0422]
增溶剂包括诸如三醋汀、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、十二烷基硫酸钠、多库酯钠、维生素e tpgs、二甲基乙酰胺、n-甲基吡咯烷酮、n-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯基吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基环糊精、乙醇、正丁醇、异丙醇、胆固醇、胆汁盐、聚乙二醇200-600、四氢呋喃聚乙二醇醚、二乙二醇单乙基醚、丙二醇和二甲基异山梨醇酯等化合物。
[0423]
稳定剂包括诸如任何抗氧化剂、缓冲剂、酸、防腐剂等化合物。示例性稳定剂包括l-精氨酸盐酸盐、氨基丁三醇、白蛋白(人)、柠檬酸、苯甲醇、苯酚、磷酸二氢二钠脱水合物、丙二醇、间甲酚(metacresol)或间甲酚(m-cresol)、乙酸锌、聚山梨醇酯-20或20或氨丁三醇。
[0424]
助悬剂包括诸如以下的化合物：聚乙烯基吡咯烷酮，例如聚乙烯基吡咯烷酮k12、聚乙烯基吡咯烷酮k17、聚乙烯基吡咯烷酮k25或聚乙烯基吡咯烷酮k30；乙烯基吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物(s630)；聚乙二醇，例如聚乙二醇可以具有约300至约6000、或约3350至约4000、或约7000至约5400的分子量；羧甲纤维素钠；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素；醋酸硬脂酸羟甲基纤维素；聚山梨醇酯-80；羟乙基纤维素；海藻酸钠；胶质，如例如黄蓍胶和阿拉伯胶、瓜尔胶、黄原胶类(包括黄原胶)；糖；纤维质，如例如羧甲纤维素钠、甲基纤维素、羧甲纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素；聚山梨醇酯-80；海藻酸钠；聚乙氧基化脱水山梨醇单月桂酸酯、聚乙氧基化脱水山梨醇单月桂酸酯；聚维酮等。
[0425]
表面活性剂包括诸如十二烷基硫酸钠、多库酯钠、tween 60或80、三醋汀、维生素e tpgs、脱水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、聚山梨酸酯、泊洛沙姆(polaxomer)、胆汁盐、单硬脂酸甘油酯、环氧乙烷与环氧丙烷的共聚物(例如，(basf))等化合物。另外的表面活性剂包括聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和植物油(例如，聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油)以及聚氧乙烯烷基醚和烷基苯基醚(例如，辛苯聚醇10、辛苯聚醇40)。有时，包括表面活性剂以增强物理稳定性或用于其他目的。
[0426]
粘度增强剂包括例如甲基纤维素、黄原胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、醋酸硬脂酸羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸盐、阿拉伯胶、壳聚糖及其组合。
[0427]
润湿剂包括诸如油酸、单硬脂酸甘油酯、脱水山梨醇单油酸酯、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯、多库酯钠(sodium docusate)、油酸钠、十二烷基硫酸钠、多库酯钠(sodium doccusate)、三醋汀、tween 80、维生素e tpgs、铵盐等化合物。治疗方案
[0428]
在一些实施方案中，施用本文所述的药物组合物用于治疗应用。在一些实施方案
中，将药物组合物每天施用一次、每天施用两次、每天施用三次或更多次。将药物组合物每日施用、每天施用、每隔一天施用、每周施用五天、每周施用一次、每隔一周施用、每月施用两周、每月施用三周、每月施用一次、每月施用两次、每月施用三次或更多次。将药物组合物施用至少1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、18个月、2年、3年或更长时间。
[0429]
在患者状况确实有所改善的情况下，根据医生的判断，连续施用组合物，可替代地，将施用的组合物的剂量暂时减少或暂时中止一定时间(即，“药物假期”)。在一些情形下，药物假期的长度在2天与1年之间变化，包括(仅通过举例的方式)2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。药物假期期间的剂量减少是从10％-100％，包括(仅通过举例的方式)10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
[0430]
在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每周一次、每两周一次、每三周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每9周一次、每10周一次、每11周一次、每12周一次、每13周一次、每14周一次、每15周一次、每16周一次、每17周一次、每18周一次、每19周一次、每20周一次、每21周一次、每22周一次、每23周一次、每24周一次、每25周一次、每26周一次、每27周一次或每28周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每两周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每三周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每4周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每5周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每6周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每7周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每8周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每9周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每10周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每11周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每12周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每13周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每14周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每15周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每16周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每17周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每18周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每19周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每20周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每21周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每22周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每23周一次。在一些实施方案中，将有效量的il-2缀合物施用至有需要的受试者，每24周一次。
[0431]
一旦患者病症已经得到改善，必要时施用维持剂量。随后，可以根据症状将剂量或施用频率或两者降低至保留改善的疾病、障碍或病症的水平。
[0432]
在一些实施方案中，对应于这种量的给定药剂的量根据多种因素而变化，所述因素如特定化合物、疾病的严重程度、需要治疗的受试者或宿主的特性(例如，体重)，然而根据围绕病例的特定情况(包括例如所施用的具体药剂、施用途径和所治疗的受试者或宿主)以本领域已知的方式常规地确定。在一些情形下，所需剂量方便地以单一剂量或作为分开的剂量呈现，所述分开的剂量是同时(或在短时间段内)或以适当的间隔(例如每天两个、三个、四个或更多个子剂量)施用。
[0433]
在一些实施方案中，所述方法包括以以下范围内的剂量将il-2缀合物给药至有需要的受试者：从1μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约2μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约4μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约6μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约8μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约10μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约12μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约14μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约16μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约18μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约20μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约22μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约24μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约26μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约28μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约32μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约34μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约36μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约40μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约45μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约50μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约55μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约60μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约65μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约70μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约75μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约80μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约85μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约90μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约95μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约100μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者
体重、或从约110μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约120μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约130μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约140μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约150μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约160μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约170μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约180μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或从约190μg的il-2缀合物/kg的受试者体重至约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重。前述范围仅仅是提示性的，因为关于单一治疗方案的变量数量很大，并且相对于这些推荐值的显著偏差并不罕见。此类剂量根据许多变量而改变，不限于所使用化合物的活性、待治疗的疾病或病症、施用方式、个体受试者的需求、所治疗疾病或病症的严重程度以及执业医师的判断。在一些实施方案中，通过细胞培养物或实验动物中的标准制药学程序来确定此类治疗方案的毒性和治疗功效，所述标准制药学程序包括但不限于ld50(对50％的群体致死的剂量)和ed50(对50％的群体具有治疗效果的剂量)的确定。毒性与治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且其表示为ld50与ed50之间的比率。展现出高治疗指数的化合物是优选的。将从细胞培养测定和动物研究获得的数据用于制定用于人的剂量范围。此类化合物的剂量优选地在循环浓度的范围内，所述循环浓度包括具有最小毒性的ed50。剂量根据所采用的剂型和所利用的施用途径而在此范围内变化。
[0434]
在一些实施方案中，所述方法包括以以下剂量将il-2缀合物给药至有需要的受试者：约1μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、或约2μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约4μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约6μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约8μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约10μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约12μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约14μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约16μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约18μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约20μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约22μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约24μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约26μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约28μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约30μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约32μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约34μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约36μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约38μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约40μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约42μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约44μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约46μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约48μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约50μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约55μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约60μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约65μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约70μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约75μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约80μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约85μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约90μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约95μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约100μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约110μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约120μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约130μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约140μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约150μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约160μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约170μg的il-2缀
合物/kg的受试者体重、约180μg的il-2缀合物/kg的受试者体重、约190μg的il-2缀合物/kg的受试者体重或约200μg的il-2缀合物/kg的受试者体重。前述范围仅仅是提示性的，因为关于单一治疗方案的变量数量很大，并且相对于这些推荐值的显著偏差并不罕见。此类剂量根据许多变量而改变，不限于所使用化合物的活性、待治疗的疾病或病症、施用方式、个体受试者的需求、所治疗疾病或病症的严重程度以及执业医师的判断。在一些实施方案中，通过细胞培养物或实验动物中的标准制药学程序来确定此类治疗方案的毒性和治疗功效，所述标准制药学程序包括但不限于ld50(对50％的群体致死的剂量)和ed50(对50％的群体具有治疗效果的剂量)的确定。毒性与治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且其表示为ld50与ed50之间的比率。展现出高治疗指数的化合物是优选的。将从细胞培养测定和动物研究获得的数据用于制定用于人的剂量范围。此类化合物的剂量优选地在循环浓度的范围内，所述循环浓度包括具有最小毒性的ed50。剂量根据所采用的剂型和所利用的施用途径而在此范围内变化。
[0435]
前述范围仅仅是提示性的，因为关于单一治疗方案的变量数量很大，并且相对于这些推荐值的显著偏差并不罕见。此类剂量根据许多变量而改变，不限于所使用化合物的活性、待治疗的疾病或病症、施用方式、个体受试者的需求、所治疗疾病或病症的严重程度以及执业医师的判断。
[0436]
在一些实施方案中，通过细胞培养物或实验动物中的标准制药学程序来确定此类治疗方案的毒性和治疗功效，所述标准制药学程序包括但不限于ld50(对50％的群体致死的剂量)和ed50(对50％的群体具有治疗效果的剂量)的确定。毒性与治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并且其表示为ld50与ed50之间的比率。展现出高治疗指数的化合物是优选的。将从细胞培养测定和动物研究获得的数据用于制定用于人的剂量范围。此类化合物的剂量优选地在循环浓度的范围内，所述循环浓度包括具有最小毒性的ed50。剂量根据所采用的剂型和所利用的施用途径而在此范围内变化。试剂盒/制品
[0437]
在某些实施方案中，本文公开了与本文所述的一种或多种方法和组合物一起使用的试剂盒和制品。此类试剂盒包括载体、包装或容器，其被分隔以容纳一个或多个容器如小瓶、管等，所述一个或多个容器中的每一个包含待在本文所述的方法中使用的单独要素之一。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器和试管。在一个实施方案中，容器由各种材料(如玻璃或塑料)形成。
[0438]
在一些实施方案中，试剂盒包含可用于开发过继细胞疗法的制品。在一些实施方案中，试剂盒包含一种或多种本文公开的细胞因子(例如，il-2)多肽或细胞因子(例如，il-2)缀合物，以及任选地一种或多种本文所述的药物赋形剂，以促进细胞因子(例如，il-2)多肽或细胞因子(例如，il-2)缀合物的递送。此类试剂盒可以任选地包括一种或多种辅助组分，包括t细胞受体信号传导或调节的诱导物(例如，检查点抗体、cd3/cd28抗体、主要组织相容性复合物(mhc)等)，或者替代性细胞因子或细胞因子受体激动剂。此类试剂盒进一步任选地包括与其在本文所述的方法中的使用有关的识别描述或标签或说明书。在一些实施方案中，试剂盒包含编码本文公开的il-2缀合物的一个或多个多核酸序列，cd4 辅助细胞、cd8 效应幼稚和记忆细胞、自然杀伤(nk)细胞或自然杀伤t(nkt)细胞的激活剂，和/或其药物组合物。
[0439]
增殖性和感染性疾病试剂盒和制品
[0440]
在一些实施方案中，本文公开了包含分离且经修饰的白介素2(il-2)多肽的试剂盒，所述多肽在多肽上的位置处包含至少一种非天然氨基酸，其降低经修饰的il-2多肽与白介素2受体α(il-2rα)之间的结合，但是保留与白介素2βγ受体(il-2rβγ)信号传导复合物的显著结合，以形成il-2/il-2rβγ复合物，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，相对于野生型il-2多肽，与il-2rα的结合的降低包括结合亲和力降低约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％或100％。在一些实施方案中，相对于野生型il-2多肽，与il-2rα的结合的降低包括降低3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多倍。
[0441]
在一些实施方案中，本文公开了包含分离且经修饰的白介素2(il-2)多肽的试剂盒，所述多肽包含至少一种非天然氨基酸，其中分离且经修饰的il-2多肽展现出对il-2βγ信号传导复合物的第一受体信号传导效力和对il-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号传导效力，并且其中第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间的差异小于10倍。在一些实施方案中，受体信号传导效力的差异小于5倍、小于4倍、小于3倍、小于2倍或小于1倍。
[0442]
在一些实施方案中，本文公开了包含编码经修饰的白介素2(il-2)多肽的多核苷酸序列的试剂盒，所述多肽在多肽上的位置处包含至少一种非天然氨基酸，其降低经修饰的il-2多肽与白介素2受体α(il-2rα)之间的结合，但是保留与白介素2βγ受体(il-2rβγ)信号传导复合物的显著结合，以形成il-2/il-2rβγ复合物，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0443]
在一些实施方案中，本文公开了包含编码经修饰的白介素2(il-2)多肽的多核苷酸序列的试剂盒，所述多肽包含至少一种非天然氨基酸，其中分离且经修饰的il-2多肽展现出对il-2βγ信号传导复合物的第一受体信号传导效力和对il-2αβγ信号传导复合物的第二受体信号传导效力，并且其中第一受体信号传导效力与第二受体信号传导效力之间的差异小于10倍。在一些实施方案中，受体信号传导效力的差异小于5倍、小于4倍、小于3倍、小于2倍或小于1倍。
[0444]
自身免疫试剂盒和制品
[0445]
在一些实施方案中，本文公开了包含分离且经修饰的白介素2(il-2)多肽的试剂盒，所述多肽在多肽上的位置处包含至少一种非天然氨基酸，其降低对白介素2受体βγ(il-2rβγ)的受体信号传导效力或减少il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集，但是保留白介素2αβγ受体(il-2rαβγ)的显著激活，其中降低的受体信号传导效力是与野生型il-2多肽与il-2rβγ之间的受体信号传导效力相比，并且其中募集是与野生型il-2多肽对il-2rγ亚基的募集相比。
[0446]
在一些实施方案中，本文公开了包含分离且经修饰的白介素2(il-2)多肽的试剂盒，所述多肽在多肽上的位置处包含至少一种非天然氨基酸，其增加il-2rα亚基至il-2多肽的募集，从而导致白介素2αβγ受体(il-2rαβγ)的激活，其中募集的增加是与野生型il-2多肽对il-2rα亚基的募集相比。
[0447]
在一些实施方案中，对il-2rβγ的受体信号传导效力降低的经修饰的il-2多肽能够扩增cd4 t调节性(treg)细胞。在一些实施方案中，缀合部分削弱或阻断il-2与il-2rβγ
的受体信号传导效力，或者减少il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集。在一些实施方案中，通过经修饰的il-2/il-2rαβγ复合物进行的cd4 treg细胞增殖等效于或大于野生型il-2多肽进行的cd4 treg细胞增殖。在一些实施方案中，经修饰的il-2/il-2rαβγ复合物诱导cd4 treg细胞增殖至足以在动物模型中调节病程的群体。在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽展现出对il-2rβγ的第一受体信号传导效力和对il-2rαβγ的第二受体信号传导效力，其中第一受体信号传导效力比第二受体信号传导效力低至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更低。在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽的第一受体信号传导效力低于野生型il-2多肽对il-2rβγ的受体信号传导效力。在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽的第二受体信号传导效力低于野生型il-2多肽对il-2rαβγ的受体信号传导效力。在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽进一步提供il-2rα亚基至il-2多肽的募集的增加，从而导致白介素2αβγ受体(il-2rαβγ)的激活，其中募集的增加是与野生型il-2多肽对il-2rα亚基的募集相比。在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽进一步提供il-2rγ亚基至il-2/il-2rβ复合物的募集的减少，其中减少的募集是与野生型il-2多肽对il-2rβ亚基和/或il-2rγ亚基的募集相比。
[0448]
在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、k47、k48、a50、t51、e52、k53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、n89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、a125、q126、s127、s130、t131、l132和t133，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、r81、d84、s87、n88、v91、i92、l94、e95、e116、n119、r120、t123、a125、q126、s127、s130、t131、l132和t133，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、k47、k48、a50、t51、e52、k53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、p82、r83、n89、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109、e110、t111、a112和t113，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自k8、k9、l12、e15、h16、l19、d20、q22、m23、n26、d84、n88、e95和q126，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自k8、k9和h16，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自q22、n26、n88和q126，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自e15、d20、d84和e95，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自l12、l19和m23，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸的位置选自q22和n26，其中氨基酸残基的编号对应于seq id no:1。
[0449]
一般试剂盒和制品
[0450]
在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸：是赖氨酸类似物；包含芳香族侧链；包含叠氮基；包含炔基；或者包含醛或酮基。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨
基酸不包含芳香族侧链。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸包括n6-(2-叠氮基乙氧基)-羰基-l-赖氨酸(azk；其化学结构在图3c中显示为化合物90)、n6-(炔丙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(prak；其化学结构在图3c中显示为化合物112)、bcn-l-赖氨酸、降冰片烯赖氨酸、tco-赖氨酸、甲基四嗪赖氨酸、烯丙氧基羰基赖氨酸、2-氨基-8-氧代壬酸、2-氨基-8-氧代辛酸、对乙酰基-l-苯丙氨酸、对叠氮基甲基-l-苯丙氨酸(pamf)、对碘-l-苯丙氨酸、间乙酰基苯丙氨酸、2-氨基-8-氧代壬酸、对炔丙氧基苯丙氨酸、对炔丙基-苯丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、l-多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸、对叠氮基-l-苯丙氨酸、对酰基-l-苯丙氨酸、对苯甲酰基-l-苯丙氨酸、对溴苯丙氨酸、对氨基-l-苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸、o-烯丙基酪氨酸、o-甲基-l-酪氨酸、o-4-烯丙基-l-酪氨酸、4-丙基-l-酪氨酸、膦酰酪氨酸、三-o-乙酰基-glcnacp-丝氨酸、l-磷酸丝氨酸、膦酰丝氨酸、l-3-(2-萘基)丙氨酸、2-氨基-3-((2-((3-(苄氧基)-3-氧代丙基)氨基)乙基)硒基)丙酸、2-氨基-3-(苯基硒基)丙酸或硒代半胱氨酸。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸包括n6-(2-叠氮基乙氧基)-羰基-l-赖氨酸(azk；其化学结构在图3c中显示为化合物90)或n6-(炔丙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(prak；其化学结构在图3c中显示为化合物112)。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸包括n6-(2-叠氮基乙氧基)-羰基-l-赖氨酸(azk；其化学结构在图3c中显示为化合物90)。在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸包括n6-(炔丙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(prak；其化学结构在图3c中显示为化合物112)。
[0451]
在一些实施方案中，所述至少一种非天然氨基酸包含被允许与包括水溶性聚合物在内的缀合部分反应的炔烃，所述水溶性聚合物包括聚乙二醇(peg)、聚(丙二醇)(ppg)、乙二醇与丙二醇的共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉(poz)、聚(n-丙烯酰基吗啉)或其组合。在一些实施方案中，水溶性聚合物包括peg分子。
[0452]
在一些实施方案中，经修饰的il-2多肽包含缀合部分。在一些实施方案中，缀合部分包括水溶性聚合物、脂质、蛋白质和/或肽。在一些实施方案中，水溶性聚合物包括聚乙二醇(peg)、聚(丙二醇)(ppg)、乙二醇与丙二醇的共聚物、聚(氧乙基化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基吡咯烷酮)、聚(羟烷基甲基丙烯酰胺)、聚(羟烷基甲基丙烯酸酯)、聚(糖)、聚(α-羟酸)、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚噁唑啉(poz)、聚(n-丙烯酰基吗啉)或其组合。在一些实施方案中，水溶性聚合物包括peg分子。
[0453]
在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与小于缀合部分的peg的体内血浆半衰期相比，缀合部分包括对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期的peg分子。在一些情形下，如与大于缀合部分的peg的体内血浆半衰期相比，缀合部分包括对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期的peg分子。
[0454]
在一些实施方案中，peg的分子量不影响对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或者具有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与
野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0455]
在一些实施方案中，peg分子是线性peg。在一些实施方案中，其中peg分子是分支peg。在一些实施方案中，peg包含在约2,000-50,000道尔顿(da)之间。在一些实施方案中，peg具有包含约5,000da、10,000da、15,000da、20,000da、25,000da、30,000da、35,000da、40,000da、45,000da或50,000da的分子量。在一些情形下，peg是5,000da。在一些情形下，peg是10,000da。在一些情形下，peg是15,000da。在一些情形下，peg是20,000da。在一些情形下，peg是25,000da。在一些情形下，peg是30,000da。在一些情形下，peg是35,000da。在一些情形下，peg是40,000da。在一些情形下，peg是45,000da。在一些情形下，peg是50,000da。
[0456]
本文提供的制品含有包装材料。药物包装材料的例子包括但不限于泡罩包装、瓶子、管、袋、容器、瓶子以及适合于所选配制品与预期施用方式和治疗的任何包装材料。
[0457]
例如，一个或多个容器包括一种或多种经修饰的il-2多肽，其包含a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132或t133，其中残基位置对应于如seq id no:1所示的2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、15、16、18、19、20、22、23、26、27、29、30、31、32、35、37、46、47、48、50、51、52、53、55、57、60、67、71、74、75、76、77、78、79、81、82、83、84、87、88、89、91、92、94、95、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、109和88、110、111、112、113、116、119、120、123、125、126、127、130、131、132和133。在一些实施方案中，包含t37(其中残基位置对应于如seq id no:1所示的位置9、11、12、15、16、18、19、20、22、23、26、27、29、、53、55、57、60、67、71、74、75、76、99、100、101、102、10 116、119、120、123、125、131、132和133)的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-50,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或者具有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0458]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置8的残基k8处包含突变的经修饰
的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-50,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或者具有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0459]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置15的残基h15处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-50,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或者具有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0460]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置90的残基v90处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-50,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰
期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或者具有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0461]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置108和87的残基在n87r变体中的d108处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-50,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或者具有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0462]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置124的残基s124处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或者具有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有
最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0463]
在一些实施方案中，在对应于seq id no:3的位置129的残基s129处包含突变的经修饰的il-2多肽包含缀合部分，其包括具有约2,000-60,000da的分子量的peg。在一些实施方案中，分子量包括5,000da。在一些实施方案中，分子量包括10,000da。在一些实施方案中，分子量包括15,000da。在一些实施方案中，分子量包括20,000da。在一些实施方案中，分子量包括25,000da。在一些实施方案中，分子量包括30,000da。在一些实施方案中，分子量包括35,000da。在一些实施方案中，分子量包括40,000da。在一些实施方案中，分子量包括45,000da。在一些实施方案中，分子量包括50,000da。在一些实施方案中，分子量包括55,000da。在一些实施方案中，分子量包括60,000da。在一些实施方案中，peg的分子量至少部分决定经修饰的il-2多肽的体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较小peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更长体内血浆半衰期。在一些情形下，如与较大peg的体内血浆半衰期相比，peg对应于经修饰的il-2多肽的更短体内血浆半衰期。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽对il-2βγ或il-2αβγ信号传导复合物的受体信号传导效力，或者具有最小影响。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽与il-2rα的所需降低的结合或与il-2rβγ信号传导复合物的维持的结合，或者具有最小影响，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。在一些实施方案中，peg的分子量不影响经修饰的il-2多肽/il-2rβγ复合物的形成，其中与il-2rα降低的结合是与野生型il-2多肽与il-2rα之间的结合相比。
[0464]
试剂盒通常包括列出内容物和/或使用说明书的标签以及包含使用说明书的包装说明书。通常还将包括一组说明书。
[0465]
在一个实施方案中，标签在容器上或与容器相关。在一个实施方案中，当形成标签的字母、数字或其他字符被贴附、模制或蚀刻到容器本身中时，标签在容器上；当标签存在于也容纳容器的器皿或载体内时，标签与容器相关，例如作为包装说明书。在一个实施方案中，使用标签来指示内容物将用于特定治疗应用。标签还指示如在本文所述的方法中使用内容物的指导。
[0466]
在某些实施方案中，药物组合物呈现在包装或分配器装置中，所述装置含有一个或多个含有本文提供的化合物的单位剂型。包装例如含有金属或塑料箔，如泡罩包装。在一个实施方案中，包装或分配器装置附有施用说明书。在一个实施方案中，包装或分配器还附有与容器相连的通知，所述通知的形式由管理药物制造、使用或销售的政府机构规定，所述通知反映了所述机构对药物形式用于人用或兽用施用的批准。例如，这样的通知是由美国食品药品监督管理局批准的药物标签或者经批准的产品说明书。在一个实施方案中，还制备了含有在相容的药物载体中配制的本文提供的化合物的组合物，将其放置在适当的容器中，并且标记用于治疗所指示病症。某些术语
[0467]
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与所要求保护的主题所属领域的技术人员通常所理解的相同的含义。应理解，具体实施方式仅是示例性和解释性的，并且对所要求保护的任何主题均无限制性。在本技术中，除非另外明确陈述，否则单
数的使用包括复数。必须指出，如在说明书中所用，除非上下文另外清楚地规定，否则单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“所述(the)”包括复数指示物。在本技术中，除非另外陈述，否则“或”的使用意指“和/或”。此外，术语“包括(including)”以及其他形式如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”的使用是非限制性的。
[0468]
尽管本发明的各种特征可以在单个实施方案的上下文中描述，但所述特征也可以单独提供或以任何合适的组合提供。相反，尽管为了清楚起见，本文可以在单独的实施方案的上下文中描述本发明，但本发明也可以在单个实施方案中实现。
[0469]
在说明书中对“一些实施方案”、“一个实施方案(an embodiment)”、“一个实施方案(one embodiment)”或“其他实施方案”的提及意指结合实施方案描述的特定特征、结构或特性包括在本发明的至少一些实施方案中，但是不一定包括在本发明的所有实施方案中。
[0470]
如本文所用，范围和量可以表示为“约”特定值或范围。约也包括确切的量。因此，“约5μl”意指“约5μl”以及“5μl”。通常，术语“约”包括将预期在实验误差内(例如像在15％、10％、或5％内)的量。
[0471]
本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应被解释为限制所描述的主题。
[0472]
如本文所用，术语“一个或多个个体”、“一名或多名受试者”和“一名或多名患者”意指任何哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人。在一些实施方案中，哺乳动物是非人。所述术语都不要求或不限于以卫生保健工作者(例如医生、注册护士、执业护士、医师助理、护理员或临终关怀工作者)进行监督(例如持续或间断)为特征的情况。
[0473]
如本文所用，关于结合亲和力的术语“显著的”或“显著地”意指细胞因子(例如，il-2多肽)的结合亲和力的足以影响细胞因子(例如，il-2多肽)与靶受体的结合的变化。在一些情形下，所述术语是指至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更大的变化。在一些情形下，所述术语意指至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1000倍或更大的变化。
[0474]
在一些情形下，关于经由细胞因子信号传导复合物激活一种或多种细胞群的术语“显著的”或“显著地”意指足以激活细胞群的变化。在一些情况下，将激活细胞群的变化测量为受体信号传导效力。在此类情况下，可以提供ec50值。在其他情况下，可以提供ed50值。在另外的情况下，可以提供细胞因子的浓度或剂量。
[0475]
如本文所用，术语“效力”是指产生靶效应所需的细胞因子(例如，il-2多肽)量。在一些情形下，术语“效力”是指激活靶细胞因子受体(例如，il-2受体)所需的细胞因子(例如，il-2多肽)量。在其他情形下，术语“效力”是指激活靶细胞群所需的细胞因子(例如，il-2多肽)量。在一些情况下，将效力测量为ed50(有效剂量50)或产生50％最大效应所需的剂量。在其他情况下，将效力测量为ec50(有效浓度50)或在50％群体中产生靶效应所需的剂量。
[0476]
如本文所用，“il-2缀合物”是附接(如通过接头)至缀合部分(例如，包括peg基团)的il-2多肽；il-2缀合物可以呈但不一定呈药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物的形式。如本文其他地方详细描述的，il-2多肽可以包含非天然氨基酸，其可以用作与缀合部分的附接位点。编号实施方案。
[0477]
本公开文本包括以下非限制性编号实施方案：实施方案1.一种包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(i)的结构替代：其中：z是ch2并且y是y是ch2并且z是z是ch2并且y是或者y是ch2并且z是w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案1.1.一种包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(i)的结构替代：
其中：z是ch2并且y是y是ch2并且z是z是ch2并且y是或者y是ch2并且z是w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案2.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(i)的结构替代：其中：z是ch2并且y是y是ch2并且z是
z是ch2并且y是或者y是ch2并且z是w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案2.1.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(i)的结构替代：缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(i)的结构替代：其中：z是ch2并且y是y是ch2并且z是z是ch2并且y是或者y是ch2并且z是w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；x具有以下结构：
x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案3.根据实施方案1-2.1中任一项所述的il-2缀合物，其中z是ch2并且y是实施方案4.根据实施方案1-2.1中任一项所述的il-2缀合物，其中y是ch2并且z是实施方案5.根据实施方案1-2.1中任一项所述的il-2缀合物，其中z是ch2并且y是实施方案6.根据实施方案1-2.1中任一项所述的il-2缀合物，其中z是ch2并且y是并且w是具有选自15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团。实施方案7.根据实施方案1-2.1中任一项所述的il-2缀合物，其中y是ch2并且z是实施方案8.根据实施方案1-2.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述peg基团具有选自5kda、10kda、20kda、30kda、40kda或50kda的平均分子量。实施方案9.根据实施方案1-1.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述peg基团具有50kda的平均分子量。实施方案10.根据实施方案1-1.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述peg基团具有30kda的平均分子量。实施方案11.根据实施方案1-1.1中任一项所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、
n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。实施方案12.根据实施方案11所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。实施方案13.根据实施方案12所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。实施方案14.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。实施方案15.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。实施方案16.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。实施方案17.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。实施方案18.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。实施方案19.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。实施方案20.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。实施方案21.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。实施方案22.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。实施方案23.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。实施方案24.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。实施方案25.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。实施方案26.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。实施方案27.根据实施方案13所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。实施方案28.根据实施方案2所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、
l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。实施方案29.根据实施方案28所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案30.根据实施方案29所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。实施方案31.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。实施方案32.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。实施方案33.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。实施方案34.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。实施方案35.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。实施方案36.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。实施方案37.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。实施方案38.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。实施方案39.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。实施方案40.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。实施方案41.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。实施方案42.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。实施方案43.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。实施方案44.根据实施方案30所述的il-2缀合物，其中式(i)的结构在所述il-2缀
合物的氨基酸序列中的位置是t131。实施方案45.一种包含seq id no:34-48和199-213中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg]具有式(ii)或式(iii)的结构或者式(ii)和式(iii)的混合物：其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案45.1一种包含seq id no:34-48和199-213中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg]具有式(ii)或式(iii)的结构或者式(ii)和式(iii)的混合物：
其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案46.根据实施方案45-45.1中任一项所述的il-2缀合物，其中[azk_peg]是式(ii)和式(iii)的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案47.根据实施方案45-45.1中任一项所述的il-2缀合物，其中[azk_peg]具有式(ii)的结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案48.根据实施方案47所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:34-48中任一个的氨基酸序列。实施方案49.根据实施方案47所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。实施方案50.根据实施方案49所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案51.根据实施方案50所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分子量的peg基团；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案52.根据实施方案50所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案53.根据实施方案47所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:199-213中任一个的氨基酸序列。实施方案54.根据实施方案53所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。
实施方案55.根据实施方案54所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案56.根据实施方案55所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分子量的peg基团。实施方案57.根据实施方案55所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。实施方案58.根据实施方案45所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:35或200的氨基酸序列。实施方案59.根据实施方案58所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。实施方案60.根据实施方案59所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案61.根据实施方案60所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分子量的peg基团。实施方案62.根据实施方案60所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。实施方案63.根据实施方案45所述的il-2缀合物，其中[azk_peg]具有式(iii)的结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案64.根据实施方案63所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:34-48中任一个的氨基酸序列。实施方案65.根据实施方案64所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。实施方案66.根据实施方案65所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案67.根据实施方案66所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分子量的peg基团。实施方案68.根据实施方案66所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。实施方案69.根据实施方案45所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:199-213中任一个的氨基酸序列。
实施方案70.根据实施方案69所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。实施方案71.根据实施方案70所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案72.根据实施方案71所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分子量的peg基团。实施方案73.根据实施方案71所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。实施方案74.根据实施方案1至73中任一项所述的il-2缀合物，其中w是线性或分支peg基团。实施方案75.根据实施方案1至73中任一项所述的il-2缀合物，其中w是线性peg基团。实施方案76.根据实施方案1至73中任一项所述的il-2缀合物，其中w是分支peg基团。实施方案77.根据实施方案1至73中任一项所述的il-2缀合物，其中w是甲氧基peg基团。实施方案78.根据实施方案77所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性或分支的。实施方案79.根据实施方案78所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性的。实施方案80.根据实施方案78所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是分支的。实施方案81.一种包含seq id no:49-63和214-228中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]具有式(ii)或式(iii)的结构或者式(ii)和式(iii)的混合物：其中：
w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案81.1.一种包含seq id no:49-63和214-228中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]具有式(ii)或式(iii)的结构或者式(ii)和式(iii)的混合物：其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案82.根据实施方案81-81.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:49-63中任一个的氨基酸序列。实施方案83.根据实施方案81-81.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:214-228中任一个的氨基酸序列。实施方案84.根据实施方案81-81.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:50或215的氨基酸序列。
实施方案85.根据实施方案81-81.1中任一项所述的il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]具有式(ii)的结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案86.根据实施方案85所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:49-63中任一个的氨基酸序列。实施方案87.根据实施方案85所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:214-228中任一个的氨基酸序列。实施方案88.根据实施方案85所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:50或215的氨基酸序列。实施方案89.根据实施方案81-81.1中任一项所述的il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]具有式(iii)的结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案90.根据实施方案89所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:49-63中任一个的氨基酸序列。实施方案91.根据实施方案89所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:214-228中任一个的氨基酸序列。实施方案92.根据实施方案89所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:50或215的氨基酸序列。实施方案93.一种包含seq id no:64-78和229-243中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg30kda]具有式(ii)或式(iii)的结构，或者是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：
其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案93.1.一种包含seq id no:64-78和229-243中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg30kda]具有式(ii)或式(iii)的结构，或者是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：
id no:64-78中任一个的氨基酸序列。实施方案103.根据实施方案101所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:229-243中任一个的氨基酸序列。实施方案104.根据实施方案101所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:65或230的氨基酸序列。实施方案105.一种包含seq id no:34-48和199-213中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案105.1.一种包含seq id no:34-48和199-213中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：
其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案106.根据实施方案105-105.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率为约1:1。实施方案107.根据实施方案105-105.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率大于1:1。实施方案108.根据实施方案105-105.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率小于1:1。实施方案109.根据实施方案105至109中任一项所述的il-2缀合物，其中w是线性或分支peg基团。实施方案110.根据实施方案105至109中任一项所述的il-2缀合物，其中w是线性peg基团。实施方案111.根据实施方案105至109中任一项所述的il-2缀合物，其中w是分支peg基团。实施方案112.根据实施方案105至109中任一项所述的il-2缀合物，其中w是甲氧
基peg基团。实施方案113.根据实施方案112所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性或分支的。实施方案114.根据实施方案113所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性的。实施方案115.根据实施方案113所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是分支的。实施方案116.一种包含seq id no:49-63和214-228中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案116.1.一种包含seq id no:49-63和214-228中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg50kda]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：
其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案117.根据实施方案116-116.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg50kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率为约1:1。实施方案118.根据实施方案116-116.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg50kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率大于1:1。实施方案119.根据实施方案116-116.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg50kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率小于1:1。实施方案120.一种包含seq id no:64-78和229-243中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg30kda]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：
其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案120.1.一种包含seq id no:64-78和229-243中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_peg30kda]是式(ii)和式(iii)的结构的混合物：其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：
x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案121.根据实施方案120-120.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg30kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率为约1:1。实施方案122.根据实施方案120-120.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg30kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率大于1:1。实施方案123.根据实施方案120-120.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_peg30kda]的总量的式(ii)的结构的量与式(iii)的结构的量的比率小于1:1。实施方案124.一种包含seq id no:154-168和109-123中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]具有式(iv)或式(v)的结构或者式(iv)和式(v)的混合物：其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案124.1.一种包含seq id no:154-168和109-123中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]具有式(iv)或式(v)的结构或者式(iv)和式(v)的混合物：物：其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案125.根据实施方案124-124.1中任一项所述的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]是式(iv)和式(v)的混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案126.根据实施方案124-124.1中任一项所述的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]具有式(iv)的结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
实施方案127.根据实施方案126所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:109-123中任一个的氨基酸序列。实施方案128.根据实施方案127所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。实施方案129.根据实施方案128所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案130.根据实施方案129所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分子量的peg基团。实施方案131.根据实施方案129所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。实施方案132.根据实施方案126所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:155或110的氨基酸序列。实施方案133.根据实施方案132所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。实施方案134.根据实施方案133所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案135.根据实施方案134所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分子量的peg基团。实施方案136.根据实施方案134所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。实施方案137.根据实施方案124-124.1中任一项所述的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]具有式(v)的结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案138.根据实施方案137所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:109-123中任一个的氨基酸序列。实施方案139.根据实施方案138所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。实施方案140.根据实施方案139所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案141.根据实施方案140所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分
子量的peg基团。实施方案142.根据实施方案140所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。实施方案143.根据实施方案137所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:155或110的氨基酸序列。实施方案144.根据实施方案143所述的il-2缀合物，其中w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda或60kda的平均分子量的peg基团。实施方案145.根据实施方案144所述的il-2缀合物，其中w是具有选自50kda和30kda的平均分子量的peg基团。实施方案146.根据实施方案145所述的il-2缀合物，其中w是具有50kda的平均分子量的peg基团。实施方案147.根据实施方案145所述的il-2缀合物，其中w是具有30kda的平均分子量的peg基团。实施方案148.根据实施方案124至147中任一项所述的il-2缀合物，其中w是线性或分支peg基团。实施方案149.根据实施方案124至147中任一项所述的il-2缀合物，其中w是线性peg基团。实施方案150.根据实施方案124至147中任一项所述的il-2缀合物，其中w是分支peg基团。实施方案151.根据实施方案124至147中任一项所述的il-2缀合物，其中w是甲氧基peg基团。实施方案152.根据实施方案151所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性或分支的。实施方案153.根据实施方案152所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性的。实施方案154.根据实施方案152所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是分支的。实施方案155.一种包含seq id no:169-183和124-138中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg50kda]具有式(iv)或式(v)的结构或者式(iv)和式(v)的混合物：
其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案155.1.一种包含seq id no:169-183和124-138中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg50kda]具有式(iv)或式(v)的结构或者式(iv)和式(v)的混合物：混合物：其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：
id no:169-183中任一个的氨基酸序列。实施方案165.根据实施方案163所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:124-138中任一个的氨基酸序列。实施方案166.根据实施方案163所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:170或125的氨基酸序列。实施方案167.一种包含seq id no:184-198和139-153中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg30kda]具有式(iv)或式(v)的结构，或者是式(iv)和式(v)的结构的混合物：其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案167.1.一种包含seq id no:184-198和139-153中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg30kda]具有式(iv)或式(v)的结构，或者是式(iv)和式(v)的结构的混合物：
id no:184-198中任一个的氨基酸序列。实施方案173.根据实施方案171所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:139-153中任一个的氨基酸序列。实施方案174.根据实施方案171所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:185或140的氨基酸序列。实施方案175.根据实施方案167-167.1中任一项所述的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg30kda]具有式(v)的结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案176.根据实施方案175所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:184-198中任一个的氨基酸序列。实施方案177.根据实施方案175所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:139-153中任一个的氨基酸序列。实施方案178.根据实施方案175所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:185或140的氨基酸序列。实施方案179.一种包含seq id no:154-168和109-123中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：
或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案179.1.一种包含seq id no:154-168和109-123中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：其中：w是具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案180.根据实施方案179-179.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率为约1:1。实施方案181.根据实施方案179-179.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率大于1:1。实施方案182.根据实施方案179-179.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率小于1:1。
实施方案183.根据实施方案179至182中任一项所述的il-2缀合物，其中w是线性或分支peg基团。实施方案184.根据实施方案179至182中任一项所述的il-2缀合物，其中w是线性peg基团。实施方案185.根据实施方案179至182中任一项所述的il-2缀合物，其中w是分支peg基团。实施方案186.根据实施方案179至182中任一项所述的il-2缀合物，其中w是甲氧基peg基团。实施方案187.根据实施方案186所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性或分支的。实施方案188.根据实施方案186所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是线性的。实施方案189.根据实施方案186所述的il-2缀合物，其中所述甲氧基peg基团是分支的。实施方案190.一种包含seq id no:169-183和124-138中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg50kda]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案190.1.一种包含seq id no:169-183和124-138中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg50kda]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：
其中：w是具有50kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案191.根据实施方案190-190.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg50kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率为约1:1。实施方案192.根据实施方案190-190.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg50kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率大于1:1。实施方案193.根据实施方案190-190.1中任一项所述的il-2缀合物，其中在所述il-2缀合物中构成[azk_l1_peg50kda]的总量的式(iv)的结构的量与式(v)的结构的量的比率小于1:1。实施方案194.一种包含seq id no:184-198和139-153中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg30kda]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：
其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案194.1.一种包含seq id no:184-198和139-153中任一个的氨基酸序列的il-2缀合物，其中[azk_l1_peg30kda]是式(iv)和式(v)的结构的混合物：其中：w是具有30kda的平均分子量的peg基团；并且x具有以下结构：
2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物替代：代：其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案199.根据实施方案198-198.1中任一项所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。实施方案200.根据实施方案199所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。实施方案201.根据实施方案200所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。
实施方案202.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自在所述il-2缀合物的氨基酸序列中是k8。实施方案203.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。实施方案204.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。实施方案205.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。实施方案206.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。实施方案207.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。实施方案208.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。实施方案209.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。实施方案210.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。实施方案211.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。实施方案212.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。实施方案213.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。实施方案214.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。实施方案215.根据实施方案201所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。实施方案216.根据实施方案198至215中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约75至约1000。实施方案217.根据实施方案198至215中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约100至约1000。实施方案218.根据实施方案198至215中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约200至约5000。实施方案219.根据实施方案198至215中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约500至约1000。实施方案220.根据实施方案198至215中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约400
至约800。实施方案221.一种包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物替代：其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案221.1.一种包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案222.根据实施方案221-221.1中任一项所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132。实施方案223.根据实施方案222所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。实施方案224.根据实施方案223所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。实施方案225.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。
实施方案226.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。实施方案227.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。实施方案228.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。实施方案229.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。实施方案230.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。实施方案231.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。实施方案232.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。实施方案233.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。实施方案234.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。实施方案235.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。实施方案236.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。实施方案237.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。实施方案238.根据实施方案224所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。实施方案239.根据实施方案221至238中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约75至约1000。实施方案240.根据实施方案221至238中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约100至约1000。实施方案241.根据实施方案221至238中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约200至约5000。实施方案242.根据实施方案221至238中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约500至约1000。实施方案243.根据实施方案221至238中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约400至约800。实施方案244.一种包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:3内未被替代的氨基酸残基的共价键；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案245.根据实施方案244所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案246.根据实施方案245所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案247.根据实施方案246所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案248.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。实施方案249.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。实施方案250.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者
(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。实施方案251.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。实施方案252.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。实施方案253.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。实施方案254.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。实施方案255.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。实施方案256.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。实施方案257.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。实施方案258.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。实施方案259.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。实施方案260.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。实施方案261.根据实施方案247所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。实施方案262.根据实施方案244至261中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约75至约1000。实施方案263.根据实施方案244至261中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约100至约1000。实施方案264.根据实施方案244至261中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约200至约5000。实施方案265.根据实施方案244至261中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约500至约1000。实施方案266.根据实施方案244至261中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约400至约800。实施方案267.一种包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:3内未被替代的氨基酸残基的共价键；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案267.1.一种包含seq id no:3的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物替代：其中：
n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:3内未被替代的氨基酸残基的共价键。实施方案268.根据实施方案267或267.1所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131和t132；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案269.根据实施方案268所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124、q125、s126、s129和t130。实施方案270.根据实施方案269所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k8、h15、l18、d19、m22、n25、n87、v90、e99、在n87r变体中的d108、n118、t122、s124和t130。实施方案271.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k8。实施方案272.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h15。实施方案273.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l18。实施方案274.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d19。实施方案275.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m22。实施方案276.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n25。实施方案277.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n87。实施方案278.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v90。实施方案279.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e99。实施方案280.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n87r变体中的d108。实施方案281.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构
或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n118。实施方案282.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t122。实施方案283.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s124。实施方案284.根据实施方案270所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t130。实施方案285.根据实施方案267至284中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约75至约1000。实施方案286.根据实施方案267至284中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约100至约1000。实施方案287.根据实施方案267至284中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约200至约5000。实施方案288.根据实施方案267至284中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约500至约1000。实施方案289.根据实施方案267至284中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约400至约800。实施方案290.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物替代：其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。
实施方案290.1.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物替代：其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案291.根据实施方案290-290.1中任一项所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133x。实施方案292.根据实施方案291所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。实施方案293.根据实施方案292所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、
m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。实施方案294.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。实施方案295.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。实施方案296.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。实施方案297.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。实施方案298.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。实施方案299.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。实施方案300.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。实施方案301.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。实施方案302.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。实施方案303.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。实施方案304.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。实施方案305.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。实施方案306.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。实施方案307.根据实施方案293所述的il-2缀合物，其中式(vi)或(vii)的结构或者(vi)和(vii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。实施方案308.根据实施方案290至307中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约75至约1000。实施方案309.根据实施方案290至307中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约100至约1000。实施方案310.根据实施方案290至307中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约200至约5000。实施方案311.根据实施方案290至307中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约500至约1000。实施方案312.根据实施方案290至307中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约400
至约800。实施方案313.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物替代：其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案313.1.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且x具有以下结构：x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点；并且x 1指示与下一个氨基酸残基的附接点。实施方案314.根据实施方案313-313.1中任一项所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。实施方案315.根据实施方案314所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。实施方案316.根据实施方案315所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。实施方案317.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。
实施方案318.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。实施方案319.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。实施方案320.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。实施方案321.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。实施方案322.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。实施方案323.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。实施方案324.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。实施方案325.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。实施方案326.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。实施方案327.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。实施方案328.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。实施方案329.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。实施方案330.根据实施方案316所述的il-2缀合物，其中式(viii)或(ix)的结构或者(viii)和(ix)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。实施方案331.根据实施方案313至330中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约75至约1000。实施方案332.根据实施方案313至330中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约100至约1000。实施方案333.根据实施方案313至330中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约200至约5000。实施方案334.根据实施方案313至330中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约500至约1000。实施方案335.根据实施方案313至330中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约400至约800。实施方案336.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:4内未被替代的氨基酸残基的共价键；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案336.1.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物替代：其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:4内未被替代的氨基酸残基的共价键。实施方案337.根据实施方案336或336.1所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的
结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。实施方案338.根据实施方案337所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。实施方案339.根据实施方案338所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。实施方案340.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。实施方案341.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。实施方案342.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。实施方案343.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。实施方案344.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。实施方案345.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。实施方案346.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。实施方案347.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。实施方案348.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。实施方案349.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。实施方案350.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。实施方案351.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。实施方案352.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。
实施方案353.根据实施方案339所述的il-2缀合物，其中式(x)或(xi)的结构或者(x)和(xi)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。实施方案354.根据实施方案336至353中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约75至约1000。实施方案355.根据实施方案336至353中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约100至约1000。实施方案356.根据实施方案336至353中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约200至约5000。实施方案357.根据实施方案336至353中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约500至约1000。实施方案358.根据实施方案336至353中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约400至约800。实施方案359.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物替代：其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:4内未被替代的氨基酸残基的共价键；或其药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。实施方案359.1.一种包含seq id no:4的氨基酸序列的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物中的至少一个氨基酸残基被式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物替代：
其中：n是在从约2至约5000范围内的整数；并且波浪线指示与seq id no:4内未被替代的氨基酸残基的共价键。实施方案360.根据实施方案359或359.1所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132和t133。实施方案361.根据实施方案360所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125、q126、s127、s130和t131。实施方案362.根据实施方案361所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置选自k9、h16、l19、d20、m23、n26、n88、v91、e100、在n88r变体中的d109、n119、t123、s125和t131。实施方案363.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是k9。实施方案364.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是h16。实施方案365.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是l19。实施方案366.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构
或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是d20。实施方案367.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是m23。实施方案368.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n26。实施方案369.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n88。实施方案370.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是v91。实施方案371.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是e100。实施方案372.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是在n88r变体中的d109。实施方案373.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是n119。实施方案374.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t123。实施方案375.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是s125。实施方案376.根据实施方案362所述的il-2缀合物，其中式(xii)或(xiii)的结构或者(xii)和(xiii)的混合物在所述il-2缀合物的氨基酸序列中的位置是t131。实施方案377.根据实施方案359至376中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约75至约1000。实施方案378.根据实施方案359至376中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约100至约1000。实施方案379.根据实施方案359至376中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约200至约5000。实施方案380.根据实施方案359至376中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约500至约1000。实施方案381.根据实施方案359至376中任一项所述的il-2缀合物，其中n是约400至约800。实施方案382.一种治疗受试者的自身免疫性疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案383.根据实施方案382所述的方法，其中所述自身免疫性疾病选自移植物抗宿主病(gvhd)、特应性皮炎、克罗恩病、斑秃、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性肝炎、皮肌炎、1型糖尿病、青少年/儿童1型糖尿病、幼年型特发性关节炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、吉兰-巴雷综合征、特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、多发性硬化、天疱疮/类天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性肌炎、原发性胆汁性胆管炎、原发性胆汁性肝硬
化、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、银屑病、类风湿性关节炎、硬皮病、crest综合征、干燥综合征、系统性红斑狼疮、甲状腺炎、葡萄膜炎、白癜风、韦格纳肉芽肿病、艾迪生病(肾上腺功能不全)、桥本甲状腺炎、自身免疫性肝炎、不孕症/不育症、anca相关性血管炎、银屑病关节炎、乳糜泻、溃疡性结肠炎、硬化性苔藓和白塞病。实施方案384.根据实施方案383所述的方法，其中所述自身免疫性疾病选自移植物抗宿主病(gvhd)、特应性皮炎、克罗恩病、1型糖尿病、多发性硬化、类风湿性关节炎、重症肌无力、原发性胆汁性肝硬化、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、肾小球肾炎、特发性血小板减少性紫癜、系统性红斑狼疮、硬皮病、crest综合征、银屑病、乳糜泻、溃疡性结肠炎、天疱疮、银屑病关节炎和不孕症/不育症。实施方案385.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是移植物抗宿主病(gvhd)。实施方案386.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是特应性皮炎。实施方案387.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是克罗恩病。实施方案388.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是1型糖尿病。实施方案389.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是多发性硬化。实施方案390.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是类风湿性关节炎。实施方案391.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是重症肌无力。实施方案392.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是原发性胆汁性胆管炎或原发性胆汁性肝硬化。实施方案393.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是非酒精性脂肪性肝炎(nash)。实施方案394.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是肾小球肾炎。实施方案395.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是特发性血小板减少性紫癜。实施方案396.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是系统性红斑狼疮。实施方案397.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是硬皮病。实施方案398.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是crest综合征。实施方案399.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是不孕症/不育症。实施方案400.根据实施方案382至399中任一项所述的方法，其中将所述il-2缀合
物施用至所述有需要的受试者，每周一次、每两周一次、每三周一次、每4周一次、每5周一次、每6周一次、每7周一次或每8周一次。实施方案401.根据实施方案400所述的方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每周一次、每两周一次、每三周一次或每4周一次。实施方案402.根据实施方案401所述的方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每周一次。实施方案403.根据实施方案401所述的方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每两周一次。实施方案404.根据实施方案401所述的方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每三周一次。实施方案405.根据实施方案401所述的方法，其中将所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者，每四周一次。实施方案406.根据实施方案382至405中任一项所述的方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者在所述受试者的血液中展现出增加的类风湿因子浓度。实施方案407.根据实施方案406所述的方法，其中所述受试者的血液中所述增加的类风湿因子浓度为约14iu/ml或更高或者约15iu/ml或更高。实施方案408.根据实施方案407所述的方法，其中所述受试者的血液中所述增加的类风湿因子浓度为约14iu/ml或更高。实施方案409.根据实施方案407所述的方法，其中所述受试者的血液中所述增加的类风湿因子浓度为约15iu/ml或更高。实施方案410.一种治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括：(a)确定所述受试者的血液中的类风湿因子浓度；以及(b)如果所述受试者的血液中的类风湿因子浓度大于约14iu/ml，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案411.根据实施方案410所述的方法，其中如果所述受试者的血液中的类风湿因子浓度大于约15iu/ml，则将治疗有效量的所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者。实施方案412.一种治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括如果确定所述受试者的血液中的类风湿因子浓度大于约14iu/ml，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案413.一种治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括如果确定所述受试者的血液中的类风湿因子浓度大于约15iu/ml，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案414.根据实施方案382至405中任一项所述的方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。实施方案414.1.根据实施方案382至405中任一项所述的方法，其中在向所述受试
者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前任选地使用魏氏沉降率方法或温氏沉降率方法确定所述有需要的受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。实施方案415.根据实施方案414-414.1中任一项所述的方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前使用魏氏沉降率方法确定所述受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。实施方案416.根据实施方案414-414.1中任一项所述的方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前使用温氏沉降率方法确定所述受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。实施方案417.根据实施方案414至416中任一项所述的方法，其中所述受试者是50岁以下的女性并且展现出大于约20mm/hr的魏氏沉降率。实施方案418.根据实施方案414至416中任一项所述的方法，其中所述受试者是50岁以上的女性并且展现出大于约30mm/hr的魏氏沉降率。实施方案419.根据实施方案414至416中任一项所述的方法，其中所述受试者是50岁以下的男性并且展现出大于约15mm/hr的魏氏沉降率。实施方案420.根据实施方案414至416中任一项所述的方法，其中所述受试者是50岁以上的男性并且展现出大于20mm/hr的魏氏沉降率。实施方案421.根据实施方案414至416中任一项所述的方法，其中所述受试者是儿童并且展现出大于约10mm/hr的魏氏沉降率。实施方案422.一种治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病的方法，所述方法包括：(a)确定所述受试者的红细胞沉降率(esr)；以及(b)如果确定esr异常，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案423.根据实施方案422所述的方法，其中使用温氏沉降率方法确定所述受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。实施方案424.根据实施方案422所述的方法，其中使用魏氏沉降率方法确定所述受试者展现出红细胞沉降率(esr)测试异常。实施方案425.根据实施方案424所述的方法，其中所述受试者是50岁以下的女性并且展现出大于约20mm/hr的魏氏沉降率。实施方案426.根据实施方案424所述的方法，其中所述受试者是50岁以上的女性并且展现出大于约30mm/hr的魏氏沉降率。实施方案427.根据实施方案424所述的方法，其中所述受试者是50岁以下的男性并且展现出大于约15mm/hr的魏氏沉降率。实施方案428.根据实施方案424所述的方法，其中所述受试者是50岁以上的男性并且展现出大于20mm/hr的魏氏沉降率。实施方案429.根据实施方案424所述的方法，其中所述受试者是儿童并且展现出大于约10mm/hr的魏氏沉降率。实施方案430.根据实施方案382至405中任一项所述的方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者在所述受试者的血
液中展现出增加的c反应蛋白(crp)浓度。实施方案431.根据实施方案430所述的方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者在血液中展现出大于10mg/l的c反应蛋白(crp)浓度。实施方案432.一种治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病的方法，所述方法包括：(a)确定所述受试者的血液中的c反应蛋白(crp)浓度；以及(b)如果确定所述受试者的血液中的c反应蛋白(crp)浓度异常，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案433.根据实施方案68所述的方法，其中在向所述受试者施用所述治疗有效量的所述il-2缀合物之前确定所述有需要的受试者在血液中展现出大于10mg/l的c反应蛋白(crp)浓度。实施方案434.一种治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括：(a)确定所述受试者的血液中的抗环瓜氨酸肽(抗ccp)浓度；以及(b)如果确定所述受试者的血液中的类风湿因子浓度异常，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案435.根据实施方案434所述的方法，其中如果确定所述受试者的血液中的抗环瓜氨酸肽(抗ccp)浓度大于约20iu/ml，则将治疗有效量的所述il-2缀合物施用至所述有需要的受试者。实施方案436.一种治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括如果确定所述受试者的血液中的抗环瓜氨酸肽(抗ccp)浓度异常，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案437.一种治疗有需要的受试者的类风湿性关节炎的方法，所述方法包括如果确定所述受试者的血液中的抗环瓜氨酸肽(抗ccp)浓度大于约20iu/ml，则向所述有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施方案1至381中任一项所述的il-2缀合物。实施方案438.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是银屑病。实施方案439.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是乳糜泻。实施方案440.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是溃疡性结肠炎。实施方案441.根据实施方案384所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是天疱疮。实施方案442.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:64的氨基酸序列。实施方案443.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:65的氨基酸序列。实施方案444.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:66的氨基酸序列。实施方案445.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:67的氨基酸序列。
实施方案446.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:68的氨基酸序列。实施方案447.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:69的氨基酸序列。实施方案448.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:70的氨基酸序列。实施方案449.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:71的氨基酸序列。实施方案450.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:72的氨基酸序列。实施方案451.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:73的氨基酸序列。实施方案452.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:74的氨基酸序列。实施方案453.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:75的氨基酸序列。实施方案454.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:76的氨基酸序列。实施方案455.根据实施方案93-93.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:77的氨基酸序列。实施方案456.根据实施方案155-155.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:170的氨基酸序列。实施方案457.根据实施方案167-167.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:185的氨基酸序列。实施方案458.根据实施方案167-167.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:190的氨基酸序列。实施方案459.根据实施方案167-167.1中任一项所述的il-2缀合物，其中所述il-2缀合物具有seq id no:197的氨基酸序列。实施方案460.一种制备il-2缀合物的方法，所述方法包括：使il-2多肽与mpeg-dbco反应，所述il-2多肽包含下式的非天然氨基酸：其中所述il-2多肽包含seq id no:3或4的氨基酸序列，其中所述il-2多肽中的至少一个氨基酸残基被所述非天然氨基酸替代，位置x-1指示与前一个氨基酸残基的附接点，位置x 1指示与后一个氨基酸残基的附接点，并且位置x指示所述非天然氨基酸所取代的氨基酸的位置，
所述mpeg-dbco具有下式：其中n使得所述mpeg-dbco包含具有约5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda或50kda的分子量的peg，从而产生所述il-2缀合物。实施方案461.根据实施方案460所述的方法，其中位置x是p1、t2、s3、s4、s5、t6、k7、k8、q10、l11、e14、h15、l17、l18、d19、q21、m22、n25、g26、n28、n29、y30、k31、k34、t36、m45、p46、k47、a49、t50、e51、l52、k53、h54、q56、e59、e66、n70、q73、s74、k75、n76、f77、h78、r80、p81、r82、d83、s86、n87、i88、v90、i91、l93、e94、k96、g97、s98、e99、t100、t101、f102、m103、c104、e105、y106、a107、d108-在n87r变体中的d108、e109、t110、a111、t112、e115、n118、r119、t122、f123、s124、q125、s126、s129、t130、l131或t132，参考在seq id no:3内的氨基酸位置。实施方案462.根据实施方案460所述的方法，其中位置x是a1、p2、t3、s4、s5、s6、t7、k8、k9、q11、l12、e15、h16、l18、l19、d20、q22、m23、n26、g27、n29、n30、y31、k32、k35、t37、m46、p47、k48、a50、t51、e52、l53、h55、q57、e60、e67、n71、q74、s75、k76、n77、f78、h79、r81、p82、r83、d84、s87、n88、i89、v91、i92、l94、e95、k97、g98、s99、e100、t101、t102、f103、m104、c105、e106、y107、a108、d109-在n88r变体中的d109、e110、t111、a112、t113、e116、n119、r120、t123、s125、q126、s127、s130、t131、l132或t133，参考在seq id no:4内的氨基酸位置。实施方案463.根据实施方案460-462中任一项所述的方法，其中所述il-2多肽包含seq id no:3或4的氨基酸序列，其中所述il-2多肽中的至少一个氨基酸残基被所述非天然氨基酸替代。实施方案464.根据实施方案460-463中任一项所述的方法，其中所述peg具有约30kda的分子量。实施方案465.根据实施方案460-463中任一项所述的方法，其中所述peg具有约50kda的分子量。实施方案466.根据实施方案460所述的方法，其中所述il-2缀合物是根据实施方案1-381或442-459中任一项所述的il-2缀合物。实施例
[0478]
这些实施例仅仅出于说明性目的提供，并且不限制本文提供的权利要求的范围。
[0479]
实施例1中公开的化合物中的每一种利用seq id no:4和[azk_peg]部分，其中被取代的氨基酸在il-2缀合物中的位置是参考在seq id no:4中的位置。
[0480]
例如，使用类似于实施例1中公开的那些方法的方法来制备表3中标记“k9_30kda”的化合物，其中首先制备具有seq id no:4的蛋白质，其中位置9处的脯氨酸被azk替代。然
后允许含azk的蛋白质在点击化学条件下与包含具有30kda的平均分子量的甲氧基线性peg基团的dbco反应，以提供包含式(ii)、式(iii)或者式(ii)和(iii)的混合物的具有seq id no:20的产物，其中w是具有30kda的平均分子量的甲氧基线性peg基团。
[0481]
在另一个例子中，通过以下方式制备表3中标记“h16_30kda”的化合物：首先制备具有seq id no:4的蛋白质，其中位置16处的脯氨酸被azk替代。然后允许含azk的蛋白质在点击化学条件下与包含具有30kda的平均分子量的甲氧基线性peg基团的dbco反应，以提供包含式(ii)、式(iii)或者式(ii)和(iii)的混合物的具有seq id no:21的产物，其中w是具有30kda的平均分子量的甲氧基线性peg基团。
[0482]
在另一个例子中，通过以下方式制备表3中标记“n26_30kda”的化合物：首先制备具有seq id no:4的蛋白质，其中位置26处的谷氨酸被azk替代。然后允许含azk的蛋白质在点击化学条件下与包含具有30kda的平均分子量的甲氧基线性peg基团的dbco反应，以提供包含式(ii)、式(iii)或者式(ii)和(iii)的混合物的具有seq id no:25的产物，其中w是具有30kda的平均分子量的甲氧基线性peg基团。
[0483]
用于制备本文所用的il-2化合物的示例性详细程序如下。使用本文公开的方法将il-2缀合物在大肠杆菌中表达为包涵体，其中制备了编码具有所需氨基酸序列的蛋白质的表达质粒，所述大肠杆菌含有(a)包含第一非天然核苷酸和第二非天然核苷酸的非天然碱基对，以在掺入了非天然氨基酸n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(azk)的所需位置提供密码子，并且在trna中提供匹配反密码子；(b)编码源自马氏甲烷八叠球菌pyl并且包含非天然核苷酸以提供匹配反密码子代替其天然序列的trna的质粒；(c)编码巴氏甲烷八叠球菌来源的吡咯赖氨酰-trna合成酶(mb pylrs)的质粒；以及(d)n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(azk)。编码所需il-2变体的氨基酸序列的双链寡核苷酸在例如编码具有seq id no:3的蛋白质的序列的位置1、2、3、4、5、6、7、8、10、11、14、15、17、18、19、21、22、25、26、28、29、30、31、34、36、45、46、47、49、50、51、52、53、54、56、59、66、70、73、74、75、76、77、78、80、81、82、83、86、87、88、90、91、93、94、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108-在n87r变体中的108、109、110、111、112、115、118、119、122、123、124、125、126、129、130、131或132处，或者在编码具有seq id no:4的蛋白质的序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、15、16、18、19、20、22、23、26、27、29、30、31、32、35、37、46、47、48、50、51、52、53、55、57、60、67、71、74、75、76、77、78、79、81、82、83、84、87、88、89、91、92、94、95、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109-在n88r变体中的109、110、111、112、113、116、119、120、123、125、126、127、130、131、132或133处含有密码子axc，其中x是如本文所公开的非天然核苷酸。在一些实施方案中，细胞进一步包含质粒，所述质粒可以是蛋白质表达质粒或另一种质粒，其编码来自马氏甲烷八叠球菌的正交trna基因，所述正交trna基因包含axc匹配的反密码子gyt代替其天然序列，其中y是如本文所公开的并且可以与密码子中的非天然核苷酸相同或不同的非天然核苷酸。x和y选自如本文所公开的非天然核苷酸dtpt3、dnam和dcnmo。使用标准程序纯化并再折叠所表达的蛋白质，之后使用dbco介导的无铜点击化学将含azk的il-2产物位点特异性聚乙二醇化，以将稳定的共价mpeg部分附接至azk(参见下文的方案1)。实施例1
[0484]
对原代人白细胞减少系统(lrs)来源的pbmc样品中的示例性il-2化合物的离体免
疫反应谱分析
[0485]
为了确定示例性il-2化合物的差异性受体特异性如何影响原代免疫细胞亚群的激活，在人lrs来源的外周血单个核细胞(pbmc)样品中使用多色流式细胞术进行淋巴细胞激活的浓度-反应谱分析。通过seq id no.1的修饰来合成表3的缀合物。
[0486]
对示例性il-2缀合物进行功能分析，示于表3中。将il-2缀合物在大肠杆菌中表达为包涵体，使用标准程序纯化并再折叠，之后使用dbco介导的无铜点击化学将il-2产物位点特异性聚乙二醇化，以将稳定的共价mpeg部分附接至azk(方案1)。
[0487]
方案1.azk_peg白介素变体的示例性合成(其中n指示重复peg单元的数量)。示出了由点击反应形成的区域异构体。
[0488]
这些研究是在primitybio llc(加利福尼亚州弗里蒙特)进行的。用示例性il-2化合物的稀释系列处理源自人lrs样品的原代淋巴细胞，并且基于每种淋巴细胞细胞类型中的pstat5信号传导使用表2中所示的组进行定量。
[0489]
表2.指示细胞群的关键.指示细胞群的关键
[0490]
针对在浓度-反应模式中不同t和nk细胞子集的激活来分析流式细胞术数据，在用示例性il-2变体k9_30kda处理后读取pstat5积累。
[0491]
图4a-图4b示出了人lrs原代细胞中pstat5信号传导的剂量反应曲线(图4a)以及小鼠ctll-2群体中的增殖反应(图4b)。
[0492]
表3示出了在用所指示il-2变体处理的人lrs样品或ctll-2增殖中，pstat5信号传导的剂量反应ec50(ec50)。表3在用所指示il-2变体处理的人lrs样品或ctll-2增殖中，pstat5信号传导的剂量反应ec50(ec50)
[0493]
根据从mfi图生成的剂量反应曲线计算ec50值(pg/ml)。*在每次单独实验中，treg效力与天然il-2(野生型il-2)运行相比的变化。实施例2
[0494]
相比于il-2受体αβγ复合物，优先降低对il-2rβγ复合物的信号传导的peg-il-2缀合物的设计
[0495]
为了鉴定seq id no.3或4的多肽的聚乙二醇化位点，使用il-2/异三聚体受体信号传导复合物的结构数据(pdb:2erj,[stauber 2006])来指导il-2缀合物的设计。如本文所述制备所得的il-2缀合物。将包含非天然氨基酸n6-((2-叠氮基乙氧基)-羰基)-l-赖氨酸(azk)的蛋白质在大肠杆菌中表达为包涵体，使用本领域普通技术人员已知的程序纯化并再折叠。然后允许包含azk的蛋白质与包含所需peg基团(例如，具有选自5kda、10kda、15kda、20kda、25kda、30kda、35kda、40kda、45kda、50kda、55kda和60kda的大小的peg基团)的含dbco的试剂反应，以提供所需的il-2缀合物。实施例3
[0496]
相比于il-2受体αβγ复合物，优先降低对il-2rβγ复合物的信号传导的peg-il-2缀合物的设计和筛选
[0497]
在discoverx(加利福尼亚州弗里蒙特)使用pathhunter il-2细胞因子受体测定针对功能活性筛选具有seq id no:4的各种il-2缀合物，其中所指示位置处的氨基酸残基被具有所指示peg大小的式(ii)、式(iii)的结构或者式(ii)和(iii)的混合物替代。例如，此实施例中标记“d20_30”的化合物是具有seq id no:4的化合物，其中式(ii)、式(iii)的结构或者式(ii)和(iii)的混合物在残基d20(seq id no:67)处被具有30kda的分子量的peg基团取代。类似地，在此实施例中测试以下化合物：表4(a)
[0498]
所述测定使用表达il-2受体β(il-2rβ)和γ(il-2rγ)亚基的重组人u2os细胞系，所述亚基各自与分裂报告酶的一半融合。工程化第二细胞系以表达il-2rα亚基。用这两种细胞系进行的平行测试允许评估il-2受体αβγ以及基础βγ复合物的变体激活。对il-2βγ受体复合物的il-2激动剂活性刺激受体二聚化和报告β-半乳糖苷酶重构，从而产生化学发光信号。以激动剂模式运行所述测定以确定测试的每种il-2缀合物的效力(ec
50
)，并且确定所测试的每种il-2缀合物的il2rα阳性与阴性细胞类型之间的剂量反应曲线谱。
[0499]
discoverx il-2受体βγ和αβγ激动剂测定的方法
[0500]
根据标准程序从冷冻器原液扩增pathhunter细胞系。将细胞以20μl总体积接种至白色壁的384孔微量板中，并且在测试前孵育适当时间。对于激动剂确定，将细胞与待测试的il-2缀合物一起孵育以诱导反应。对样品原液进行中间稀释以产生测定缓冲液中的5x样品。将约5μl的5x样品添加至细胞中并在37℃下孵育从6小时至16小时的时间段，根据测定而定。媒介物浓度为1％。通过以下方式生成测定信号：单次添加分别用于激动剂和拮抗剂测定的12.5或15μl(50％v/v)的pathhunter检测试剂混合物，然后在室温下孵育一小时。对于一些测定，使用高灵敏度检测试剂(pathhunter flash试剂盒)检测活性，以改善测定的性能。在这些测定中，将等体积的检测试剂(25μl或30μl)添加至孔中，然后在室温下孵育一小时。在信号生成后以用于化学发光信号检测的perkinelmer envision仪器读取微量板。
[0501]
使用cbis数据分析套件软件(cheminnovation，加利福尼亚州)分析化合物活性。使用下式计算活性百分比：％活性＝100％x(测试样品的平均rlu-媒介物对照的平均rlu)/(平均max rlu对照配体-媒介物对照的平均rlu)。化合物活性示于图5a、图5b和图5c中。
[0502]
在il-2缀合物的基于细胞的筛选中il-2受体激动作用的效力(ec
50
)数据示于下表
中。ec
50
值以纳克的il-2缀合物/ml报告。注意，为了促进聚乙二醇化和非聚乙二醇化化合物的比较，所报告的质量值对应于每种il-2缀合物中的il-2多肽的质量，并且不包括mpeg或接头组分的质量。表4(b)实施例4
[0503]
在小鼠中筛选il-2缀合物
[0504]
为了在小鼠中表征每种il-2缀合物的药代动力学和药效学作用，将表5(a)中描述的每种缀合物以大约0.9mg/kg(注意-剂量是通过测量多肽蛋白的质量而确定的，并且不包括聚乙二醇或接头部分的质量)作为单次皮下注射施用至幼稚c57/bl6小鼠。如表5(a)中所指示的，经由末梢放血收集样品，在所指示时间收集样品，并且使用elisa和流式细胞术对样品进行pk分析，以定量单独淋巴细胞群的信号传导、激活和增殖。本研究中使用的所有化合物(除n88_30kd之外)都具有seq id no:4，其中所指示位置处的氨基酸被包含具有30kda的分子量的线性mpeg基团的式(ii)、式(iii)的结构或者式(ii)和(iii)的混合物取代，在所指示氨基酸残基处被取代。对于n88_30kd变体，所述化合物具有序列seq id no:4，其中所指示位置处的氨基酸被包含具有30kda的分子量的线性mpeg基团的式(iv)、式(v)的结构或者式(iv)和(v)的混合物取代，在所指示氨基酸残基处被取代。表5(a).小鼠pk/pd研究细节
[0505]
使用可商购的人il-2elisa测定(abcam，英国剑桥)来进行血浆样品的生物分析。按照制造商的说明书确定在源自血浆的样品中所给药的每种il-2缀合物和内标的浓度，并且在标准测量的线性范围内的条件下测量每个时间点。il-2缀合物k9_30kd、l19_30kd、n88r/d109_30kd、h16_30kd、q126_30kd和n88_30kd(全部以0.9mg/kg给药)的血浆浓度曲线绘制于图6中。
[0506]
为了在小鼠中表征il-2缀合物的药效学作用，将每种缀合物以大约0.9mg/kg的剂量(注意-剂量是通过测量多肽蛋白的质量而确定的，并且不包括聚乙二醇或接头部分的质量)作为单次皮下注射给药至幼稚c57/bl6小鼠。如表5(b)中所指示的，经由末梢放血收集样品。在crown bio(加利福尼亚州拉霍亚)进行化合物配制、给药和样品收集。由primitybio(加利福尼亚州弗里蒙特)进行使用流式细胞术的药效学分析，并且使用此分析来定量单独淋巴细胞种群的信号传导、激活和增殖。表5(b).c57/bl6小鼠中il-2缀合物的流式细胞术研究的标记物组
[0507]
首先使用fsc-a相对fsc-hour针对单态细胞对细胞进行门控，以排除任何聚集体或双联体。在此门内，针对中至高前向散射(fsc-a)和侧向散射(ssc-a)对细胞进行门控，以
排除红细胞和碎片。然后t细胞被门控为cd3 群体。然后t细胞被分为cd4 t细胞和cd8 t细胞。然后treg被从cd4 t细胞门控为cd25 foxp3 群体。nk细胞被从cd3阴性群体鉴定为nk1.1阳性群体。用于推导ec
50
值的统计数据和绘图使用cellengine软件根据检测磷酸化stat5的通道中的信号计算细胞群、供体和所给药的il-2缀合物各自的中值荧光强度(mfi)。使用spotfire分析统计数据。在spotfire内，针对il-2缀合物剂量在对数标度上以及针对mfi读数在线性标度上绘制数据。使用4参数逻辑回归方程来拟合这些数据。将ec
50
计算为曲线的拐点。对于所测试的每种il-2缀合物，在单态细胞(观察到的总淋巴细胞)中定量treg(cd3 cd4 cd25高foxp3 )细胞。绘制每种il-2缀合物的来自三只独立动物的treg(在单态细胞中的％)的平均倍数变化，表示为treg在单态细胞中的最大百分比/在给药前样品中treg在单态细胞中的百分比。每个条表示所指示平均值的标准误差。示出了在小鼠中由于皮下剂量的il-2缀合物所致的在单态细胞中的treg百分比的最大倍数变化的结果示于图7中。
[0508]
确定了在单态细胞中的treg百分比与在c57/bl6小鼠中在单次皮下剂量的il-2缀合物后的时间的关系。对于每种il-2缀合物，对样品进行流式细胞术，以鉴定并定量treg(cd3 cd4 cd25 foxp3 )细胞群在总细胞群(单态细胞)内的比例。在图8中示出了il-2k9_30kd、l19_30kd、q126_30kd和h16_30kd的数据。
[0509]
图9a示出了对于k9_30kd、l19_30kd、q126_30kd和h16_30kd il-2缀合物，在c57/bl6小鼠中cd8 t细胞群(cd3 cd4-cd8 )在总细胞群(单态细胞)内的比例。每个点表示三只独立动物的平均值，误差条表示平均值的标准误差。
[0510]
图9b示出了对于il-2缀合物e100_30kd、n88r/d109_30kd、t123_30kd、n88_30kd和v91_30kd，在c57/bl6小鼠中在总细胞群(单态细胞)内的cd8 t细胞(cd3 cd4-cd8 )群。每个点表示三只独立动物的平均值，误差条表示平均值的标准误差。实施例5
[0511]
在食蟹猴中皮下给药后il-2缀合物的药代动力学分析
[0512]
在实施例5中使用表6中所示的以下化合物：表6.
[0513]
将l19_30kd、h16_30kd和n88_30kd以0.37mg/kg n88_30kd、0.03mg/kg l19_30kd、0.16mg/kg l19_30kd、0.12mg/kg h16_30kd、0.67mg/kg h16_30kd和0.2mg/kg h16_30kd的剂量皮下给药至三只雄性食蟹猴。il-2缀合物l19_30kd、h16_30kd和n88_30kd的血浆浓度谱示于图10中。
[0514]
在第0天，将il-2缀合物n88_30kd、l19_30kd、h16_30kd和h16_50kd以0.37mg/kg n88_30kd、0.2mg/kg h16_30kd、0.67mg/kg h16_30kd、0.03mg/kg l19_30kd、0.16mg/kg l19_30kd、0.2mg/kg h16_50kd和0.8mg/kg h16_50kd的剂量皮下给药至三只雄性食蟹猴。对于每种il-2缀合物，在所指示时间点收集外周血样品，并且对样品进行流式细胞术，以鉴定并定量treg细胞群在总血细胞群(单态细胞)内的比例。每个点表示三只独立动物的平均值，误差条表示平均值的标准误差。使用人il-2elisa测定进行血浆样品的生物分析，所述测定使用抗il-2将il-2缀合物捕获至表面并经由抗peg抗体检测il-2缀合物。确定在源自血浆的样品中每种测试物品和内标的浓度，并且在标准测量的线性范围内的条件下测量每个时间点。示出了在给药il-2缀合物n88_30kd、h16_30kd、h16_50kd和l19_30kd后在食蟹猴中treg细胞群在总血细胞群(单态细胞)内的比例的鉴定和定量的结果示于图11中。
[0515]
在第0天，将il-2缀合物n88_30kd、l19_30kd、h16_30kd和h16_50kd以0.37mg/kg n88_30kd、0.03mg/kg l19_30kd、0.16mg/kg l19_30kd、0.12mg/kg h16_30kd、0.67mg/kg h16_30kd、0.2mg/kg h16_50kd和0.80mg/kg h16_50kd的剂量皮下给药至三只雄性食蟹猴。示出了在给药il-2缀合物n88_30kd、h16_30kd、h16_50kd和l19_30kd后在食蟹猴中cd8 t细胞群在总血细胞群(单态细胞)内的比例的鉴定和定量的结果示于图12中。实施例6
[0516]
向食蟹猴给药il-2缀合物
[0517]
在食蟹猴中给药下表7中描述的il-2缀合物，其中每个给药组3只雄性动物(共24只动物)。在第0天，向动物给予单次皮下剂量的所指示il-2缀合物。下文所述的每种缀合物(除h16_30kda和h16_50kda之外)都具有seq id no:4，其中所指示氨基酸位置被式(ii)、式
(iii)的结构或者式(ii)和(iii)的混合物取代，并且它们含有所指示大小的peg链。例如，标记“l19_30kda”的变体具有seq id no:4，其中位置l19处的氨基酸被式(ii)、式(iii)的结构或者式(ii)和(iii)的混合物替代，并且含有30kda的线性mpeg基团。对于h16_30kda和h16_50kda变体，所述化合物具有seq id no:4，其中所指示氨基酸位置被式(iv)、式(v)的结构或者式(iv)和(iv)的混合物和分别具有30kda或50kda的分子量的线性mpeg基团取代。表7.表7.
[0518]
在以下时间点从每只动物取血样：用于血液学的样品：第-1天、第1天(给药前)、第3天、第6天、第10天、第15天和第22天。用于药代动力学和药效学的样品：(给药前)、给药后0.5、1、2、4、8、24、36、48、72、96、120、144、168、和240、360、528(第22天)小时。细胞因子样品收集和分析：第-1天、和第1天(给药前)、给药后8、24、72、120和168、360和528(第22天)小时。
[0519]
白细胞计数(wbc)的峰值倍数变化、淋巴细胞计数的峰值倍数变化以及针对每种il-2缀合物观察到峰值淋巴细胞计数的日期指示于表8中。表8.
[0520]
在0.12mg/kg和0.67mg/kg剂量下在非人灵长类动物中h16_30kd变体的药代动力学参数示于下表9中，并且在0.12mg/kg和0.67mg/kg剂量下h16_30kd变体的血浆浓度与时
间的关系图示于图13中(0.12mg/kg剂量显示为下部迹线，而0.67mg/kg剂量显示为上部迹线)。表9.
[0521]
h16_30kda变体在0.12mg/kg剂量下以及h16_50kda变体在0.2mg/kg剂量下的血浆浓度图示于图14中，其中30kda变体的迹线显示为下部迹线(正方形)，并且50kda变体的迹线显示为上部迹线(三角形)。在非人灵长类动物的血浆中h16_30kda变体在0.12mg/kg剂量下以及h16_50kda变体在0.2mg/kg剂量下的在单态细胞中的t
reg
细胞百分比与给药后时间的关系图示于图15中，其中媒介物的迹线是下部迹线(正方形)，30kda变体的迹线以中间迹线显示，并且50kda变体的迹线以上部迹线显示。实施例7
[0522]
为了研究il-2缀合物(h16_50kd)对小鼠的钥孔戚血蓝蛋白(klh)诱导的迟发型超敏反应(dth)的影响，通过在第1天进行klh致敏并在第7天进行激发而在雌性c57bl/6小鼠中诱导dth，并且在第0天和第3天用h16_50kd处理小鼠。研究计划的细节提供于表10以及图16中。表10.dth研究细节表10.dth研究细节sc：皮下注射；qd：每天一次
[0523]
超敏反应诱导：在第1天，第2至6组小鼠接受肩胛内皮下(sc)注射用klh/cfa/ifa乳液(2.5mg/ml)，剂量体积为0.1ml(klh剂量为250μg)。在第7天，使用hamilton注射器和10μl剂量体积(klh剂量水平10μg)，来自第1至6组的所有小鼠在右耳(或左耳，如果需要的话)接受皮内(id)注射klh(1mg/ml pbs)。
[0524]
如下制备用于致敏的klh/cfa/ifa乳液：在pbs中制备klh(calbiochem；目录号374807)以获得3x溶液(7.5mg/ml)。将不完全弗氏佐剂(ifa，sigma)和完全弗氏佐剂(cfa，sigma)置于冰浴中。在50ml锥形管中提供klh溶液；并且添加等体积的cfa和ifa(1:1:1)，以产生所需1x浓度为2.5mg/ml的最终klh/cfa/ifa乳液。
[0525]
媒介物和h16_50kd的施用：在第0天和第3天皮下(sc，在腰椎区域)处理第1至5组小鼠。第1-9天第6组小鼠接受通过强饲(po)给予的阳性对照。在第1天和第7天进行klh注射
前2小时，施用环孢菌素a(csa，tokyo chemical industry)(在超纯水的0.5％甲基纤维素(400cp))。
[0526]
耳朵厚度和血液免疫表型的评估：在klh激发(在第7天)前，然后随后在第8天、第9天和第10天从注射的耳朵(和来自第1组动物的对侧耳朵)中取出8mm的打孔器(在注射部位周围)。在klh激发后大约24h、48h和72h，通过异氟醚吸入略微麻醉动物。使用工程千分尺测量耳瓣的厚度。
[0527]
在第0天、第3天、第7天可替代地经由颈静脉穿刺(在h16_50kd给药和/或klh注射前2-3小时)以及最终在第10天从所有组的每组5只动物收集全血样品(150μl)。使用流式细胞术分析(cd45/cd3/cd4/cd25/foxp3)对血样进行血液免疫分型。确定所有时间点的作为treg细胞(cd25 /foxp3 )的cd4 t细胞的相对百分比。仅在第10天，通过sysmex系统使用淋巴细胞计数确定cd4 treg的绝对计数。
[0528]
在第10天，在最终评估结束时，将来自第1-6组的所有动物麻醉(用1％-5％异氟醚)，并且经由腹主动脉或通过心脏内穿刺收集血样(约0.5-1ml)。然后，给动物的腹主动脉放血，并且此后立即收集耳朵组织(来自第1组的双耳以及来自第2-6组的注射klh的耳朵)用于耳朵厚度测量。
[0529]
如图17a-图17b所示，如与阴性对照(仅媒介物)相比，以0.1mg/kg和0.3mg/kg给药h16_50kd减小耳朵厚度，表明迟发型超敏反应减轻。如图17c所示，与阴性对照(仅媒介物)和阳性对照(环孢菌素a)相比，通过分别以0.03mg/kg、0.1mg/kg和0.3mg/kg给药h16_50kd，cd4 t细胞在cd25 foxp3 细胞群内的相对百分比增加。
[0530]
如图18a-图18c所示，与阴性对照(仅媒介物)和阳性对照(环孢菌素a)相比，通过分别以0.03mg/kg、0.1mg/kg和0.3mg/kg给药h16_50kd，treg(cd4 cd25 foxp3 )细胞在cd45 细胞群内(图18a)、在tcrβ 细胞群内(图18b)以及在cd4 细胞群内(图18c)的相对百分比全部增加。图19还表明，在第10天结束时，如与阴性对照(仅媒介物)和阳性对照(环孢菌素a)相比，在分别以0.03mg/kg、0.1mg/kg和0.3mg/kg给药h16_50kd后，在小鼠中treg(cd4 cd25 foxp3 )细胞的绝对计数更高。
[0531]
上文数据证明，h16_50kd的施用在疾病模型(dth)中显示出治疗活性，涉及通过所诱导的treg抑制对致敏剂的回忆反应。实施例8
[0532]
为了表征il-2缀合物h16_50kd(在实施例7中使用的缀合物)和人il2配体与il2受体α和il2受体β的人、小鼠和食蟹猴形式的结合，将fc标记的il2受体捕获到蛋白a包被的传感器芯片上，并且用biacore spr生物传感器系统测量h16_50kd和人il2配体与受体的结合。不含受体(仅蛋白a)的表面用作参考表面。
[0533]
将fc标记的受体捕获到蛋白a包被的传感器芯片上：如biacore手册内所述，使用标准胺偶联将蛋白a偶联到c1传感器芯片上。将每个冻干的fc受体样品溶解至0.25ug/ml，然后以1/100稀释以捕获到蛋白a表面上。改变捕获时间，以产生从约300至1000ru的不同密度表面用于动力学研究。使用高密度表面针对人和食蟹猴β受体运行另外的实验。这些受体分别被捕获至约8,000和约13,000ru。
[0534]
il2和h16_50kd与人、小鼠和食蟹猴α受体表面的结合：使用从0.7至200nm的2倍浓度系列测试il2和h16_50kd与人、小鼠和食蟹猴α受体表面的结合。使用scrubber-2
(biologic software pty ltd)通过减去来自不含受体的参考表面的信号以及缓冲液注射物的平均值来处理反应数据。将每个测试样品的八个数据集总体上拟合至1:1相互作用模型，包括用于质量输运的步骤。
[0535]
il2和h16_50kd与人和食蟹猴β受体表面的结合：使用从16nm至4um的2倍浓度系列测试il2和h16_50kd样品与人和食蟹猴β受体表面的结合。通过减去来自不含受体的参考表面的信号以及缓冲液注射物的平均值来处理反应数据。将il2与人和食蟹猴β受体表面相互作用的四个数据集总体上拟合至1:1相互作用模型。没有观察到h16_50kd与人或食蟹猴β受体表面的结合。
[0536]
为了确定是否可以检测到h16_50kd与人和食蟹猴β受体表面的任何相互作用，使用每种受体的高密度表面进行另外的结合研究。对于这些测试，首先使用从23nm至12um的2倍浓度系列测定h16_50kd。即使浓度高达12um，也无法检测到h16_50kd与人或食蟹猴βr受体的特异性相互作用。相比之下，分别观察到il2对人和食蟹猴β受体表面的显著反应或900ru和1700ru。没有观察到il2与参考表面的结合。
[0537]
结果总结：总的说来，il2以约10nm的类似亲和力结合至人、小鼠和食蟹猴结合的α形式，而h16_50kd在约30nm下对α受体展示出弱约3倍的亲和力。il2以约300nm的类似亲和力结合至人和食蟹猴β受体。无法检测到h16_50kd与β受体的显著结合。h16_50kd似乎是一种具有显著降低或消除的β受体亲和力的化合物，因为即使在高浓度下，也检测不到与il2β受体的结合。表11提供了结合常数的总结。表11.在25℃下确定的il2和h16_50kd与受体的结合常数。表11.在25℃下确定的il2和h16_50kd与受体的结合常数。注意：括号中的值表示针对最后一位有效数字报告的一组8或4个数据集的标准差。例如，1.3(8)e8表示(1.3
±
0.8)e8。il2与hαr的缔合速率的值非常快，因此质量输运有限。这导致误差更高。然而，因为缔合速率和解离速率高度相关，所以高度质量输运有限数据的动力学参数的比率仍然为平衡解离常数(kd)提供了精确的值。
[0538]
虽然在本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员而言应明显的是，此类实施方案仅通过举例的方式来提供。在不背离本发明的情况下，本领域
技术人员现在应想到许多改变、变化和替换。应当理解的是，本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案都可以用于实践本发明。以下权利要求旨在限定本发明的范围，并且由此覆盖这些权利要求及其等同物范围内的方法和结构。
再多了解一些
本文用于企业家、创业者技术爱好者查询，结果仅供参考。
