一种治疗肾病的中药组合物及其应用

1.本发明属于生物医药技术领域，具体的涉及一种治疗肾病的药物及其应用。


背景技术：

2.慢性肾脏病已成为现代社会威胁人类健康的重大疾病之一，其往往继发于糖尿病、高血压、感染、药物中毒等多种疾病。且慢性肾脏病在我国的患病率呈逐年上升趋势。慢性肾脏病是指各种原因引起的肾脏结构和功能障碍超过3个月，包括肾小球滤过率正常和不正常的病理损伤，血液或尿液成分异常，以及影像学检查异常；或不明原因的gfr下降(《60ml/min)超过3个月。由于缺乏肾脏病知识，20％-30％的患者首次到医院就诊时就发现肾功能损害已经到了不可逆转的阶段。目前临床治疗ckd主要以对症治疗及透析替代治疗为主，且治疗时间长，给患者的身心健康带来了沉重的打击，也给家庭及社会带来了严重的经济负担。对症治疗的西药主要有糖皮质激素(泼尼松)，细胞毒药物(环磷酰胺；盐酸氮芥)，免疫抑制剂(环孢素a；他克莫司；霉酚)等。然而这些药物有严重的副作用，并且停药后对治疗的抵抗和疾病复发是常见的。因此，寻找开发新的治疗ckd药物具有非常重要的社会、经济意义。
3.当今国际肾脏病学界一直致力于探索有效延缓ckd进展的新治疗方法。祖国传统中医学的整体观念和辨证论治为肾脏疾病提供了有力治疗手段。慢性肾脏病(ckd)中医学无相应疾病名称，根据临床表现归属于“水肿”、“虚劳”、“腰痛”、“肾风”、“尿浊”等范畴。近年来不断有各种不同的临床研究及报道显示中药在改善ckd患者的症状、体征，延缓肾功能进展，降低西药不良反应等方面具有良好效果，且其治疗机理呈现多途径、多靶点的特点，与当前的合成药物相比，有着不可替代的优越性。中药临床疗效的发挥是通过中药有效成分组成的复杂物质体系和病理条件下药物作用病证靶点组成的复杂生物体系两个系统之间整体动态地相互作用过程实现的，即系统对系统的关系。慢性肾脏病的复杂疾病体系和中医药理论治疗的整体性不谋而合。因此如何研发一种治疗慢性肾病的中药制剂成为现有技术中亟需解决的问题。
4.水葱为莎草科藨草属多年生宿根挺水草本植物。株高1-2米，茎杆高大通直，很像食用的大葱。杆呈圆柱状，中空。根状茎粗壮而匍匐，须根很多。在自然界中常生长在沼泽地、沟渠、池畔、湖畔浅水中。产于中国多地省份，也分布于朝鲜、日本，澳洲、南北美洲等地。在《中药大辞典》、《中华本草》、《南京民间药草》中均有“以水葱茎入药，有清凉利尿之效，能治水肿胀满，小便不通”等类似记载。研究者范铮证明水葱有较强的抑菌活性，顾懿宁等学者用水葱治疗236例良性前列腺增生症患者引起的水肿取得了较好的临床疗效。但是水葱或其提取物对肾脏相关疾病的作用目前尚未见研究报道。


技术实现要素：

5.本发明提供了一种治疗肾病的中药组合物，为肾病的预防与治疗提供一种新的方法。
6.为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
7.第一方面，本发明提出了一种治疗肾病的中药组合物，包括水葱根茎。
8.作为本发明的具体实施方式，所述中药组合物，每1kg中药组合物中包括22mg～27mg水葱根茎。
9.第二方面，本发明提出了所述治疗肾病的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：将包含水葱根茎的原料干燥后研磨成粉末，加入药学上可接受的载体和/或赋形剂后，与水按照1：(13～17)的比例混合并加热至90℃～98℃，保温回流20h～28h后浓缩至水的体积减少为原体积的1/12～1/20，得到治疗肾病的中药组合物。
10.作为本发明的具体实施方式，所述的治疗肾病的中药组合物的制备方法，所述浓缩步骤包括：首先将其浓缩至水的体积减少为原体积的1/3～1/4，然后加入至与最初等体积的水，再浓缩至水的体积减少为原体积的1/6～1/8，再加入至与最初等体积的水，再浓缩至水的体积减少为原体积的1/12～1/20。
11.第三方面，本发明提出了所述中药组合物制备得到的治疗肾病的药物。
12.作为本发明的具体实施方式，所述治疗肾病的药物，还包括填充剂和/或矫味剂。
13.优选地，所述矫味剂包括甜菊素、山梨醇或甘露醇中的一种。
14.作为本发明的具体实施方式，所述药物的剂型至少包括汤剂、酒剂、茶剂、露剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、片剂或锭剂中的一种。
15.第四方面，本发明提出了所述中药组合物或所述药物在制备改善肾功能的药物或保健品中的应用。
16.作为本发明的具体实施方式，所述肾病至少包括肾炎、中毒性肾病、糖尿病肾病和肾病综合症中的一种。
17.本发明的治疗肾病的中药组合物，具有如下有益效果：
18.本发明的中药组合物采用水葱根茎作为原料，水葱根茎来源于天然植物，因此本发明的中药组合物具有安全、有效、制备简单的优点。另外，本发明的水葱提取物能降低肾病大鼠24h尿蛋白，利尿，肾重/体重比显著降低，肾功能指标bun、cre明显降低，血清中的sod显著增高，对阿霉素所致大鼠肾损伤有抗氧化作用，nrf2和hmgb1的表达效果较好。因此，本发明的中药组合物对肾病具有显著的治疗效果。本发明的水葱根茎具有原料易得、成本低廉、药用价值高等特点，在提高疗效的同时可以降低中药组合物的成本。
附图说明
19.图1为阿霉素肾病大鼠肾脏组织he染色结果；其中，1a-空白组，1b-模型组，1c-低剂量组，1d-高剂量组，1e-贝那普利组；
20.图2为肾脏组织冰冻切片荧光探针测量ros的结果；其中，2a-空白组，2b-模型组，2c-低剂量组，2d-高剂量组，2e-贝那普利组；
21.图3为免疫组化nrf2表达染色的结果；其中，3a-空白组，3b-模型组，3c-低剂量组，3d-高剂量组，3e-贝那普利组；
22.图4为免疫组化hmgb1表达染色的结果；其中，4a-空白组，4b-模型组，4c-低剂量组，4d-高剂量组，4e-贝那普利组。
具体实施方式
23.为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例详细阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
24.水葱根茎成人临床剂量为27g生药/日，按成人平均体重70kg计算，临床剂量为0.39g生药/kg，按体表面积法换算大鼠等效剂量为2.5g生药/kg。本实验将水葱大鼠等效剂量作为该实验组的低剂量，等效剂量5倍作为中剂量，等效剂量10倍作为高剂量，即2.5g生药/kg、12.5g生药/kg、25.0g生药/kg。氢氯噻嗪片临床剂量为100mg，按体表面积法换算大鼠等效剂量为9.0mg/kg。
25.水葱根茎对大鼠慢性肾病模型的影响
26.1.1动物分组
27.雄性sd大鼠30只，体重180-220g，大鼠放入独立通风笼(ivc)内适应1-2天后，按体重随机分为5组，即a-空白组、b-模型组(阿霉素组7.5mg/kg)、c-水葱根茎根茎水煎液低剂量组(2.5g/kg)、d-水葱根茎根茎水煎液高剂量组(7.5g/kg),e-阳性对照组(贝那普利组)(10.0mg/kg)。采用预防性给药，提前2天口服灌胃给予相应药液(水葱根茎高低剂量，贝那普利)，第3天给予完相应药液2小时后，正常对照组(a组)尾静脉注射等体积生理盐水，其余各组(b\c\d\e组)分别尾静脉注射阿霉素(7.5mg/kg)，阿霉素用0.9％生理盐水配制成1mg/ml的浓度。给药体积按照10ml/kg灌胃。然后每天灌胃给予相应的药液，连续给药3周。第2周末时，收集一次小便，检测24h尿蛋白。看造模是否成功。第3周末，用代谢笼收集30只大鼠的尿液，收集完小便后，称重，然后腹腔注射3％戊巴比妥钠(0.2ml/100g)，心脏取血，采集30只大鼠的血液，取出肾脏组织，小心剥去包膜，称重，一颗肾脏立即放在4％的多聚甲醛中固定，一颗肾脏立即放在干冰中保存。
28.1.2实验指标
29.1.2.1分别称量大鼠和肾脏重量，求算出肾重/体重比。
30.1.2.2收集大鼠24h尿液，测定尿蛋白含量。
31.1.2.3心脏采血：测定血清尿素氮(bun)、肌酐(scr)、胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、超氧化物歧化酶(sod)、丙二醛(mda)。
32.1.2.4肾脏组织(冰冻切片)：ros荧光探针测定。
33.1.2.5肾脏组织(干冰保存)：组织匀浆后，测定il-1β,il-18。
34.1.2.6肾脏组织(4％多聚甲醛固定)he染色，观察组织形态结构和病理变化。
35.1.2.7肾脏组织(4％多聚甲醛固定)免疫组化：nrf2(氧化指标)、hmgb1(炎症指标)。
36.1.3实验结果
37.1.3.1水葱根茎对阿霉素肾病大鼠尿蛋白的影响
38.如表1所示，与空白组比较，模型组24h尿蛋白显著增加(p《0.01)，说明造模是成功的；与模型组比较，水葱根茎低、高剂量组24h尿蛋白有降低趋势，高剂量组降低趋势更加明显。贝那普利组24h尿蛋白与模型组比较有明显降低(p《0.05)。
39.表1水葱根茎对阿霉素肾病大鼠24h尿蛋白的影响(n＝6)
40.组别剂量24h尿蛋白(mg)
空白组
‑‑
7.85
±
9.02模型组7.5mg/kg296.33
±
125.15水葱根茎低剂量组2.5g/kg267.72
±
66.43水葱根茎高剂量组7.5g/kg189.20
±
61.41贝那普利组10mg/kg132.17
±
54.23*
41.注：与模型组比较*p《0.05，**p《0.01。
42.1.3.2水葱根茎对阿霉素肾病大鼠尿量的影响
43.如表2所示，与模型组比较，水葱根茎低剂量组24h尿量有明显增加(p《0.05)，高剂量组有利尿的趋势。
44.表2水葱根茎对阿霉素肾病大鼠24h尿尿量的影响(n＝6)
45.组别剂量24h尿量(ml)空白组
‑‑
37.50
±
16.96模型组7.5mg/kg28.67
±
5.75水葱根茎低剂量组2.5g/kg48.75
±
13.45*水葱根茎高剂量组7.5g/kg31.00
±
8.31贝那普利组10mg/kg24.58
±
7.94
46.注：与模型组比较*p《0.05，**p《0.01。
47.1.3.3水葱根茎对阿霉素肾病大鼠肾重/体重比的影响
48.如表3所示，与模型组比较，水葱根茎低、高剂量的肾重/体重比有显著降低(p《0.01)。表明水葱根茎低、高剂量对阿霉素诱导的肾病大鼠引起的肾性水肿有利尿消肿的作用。阳性对照药贝那普利的肾重/体重比也有明显降低(p《0.05)，表明贝那普利也有保护阿霉素肾病大鼠肾脏的作用。
49.表3水葱根茎对阿霉素肾病大鼠肾重/体重比的影响(n＝6)
[0050][0051]
注：与模型组比较*p《0.05，**p《0.01。
[0052]
1.3.4水葱根茎对阿霉素肾病大鼠肾功能的影响
[0053]
如表4所示，与模型组比较，水葱根茎低、高剂量的bun有显著降低(p《0.01)，cre也有明显降低(p《0.05)，肾功能指标bun、cre的明显降低表明水葱根茎低、高剂量对阿霉素诱导的肾病大鼠引起的肾损伤有保护作用。
[0054]
表4水葱根茎对阿霉素肾病大鼠肾功能的影响(n＝6)
[0055][0056]
注：与模型组比较*p《0.05，**p《0.01。
[0057]
1.3.5水葱根茎对阿霉素肾病大鼠血脂代谢的影响
[0058]
如表5所示，与正常组比较，模型组血清中的tc、tg有显著增高(p《0.01)；表明阿霉素诱导的肾病大鼠能显著引起高脂血症。其他各组与模型组比较，均无显著性差异。
[0059]
表5水葱根茎对阿霉素肾病大鼠血脂代谢的影响(n＝6)
[0060]
组别剂量tc(mmol/l)tg(mmol/l)空白组
‑‑
2.12
±
0.331.20
±
0.10模型组7.5mg/kg6.33
±
0.92

2.08
±
0.37

水葱根茎低剂量组2.5g/kg5.30
±
1.171.72
±
0.43水葱根茎高剂量组7.5g/kg6.21
±
2.161.84
±
0.46贝那普利组10.0mg/kg6.83
±
1.062.18
±
0.42
[0061]
注：与正常组比较

p《0.05，

p《0.01
[0062]
1.3.6水葱根茎对阿霉素肾病大鼠肾脏组织形态结构的影响
[0063]
图1为放大20倍后的阿霉素肾病大鼠肾脏组织he染色结果。从图中可以看出正常组大鼠肾组织切片未见明显异常。模型组大鼠肾组织中部分肾小管上皮细胞肿胀、坏死，可见大量蛋白管型，肾间质可见炎症细胞浸润，少量纤维组织增生。水葱根茎低剂量、高剂量组和贝那普利组上述病变减轻，蛋白管型明显减少。
[0064]
3.3.7水葱根茎对阿霉素肾病大鼠氧化指标的影响
[0065]
如表6及图2所示，与模型组比较，水葱根茎低剂量血清中的sod显著增高(p《0.01)，高剂量血清中的sod明显增高(p《0.05)，而mda也有下降趋势。提示水葱根茎低、高剂量对阿霉素所致大鼠肾损伤有抗氧化作用。
[0066]
表6水葱根茎对阿霉素肾病大鼠抗氧化指标的影响(n＝6)
[0067]
组别剂量sod(u/ml)mda(nmol/l)空白组
‑‑
651.32
±
67.628.04
±
1.80模型组7.5mg/kg459.96
±
44.6410.05
±
4.20水葱根茎低剂量组2.5g/kg675.24
±
59.66**8.38
±
1.14
水葱根茎高剂量组7.5g/kg653.05
±
139.34*9.86
±
2.34贝那普利组10.0mg/kg494.54
±
106.8410.44
±
1.54
[0068]
与模型组比较*p《0.05，**p《0.01。
[0069]
1.3.8水葱根茎对阿霉素肾病大鼠肾脏组织中ros的影响
[0070]
图2为放大400倍后的肾脏组织冰冻切片荧光探针测量ros的结果。从图中可以看出，有ros的位置，红色背景会比较深。模型组红色背景比较深，而空白组颜色比较浅。与模型组比较，低剂量和高剂量组的红色背景比较少，有明显差异。提示水葱根茎低、高剂量对阿霉素所致大鼠肾损伤有抗氧化作用。
[0071]
1.3.9水葱根茎对阿霉素肾病大鼠肾脏组织中nrf2表达情况的影响
[0072]
图3为放大200倍的免疫组化nrf2表达染色的结果。从图中可以看出，有nrf2蛋白表达的位置，会被染成黄色，棕色甚至深棕色。空白组有浅棕色出现；模型组有比较多的深棕色出现；与模型组相比，低剂量组和高剂量组的nrf2蛋白表达量较少，有明显差异。贝那普利组有相对较多的棕色甚至深棕色出现，但与模型组相比，棕色出现的比例会少些。
[0073]
1.3.10水葱根茎对阿霉素肾病大鼠肾脏组织中hmgb1表达情况的影响
[0074]
图4为放大400倍后的免疫组化hmgb1表达染色的结果。从图中可以看出，有hmgb1蛋白表达的位置，会被染成黄色，棕色甚至深棕色。空白组在细胞核中有浅棕色出现；模型组细胞核中有比较多的深棕色出现，且颜色较深；与模型组比较，低剂量组和贝那普利组被染成棕色的颜色浅很多，高剂量组颜色更浅了一些。与模型组相比，低、高剂量组的hmgb1蛋白表达量较少，有明显差异。
[0075]
综上所述，本发明含水葱根茎的中药组合物对于慢性肾病治疗有较好疗效，本发明进行了系统的药学、药理研究，证明该化合物临床应用安全有效，具有明显的特点和推广价值。
[0076]
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。