靶向STAT6的细胞外囊泡-ASO构建体的制作方法

技术特征：
1.一种包含反义寡核苷酸(aso)的细胞外囊泡，所述反义寡核苷酸(aso)包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列与stat6转录物(seq id no:1或seq id no:3)内的核酸序列互补。2.如权利要求1所述的细胞外囊泡，其中所述aso不是tgagcgaatggacaggtctt(seq id no:89)。3.如权利要求1或2所述的细胞外囊泡，所述细胞外囊泡靶向选自由以下组成的组的细胞：巨噬细胞、骨髓源性抑制细胞(mdsc)、单核细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞以及它们的任何组合。4.如权利要求1至3中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列与对应于如seq id no:3中列出的核苷酸序列的stat6转录物的核苷酸1至2056或对应于如seq id no:3中列出的核苷酸序列的stat6转录物的核苷酸2059至3963内的核酸序列互补。5.如权利要求4所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与所述stat6转录物内的所述核酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％互补。6.如权利要求1至5中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso能够降低人细胞(例如，免疫细胞)中的stat6蛋白表达，其中所述人细胞表达所述stat6蛋白。7.如权利要求6所述的细胞外囊泡，其中与未暴露于所述aso的人细胞中的stat6蛋白表达相比，所述stat6蛋白表达降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。8.如权利要求1至7中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso能够降低人细胞(例如，免疫细胞)中的stat6mrna的水平，其中所述人细胞表达所述stat6mrna。9.如权利要求8所述的细胞外囊泡，其中与未暴露于所述aso的人细胞中的所述stat6mrna的水平相比，stat6mrna的所述水平降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。10.如权利要求1至9中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso是间隙聚体、混合聚体或全聚体。11.如权利要求1至10中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso包含一种或多种核苷类似物。12.如权利要求11所述的细胞外囊泡，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括2'-o-烷基-rna；2'-o-甲基rna(2'-ome)；2'-烷氧基-rna；2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)；2'-氨基-dna；2'-氟-rna；2'-氟-dna；阿拉伯核酸(ana)；2'-氟-ana；或双环核苷类似物。13.如权利要求11或12所述的细胞外囊泡，其中所述核苷类似物中的一者或多者是糖修饰的核苷。14.如权利要求13所述的细胞外囊泡，其中所述糖修饰的核苷是增强亲和力的2'糖修饰的核苷。15.如权利要求11至14中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括包含双环糖的核苷。
16.如权利要求11至14中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括lna。17.如权利要求11至16中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述核苷酸类似物中的一者或多者选自由以下组成的组：限制性乙基核苷(cet)、2',4'-限制性2'-o-甲氧基乙基(cmoe)、α-l-lna、β-d-lna、2'-o,4'-c-亚乙基-桥联核酸(ena)、氨基-lna、氧基-lna、硫代-lna以及它们的任何组合。18.如权利要求1至17中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso包含一个或多个5'-甲基-胞嘧啶核碱基。19.如权利要求4至18中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与所述stat6转录物的(i)5'非翻译区(utr)；(ii)编码区；或(iii)3'utr内的核酸序列互补。20.如权利要求1至19中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与包含(i)seq id no:3的核苷酸1
–
700；(ii)seq id no:3的核苷酸1000-1500；(iii)seq id no:3的核苷酸1500-2000；(iv)seq id no:3的核苷酸2000
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2500；(v)seq id no:3的2500
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3000；(vi)seq id no:3的3000
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3700；(vii)seq id no:3的核苷酸413
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803；(viii)seq id no:3的核苷酸952-1688；(ix)seq id no:3的核苷酸1726-2489；(x)seq id no:3的核苷酸2682
–
2912；(xi)seq id no:3的2970
–
3203；(xii)seq id no:3的3331
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3561；(xiii)seq id no:3的核苷酸463
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753；(xiv)seq id no:3的核苷酸1002-1638；(xv)seq id no:3的核苷酸1776-2439；(xvi)seq id no:3的核苷酸2682
–
2862；(xvii)seq id no:3的3020
–
3153；(xviii)seq id no:3的3381
–
3511；(xix)seq id no:3的核苷酸503
–
713；(xx)seq id no:3的核苷酸1042-1598；(xxi)seq id no:3的核苷酸1816-2399；(xxii)seq id no:3的核苷酸2722
–
2822；(xxiii)seq id no:3的3060
–
3113；或(xxiv)seq id no:3的3421
–
3471的核酸序列互补。21.如权利要求1至20中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与(i)seq id no:3的核苷酸513
–
703；(ii)seq id no:3的核苷酸1052
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1588；(iii)seq id no:3的核苷酸1826
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2389；(iv)seq id no:3的核苷酸2732
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2812；(v)seq id no:3的3070
–
3103；或(vi)seq id no:3的3431
–
3461内的核酸序列互补。22.如权利要求1至21中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列包含与选自图1中的序列的序列互补的核苷酸序列。23.如权利要求14至22中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与所述stat6转录物内的核苷酸序列完全互补。24.如权利要求13至31中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso包含选自seq id no:91-193的核苷酸序列，具有一个或两个错配。25.如权利要求1至24中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso具有选自由图1中的设计组成的组的设计，其中大写字母是糖修饰的核苷，并且小写字母是dna。26.如权利要求1至25中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso的长度是14至20个核苷酸。27.如权利要求4至26中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列包含一个或多个经修饰的核苷间键联。28.如权利要求35所述的细胞外囊泡，其中所述一个或多个经修饰的核苷间键联是硫
代磷酸酯键联。29.如权利要求27或28所述的细胞外囊泡，其中至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的核苷间键联经修饰。30.如权利要求29所述的细胞外囊泡，其中所述aso中的所述核苷间键联中的每一者是硫代磷酸酯键联。31.如权利要求1至30中任一项所述的细胞外囊泡，所述细胞外囊泡还包含锚定部分。32.如权利要求31所述的细胞外囊泡，其中所述aso连接至所述锚定部分。33.如权利要求1至32中任一项所述的细胞外囊泡，所述细胞外囊泡还包含外源靶向部分。34.如权利要求33所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分包含肽、抗体或其抗原结合片段、化学化合物、rna适体或它们的任何组合。35.如权利要求33或34所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分包含肽。36.如权利要求33至35中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分包含微蛋白、设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、抗运载蛋白、adnectin、适体、肽模拟物分子、受体的天然配体、骆驼科动物纳米抗体或它们的任何组合。37.如权利要求33至36中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分包含全长抗体、单结构域抗体、仅重链抗体(vhh)、单链抗体、仅鲨鱼重链抗体(vnar)、scfv、fv、fab、fab'、f(ab')2或它们的任何组合。38.如权利要求37所述的细胞外囊泡，其中所述抗体是单链抗体。39.权利要求33至38中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分使外泌体靶向肝脏、心脏、肺、脑、肾脏、中枢神经系统、周围神经系统、肌肉、骨、关节、皮肤、肠、膀胱、胰腺、淋巴结、脾脏、血液、骨髓或它们的任何组合。40.如权利要求33至39中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分使所述外泌体靶向肿瘤细胞、树突细胞、t细胞、b细胞、巨噬细胞、神经元、肝细胞、库普弗细胞、髓系细胞(例如，嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、造血干细胞、mdsc(例如，单核细胞性mdsc或粒细胞性mdsc))或它们的任何组合。41.如权利要求33至40中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述ev包含将所述外源靶向部分连接至所述ev的支架部分。42.如权利要求33至41中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分是支架x。43.如权利要求33至41中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分是支架y。44.如权利要求42所述的细胞外囊泡，其中所述支架x是能够将所述aso锚定在所述ev的腔表面上和/或所述ev的外表面上的支架蛋白。45.如权利要求42或44所述的细胞外囊泡，其中所述支架x选自由以下组成的组：前列腺素f2受体负调控因子(ptgfrn蛋白)；basigin(bsg蛋白)；免疫球蛋白超家族成员2(igsf2蛋白)；免疫球蛋白超家族成员3(igsf3蛋白)；免疫球蛋白超家族成员8(igsf8蛋白)；整联蛋白β-1(itgb1蛋白)；整联蛋白α-4(itga4蛋白)；4f2细胞表面抗原重链(slc3a2蛋白)；一类atp转运蛋白(atp1a1、atp1a2、atp1a3、atp1a4、atp1b3、atp2b1、atp2b2、atp2b3、atp2b4
蛋白)；它们的功能片段；以及它们的任何组合。46.如权利要求31至45中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分是ptgfrn蛋白或其功能片段。47.如权利要求31至46中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分包含如seq id no:302中列出的氨基酸序列。48.如权利要求31至47中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分包含与seq id no:301至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或约100％同一的氨基酸序列。49.如权利要求43所述的细胞外囊泡，其中所述支架y是能够将所述aso锚定在所述ev的腔表面上和/或所述ev的外表面上的支架蛋白。50.如权利要求43或49所述的细胞外囊泡，其中所述支架y选自由以下组成的组：富含肉豆蔻酰化丙氨酸的蛋白激酶c底物(marcks蛋白)、富含肉豆蔻酰化丙氨酸的蛋白激酶c底物样1(marcksl1蛋白)、脑酸溶性蛋白1(basp1蛋白)、它们的功能片段以及它们的任何组合。51.如权利要求43、49和50中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述支架y是basp1蛋白或其功能片段。52.如权利要求43和49至51中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述支架y包含n末端结构域(nd)和效应结构域(ed)，其中所述nd和/或所述ed与所述ev的所述腔表面缔合。53.如权利要求52所述的细胞外囊泡，其中所述nd通过肉豆蔻酰化与所述外泌体的所述腔表面缔合。54.如权利要求52或53所述的细胞外囊泡，其中所述ed通过离子相互作用与所述外泌体的所述腔表面缔合。55.如权利要求52至53中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述ed包含(i)碱性氨基酸或(ii)按顺序的两个或更多个碱性氨基酸，其中所述碱性氨基酸选自由以下组成的组：lys、arg、his以及它们的任何组合。56.如权利要求55所述的细胞外囊泡，其中所述碱性氨基酸是(lys)n，其中n是介于1与10之间的整数。57.如权利要求52至56中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述ed包含lys(k)、kk、kkk、kkkk(seq id no:405)、kkkkk(seq id no:406)、arg(r)、rr、rrr、rrrr(seq id no:407)、rrrrr(seq id no:408)、kr、rk、kkr、krk、rkk、krr、rrk、(k/r)(k/r)(k/r)(k/r)(seq id no:409)、(k/r)(k/r)(k/r)(k/r)(k/r)(seq id no:410)或它们的任何组合。58.如权利要求52至57中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述nd包含如g:x2:x3:x4:x5:x6中列出的氨基酸序列，其中g表示gly；其中“:”表示肽键，其中所述x2至所述x6中的每一者独立地是氨基酸，并且其中所述x6包含碱性氨基酸。59.如权利要求58所述的细胞外囊泡，其中：(i)所述x2选自由以下组成的组：pro、gly、ala和ser；(ii)所述x4选自由以下组成的组：pro、gly、ala、ser、val、ile、leu、phe、trp、tyr、gln和met；(iii)所述x5选自由以下组成的组：pro、gly、ala和ser；
(iv)所述x6选自由以下组成的组：lys、arg和his；或(v)(i)-(iv)的任何组合。60.如权利要求52至59中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述nd包含g:x2:x3:x4:x5:x6的氨基酸序列，其中(i)g代表gly；(ii)“:”表示肽键；(iii)所述x2是选自由以下组成的组的氨基酸：pro、gly、ala和ser；(iv)所述x3是氨基酸；(v)所述x4是选自由以下组成的组的氨基酸：pro、gly、ala、ser、val、ile、leu、phe、trp、tyr、gln和met；(vi)所述x5是选自由以下组成的组的氨基酸：pro、gly、ala和ser；并且(vii)所述x6是选自由以下组成的组的氨基酸：lys、arg和his。61.如权利要求58至60中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述x3选自由以下组成的组：asn、gln、ser、thr、asp、glu、lys、his和arg。62.如权利要求52至61中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述nd和所述ed通过接头连接。63.如权利要求62所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含一个或多个氨基酸。64.如权利要求52至63中任一项所述的方法，其中所述nd包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：(i)ggklskk(seq id no:411)、(ii)gaklskk(seq id no:412)、(iii)ggkqskk(seq id no:413)、(iv)ggklakk(seq id no:414)、(v)ggklsk(seq id no:415)或(vi)它们的任何组合。65.如权利要求64所述的细胞外囊泡，其中所述nd包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：(i)ggklskkk(seq id no:438)、(ii)ggklskks(seq id no:439)、(iii)gaklskkk(seq id no:440)、(iv)gaklskks(seq id no:441)、(v)ggkqskkk(seq id no:442)、(vi)ggkqskks(seq id no:443)、(vii)ggklakkk(seq id no:444)、(viii)ggklakks(seq id no:445)和(ix)它们的任何组合。66.如权利要求52至65中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述nd包含氨基酸序列ggklskk(seq id no:411)。67.如权利要求43和49至66中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述支架y的长度是至少约8、至少约9、至少约10、至少约11、至少约12、至少约13、至少约14、至少约15、至少约16、至少约17、至少约18、至少约19、至少约20、至少约21、至少约22、至少约23、至少约24、至少约25、至少约30、至少约35、至少约40、至少约45、至少约50、至少约55、至少约60、至少约65、至少约70、至少约75、至少约80、至少约85、至少约90、至少约95、至少约100、至少约105、至少约110、至少约120、至少约130、至少约140、至少约150、至少约160、至少约170、至少约180、至少约190或至少约200个氨基酸。68.如权利要求43和49至67所述的细胞外囊泡，其中所述支架y包含(i)ggklskkkkgynvn(seq id no:446)、(ii)gaklskkkkgynvn(seq id no:447)、(iii)ggkqskkkkgynvn(seq id no:448)、(iv)ggklakkkkgynvn(seq id no:449)、(v)ggklskkkkgysgg(seq id no:450)、(vi)ggklskkkkgsggs(seq id no:451)、(vii)
ggklskkkksggsg(seq id no:452)、(viii)ggklskkksggsgg(seq id no:453)、(ix)ggklskksggsggs(seq id no:454)、(x)ggklsksggsggsv(seq id no:455)或(xi)gakkskkrfsfkks(seq id no:456)。69.如权利要求43和49至68所述的细胞外囊泡，其中所述支架y由以下组成：(i)ggklskkkkgynvn(seq id no:446)、(ii)gaklskkkkgynvn(seq id no:447)、(iii)ggkqskkkkgynvn(seq id no:448)、(iv)ggklakkkkgynvn(seq id no:449)、(v)ggklskkkkgysgg(seq id no:450)、(vi)ggklskkkkgsggs(seq id no:451)、(vii)ggklskkkksggsg(seq id no:452)、(viii)ggklskkksggsgg(seq id no:453)、(ix)ggklskksggsggs(seq id no:454)、(x)ggklsksggsggsv(seq id no:455)或(xi)gakkskkrfsfkks(seq id no:456)。70.如权利要求43和49至69所述的细胞外囊泡，其中所述支架y在n末端不包含met。71.如权利要求43和49至70中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述支架y在所述支架蛋白的n末端包含肉豆蔻酰化氨基酸残基。72.如权利要求71所述的细胞外囊泡，其中所述支架y的n末端的所述氨基酸残基是gly。73.如权利要求31至72中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso与所述ev的所述外表面上的所述锚定部分和/或所述支架部分连接。74.如权利要求31至73中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso与所述ev的所述腔表面上的所述锚定部分和/或所述支架部分连接。75.如权利要求31至74中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分包含固醇、gm1、脂质、维生素、小分子、肽或它们的组合。76.如权利要求31至74中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分包含胆固醇。77.如权利要求31至74中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分包含磷脂、溶血磷脂、脂肪酸、维生素(例如，维生素d和/或维生素e)或它们的任何组合。78.如权利要求31至77中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso通过接头与所述锚定部分和/或所述支架部分连接。79.如权利要求1至78中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso通过接头与所述ev连接。80.如权利要求78或79所述的细胞外囊泡，其中所述接头是多肽。81.如权利要求78或79所述的细胞外囊泡，其中所述接头是非多肽部分。82.如权利要求78或79所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含乙二醇。83.如权利要求82所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含heg、teg、peg或它们的任何组合。84.如权利要求78或79所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含丙烯酸亚磷酰胺(例如，acrydite
tm
)、腺苷酸化、叠氮化物(nhs酯)、地高辛(nhs酯)、胆固醇-teg、i-linker
tm
、氨基修饰剂(例如，氨基修饰剂c6、氨基修饰剂c12、氨基修饰剂c6 dt或uni-link
tm
氨基修饰剂)、炔烃、5'己炔基、5-辛二炔基du、生物素化(例如，生物素、生物素(叠氮化物)、生物素dt、生物素-teg、双重生物素、pc生物素或脱硫生物素)、硫醇修饰(硫醇修饰剂c3 s-s、二硫醇或硫醇修饰剂c6 s-s)或它们的任何组合。
85.如权利要求78至84中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述接头是可裂解接头。86.如权利要求85所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。87.如权利要求78至86中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含(i)马来酰亚胺部分和(ii)缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。88.如权利要求1至87中任一项所述的胞外囊泡，其中所述ev是外泌体。89.一种反义寡核苷酸(aso)，所述反义寡核苷酸包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列与stat6转录物(seq id no:1或seq id no:3)内的核酸序列互补。90.如权利要求89所述的aso，所述aso不是tgagcgaatggacaggtctt(seq id no:89)。91.如权利要求89或90所述的aso，所述aso包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列与对应于如seq id no:3中列出的核苷酸序列的stat6转录物的核苷酸1至2056、对应于如seq id no:3中列出的核苷酸序列的stat6转录物的核苷酸2059至3963内的核酸序列互补。92.如权利要求91所述的aso，其中其所述连续核苷酸序列与所述stat6转录物内的所述核酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％互补。93.如权利要求89至92中任一项所述的aso，所述aso能够降低人细胞(例如，免疫细胞)中的stat6蛋白表达，其中所述人细胞表达所述stat6蛋白。94.如权利要求93所述的aso，其中与未暴露于所述aso的人细胞中的stat6蛋白表达相比，所述stat6蛋白表达降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。95.如权利要求89至94中任一项所述的aso，所述aso能够降低人细胞(例如，免疫细胞)中的stat6mrna的水平，其中所述人细胞表达所述stat6mrna。96.如权利要求95所述的aso，其中与未暴露于所述aso的人细胞中的所述stat6mrna的水平相比，stat6mrna的所述水平降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。97.如权利要求91至96中任一项所述的aso，所述aso是间隙聚体、混合聚体或全聚体。98.如权利要求91至97中任一项所述的aso，所述aso包含一种或多种核苷类似物。99.如权利要求98所述的aso，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括2'-o-烷基-rna；2'-o-甲基rna(2'-ome)；2'-烷氧基-rna；2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)；2'-氨基-dna；2'-氟-rna；2'-氟-dna；阿拉伯核酸(ana)；2'-氟-ana；或双环核苷类似物(lna)。100.如权利要求98或99所述的aso，其中所述核苷类似物中的一者或多者是糖修饰的核苷。101.如权利要求100所述的aso，其中所述糖修饰的核苷是增强亲和力的2'糖修饰的核苷。102.如权利要求97至101中任一项所述的aso，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括包含双环糖的核苷。
103.如权利要求97至102中任一项所述的aso，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括lna。104.如权利要求103所述的aso，其中所述lna选自由以下组成的组：限制性乙基核苷(cet)、2',4'-限制性2'-o-甲氧基乙基(cmoe)、α-l-lna、β-d-lna、2'-o,4'-c-亚乙基-桥联核酸(ena)、氨基-lna、氧基-lna、硫代-lna以及它们的任何组合。105.如权利要求89至104中任一项所述的aso，所述aso包含一个或多个5'-甲基-胞嘧啶核碱基。106.如权利要求89至105中任一项所述的aso，其中所述aso包含seq id no:194至seq id no:206中的任一个。107.如权利要求89至106中任一项所述的aso，其中所述aso具有选自由图1中的设计组成的组的设计，其中大写字母是糖修饰的核苷，并且小写字母是dna。108.如权利要求89至107中任一项所述的aso，其中所述aso的长度是14至20个核苷酸。109.如权利要求89至108中任一项所述的aso，其中所述连续核苷酸序列包含一个或多个经修饰的核苷间键联。110.如权利要求109所述的aso，其中所述一个或多个经修饰的核苷间键联是硫代磷酸酯键联。111.如权利要求109或110所述的aso，其中至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的核苷间键联经修饰。112.如权利要求111所述的aso，其中所述aso中的所述核苷间键联中的每一者是硫代磷酸酯键联。113.一种缀合物，所述缀合物包含权利要求89至112中任一项所述的aso，其中所述aso与至少一个非核苷酸或非多核苷酸部分共价连接。114.如权利要求113所述的缀合物，其中所述非核苷酸或非多核苷酸部分包含蛋白质、脂肪酸链、糖残基、糖蛋白、聚合物或它们的任何组合。115.一种细胞外囊泡，所述细胞外囊泡包含权利要求89至112中任一项所述的aso或权利要求113或114所述的缀合物。116.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso或权利要求113或114所述的缀合物，以及药学上可接受的稀释剂、载体、盐或佐剂。117.如权利要求116所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的盐包括钠盐、钾盐、铵盐或它们的任何组合。118.如权利要求116或117所述的药物组合物，所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。119.如权利要求118所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是stat6拮抗剂。120.如权利要求119所述的药物组合物，其中所述stat6拮抗剂是化学化合物、sirna、shrna、反义寡核苷酸、蛋白质或它们的任何组合。121.如权利要求119或120所述的药物组合物，其中所述stat6拮抗剂是抗stat6抗体或其片段。122.如权利要求119或120所述的药物组合物，其中所述stat6拮抗剂包含反义寡核苷
酸(aso)。123.一种药盒，所述药盒包括权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物以及使用说明书。124.一种诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包括权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物以及使用说明书。125.一种抑制或降低细胞中的stat6蛋白表达的方法，所述方法包括向表达stat6蛋白的所述细胞施用权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物，其中所述细胞中的所述stat6蛋白表达在所述施用后受到抑制或降低。126.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物。127.权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物在制造用于治疗有需要的受试者的癌症的药物中的用途。128.如权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、如权利要求89至112中任一项所述的aso、如权利要求113或114所述的缀合物或如权利要求116至122中任一项所述的药物组合物，它们用于治疗有需要的受试者的癌症。129.一种治疗有需要的受试者的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物，其中所述疾病或病症选自纤维化、炎症、神经变性疾病、代谢病症/cvd以及它们的任何组合。130.权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物在制造用于治疗有需要的受试者的疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症选自纤维化、炎症、神经变性疾病、代谢病症/cvd以及它们的任何组合。131.如权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、如权利要求89至112中任一项所述的aso、如权利要求113或114所述的缀合物或如权利要求116至122中任一项所述的药物组合物，它们用于治疗有需要的受试者的疾病或病症，其中所述疾病或病症选自纤维化、炎症、神经变性疾病、代谢病症/cvd以及它们的任何组合。132.如权利要求125、126和129中任一项所述的方法、如权利要求127或130所述的用途或如权利要求128或131所述使用的组合物，其中在所述施用后，所述aso抑制或降低所述细胞中stat6mrna的表达。133.如权利要求132所述的方法、用途或使用的组合物，其中与未暴露于所述aso的细胞中stat6mrna的水平相比，在所述施用后，stat6mrna的水平降低至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约
100％。134.如权利要求125、126和129中任一项所述的方法、如权利要求127或130所述的用途或如权利要求128或131所述使用的组合物，其中与未暴露于所述aso的细胞中stat6蛋白的表达相比，在所述施用后，stat6蛋白的所述表达降低至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％。135.如权利要求125、126和129中任一项所述的方法、如权利要求127或130所述的用途或如权利要求128或131所述使用的组合物，其中所述细胞外囊泡、所述aso、所述缀合物或所述药物组合物心内、经口、胃肠外、鞘内、脑室内、经肺、局部或心室内施用。136.如权利要求126所述的方法、如权利要求127所述的用途或如权利要求128所述使用的组合物，其中所述癌症选自由以下组成的组：纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、结肠直肠癌、淋巴瘤、白血病、肝癌、成胶质细胞瘤、黑素瘤、骨髓瘤基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯氏肿瘤、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、滤泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、b细胞淋巴瘤以及它们的任何组合。137.如权利要求129所述的方法、如权利要求130所述的用途或如权利要求131所述使用的组合物，其中所述疾病或病症包括纤维化。138.如权利要求129所述的方法、如权利要求130所述的用途或如权利要求131所述使用的组合物，其中所述疾病或病症包括选自由以下组成的组的纤维化：肝纤维化(nash)、肝硬化、肺纤维化、囊性纤维化、慢性溃疡性结肠炎/ibd、膀胱纤维化、肾纤维化、caps(穆-韦二氏综合征)、心房纤维化、心内膜心肌纤维化、陈旧性心肌梗死、胶质瘢痕、动脉僵硬、关节纤维化、克罗恩氏病、杜普伊特伦挛缩、瘢痕疙瘩纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、佩罗尼氏病、肾原性系统性纤维化、进行性大块纤维化、腹膜后纤维化、硬皮病/系统性硬化症、粘连性关节囊炎以及它们的任何组合。139.一种活化有需要的受试者中的脑膜巨噬细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物。140.一种治疗有需要的受试者的中枢神经系统的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物。141.一种诱导有需要的受试者中的脑膜巨噬细胞的m1极化的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所
述的药物组合物。142.一种诱导有需要的受试者的肿瘤的脑膜巨噬细胞浸润的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至88和115中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求89至112中任一项所述的aso、权利要求113或114所述的缀合物或权利要求116至122中任一项所述的药物组合物。

技术总结
本公开涉及细胞外囊泡，例如外泌体，所述细胞外囊泡包含反义寡核苷酸(ASO)，其中所述ASO包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列与STAT6转录物内的核酸序列互补。本文还提供了用于产生所述外泌体的方法和使用所述外泌体治疗和/或预防疾病或病症的方法。病症的方法。


技术研发人员：达利亚
受保护的技术使用者：科迪亚克生物科学公司
技术研发日：2020.08.14
技术公布日：2022/7/9