一种抗氧化降血脂护肝的植物发酵液及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种抗氧化降血脂护肝的植物发酵液及其制备方法和应用。


背景技术：

2.氧化应激(oxidative stress，os)体内活性氧(ros)与活性氮(rns)的产生与抗氧化系统的清除之间不协调，致时机体内平衡状态被破坏，机体内ros与rns等物质剩余过多，机体抗氧化能力下降，氧化应激水平增加，引起机体组织和细胞损伤，生命活动受损的一种状态。在氧化应激状态下，体内产生了过量的氧自由基，攻击生物大分子，造成生物膜的损伤，蛋白质的失活，使酶变性、促使脂肪氧化和诱导dna的复制表达错误等，进一步造成细胞和组织的损伤。研究表明氧化应激参与了众多慢性病的发病机制，糖尿病以及心血管疾病等都与其密切相关，它是这些疾病的共同发病“土壤”。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种抗氧化降血脂护肝的植物发酵液及其制备方法和应用。
4.为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
5.第一方面，本发明提供一种抗氧化降血脂护肝的植物发酵液，按重量份数计，包括以下发酵底物：
6.山楂1-3份，香菇比例为1-3份，蒲公英1-3份，马齿苋1-3份。
7.山楂酸甘、微温，归脾、胃、肝经中含有有机酸、黄酮及黄酮苷等化合物；香菇中含有大量的氨基酸、蛋白质及多种微量元素。蒲公英和马齿苋中含有丰富的黄酮类和有机酸类成分。
8.作为本发明所述的抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的优选实施方式，所述植物发酵液还包括益生菌；所述益生菌包括植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌；所述植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的质量比为1：(1-3)。
9.益生菌发酵中药能充分释放中药中的有效成分，从而改善和提高药物活性，同时发酵液中含有大量活性酶，可以使机体迅速吸收。
10.第二方面，本发明提供一种所述抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的制备方法，包括以下步骤：
11.(1)取所述山楂、香菇粉碎，再与蒲公英和马齿苋混合，加水煎煮，收集滤液，取滤渣再加水，继续煎煮，收集滤液；合并两次滤液，得复合提取液；
12.(2)冷却所得复合提取液，向所得复合提取液中接种植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌发酵，灭菌、均质、灌装，即成。
13.作为本发明所述的抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的制备方法的优选实施方式，其特征在于，在所述步骤(1)中，第一次煎煮的料液比为1:(5-15)，煎煮时间为0.5h-2h；第
二次煎煮时间料液比为1:(6-10)，煎煮时间为0.5h-1h。
14.作为本发明所述的抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的制备方法的优选实施方式，在所述步骤(2)中，所述冷却至30℃-37℃。
15.作为本发明所述的抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的制备方法的优选实施方式，在所述步骤(2)中，所述植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的接种量为所述复合提取液的2wt％-20wt％；所述植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的质量比为1：(1-3)。
16.作为本发明所述的抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的制备方法的优选实施方式，在所述步骤(2)中，所述发酵的时间为32h-60h。
17.第三方面，本发明提供一种所述制备方法所得的产物。
18.第四方面，本发明提供一种保健食品、功能食品或特殊医学用途食品，包括所述植物发酵液或所述产物。
19.作为本发明所述的食品的优选实施方式，所述食品的剂型为硬胶囊、糖果、颗粒剂、片剂、口服液、饮品中的任意一种。
20.与现有技术相比，本发明的有益效果为：
21.本发明的抗氧化降血脂护肝的植物发酵液采用山楂、香菇、马齿苋和蒲公英四种药材相互配伍，在益生菌发酵作用下具有多种功效，且比水提取液功效更显著。本发明的植物发酵液不仅具有抗氧化延缓衰老的作用，而且还具有降低胆固醇与血脂、减轻肝脏损伤和保护结肠黏膜等多种功效，具有优良的应用前景。
附图说明
22.图1为植物发酵液的工艺流程图。
23.图2为大鼠肝组织he染色结果(
×
400)；
24.图3为大鼠结肠组织he染色结果(
×
200)。
具体实施方式
25.为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
26.实施例中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。所涉及的益生菌均为可用于食品的菌种。所涉及的植物乳杆菌为lactobacillus plantarum，所涉及的嗜酸乳杆菌为lactobacillus acidophilus。
27.实施例1：一种抗氧化降血脂护肝的植物发酵液
28.该抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的制备方法如图1所示。
29.具体如下：
30.(1)取山楂、香菇粉碎后与蒲公英和马齿苋混合加水煎煮，收集滤液，滤渣再加水，继续煎煮过滤收集滤液，合并两次滤液，得到复合提取液；
31.其中，按质量份数计，山楂3份，香菇3份，马齿苋5份，蒲公英3份；第一次料液比为1:10，煎煮时间为2h，第二次煎煮料液比为1:10，时间为1h。
32.(2)冷却所得复合提取液至30℃，向所得复合提取液中接种植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌进行发酵32h-60h，灭菌、均质、灌装，即成植物发酵液。
33.其中，所述植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的接种量为所述复合提取液的10wt％；所述所述植物乳杆菌与所述嗜酸乳杆菌质量比为1:1。
34.实施例2：一种抗氧化降血脂护肝的植物发酵液
35.该抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的制备方法具体如下：
36.(1)取山楂、香菇粉碎后与蒲公英和马齿苋混合加水煎煮，收集滤液，滤渣再加水，继续煎煮过滤收集滤液，合并两次滤液，得到复合提取液；
37.其中，按质量份数计，山楂2份，香菇2份，马齿苋1份，蒲公英1份；第一次料液比为1:10，煎煮时间为1.5h，第二次煎煮料液比为1:8，时间为30min。
38.(2)冷却所得复合提取液至36℃，向所得复合提取液中接种植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌进行发酵32h，灭菌、均质、灌装，即成植物发酵液。
39.其中，所述植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的接种量为所述复合提取液的20wt％；所述所述植物乳杆菌与所述嗜酸乳杆菌质量比为1:3。
40.实施例3：一种抗氧化降血脂护肝的植物发酵液
41.该抗氧化降血脂护肝的植物发酵液的制备方法具体如下：
42.(1)取山楂、香菇粉碎后与蒲公英和马齿苋混合加水煎煮，收集滤液，滤渣再加水，继续煎煮过滤收集滤液，合并两次滤液，得到复合提取液；
43.其中，按质量份数计，山楂1份，香菇1份，马齿苋3份，蒲公英2份；第一次料液比为1:5，煎煮时间为0.5h，第二次煎煮料液比为1:6，时间为30min。
44.(2)冷却所得复合提取液至37℃，向所得复合提取液中接种植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌进行发酵48h，灭菌、均质、灌装，即成植物发酵液。
45.其中，所述植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的接种量为所述复合提取液的5wt％；所述所述植物乳杆菌与所述嗜酸乳杆菌质量比为1:2。
46.实施例4：一种保健食品
47.取实施例1所制备的植物发酵液制成保健食品，该保健食品的剂型可为硬胶囊或口服液。
48.实施例5：一种功能食品
49.取实施例2所制备的植物发酵液制成功能食品，该功能食品的剂型可为糖果或饮品。
50.实施例6：一种特殊医学用途食品
51.取实施例3所制备的植物发酵液制成特殊医学用途食品，该特殊医学用途食品的剂型可为颗粒剂或片剂。
52.试验例1：检测发酵前后成分
53.检测实施例2中水提取液和植物发酵液中粗多糖、总酸(以乙酸来计)、乳酸和总黄酮含量，结果见表1。
54.表1成分含量
[0055][0056]
可见，经植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌发酵后，提取液中的粗多糖、总酸(以乙酸计)、乳酸和总黄酮含量均显著增加，ph值降低。
[0057]
试验例2：动物实验
[0058]
(1)动物造模及给药
[0059]
动物造模及给药：采用spf级别sd雄性大鼠，造模导致大鼠糖脂代谢紊乱及衰老，同步进行受试物的预防性给药(分别设立高、中、低剂量组别，及空白组、模型组及水提物对照组，每组动物≥6只)。
[0060]
水提物对照组采用实施例2制备的水提取液，按照8.3ml/kg每日灌胃给药；高、中、低剂量组高剂量组采用实施例2制备的植物发酵液，高剂量组按照16.6ml/kg每日灌胃给药，中剂量组按照8.3ml/kg每日灌胃给药，低剂量组按照4.15ml/kg每日灌胃给药。
[0061]
第8周实验结束，取材并测定有关指标。
[0062]
利用试剂盒检测血清中胆固醇、甘油三酯、谷胱甘肽、丙二醛、超氧化物歧化酶含量；肝右叶用0.9％生理盐水制成10％的肝匀浆，利用试剂盒检测肝组织中甘油三酯含量。
[0063]
解剖sd大鼠取结肠(10cm)、肝右叶中部，经4％多聚甲醛固定，进行苏木精-伊红(he)染色。
[0064]
(3)检测结果
[0065]
第一，降低胆固醇和血脂指标检测。
[0066]
检测结果如表2所示。
[0067]
表2检测结果
[0068][0069]
注：*：与模型组比较，p《0.05；**：与模型组比较，p《0.01；#：与水提取物对照组比较，
[0070]
p《0.05；##：与水提取物对照组比较，p《0.01。
[0071]
空白组与模型组相比，血清胆固醇和甘油三酯，均显示出统计学上的差异，说明此模型下观察讨论相关指标数值有意义。
[0072]
在降血脂方面，结果显示，低剂量组、中剂量组、高剂量组对降低血脂、降低胆固醇
的效果依次增强。以上降血脂的数据，均可看出植物发酵物和水提物组(对照组)的功效相差较大，说明植物发酵液的药理功效与水提物相差甚远，发酵后的植物发酵液各剂量组对血清有显著性差异，表明通过发酵使植物发酵液的降脂效果显著增高。
[0073]
第二，抗氧化功能指标检测。
[0074]
检测结果如表3所示。
[0075]
表3检测结果
[0076][0077]
注：*：与模型组比较，p《0.05；**：与模型组比较，p《0.01；#：与水提取物对照组比较，
[0078]
p《0.05；##：与水提取物对照组比较，p《0.01。
[0079]
空白组与模型组相比，血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽和丙二醛，均显示出统计学上的差异，说明此复合模型以接近于氧化老化实验模型，本模型下观察讨论抗氧化指标数值有意义。
[0080]
植物发酵液在血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽和丙二醛等相关指标上，均有组别呈现显著性差异，且与水提取组(对照组)功效存在显著差异，说明植物发酵液具有抗氧化功效。
[0081]
第三，护肝指标检测。
[0082]
植物发酵液在肝匀浆中甘油三酯方面数据如表4所示，大鼠肝组织的苏木精-伊红(he)染色结果如图2和表5所示。
[0083]
表4检测结果
[0084][0085]
注：*：与模型组比较，p《0.05；**：与模型组比较，p《0.01；#：与水提取物组比较，p《0.05；
[0086]
##：与水提取物组比较，p《0.01。
[0087]
表5肝组织染色结果
[0088][0089]
空白组与模型组相比，肝组织中甘油三酯显示出统计学上的差异，说明此模型下观察讨论相关指标数值有意义。低剂量组、中剂量组、高剂量组对肝组织中甘油三酯的含量均有降低的趋势，可见该植物发酵液在脂肪肝缓解和保护方面将会有功效前景。表4的数据可看出发酵后的植物发酵液各剂量组对肝组织中甘油三酯均有显著性差异，表明通过发酵使植物发酵液的护肝效果显著增高。
[0090]
大鼠肝组织he染色结果显示，植物发酵液高、中、低剂量组与模型组相比，大鼠肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润、肝细胞坏死等情况明显改善，高剂量组效果更显著，表明该植物发酵液能有效减轻肝脏损伤，在防治脂肪肝方面具有广阔的开发前景。
[0091]
第四，保护结肠黏膜指标检测。
[0092]
结肠组织的苏木精-伊红(he)染色结果如图3和表6所示。
[0093]
表6结肠组织染色结果
[0094][0095]
大鼠结肠组织he染色结果显示，植物发酵液对大鼠结肠组织黏膜层上皮细胞脱落具明显的改善作用。
[0096]
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。