一种包含植物萃取物的组合物及其促进睾固酮分泌的用途的制作方法

一种包含植物萃取物的组合物及其促进睾固酮分泌的用途
1.本技术为申请人根据母案申请(申请号：201880021757.5，发明名称：一种可促进睾固酮分泌的组合物及其用途)所提出的分案申请。
2.相关申请的交叉引用
3.本技术主张在2017年04月03日在美国提交的美国专利申请号no.62/480,860、以及在2017年05月08日在美国提交的美国专利申请号no.62/503,185的优先权，其全部内容通过引用包含于此。
技术领域
4.本发明涉及一种包含植物萃取物的组合物及其用途，尤其涉及一种可促进睾固酮分泌的组合物及其用途。


背景技术：

5.睾固酮(testosterone)是一种由类固醇衍生的激素，主要由男性的睾丸或女性的卵巢所分泌，少数由肾上腺分泌。睾固酮属于体内主要的雄激素及蛋白同化甾类，无论对于男性或女性，在健康上都有重要的影响，例如其具有增强性欲、提升肌肉质量与强度、增强免疫功能或维持骨质密度、对抗骨质疏松症等效用。
6.睾固酮在人类或脊椎动物体内，可转化为雌二醇，使某些雌激素受体活化，而影响软骨的成长或排卵素的分泌。此外，睾固酮也可直接以本身或以血清二氢睾固酮(dihydrotestosterone，dht)的形式活化雄激素受体，从而促进男性激素相关基因的表现、增加肌肉质量及力量以及骨质的密度及强度，并可刺激线性生长及骨骼成熟等；另一方面，在雄性化效应上则可促进性器官的成熟与男性第二性征的表现。
7.因此，若能适当提升体内睾固酮的分泌量，对于雄性特征的显现、性欲的维持，都有不错的效果，进一步还可增强肌肉的质量、骨骼的密度，对于老化也有减缓的效果。然而，目前可用于促进睾固酮分泌量增加的成分或药物有限，若为某种植物萃取物，其必须施予相当高的剂量，在使用成本上以及效果上有其局限，因此，若能施予多种萃取物的少量组份，即可产生单一成分的高剂量效果时，对于前述功效的运用，不但可大幅提升，也同时降低了使用成本。
8.在国人日常所常食用或饮用的植物或保健成分中，例如：葡萄籽、红茶、绿茶、红酒、柑橘、菠菜、青咖啡豆、蓝莓、普洱茶、四季春、青花菜苗、人参、枸杞、芦荟、姜黄、大蒜、红花苜蓿、迷迭香的萃取物，以及苹果多酚、β胡萝卜素或茄红素等，并未知悉其单独或组合是否具有促进睾固酮分泌的效果，若又能从复方的组合物中，找寻出可大幅提升睾固酮分泌的组份组合，对于相关用户而言将是一大福音。


技术实现要素：

9.本发明目的之一在于提供一种包含植物萃取物的组合物，通过其本身，或制备成医药组合物或食品组合物，可结合多种植物其萃取物和/或其他组份的作用，而大幅促进睾
固酮分泌的浓度，达到使个体在性征上的表现，以及肌肉、骨骼的生长质量上都能获得提升。
10.在本发明的一实施例中，上述组合物包含选自由葡萄籽萃取物与红茶萃取物、葡萄籽萃取物与绿茶萃取物、葡萄籽萃取物与柑橘萃取物、葡萄籽萃取物与菠菜萃取物、红酒萃取物与红茶萃取物、红酒萃取物与普洱茶萃取物、红酒萃取物与四季春萃取物、红酒萃取物与菠菜萃取物、红酒萃取物与青咖啡豆萃取物、红酒萃取物与蓝莓萃取物、红酒萃取物与葡萄籽萃取物、柑橘萃取物与菠菜萃取物、柑橘萃取物与青咖啡豆萃取物、柑橘萃取物与红酒萃取物、柑橘萃取物与蓝莓萃取物、柑橘萃取物与葡萄籽萃取物、青咖啡豆萃取物与蓝莓萃取物、青咖啡豆萃取物与绿茶萃取物、青咖啡豆萃取物与菠菜萃取物、青咖啡豆萃取物与普洱茶萃取物、菠菜萃取物与绿茶萃取物、菠菜萃取物与柑橘萃取物、菠菜萃取物与普洱茶萃取物、菠菜萃取物与四季春萃取物、菠菜萃取物与蓝莓萃取物、菠菜萃取物与葡萄籽萃取物、青花菜苗萃取物与茄红素、苹果多酚与姜黄萃取物、苹果多酚与青花菜苗萃取物、β胡萝卜素与姜黄萃取物、β胡萝卜素与茄红素、β胡萝卜素与青花菜苗萃取物、人参萃取物与姜黄萃取物、人参萃取物与茄红素、人参萃取物与青花菜苗萃取物、人参萃取物与β胡萝卜素、枸杞萃取物与β胡萝卜素、枸杞萃取物与人参萃取物、芦荟萃取物与红花苜蓿萃取物、迷迭香萃取物与姜黄萃取物、迷迭香萃取物与枸杞萃取物、迷迭香萃取物与大蒜萃取物、及迷迭香萃取物与红花苜蓿萃取物所组成的组中的至少任一组份组合。也就是说，本发明实施例的组成分，可为上述组中任意一组合的组合物，也可为二个组合以上所组成的组合物。
11.在本发明的一实施例中，其中该组份组合中组份间的比例为0.8～1.2∶1.2～0.8，优选为1∶1。
12.在本发明的另一实施例中，提供一种医药组合物，可将前述组成分制备成一医药组合物。
13.在本发明的前述实施例中，该医药组合物可包括前述组中的任一组合或二个以上组合所组成的组合物、及药学上可接受的载体。
14.在本发明的前述实施例中，该医药组合物的剂型可为溶液、胶囊或锭剂。
15.本发明的再一实施例中，提供一种食品组合物。
16.在本发明的前述实施例中，该食品组合物可包括前述组中任一组合或二个以上组合所组成的组合物、及食品成分，而该食品成分可为一般食品、保健食品、膳食补充品或饮品的成分。
17.本发明的另一实施例中，提供一种包含植物萃取物的组合物的用途，利用该组合物来促进睾固酮的分泌，而该组合物可为前述群组中任一组合或二个以上组合所组成的组合物。
18.在本发明的前述实施例中，该包含植物萃取物的组合物可进一步用于制造促进睾固酮分泌的医药组合物，或用于制造促进睾固酮分泌的食品、保健食品、膳食补充品或饮品。
附图说明
19.图1是本发明实施例中不同植物萃取物组合或与组份组合对于睾固酮分泌影响的结果比较图。
20.图2是本发明实施例中另一种植物萃取物组合或与组份组合对于睾固酮分泌影响的结果比较图。
具体实施方式
21.以下将进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例用以阐明本发明的发明特点及应用，而非以限定本发明的范围，对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，因此本发明的保护范围应当以本技术权利要求书的内容为准。
22.实施例1植物萃取物的制备
23.实施例1-1红茶萃取物的制备
24.首先，将红茶茶叶(fermented leaves of camellia sinensis)洗净及干燥，用粉碎机将红茶粗碎，之后以水为溶剂，以该溶剂与红茶粗碎物以液固比5～20∶1～5的比例混合后，在50℃～100℃下对红茶粗碎物进行萃取0.5～3小时。萃取温度优选为75℃～95℃。
25.经上述萃取步骤所得红茶萃取物冷却至室温后，以400目(mesh)滤网过滤以移除残余固体物。过滤后的红茶萃取物可进一步在45℃～70℃下进行减压浓缩而获得浓缩产物。
26.实施例1-2绿茶萃取物的制备
27.将绿茶茶叶(unfermented leaves of camellia sinensis)洗净及干燥，用粉碎机将绿茶粗碎，之后以水为溶剂，以该溶剂与绿茶粗碎物以液固比5～20∶1～5的比例混合后，在50℃～100℃下对绿茶粗碎物进行萃取0.5～3小时。萃取温度优选为75℃～95℃。
28.经上述萃取步骤所得绿茶萃取物冷却至室温后，以400目(mesh)滤网过滤以移除残余固体物。过滤后的绿茶萃取物可进一步在45℃～70℃下进行减压浓缩而获得浓缩产物。
29.实施例1-3四季春萃取物的制备
30.将四季春茶茶叶(leaves offour seasons spring tea plant)洗净及干燥，用粉碎机将四季春茶粗碎，之后以水为溶剂，以该溶剂与四季春茶粗碎物以液固比5～20∶1～5的比例混合后，在50℃～100℃下对四季春茶粗碎物进行萃取0.5～3小时。萃取温度优选为75℃～95℃。
31.经上述萃取步骤所得四季春茶萃取物冷却至室温后，以400目(mesh)滤网过滤以移除残余固体物。过滤后的四季春茶萃取物可进一步在45℃～70℃下进行减压浓缩而获得浓缩产物。
32.实施例1-4其他植物萃取物的制备
33.其余萃取物系取自市售产品，包括：葡萄籽萃取物[萃取自葡萄属(vitis spp.)植物种子，购自诚鸿生物科技有限公司]、柑橘萃取物[萃取自柑橘(citrus reticulata)果实，购自罗顿贸易有限公司]、菠菜萃取物[萃取自菠菜(spinaciaoleracea)，购自弘祥农产加工厂]、普洱茶萃取物[萃取自普洱茶茶叶(post-fermented leaves ofcamellia sinensis)，购自南京译朗生物科技有限公司]、青咖啡豆萃取物[萃取自未经烘焙的咖啡属(coffea spp.)植物种子，购自arjunanaturalextracts ltd(印度)]、红酒萃取物[萃取自红葡萄酒，购自上海博优堂生物技术有限公司]、蓝莓萃取物[萃取自北美蓝莓
(vacciniumcyanococcus)果实，购自元弘草本科研有限公司]、青花菜苗萃取物[萃取自青花菜(brassica oleracea var：italica)幼苗，购自蝶理株式会社]、人参萃取物[萃取自人参(panax ginseng)根部，购自hunan huachengbiotech，inc]、枸杞萃取物[萃取自枸杞(lyciumchinense)果实，购自湖南华康生物科技股份有限公司]、芦荟萃取物[萃取自芦荟(aloe vera)，购自元弘草本科研有限公司]、迷迭香萃取物[萃取自迷迭香(rosmarinusofficinalis)，购自佳景百草股份有限公司]、姜黄萃取物[萃取自姜黄(curcuma longa)根茎，购自arjunanaturalextracts ltd]、红花苜蓿萃取物[萃取自红花苜蓿(trifolium pretense)，购自茂世兴业有限公司]、大蒜萃取物[萃取自大蒜(allium sativum)鳞茎，购自长沙市惠瑞生物科技有限公司]。将这些萃取物以水配制成适当浓度后备用。
[0034]
实施例2组成物其他组份的制备
[0035]
组合物其他组份也取自市售产品，β胡萝卜素(beta carotene)购自巨研贸易有限公司，茄红素(lycopene)购自湖南朗林生物资源股份有限公司。该些组份以水配制成适当浓度后备用。
[0036]
实施例3植物萃取物或与组份的组合对睾固酮分泌影响的测试
[0037]
准备老鼠leydig细胞(以下简称tm3细胞，atcc crl1714)，培养于细胞培养液中[ham’s f12培养液与含有5％马血清、2.5％胎牛血清、0.5mm丙酮酸钠、15mm hepes与1％盘尼西林/链霉素(penicillin/streptomycin)的dulbecco
′
s modified eagle
′
s培养液(gibco)，以1∶1混合]。于24孔盘每孔中加入500μl细胞培养液，使每孔具有2
×
104个tm3细胞，并于37℃培养24小时。待细胞粘附后，移除原培养液，加入500μl新鲜的前述细胞培养液。
[0038]
之后将样本分为二组，其中，a组为对照组，不加入植物萃取物或其他试验组份，b组则为试验组。试验组b中分别依照表1至表3所列的植物萃取物、组份种类，分别以0.03125mg/ml至4mg/ml的剂量，以个别萃取物/组份，或两萃取物/组份组合以1∶1的比例加入由前述实施例1或2中所制备的萃取物/组份后，于37℃下反应24小时，之后进行睾固酮分泌量状况的分析。表中所示剂量是个别萃取物、或组合萃取物中各组份的剂量。
[0039]
首先取出50μl上述各组组成物反应后培养液的上清液，以睾固酮elisa检测套组(uscn，cat#cea458ge)，进行睾固酮浓度的检测。之后将检测出的数值以微软excel软件，利用学生t检定分析二样本间是否具有统计上的显著性(*表示p值＜0.05；**表示p值＜0.01；***表示p值＜0.001)。前述睾固酮浓度变化的结果分别如表1、表2以及图1、图2所示。
[0040]
表1
[0041][0042][0043]
表2
[0044][0045][0046]
表3
[0047][0048]
表1与表2分别是各组植物萃取物组合或植物萃取物与组份组合后，睾固酮浓度变化的列表。图1与图2则是表1与表2数值图示化的比较柱状图。请先参照表1与图1，单独葡萄籽萃取物(0.125mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果为205.13％，但与红茶(0.125mg/ml，单独促进效果为29.11％)或绿茶(0.125mg/ml，单独促进效果为45.15％)萃取物组合作用后，则可分别提升为291.63％与252.60％。而以0.5mg/ml浓度的葡萄籽萃取物与柑橘(0.5mg/ml，单独促进效果为97.92％)、菠菜(0.5mg/ml，单独促进效果为67.28％)结合的状况下，则可分别提升至513.44％与654.40％。由以上结果可知，葡萄籽萃取物与红茶萃取物、葡萄籽萃取物与绿茶萃取物、葡萄籽萃取物与柑橘萃取物、葡萄籽萃取物与菠菜萃取物的萃取物复方组合物，能够显著提升睾固酮的分泌。
[0049]
另一方面，单独红酒萃取物(0.5mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅有117.34％，但分别与0.5mg/ml的红茶(单独促进效果为29.11％)、普洱茶(单独促进效果为78.47％)、四季春(单独促进效果为57.57％)、菠菜(单独促进效果为67.28)、青咖啡豆(单独促进效果为46.77％)、蓝莓(单独促进效果为83.72％)、葡萄籽(单独促进效果为462.78％)等萃取物组合后，可分别提升睾固酮分泌量252.08％、247.71％、251.08％、550.65％、431.90％、369.92％、369.92％、446.62％。由以上结果可知，红酒萃取物与红茶萃取物、红酒萃取物与普洱茶萃取物、红酒萃取物与四季春萃取物、红酒萃取物与菠菜萃取物、红酒萃取物与青咖啡豆萃取物、红酒萃取物与蓝莓萃取物、红酒萃取物与葡萄籽萃取物的萃取物复方组合物，对于睾固酮分泌提升的效果更为显著。
[0050]
此外，单独柑橘萃取物(0.125、0.25、0.5mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅有97.92％、76.82％、78.36％，但分别与菠菜(0.5mg/ml，单独促进效果为67.28％)、青咖啡豆(0.25mg/ml，单独促进效果为72.01％)、红酒(0.5mg/ml，单独促进效果为117.34％)、蓝莓(0.125mg/ml，单独促进效果为80.62％)、葡萄籽(0.5mg/ml，单独促进效果为462.78％)等萃取物组合后，可分别提升睾固酮分泌量达426.99％、525.31％、465.76％、301.82％、513.44％。由以上结果可知，柑橘萃取物与菠菜萃取物、柑橘萃取物与青咖啡豆萃取物、柑橘萃取物与红酒萃取物、柑橘萃取物与蓝莓萃取物、柑橘萃取物与葡萄籽萃取物的萃取物复方组合物，对于睾固酮分泌提升的效果也相当显著。
[0051]
同样地，单独青咖啡豆萃取物(0.25、1mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅有72.60％与35.01％，但分别与红酒(0.25mg/ml，单独促进效果为75.59％)、蓝莓(0.25mg/ml，单独促进效果为75.69％)、绿茶(1mg/ml，单独促进效果为15.39％)、柑橘(0.25mg/ml，单独促进效果为76.82％)、菠菜(1mg/ml，单独促进效果为61.58％)、普洱茶(1mg/ml，单独促进效果为54.71％)等萃取物组合后，可分别提升睾固酮分泌量431.90％、382.36％、171.07％、525.31％、345.70％、169.75％。由以上结果可知，青咖啡豆萃取物与蓝莓萃取物、青咖啡豆萃取物与绿茶萃取物、青咖啡豆萃取物与菠菜萃取物、青咖啡豆萃取物与普洱茶萃取物的萃取物复方组合物，对于睾固酮分泌提升的效果也相当好。
[0052]
再进一步，单独菠菜萃取物(0.25、0.5、1mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果分别为98.45％、67.28％与61.58％，但分别与绿茶(0.5mg/ml，单独促进效果为21.33％)、柑橘(0.5mg/ml，单独促进效果为78.36％)、普洱茶(0.5mg/ml，单独促进效果为78.4％)、四季春(0.5mg/ml，单独促进效果为57.57％)、青咖啡豆(1mg/ml，单独促进效果为35.01％)、红酒(0.25mg/ml，单独促进效果为75.59％)、蓝莓(0.5mg/ml，单独促进效果为83.72％)、葡萄籽(0.5mg/ml，单独促进效果为462.78％)等萃取物组合后，可分别提升睾固酮分泌量162.33％、426.99％、463.94％、279.38％、345.70％、550.65％、349.28％、654.40％。由以上结果可知，菠菜萃取物与绿茶萃取物、菠菜萃取物与柑橘萃取物、菠菜萃取物与普洱茶萃取物、菠菜萃取物与四季春萃取物、菠菜萃取物与蓝莓萃取物、菠菜萃取物与葡萄籽萃取物的萃取物复方组合物，同样对于睾固酮分泌提升有相当好的效果。
[0053]
请继续参照表2与图2，单独青花菜苗萃取物(0.25mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅92.26％，但与茄红素(0.25mg/ml，单独促进效果为104.02％)组合后，可提升睾固酮分泌量258.51％。单独苹果多酚(0.03125mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅91.89％，但分别与姜黄(0.03125mg/ml，单独促进效果为111.89％)、青花菜苗(0.25mg/ml，单独促进效
果为92.26％)等萃取物组合后，可分别提升睾固酮分泌量258.91％、291.25％。由以上结果可知，青花菜苗萃取物与茄红素、苹果多酚与姜黄萃取物、苹果多酚与青花菜苗萃取物的萃取物复方组合物，对于睾固酮分泌提升有相当好的效果。
[0054]
另一方面，单独β胡萝卜素(0.03125、0.125、0.25mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅有66.21％、103.79％、111.42％，但分别与姜黄(0.03125mg/ml，单独促进效果为111.89％)、茄红素(0.125mg/ml，单独促进效果为99.94％)、青花菜苗(0.25mg/ml，单独促进效果为104.02％)等萃取物或组份组合后，可分别提升睾固酮分泌量215.27％、227.98％、240.61％。由以上结果可知，β胡萝卜素与姜黄萃取物、β胡萝卜素与茄红素、β胡萝卜素与青花菜苗萃取物的萃取物复方组合物的萃取物复方组合物，对于睾固酮分泌提升有不错的效果。
[0055]
单独人参萃取物(0.03125、0.25mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅有114.78％、116.9％，但分别与姜黄(0.03125mg/ml，单独促进效果为111.89％)、茄红素(0.25mg/ml，单独促进效果为104.02％)、青花菜苗(单独促进效果为92.26％)、β胡萝卜素(0.25mg/ml，单独促进效果为111.42％)等萃取物或组份组合后，可分别提升睾固酮分泌量297.97％、322.37％、343.29％、270.67％。同样的，单独枸杞萃取物(0.25mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅有121.85％，但分别与β胡萝卜素(0.25mg/ml，单独促进效果为111.42％)、人参萃取物(0.25mg/ml，单独促进效果为116.9％)等萃取物或组份组合后，可分别提升睾固酮分泌量257.52％、269.71％。由以上结果可知，人参萃取物与姜黄萃取物、人参萃取物与茄红素、人参萃取物与青花菜苗萃取物、人参萃取物与β胡萝卜素、枸杞萃取物与β胡萝卜素、枸杞萃取物与人参萃取物的萃取物复方组合物，对于睾固酮分泌提升也有不错的效果。
[0056]
单独芦荟萃取物(0.25mg/m1)对于睾固酮分泌的促进效果仅有108.8％，但与红花苜蓿萃取物(0.25mg/ml，单独促进效果为89.32％)组合后，可提升睾固酮分泌量278.95％。最后，单独迷迭香萃取物(0.03125、0.25mg/ml)对于睾固酮分泌的促进效果仅有106.84％与48.43％，但分别与姜黄(0.03125mg/ml，单独促进效果为111.89％)、枸杞(0.25mg/ml，单独促进效果为121.85％)、大蒜(0.25mg/ml，单独促进效果为128.88％)、红花苜蓿(0.25mg/ml，单独促进效果为89.32％)等萃取物或组份组合后，可分别提升睾固酮分泌量263.63％、186.73％、186.70％、156.70％。由以上结果可知，芦荟萃取物与红花苜蓿萃取物、迷迭香萃取物与姜黄萃取物、迷迭香萃取物与枸杞萃取物、迷迭香萃取物与大蒜萃取物，以及迷迭香萃取物与红花苜蓿萃取物的萃取物复方组合物，对于睾固酮分泌提升也有不错的效果。
[0057]
通过上述试验可知，本发明实施例的具促进睾固酮分泌功能的组合物，在两种萃取物或萃取物与组份结合的情况下，皆可产生超乎预期的相乘促进效果，使睾固酮的分泌显著增加。因此，可利用该些组合物制备相关的医药或食品组合物，使施用者或食用者在性征或肌肉、骨骼的质量上获得改善。
[0058]
此外，本发明实施方式的具促进睾固酮分泌功能的组合物，也可进一步添加于食品、保健食品、膳食补充品或饮品中。将本发明实施方式的具促进睾固酮分泌功能的组合物制备为医药组合物时，该医药组合物也可进一步加入所属技术领域所熟知的载体或其他辅剂。医药组合物的剂型，可为但不限于溶液、胶囊、或锭剂。