重组杆状病毒基因组及其改造方法、应用以及表达外源蛋白的方法与流程

技术特征：
1.重组杆状病毒基因组，其特征在于，该重组杆状病毒基因组命名为bac-δcp-vn，其生物保藏编号为：cgmcc no.23911。2.如权利要求1所述的重组杆状病毒基因组的改造方法，其特征在于，包括使用基因重组系统和反向筛选系统敲除acmnpv中的chia、v-cath、p26、p10、p74基因，并在敲除位点分别引入齿唇姬蜂病毒vankrin基因和家蚕浓核病毒ns1基因，具体步骤如下：(1)将bac-to-bac系统的病毒基因组中chia-v-cath以及p26-p10-p74基因敲除，命名为bac-δcp；(2)在chia-v-cath基因的敲除位点引入vankrin基因，在p26-p10-p74基因的敲除位点引入ns1基因，命名为bac-δcp-vn；(3)将步骤(2)获得的bac-δcp-vn制备成感受态细胞。3.根据权利要求2所述的重组杆状病毒基因组的改造方法，其特征在于，所述vankrin基因的序列为seq id.no.1，所述ns1基因的序列为seq id.no.2。4.根据权利要求2所述的重组杆状病毒基因组的改造方法，其特征在于，所述基因重组系统包括red/et重组系统和crispr/cas 9敲除系统中的一种；所述反向筛选系统包括rpsl-cm
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，hsv-tk、sacb、tet
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反向筛选系统中的一种。5.根据权利要求4所述的重组杆状病毒基因组的改造方法，其特征在于，所述基因重组系统为red/et重组系统，所述反向筛选系统为rpsl-cm
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反向筛选系统。6.重组杆状病毒基因组的表达外源蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建包含外源基因的转移载体：pfastbac-gfp、pfastbac-cap、pfastbac-gc；(2)将步骤(1)所得的转移载体转化到权利要求2中的bac-δcp-vn感受态细胞中，获得重组bacmid质粒；(3)将步骤(2)中获得的重组bacmid质粒转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒；(4)将步骤(3)获得的重组杆状病毒收获上清，进一步接种sf9细胞扩毒和接种hi5细胞表达检测其扩毒能力和病毒表达能力。7.根据权利要求6所述的表达外源蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中的所述外源基因为gfp，pcv2-cap，prv-gc中的一种；其中gfp为绿色荧光蛋白，gfp的序列为seq id.no.3；pcv2-cap为猪圆环病毒的cap蛋白，pcv2-cap的序列为seq id.no.4；prv-gc为猪伪狂犬病毒的gc蛋白，prv-gc的序列为seq id.no.5。8.权利要求2所述的重组杆状病毒基因组的改造方法在提高外源蛋白产能方面的应用。

技术总结
本发明涉及基因工程，提供了重组杆状病毒基因组及其改造方法，包括(1)将Bac-to-Bac系统的病毒基因组中chiA-v-cath以及p26-p10-p74基因敲除；(2)在chiA-v-cath基因的敲除位点引入vankrin基因，在p26-p10-p74基因的敲除位点引入NS1基因；(3)将步骤(2)获得的Bac-ΔCP-VN制备成感受态细胞。本发明还提供了上述重组杆状病毒基因组的改造方法在提高杆状病毒外源蛋白产能方面的应用，以及与该重组杆状病毒基因组的改造方法相适配的外源蛋白表达方法。本发明的制备方法不仅能够显著提高杆状病毒的增殖能力，还能够显著提高外源蛋白的表达水平。达水平。达水平。


技术研发人员：杜恩岐 王浩
受保护的技术使用者：成都纳微金生物技术有限公司
技术研发日：2022.01.24
技术公布日：2022/6/10