基于mRNA的肿瘤疫苗及其制备和联合抗癌方法与流程

技术特征：
1.一种基于mrna的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗包括mrna表达体、肿瘤特异性基因及胞内递送系统；所述mrna表达体中，mrna为自扩增rna，包括编码抗原和rna复制酶，扩增重组mrna；所述自扩增rna包括体外转录mrna，由抗原编码的开放阅读框orf、5’和3’端未翻译区utr、一个7甲基鸟苷5’帽结构、合并到第一个核苷酸的序列和3’端多聚腺苷酸尾部；所述的表达体还包括结构调整，密码子优化及核苷酸修饰。2.根据权利要求1所述的基于mrna的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤特异性基因包括野生型，野生型 多表位肽抗原，及野生型 sars-cov-2结合阈rbd野生或变异体肽抗原；所述的肿瘤特异性基因包括但不限于her2/neu mrna和tenm4 mrna；优选地，所述肿瘤特异性基因为her2/neu mrna。3.根据权利要求1或2所述的基于mrna的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗诱导细胞产生肿瘤特异性抗原，所述肿瘤特异性抗原包括肿瘤组织特异性基因表达产物，基因突变，尤其是通过高通量生物技术筛选的特异性新基因；还包括所述基因及其所选的多表位抗原；所述的基因多表位抗原辅助于肿瘤特异性抗原或新抗原，其多表位肽分子包含2-200个氨基酸，多表位肽分子的数量为2-200个抗原分子。4.根据权利要求1～3中任意一项所述的基于mrna的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗为预防和/或治疗性的。5.根据权利要求1～5中任意一项所述的基于mrna的肿瘤疫苗，其特征在于，所述疫苗为免疫检查点疫苗，所述免疫检查点疫苗所涉基因包括但不限于b7-h3 mrna。6.根据权利要求1～5中任意一项所述的基于mrna的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗还包括双特异性双功能car-t分子，所述双特异性双功能car-t分子为高通量筛选的细胞治疗性优选基因，包括但不限于b7-h3嵌合受体；优选地，设计利用双特异性t细胞参与bites作为car-t和肿瘤细胞之间的适配器的car-t；优选地，设计基于cars分子的基于蛋白开关的逻辑门；包括但不限于帮助car-t细胞对抗肿瘤免疫抑制微环境tme的优选方法，包括细胞因子、趋化因子受体、显性负性受体、肝素酶和crispr介导的基因组编辑和t细胞文库筛选的表达；优选地，除car-t细胞外，还包括工程化和优化的car-nk细胞和car-m细胞或树突状细胞。7.根据权利要求1～6中任意一项所述的基于mrna的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗还包括胞内递送系统；优选地，所述胞内递送系统为脂质递送系统，所述脂质递送系统配方包括可电离的阳离子脂质、磷脂、胆固醇和脂质锚定的聚乙二醇；优选地，lnp配方包括rna-脂质复合物、提供结构刚性的脂质以及能够修饰颗粒表面特性的脂质化聚合物涂层。8.根据权利要求1～7中任意一项所述的基于mrna的肿瘤疫苗，其特征在于，所述肿瘤疫苗还包括免疫佐剂；所述免疫佐剂为编码免疫刺激蛋白的mrna，所述mrna包括gs-csf，ifn-gamma、il-12、il32、ox40l、cd40l、cd70；优选地，包括但不限于il-15。9.根据权利要求1～8中任意一项所述的基于mrna的肿瘤疫苗的制备，其特征在于，所述制备过程包括：(1)构建各种疫苗及car-t细胞car分子和免疫刺激因子的表达质粒载体；(2)mrna的体外转录(ivt)及纯化；(3)脂质纳米递送系统包裹及免疫佐剂；(4)mrna疫苗连续生产的微流体方法；
(5)多表位抗原疫苗与新抗原鉴定；(6)car-t分子的设计与优化。10.根据权利要求1～9中任意一项所述的基于mrna疫苗的联合抗癌治疗方法，包括预防、治疗疫苗、免疫检查点疫苗或抗体、car-t细胞或car-nk细胞和免疫刺激佐剂的合理适当配伍治疗；所述的免疫检查点抑制剂抗体，包括但不限于pd-1/pd-l1。

技术总结
本发明提出了一种基于mRNA的肿瘤疫苗，该疫苗包括预防、治疗、免疫检查点疫苗和CAR-T细胞及免疫佐剂的mRNA表达体及其脂质递送系统和联合抗癌方法。该mRNA表达体以嵌合抗原的形式表达肿瘤特异性抗原、突变抗原、新抗原及CAR-T细胞受体和免疫佐剂。所述特异性抗原包括Her2/neu，Her2/neu和SARS-CoV-2野生或变体RBD抗原，新抗原TENM4，免疫检查点B7-H3，双特异性B7-H3嵌合抗原受体CAR分子及免疫佐剂IL-15；所述脂质递送系统包括脂质体和脂质纳米颗粒系统；所述联合治疗方法，包括预防、治疗疫苗、免疫检查点疫苗或抗体、CAR-T细胞和佐剂的合理适当配伍治疗，达到全面全方位多基因多因素的精准肿瘤免疫治疗效果。素的精准肿瘤免疫治疗效果。


技术研发人员：杨水祥
受保护的技术使用者：苏州祥龙生物医药科技有限公司
技术研发日：2022.02.21
技术公布日：2022/6/7