试剂盒及其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种试剂盒，其特征在于，用于检测可溶性fms样酪氨酸激酶-1的含量，所述试剂盒包括：第一试剂，包括链霉亲和素磁珠和第一稀释液；第二试剂，包括酶标记的可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体和第二稀释液；第三试剂，包括标记可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体的nhs-lc-生物素和第三稀释液；校准品以及发光底物。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一稀释液包括缓冲剂、表面活性剂、蛋白质、防腐剂、盐类、氨基酸、糖类和高分子聚合物。3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲剂为2-吗啉乙磺酸，所述第一稀释液中2-吗啉乙磺酸的浓度为20mm～100mm；和/或，所述表面活性剂为吐温20、吐温80、曲拉通100和曲拉通x405中的任意一种，所述第一稀释液中表面活性剂的浓度为0.01％～0.1％(v/v)；和/或，所述蛋白质为牛血清白蛋白，所述第一稀释液中牛血清蛋白的浓度1％～3％(w/v)；和/或，所述防腐剂为proclin300；和/或，所述盐类为nacl；和/或，所述氨基酸为甘氨酸，所述第一稀释液中甘氨酸的浓度为0.05％～0.2％(w/v)；和/或，所述糖类为海藻糖或者蔗糖，所述第一稀释液中糖类的浓度为0.1％～2％(w/v)；和/或，所述高分子聚合物为经bsa修饰的peg，所述第一稀释液中高分子聚合物的浓度为0.01％～2％(w/v)。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一稀释液包括：50mm2-吗啉乙磺酸、0.05％吐温20(v/v)、0.1％proclin300(v/v)、0.9％nacl(w/v)、1％牛血清白蛋白(w/v)、0.1％甘氨酸(w/v)、0.5％海藻糖(w/v)和0.05％经bsa修饰的peg(w/v)，所述第一稀释液的ph值为6.5。5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二稀释液包括：50mm～100mm 2-吗啉乙磺酸、0.05％～0.2％吐温20(v/v)、0.1％的proclin300(v/v)、0.9％nacl(w/v)和1％～3％牛血清白蛋白(w/v)；和/或，所述第一稀释液的ph为6.5～8.0；和/或，所述第二稀释液的ph为6.5～7.2；和/或，所述第三稀释液包括50mm 2-吗啉乙磺酸、0.05％吐温20(v/v)、0.1％proclin300(v/v)、0.9％nacl(w/v)和1.5％牛血清白蛋白(w/v)，所述第三稀释液的ph值为6.8。6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二稀释液包括：50mm2-吗啉乙磺酸、0.05％吐温20(v/v)、0.1％的proclin300(v/v)、0.9％nacl(w/v)和1.5％牛血清白蛋白(w/v)，所述第二稀释液的ph值为6.8；和/或，所述第一试剂中，链霉亲和素磁珠的浓度为0.05mg/ml～0.2mg/ml；和/或，所述第一试剂中，所述链霉亲和素磁珠的粒径为1.5μm。
7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二试剂中，酶标记的可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体的酶为碱性磷酸酶；和/或，所述第三试剂中，标记可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体的nhs-lc-生物素的浓度为0.1ug/ml～0.3ug/ml。8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品为添加可溶性fms样酪氨酸激酶-1抗原的缓冲液；和/或，所述发光底物为amppd。9.一种如权利要求1-8任意一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将链霉亲和素磁珠加入到第一稀释液中混合均匀后，磁分离清洗，再重悬于第一稀释液中，得第一试剂；将可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体活化后，与酶溶液混合反应并纯化后，制得酶标记的可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体，将酶标记的可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体与第二稀释液混合均匀，得第二试剂；将nhs-lc-生物素溶解至二甲基亚砜中形成nhs-lc-生物素溶液，将可溶性fms样酪氨酸激酶-1加入pbs缓冲液中混合均匀，并与所述nhs-lc-生物素溶液混合反应后，提纯得标记可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体的nhs-lc-生物素，将标记可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体的nhs-lc-生物素与第三稀释液混合均匀，得第三试剂。10.一种可溶性fms样酪氨酸激酶-1的含量的检测方法，其特征在于，采用如权利要求1至8任意一项所述的试剂盒，所述可溶性fms样酪氨酸激酶-1的含量的检测方法包括以下步骤：将待测样本与第二试剂混合均匀，并加入第一试剂和第三试剂，混和孵育，得到混合物；将所述混合物磁分离并清洗后，加入发光底物，混合均匀，得到待测液；检测所述待测液的发光强度；根据发光强度计算可溶性fms样酪氨酸激酶-1的含量。

技术总结
本发明公开一种试剂盒及其制备方法和应用，涉及免疫检测分析技术领域，所述试剂盒用于检测可溶性fms样酪氨酸激酶-1的含量，所述试剂盒包括：第一试剂，包括链霉亲和素磁珠和第一稀释液；第二试剂，包括酶标记的可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体和第二稀释液；第三试剂，包括标记可溶性fms样酪氨酸激酶-1单克隆抗体的NHS-LC-生物素和第三稀释液；校准品以及发光底物。本发明提出的试剂盒，在检测可溶性fms样酪氨酸激酶-1的含量时，灵敏度高、稳定性和重复性好、抗干扰能力强。抗干扰能力强。抗干扰能力强。


技术研发人员：邓家兵 黄金浪 唐灿
受保护的技术使用者：深圳天辰医疗科技有限公司
技术研发日：2022.02.23
技术公布日：2022/5/31