一种半粘性鱼卵脱粘剂及其在云南吻孔鲃人工繁殖中的应用的制作方法

1.本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种半粘性鱼卵脱粘剂及其在云南吻孔鲃人工繁殖中的应用。


背景技术：

2.产粘性卵或半粘性卵的鱼类由于鱼卵具有粘性导致在人工授精和孵化过程中出现受精率和孵化率低等问题。如产粘性卵或半粘性卵的鱼类的卵膜遇水膨胀成饱满富有弹性的粘性层，将鱼卵附着在基质或鱼巢中，导致其在短时间内失去受精能力，进而使受精率低；且粘性卵或半粘性卵受精后得到的受精卵易粘连结块，致使内部气体交换困难，进一步导致孵化率下降。因此，需对粘性卵或半粘性卵进行脱粘。
3.脱粘法是在人工催产的基础上，先授精后脱粘再进行流水孵化的技术。脱粘法主要分为物理脱粘法和化学脱粘法两种。
4.物理脱粘法主要利用黄泥浆、滑石粉、淀粉或富勒氏土等脱粘剂在机械震荡和摩擦作用下去除鱼卵表面的粘性物质，使鱼卵脱去粘性。物理脱粘法对脱粘处理时间要求比较宽松，且物理脱粘剂本身不会产生有害物质。但物理脱粘法容易由于操作不当而对受精卵产生损伤，且在孵化期间通常会招致细菌和真菌的大量滋生，导致孵化率降低；此外，泥浆、滑石粉等脱粘剂容易在鱼卵的卵膜上形成一层细泥，不利于观察胚胎发育。
5.化学脱粘法是通过使用对鱼卵的卵膜产生化学作用的物质处理来去除鱼卵的粘性，如蛋白水解酶、尿素-氯化钠混合溶液或单宁等。使用蛋白水解酶、尿素-氯化钠混合溶液或单宁可以降低细菌和真菌感染的风险。但使用化学脱粘法处理鱼卵时，需要在很短的时间内完成脱粘操作，且对脱粘剂的使用剂量有严格的要求，不正确的剂量和过长的处理时间会增加受精卵的死亡率，导致孵化率降低。


技术实现要素：

6.针对上述现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种半粘性鱼卵脱粘剂，并将该脱粘剂应用于云南吻孔鲃人工繁殖中。通过复配特定比例的滑石粉、单宁和两亲性超支化共聚物，减少滑石粉在鱼卵的卵膜上的吸附，降低单宁酸对卵膜的毒性，降低细菌和真菌感染卵膜的风险，提高云南吻孔鲃鱼卵的孵化率。
7.一种半粘性鱼卵脱粘剂，所述半粘性鱼卵脱粘剂包括如下重量份组分：滑石粉20-40份、单宁1-3份、两亲性超支化共聚物5-10份。
8.滑石主要成分是滑石含水的硅酸镁，分子式为mg3[si4o
10
](oh)2，属单斜晶系，呈层状的结构，将其作为物理脱粘剂运用于云南吻孔鲃人工繁殖中，能有效地使鱼卵脱粘。
[0009]
单宁是一种资源丰富、价廉易得的天然高分子化合物，广泛存在于植物中，易溶于水、乙醇、丙酮等溶剂中。单宁含有各种活性官能团(酚羟基、羧基)，表现出活泼的化学性质。可与鱼卵膜上的粘性物质发生反应，从而实现脱粘效果。
[0010]
两亲性超支化共聚物中含有大量的羟基和支链，两亲性超支化共聚物中的支链贯
穿于滑石粉的层状结构之间，与滑石粉中的主要成分含水的硅酸镁之间存在氢键作用，从而减少滑石粉在鱼卵的卵膜上的附着量，有利于观察胚胎发育；两亲性超支化共聚物中的羟基与单宁中的酚羟基、羧基存在氢键作用，降低单宁酸对卵膜的毒性，有效的适当延长脱粘操作时间，降低脱粘操作难度，降低滑石粉在孵化期间招致细菌和真菌感染卵膜的风险，提高云南吻孔鲃鱼卵的孵化率。
[0011]
通过滑石粉脱粘剂与单宁脱粘剂的适配，滑石粉的加入可减少单宁脱粘剂的使用，减少单宁脱粘剂对卵膜的伤害，单宁脱粘剂的加入可有效的降低滑石粉在孵化期间招致细菌和真菌感染卵膜的风险，从而提高云南吻孔鲃鱼卵的孵化率。
[0012]
优选地，所述半粘性鱼卵脱粘剂包括如下重量份组分：滑石粉25-35份、单宁1.5-2.5份、两亲性超支化共聚物6-9份。
[0013]
优选地，所述半粘性鱼卵脱粘剂包括如下重量份组分：滑石粉25-30份、单宁1.5-2份、两亲性超支化共聚物7-8份。
[0014]
优选地，所述两亲性超支化共聚物选自两亲性超支化peg-b-pcl、两亲性超支化hbpo-g-dma、两亲性超支化pei-pblg、两亲性超支化peg-b-peege、两亲性超支化聚(l-谷氨酸-γ-苄基酯)-g-聚乙二醇、两亲性超支化聚芳醚酮-g-聚乙二醇中的一种或多种。
[0015]
更优选地，所述两亲性超支化共聚物选自两亲性超支化hbpo-g-dma、两亲性超支化聚(l-谷氨酸-γ-苄基酯)-g-聚乙二醇、两亲性超支化聚芳醚酮-g-聚乙二醇中的一种或多种。
[0016]
进一步的，所述两亲性超支化共聚物还包括500-1000质量份的水。
[0017]
本发明另一目的在于提供一种所述半粘性鱼卵脱粘剂的制备方法，包括如下步骤：
[0018]
称取经筛绢进行筛滤的滑石粉、单宁、两亲性超支化共聚物混合，加水，搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0019]
本发明再一目的在于提供一种所述半粘性鱼卵脱粘剂在云南吻孔鲃人工繁殖中的应用。
[0020]
进一步的，所述半粘性鱼卵脱粘剂在云南吻孔鲃人工繁殖中的应用是将云南吻孔鲃受精卵置于脱粘剂中脱粘后孵化。
[0021]
进一步的，所述脱粘脱粘后孵化操作具体为将所述脱粘剂倒入受精卵中，搅拌，脱粘完成后，洗去脱粘剂，孵化。
[0022]
优选地，脱粘搅拌时间为1-3分钟。本方案所制得的脱粘剂脱粘时间适中，避免了单纯添加单宁脱粘剂进行脱粘时，需要在10s内完成脱粘操作，不然会产生有害作用，降低操作难度；同时，也避免了单纯添加滑石粉脱粘剂，操作时间长，脱粘效率低的问题。
[0023]
优选地，孵化温度为18-25℃，孵化ph为6.5-7.5。
具体实施方式
[0024]
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
[0025]
两亲性超支化共聚物购买自西安瑞禧生物科技有限公司。
[0026]
实施例1：脱粘剂的制备。
[0027]
称取经80目筛绢进行筛滤的20重量份滑石粉、3重量份单宁、10重量份两亲性超支化peg-b-pcl加入烧杯中，加767重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0028]
实施例2：脱粘剂的制备。
[0029]
称取经80目筛绢进行筛滤的40重量份滑石粉、1重量份单宁、5重量份两亲性超支化pei-pblg加入烧杯中，加754重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0030]
实施例3：脱粘剂的制备。
[0031]
称取经80目筛绢进行筛滤的25重量份滑石粉、2.5重量份单宁、9重量份两亲性超支化peg-b-peege加入烧杯中，加763.5重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0032]
实施例4：脱粘剂的制备。
[0033]
称取经80目筛绢进行筛滤的35重量份滑石粉、1.5重量份单宁、6重量份两亲性超支化peg-b-pcl加入烧杯中，加757.5重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0034]
实施例5：脱粘剂的制备。
[0035]
称取经80目筛绢进行筛滤的30重量份滑石粉、2重量份单宁、7重量份两亲性超支化pei-pblg加入烧杯中，加761重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0036]
实施例6：脱粘剂的制备。
[0037]
称取经80目筛绢进行筛滤的30重量份滑石粉、2重量份单宁、8重量份两亲性超支化peg-b-peege加入烧杯中，加760重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0038]
实施例7：脱粘剂的制备。
[0039]
称取经80目筛绢进行筛滤的28重量份滑石粉、1.8重量份单宁、7.5重量份两亲性超支化peg-b-pcl加入烧杯中，加762.7重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0040]
实施例8：脱粘剂的制备。
[0041]
称取经80目筛绢进行筛滤的28重量份滑石粉、1.8重量份单宁、7.5重量份两亲性超支化hbpo-g-dma加入烧杯中，加762.7重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0042]
实施例9：脱粘剂的制备。
[0043]
称取经80目筛绢进行筛滤的28重量份滑石粉、1.8重量份单宁、7.5重量份两亲性超支化聚(l-谷氨酸-γ-苄基酯)-g-聚乙二醇加入烧杯中，加762.7重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0044]
实施例10：脱粘剂的制备。
[0045]
称取经80目筛绢进行筛滤的28重量份滑石粉、1.8重量份单宁、7.5重量份两亲性超支化聚芳醚酮-g-聚乙二醇加入烧杯中，加762.7重量份水中溶解，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0046]
实施例11：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0047]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0048]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例1制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例1制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为
6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为80.7％。
[0049]
实施例12：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0050]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0051]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例2制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例2制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为80.1％。
[0052]
实施例13：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0053]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0054]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例3制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例3制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为83.7％。
[0055]
实施例14：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0056]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0057]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例4制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例4制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为84.2％。
[0058]
实施例15：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0059]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0060]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例5制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例5制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为87.8％。
[0061]
实施例16：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0062]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0063]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例6制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例6制得的
脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为87.5％
[0064]
实施例17：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0065]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0066]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例7制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例7制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为86.9％。
[0067]
实施例18：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0068]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0069]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例8制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例8制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为92.7％。
[0070]
实施例19：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0071]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0072]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例9制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例9制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为92.6％。
[0073]
实施例20：云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化。
[0074]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0075]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例10制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌1-3分钟，用清水换洗几次，洗去实施例10制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为93.5％。
[0076]
对比例1
[0077]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0078]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例1制得的脱
粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌30s，用清水换洗几次，洗去实施例1制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为62.4％。
[0079]
对比例2
[0080]
采取称重法计数，将云南吻孔鲃受精卵放在烧杯中，并在电子计重秤上称取1kg，称完后再称取2g受精卵计数，最后换算成共有多少受精卵，记录受精卵的个数。
[0081]
受精卵称重后，反复用清水洗卵2-3次，适应8min-10min，分别用实施例1制得的脱粘剂10l沿容器内壁缓缓倒入烧杯中，搅拌4分钟，用清水换洗几次，洗去实施例1制得的脱粘剂，倒入孵化器中进行流水孵化，孵化期间水温18-25℃、溶氧6mg/l-8mg/l，孵化ph为6.5-7.5，每日观察记录鱼卵发育情况。计算孵化率，孵化率计算公式如下：孵化率＝孵出鱼仔数/受精卵数
×
100％。孵化率为68.7％。
[0082]
对比例3
[0083]
称取经80目筛绢进行筛滤的20重量份滑石粉加入烧杯中，加780重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0084]
将制得半粘性鱼卵脱粘剂运用于云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化，脱粘孵化步骤同实施例12。孵化率为35.7％。
[0085]
对比例4
[0086]
称取经80目筛绢进行筛滤的3重量份单宁加入烧杯中，加797重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0087]
将制得半粘性鱼卵脱粘剂运用于云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化，脱粘孵化步骤同实施例12。孵化率为41.6％。
[0088]
对比例5
[0089]
称取经80目筛绢进行筛滤的20重量份滑石粉、3重量份单宁加入烧杯中，加777重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0090]
将制得半粘性鱼卵脱粘剂运用于云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化，脱粘孵化步骤同实施例12。孵化率为76.8％。
[0091]
对比例6
[0092]
称取经80目筛绢进行筛滤的20重量份滑石粉、10重量份两亲性超支化peg-b-pcl加入烧杯中，加770重量份水，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0093]
将制得半粘性鱼卵脱粘剂运用于云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化，脱粘孵化步骤同实施例12。孵化率为42.6％。
[0094]
对比例7
[0095]
称取经80目筛绢进行筛滤的3重量份单宁、10重量份两亲性超支化peg-b-pcl加入烧杯中，加787重量份水中溶解，室温搅拌均匀，制得半粘性鱼卵脱粘剂。
[0096]
将制得半粘性鱼卵脱粘剂运用于云南吻孔鲃受精卵的脱粘孵化，脱粘孵化步骤同实施例12。孵化率为65.4％。
[0097]
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制，尽管对照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解，技术
人员阅读本技术说明书后依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换，但这些修改或变更均未脱离本发明申请待批权利要求保护范围之内。