一种心肌肽脂质体及其制备方法与流程

1.本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种心肌肽及其制备方法。


背景技术：

2.围手术期是围绕手术的一个全过程，从病人决定接受手术治疗开始，到手术治疗直至基本康复，包含手术前、手术中及手术后的一段时间，具体是指从确定手术治疗时起，直到与这次手术有关的治疗基本结束为止，时间约在术前5-7天至术后7-12天。
3.心肌肽是一种小分子多肽，现有临床研究结果表明在心脏外科手术围术期使用心肌肽可改善心肌超微结构，但是心肌肽对于手术病人的整体获益、心功能等情况的该善尚不明确。现有的心肌肽制剂产品为注射用心肌肽，为普通的冻干粉针剂，可用于冠状动脉粥样硬化性心脏病旁路移植术、慢性瓣膜性心脏病瓣膜置换术及其他心脏手术，均需在手术过程中持续滴注，并在术后三天每日持续滴注。心脏手术作为风险性较高的外科手术，手术过程中对药物的使用较为严格，手术过程中给药可能对手术的实施、监测、安全带来风险，且术后恢复较慢，术后持续给药对患者的顺应性体验较差。因此，提供一种心肌肽缓释制剂成为了本领域人员亟待解决的技术问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种心肌肽及其制备方法，所述的心肌肽脂质体具有良好的缓释功能，能够在8天内稳定且高效的释放。
5.为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
6.一种心肌肽脂质体，包括以下重量份的组分：0.5～10份心肌肽、1～30份磷脂、0.5～10份胆固醇、0.1～5份表面活性剂、1～20份冻干保护剂。
7.本发明通过以磷脂、胆固醇作为形成脂质体载体骨架的基础材料，再通过辅以表面活性剂、冻干保护剂，从而制备得到心肌肽脂质体。
8.在上述脂质体中，磷脂结构中具有亲水性基团和亲油性基团，在制备脂质体过程中可形成包封药物的磷脂双分子层，所述的胆固醇在结构上同样具有亲油与亲水基团，其亲油性较亲水性强，与磷脂混合形成分子相互间隔定向排列的双分子脂质膜，从而有效的包封心肌肽，另一方面，胆固醇对磷脂的相变具有双向调节作用，当温度在磷脂相变温度以上时，胆固醇可降低膜的流动性，当温度在磷脂相变温度以下时，胆固醇可增加膜的柔韧性，且胆固醇的在脂质体中的使用可改善脂质体的稳定性。
9.本发明的发明人在大量的研究中发现，通过将上述原料按照上述特定的重量份进行组合可以使所述的心肌肽脂质体具有缓释功能，从而具备长效治疗潜力，术前给药后可在整个围术期持续发挥药效，避免在手术期间给药，提高手术过程的便捷性及安全性，减少术后给药次数，提高临床使用顺应性。
10.在上述重量份下进行组合，所述的心肌肽脂质体能够在8天内稳定且高效的释放，从而使所述的心肌肽脂质体在8天内只需给药一次。
11.作为本发明的优选实施方案，所述心肌肽脂质体包括以下重量份的组分：2～8份心肌肽、5～20份磷脂、1～5份胆固醇、1～5份表面活性剂、3～15份冻干保护剂。尤其是将上述各种原料控制在上述的重量份配比下，能够进一步提高缓释效果。
12.作为本发明的优选实施方案，所述心肌肽脂质体包括以下重量份的组分：4份心肌肽、13份磷脂、2份胆固醇、1份表面活性剂、12份冻干保护剂。
13.作为本发明的优选实施方案，所述磷脂为氢化大豆磷脂酰胆碱、氢化大豆磷脂酰甘油、二棕榈酸磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、聚乙二醇磷脂、甘油磷脂酰胆碱中的至少一种。
14.本发明的发明人在大量的研究中发现，不同种类及组成的磷脂对脂质体制剂的缓释功能具有显著影响，通过选择上述的磷脂能够有效的提高缓释功能。
15.作为本发明的优选实施方案，所述表面活性剂为烷基葡糖苷、脂肪酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、聚乙二醇、泊洛沙姆中的至少一种。上述所述的表面活性剂具有亲水性和亲油性，在脂质体中应用可调节脂质体制剂形态结构及稳定性，对脂质体具有调节作用。
16.作为本发明的优选实施方案，所述冻干保护剂为甘露醇、海藻糖、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、l-丝氨酸、谷氨酸钠、丙氨酸、甘氨酸、肌氨酸中的至少一种。选取上述所述的冻干保护剂一方面可使冻干制剂更易成型，降低冻干工艺难度，另一方面可保护脂质体结构在冻干过程中不被轻易破坏。
17.作为本发明的优选实施方案，所述心肌肽脂质体还包括以下重量份的组分：1～10份缓冲剂。
18.作为本发明的优选实施方案，所述缓冲剂为醋酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、tris-盐酸缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液中的至少一种。
19.本发明还提供了一种心肌肽脂质体的制备方法，包括以下步骤：
20.将磷脂、胆固醇、表面活性剂溶于有机溶剂中，除去有机溶剂，得到油相；
21.将心肌肽、缓冲液、冻干保护剂加入到去离子水中，搅拌均匀，得到水相；
22.将水相加入到油相中进行水化、整粒，除菌过滤，冻干，即得所述的心肌肽脂质体。
23.作为本发明的优选实施方案，所述有机溶剂为乙醇、氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氢呋喃、丙酮、乙酸乙酯中的至少一种。
24.本发明的有益效果在于：所述的心肌肽脂质体具有缓释功能，从而具备长效治疗潜力，术前给药后可在整个围术期持续发挥药效，避免在手术期间给药，提高手术过程的便捷性及安全性，减少术后给药次数，提高临床使用顺应性。
附图说明
25.图1为实施例1～7所述的心肌肽脂质体体外释放曲线。
具体实施方式
26.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提
下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
27.具体的分散、搅拌处理方式没有特别限制。
28.在本发明中，除特别声明，所述的份均为重量份。
29.本发明所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本发明实施例及对比例中使用的原料信息如下：
30.实施例1
31.一种心肌肽脂质体，包括以下重量份的组分：2份心肌肽、10份磷脂、2份胆固醇、3份表面活性剂、5份缓冲剂、14份冻干保护剂。
32.所述磷脂为聚乙二醇磷脂，所述表面活性剂为peg-400，所述缓冲剂为ph为7.2的磷酸盐缓冲剂，所述冻干保护剂包括10重量份甘露醇、4重量份蔗糖。
33.所述的心肌肽脂质体的制备方法，包括以下步骤：
34.将磷脂、胆固醇、表面活性剂加入到氯仿中，在50℃下溶解，通过旋转蒸发除去有机溶剂，得到油相，其中氯仿与磷脂、胆固醇、表面活性剂的重量比为4：1；
35.将心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂加入到去离子水中，搅拌均匀，得到水相，其中去离子水与心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂的重量比为4：1；
36.将水相加入到油相中，置于高速剪切机中进行乳化，再置于高压微射流均质机中，在20℃下匀化脂质体，过超滤系统去除未包裹的心肌肽，并浓缩样品至5mg/ml，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，冻干，即得所述的心肌肽脂质体。
37.实施例2
38.一种心肌肽脂质体，包括以下重量份的组分：2份心肌肽、10份磷脂、2份胆固醇、3份表面活性剂、5份缓冲剂、11份冻干保护剂。
39.所述磷脂包括5重量份聚乙二醇磷脂、5重量份二硬脂酰磷脂酰胆碱，所述表面活性剂为泊洛沙姆，所述缓冲剂为ph为7.2的磷酸盐缓冲剂，所述冻干保护剂包括6重量份甘露醇、5重量份海藻糖。
40.将磷脂、胆固醇、表面活性剂加入到氯仿/乙醇(氯仿、乙醇重量比为1:1)中，在50℃下溶解，通过旋转蒸发除去有机溶剂，得到油相，其中氯仿/乙醇与磷脂、胆固醇、表面活性剂的重量比为4：1；
41.将心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂加入到去离子水中，搅拌均匀，得到水相，其中去离子水与心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂的重量比为4：1；
42.将水相加入到油相中，置于高速剪切机中进行乳化，再置于高压微射流均质机中，在20℃下匀化脂质体，过超滤系统去除未包裹的心肌肽，并浓缩样品至10mg/ml，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，冻干，即得所述的心肌肽脂质体。
43.实施例3
44.一种心肌肽脂质体，包括以下重量份的组分：4份心肌肽、13份磷脂、2份胆固醇、1份表面活性剂、5份缓冲剂、12份冻干保护剂。
45.所述磷脂包括10重量份二棕榈酸磷脂酰胆碱、3重量份聚乙二醇磷脂，所述表面活性剂为泊洛沙姆，所述缓冲剂为ph为7.2的磷酸盐缓冲剂，所述冻干保护剂包括7重量份甘露醇、5重量份乳糖。
46.将磷脂、胆固醇、表面活性剂加入到氯仿，在50℃下溶解，通过旋转蒸发除去有机
溶剂，得到油相，其中氯仿与磷脂、胆固醇、表面活性剂的重量比为4：1；
47.将心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂加入到去离子水中，搅拌均匀，得到水相，其中去离子水与心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂的重量比为4：1；
48.将水相加入到油相中，置于高速剪切机中进行乳化，再置于氮气挤出器中，在10℃下匀化脂质体，过超滤系统去除未包裹的心肌肽，并浓缩样品至10mg/ml，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，冻干，即得所述的心肌肽脂质体。
49.实施例4
50.一种心肌肽脂质体，包括以下重量份的组分：8份心肌肽、20份磷脂、5份胆固醇、5份表面活性剂、10份缓冲剂、14份冻干保护剂。
51.所述磷脂包括12重量份氢化大豆磷脂酰胆碱、8重量份聚乙二醇磷脂，所述表面活性剂为peg-400，所述缓冲剂为ph为7.2的磷酸盐缓冲剂，所述冻干保护剂包括10重量份甘露醇、4重量份海藻糖。
52.将磷脂、胆固醇、表面活性剂加入到氯仿，在50℃下溶解，通过旋转蒸发除去有机溶剂，得到油相，其中氯仿与磷脂、胆固醇、表面活性剂的重量比为4：1；
53.将心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂加入到去离子水中，搅拌均匀，得到水相，其中去离子水与心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂的重量比为4：1；
54.将水相加入到油相中，置于高速剪切机中进行乳化，再置于高压微射流均质机中，在5℃下匀化脂质体，过超滤系统去除未包裹的心肌肽，并浓缩样品至20mg/ml，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，冻干，即得所述的心肌肽脂质体。
55.实施例5
56.一种心肌肽脂质体，包括以下重量份的组分：5份心肌肽、12份磷脂、8份胆固醇、3份表面活性剂、5份缓冲剂、12份冻干保护剂。
57.所述磷脂包括8重量份氢化大豆磷脂酰胆碱、4重量份甘油磷脂酰胆碱，所述表面活性剂为peg-400，所述缓冲剂为ph为7.2的磷酸盐缓冲剂，所述冻干保护剂包括10重量份海藻糖、2重量份蔗糖。
58.将磷脂、胆固醇、表面活性剂加入到氯仿，在50℃下溶解，通过旋转蒸发除去有机溶剂，得到油相，其中氯仿与磷脂、胆固醇、表面活性剂的重量比为4：1；
59.将心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂加入到去离子水中，搅拌均匀，得到水相，其中去离子水与心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂的重量比为4：1；
60.将水相加入到油相中，置于高速剪切机中进行乳化，再置于高压微射流均质机中，在0℃下匀化脂质体，过超滤系统去除未包裹的心肌肽，并浓缩样品至5mg/ml，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，冻干，即得所述的心肌肽脂质体。
61.实施例6
62.一种心肌肽脂质体，包括以下重量份的组分：4份心肌肽、13份磷脂、2份胆固醇、1份表面活性剂、5份缓冲剂、12份冻干保护剂。
63.所述磷脂包括10重量份二棕榈酸磷脂酰胆碱、3重量份聚乙二醇磷脂，所述表面活性剂为泊洛沙姆，所述缓冲剂为ph为6的柠檬酸盐缓冲剂，所述冻干保护剂包括7重量份甘露醇、5重量份乳糖。
64.将磷脂、胆固醇、表面活性剂加入到氯仿，在50℃下溶解，通过旋转蒸发除去有机
溶剂，得到油相，其中氯仿与磷脂、胆固醇、表面活性剂的重量比为4：1；
65.将心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂加入到去离子水中，搅拌均匀，得到水相，其中去离子水与心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂的重量比为4：1；
66.将水相加入到油相中，置于高速剪切机中进行乳化，再置于氮气挤出器中，在10℃下匀化脂质体，过超滤系统去除未包裹的心肌肽，并浓缩样品至10mg/ml，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，冻干，即得所述的心肌肽脂质体。
67.实施例7
68.一种心肌肽脂质体，包括以下重量份的组分：4份心肌肽、13份磷脂、2份胆固醇、1份表面活性剂、5份缓冲剂、12份冻干保护剂。
69.所述磷脂包括10重量份二棕榈酸磷脂酰胆碱、3重量份聚乙二醇磷脂，所述表面活性剂包括1.5重量份泊洛沙姆、1.5重量份peg-400，所述缓冲剂为ph为7.2的磷酸盐缓冲剂，所述冻干保护剂包括7重量份甘露醇、5重量份乳糖。
70.将磷脂、胆固醇、表面活性剂加入到氯仿，在50℃下溶解，通过旋转蒸发除去有机溶剂，得到油相，其中氯仿与磷脂、胆固醇、表面活性剂的重量比为4：1；
71.将心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂加入到去离子水中，搅拌均匀，得到水相，其中去离子水与心肌肽、缓冲剂、冻干保护剂的重量比为4：1；
72.将水相加入到油相中，置于高速剪切机中进行乳化，再置于氮气挤出器中，在10℃下匀化脂质体，过超滤系统去除未包裹的心肌肽，并浓缩样品至10mg/ml，用0.22μm微孔滤膜除菌过滤，冻干，即得所述的心肌肽脂质体。
73.为了进一步证明本发明的效果，提供了以下测试方法：
74.将各实施例、对比例1(对比例1为市售的心肌肽注射液)中的心肌肽脂质体分别装入透析袋中，两端夹好后，在相应条件下进行体外释放测试，分别于0、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8天取扩散池中的药液测定心肌肽含量，并根据释放时间和累积释放度绘制心肌肽脂质体体外释放曲线，释放曲线结果如图1，释放度如表1所示。
75.表1实施例1～7所述的心肌肽脂质体体外累积缓释度
[0076][0077]
从图1、表1中可看出，本发明所涉及的心肌肽脂质体可在8天内持续释放，释放达80％～90％需要6天，8天后接近完全释放，体外释放结果表明本发明所涉及的心肌肽脂质体具显著的缓释作用，术前给药后在围术期持续释放心肌肽，可避免手术期间给药、术后持续给药的缺陷，具有提高手术便捷性、安全性以及患者顺应性的潜力。
[0078]
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。