二氢异喹啉酮和异吲哚啉酮衍生物及其用途

1.本发明涉及制药领域，特别是涉及含有二氢异喹啉酮/异吲哚啉酮结构和嘧啶/吡啶结构的化合物及其制备方法，及其用于治疗和/或预防疾病的方法和用途。


背景技术：

2.细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)蛋白家族由作为细胞分裂周期的关键调节物(细胞周期cdk)、参与基因转录调节(转录cdk)的成员、以及具有其他功能的成员组成。cdk需要激活与调节性细胞周期蛋白亚基的联系。细胞周期cdk中的cdk1/细胞周期蛋白b、cdk2/细胞周期蛋白a、cdk2/细胞周期蛋白e、cdk4/细胞周期蛋白d和cdk6/细胞周期蛋白d被相继激活，以驱动细胞进入并通过细胞分裂周期。转录cdk中的cdk9/细胞周期蛋白t和cdk7/细胞周期蛋白h通过羧基末端结构域(ctd)的磷酸化来调节rna聚合酶ii的活性。正转录因子b(p-tefb)是cdk9与四种细胞周期蛋白配偶子(细胞周期蛋白t1、细胞周期蛋白k、细胞周期蛋白t2a或t2b)之一的异二聚体。
3.cdk9(ncbi基因库基因id1025)排他性地参与转录调节，而cdk7额外作为cdk-激活激酶(cak)参与细胞周期调节。
4.通过rna聚合酶ii对基因的转录由预引发复合物在启动子区的组装以及ctd的ser5和ser7通过cdk7/细胞周期蛋白h的磷酸化而启动。对于大部分基因，rna聚合酶ii在其沿dna模板移动20-40个核苷酸之后停止mrna转录。rna聚合酶ii的这种启动子近侧暂停由负向延长因子介导，并且被认为是对快速诱导的基因响应各种刺激表达进行调节的主要控制机制(cho等人，cell cycle 9，1697，2010)。p-tefb关键性地参与克服rna聚合酶ii的启动子近侧暂停，以及通过ctd的ser2的磷酸化和负向延长因子的磷酸化和失活转变为多产的延长状态。
5.p-tefb自身的活性受多种机制调节。约一半细胞的p-tefb以与7sk小核rna(7sk snrna)、la-相关蛋白7(larp7/pip7s)和六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白1/2的失活复合物形式存在(hexim1/2，he等人，mol cell 29，588，2008))。剩余一半p-tefb以包含溴结构域蛋白brd4的活性复合物形式存在(yang等人，mol cell 19，535，2005)。brd4通过与乙酰化组蛋白的相互作用将p-tefb募集至预备用于基因转录的染色质区域。通过交替地与正调节物和负调节物相互作用，p-tefb维持在功能平衡中：与7sk snrna复合物结合的p-tefb代表可以根据细胞转录和细胞增殖的需要释放活性p-tefb的储库。此外，通过包括磷酸化/去磷酸化、泛素化和乙酰化的转录后修饰来调节p-tefb的活性。
6.p-tefb异二聚体的cdk9激酶活性的活性失调与多种人类病理学情形如过度增殖性疾病(例如癌症)、病毒诱导的感染性疾病或心血管疾病相关。
7.癌症被认为是由增殖和细胞死亡(细胞凋亡)的失衡介导的过度增殖性病症。在各种人类肿瘤中发现高水平的抗细胞凋亡bcl-2-家族蛋白，其导致肿瘤细胞存活延长和治疗耐受性。p-tefb激酶活性的抑制表现为降低rna聚合酶ii的转录活性，导致短寿的抗细胞凋亡蛋白(尤其是mcl-1和xiap)的减少，恢复肿瘤细胞经历细胞凋亡的能力。与转化的肿瘤表
型相关的多种其他蛋白(例如myc、nf-kb应答基因转录物、有丝分裂激酶)要么是短寿蛋白，要么被短寿转录物(其对由p-tefb抑制介导的rna聚合酶ii的活性降低敏感)编码。
8.关于cdk9抑制剂的耐药性未有研究，本发明通过长期给药的方法获得了cdk9抑制剂耐药的细胞株，并发现了本发明的化合物能够抑制长期用cdk9抑制剂而耐药的细胞株。进一步进行蛋白表达耐药细胞株中cdk9突变的蛋白，通过检测发现本发明的化合物能够克服cdk9的耐药突变。
9.此外，许多病毒依赖于宿主细胞的转录机制以转录其自身的基因组。在hiv-1的情况下，rna聚合酶ii被募集至病毒ltr内的启动子区域。病毒转录激活子(tat)蛋白结合新生的病毒转录物并克服由p-tefb的募集引起的启动子近侧rna聚合酶ii暂停，这反过来促进转录延伸。此外，tat蛋白通过替换7sk snrna复合物内的p-tefb抑制蛋白hexim1/2来增加活性p-tefb部分。最新数据表明，抑制p-tefb的激酶活性足以在对宿主细胞无细胞毒性的激酶抑制剂浓度下阻断hiv-1复制(综述于wang&fischer，trends pharmacol sci29，302，2008)。类似地，对于其他病毒已报道了由病毒蛋白募集p-tefb，例如b-细胞癌症相关的爱泼斯坦-巴尔(epstein-barr)病毒，其中核抗原ebna2与p-tefb相互作用(bark-jones等人，oncogene25，1775，2006)，和人类t-嗜淋巴细胞病毒1型(htlv-1)，其中转录激活子tax募集p-tefb(zhou等人，j virol 80，4781，2006)。
10.心脏肥大，是心脏对机械过载和压力(血液动力学压力，例如高血压、心肌梗死)的适应性反应，长期可导致心衰和死亡。心脏肥大表现为与心肌细胞中增加的转录活性和rna聚合酶ii ctd磷酸化有关。发现p-tefb通过从失活的7sk snrna/hexim1/2复合物的解离而被激活。这些发现表明，p-tefb激酶活性的药理学抑制可作为治疗心脏肥大的治疗方法(综述于dey等人，cell cycle 6，1856，2007)。
11.总之，多个证据线索表明选择性抑制p-tefb异二聚体(＝cdk9和四种细胞周期蛋白配偶子(细胞周期蛋白t1、细胞周期蛋白k、细胞周期蛋白t2a或t2b)之一)的cdk9激酶活性代表了用于治疗疾病例如癌症、病毒性疾病和/或心脏疾病的新方法。cdk9属于至少13个密切相关的激酶家族，其中细胞周期cdk的亚组在调节细胞增殖中履行多种作用。因此，预期细胞周期cdk(例如cdk1/细胞周期蛋白b、cdk2/细胞周期蛋白a、cdk2/细胞周期蛋白e、cdk4/细胞周期蛋白d、cdk6/细胞周期蛋白d)和cdk9的共同抑制影响正常增殖的组织，例如肠粘膜、淋巴和造血器官以及生殖器官。为使cdk9激酶抑制的治疗范围最大化，因此需要对cdk9具有高选择性的分子。
12.总体上，尽管各种cdk抑制剂是已知的，但仍需要选择性cdk9抑制剂用于治疗疾病如过度增殖性疾病、病毒性疾病和/或心脏疾患，其与现有技术已知的化合物相比提供一种或多种优势。


技术实现要素：

13.本发明涉及一种激酶抑制剂，其包括式(i)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0014][0015]
其中，a选自环己基、苯基、吡啶基和哌啶基；
[0016]
x为ch或n；
[0017]
z为-nh-或-nh-c(＝o)-；
[0018]
n为0或1；
[0019]
r1选自氢、卤素、氰基、(c1-c6)烷基、和(c1-c6)卤代烷基；
[0020]
r2选自氢和(c1-c6)烷基，或者两个r2一起形成(c3-c6)环烷基；
[0021]
m选自1-3的整数，且每个r3各自独立地选自氢、-nh-(c1-c3)烷基-(c1-c3)烷氧基、卤素、(c1-c6)烷基、(c1-c6)烷氧基、(c1-c6)卤代烷基、(c1-c6)烷基酰氨基、(c1-c6)烷基磺酰基、(c1-c6)烷基磺酰氨基、氨基磺酰基、(c1-c6)烷基胺基磺酰基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基磺酰基、羧基(c1-c3)烷基、氨基磺酰基(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷基磺酰基(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷基磺酰基(c3-c6)环烷基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基氨酰基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基、-s(＝o)(＝nh)(c1-c3)烷基、和-(c1-c3)烷基-s(＝o)(＝nh)(c1-c3)烷基；
[0022]
r4选自氢和(c1-c6)烷基。
[0023]
在优选的实施方式中，本发明涉及式(ia)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0024][0025]
其中x、n、r1、r2、r3、和r4如前文所定义。
[0026]
在该实施方式中，x优选为n；在又一实施方式中，r3优选为-nh-(c1-c3)烷基-(c1-c3)烷氧基或羧基(c1-c3)烷基。
[0027]
在另外优选的实施方式中，本发明涉及式(ib)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0028][0029]
其中，y为ch或n；x、m、n、r1、r2、r3、和r4如前文所定义。
[0030]
在更优选的方面，x为n；在其他优选的方面，y为ch。
[0031]
在另外优选的方面，每个r3各自独立地选自卤素、(c1-c6)烷基、(c1-c6)烷氧基、(c1-c6)卤代烷基、(c1-c6)烷基磺酰基、(c1-c6)烷基磺酰氨基、氨基磺酰基、(c1-c6)烷基胺基磺酰基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基磺酰基、氨基磺酰基(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷基磺酰基(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷基磺酰基(c3-c6)环烷基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基氨酰基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基、-s(＝o)(＝nh)(c1-c3)烷基、和-(c1-c3)烷基-s(＝o)(＝nh)(c1-c3)烷基。
[0032]
在另外优选的实施方式中，本发明涉及式(ic)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0033][0034]
其中x、n、r1、r2、r3和r4如前文所定义。
[0035]
在更优选的方面，r3为(c1-c6)烷基酰氨基。
[0036]
在另外优选的实施方式中，本发明涉及式(id)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0037][0038]
其中x、n、r1、r2、r3和r4如前文所定义。
[0039]
在该实施方式中，x优选为n；在更优选的方面，r3为(c1-c6)烷基磺酰基。
[0040]
另一方面，本技术还涉及包含本发明的激酶抑制剂和药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物。
[0041]
在其他方面，本技术涉及本发明的激酶抑制剂在制备用于治疗过度增殖性疾病、病毒诱导的感染性疾病和心血管疾病的药物中的用途。
[0042]
在另一方面，本技术还涉及使用本发明的激酶抑制剂治疗过度增殖性疾病、病毒诱导的感染性疾病和心血管疾病的方法。
具体实施方式
[0043]
定义
[0044]
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域普通技术人员通常所理解的含义。在说明书中，除非上下文另有明确说明，单数形式也包含复数形式。本文提到的所有出版物、专利申请、专利或其它参考文献均通过引入本文作为参考。在存在抵触的情况下，以本说明书(包括定义在内)为准。此外，材料、方法和实施例都仅是说明性的，并不意在限制本发明的范围。
[0045]
除非另有说明，本发明采用本领域技术范围内的质谱、nmr、hplc、蛋白质化学、生物化学、重组dna技术和药理学等常规方法。除非提供具体的定义，否则与本文描述的分析化学、合成有机化学、以及医学和药物化学等化学上相关的命名和实验室操作和技术，是本领域技术人员已知的。一般而言，前述技术和步骤可以通过本领域众所周知的和在各种一般文献和更具体文献中描述的常规方法来实施，这些文献在本说明书中被引用和讨论。
[0046]
术语“烷基”是指脂肪族烃基团，可以是支链或直链的烷基。根据结构，烷基可以是单价基团或双价基团(即亚烷基)。在本发明中，烷基优选是具有1-8个碳原子的烷基，更优选具有1-6个碳原子的“低级烷基”，甚至更优选具有1-3个碳原子的烷基。典型的烷基包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基等。应理解，本文提到的“烷基”包括可能存在的所有构型和构象的该烷基，例如本文提到的“丙基”包括正丙基和异丙基，“丁基”包括正丁基、异丁基和叔丁基，“戊基”包括正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、和戊-3-基等。
[0047]
术语“烷氧基”是指-o-烷基，其中烷基如本文中定义。典型的烷氧基包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基等。
[0048]
术语“烷氧基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的烷氧基取代。
[0049]
术语“环烷基”是指单环或多环基，其仅含有碳和氢。环烷基包括具有3-12个环原子的基团。根据结构，环烷基可以是单价基团或双价基团(例如亚环烷基)。在本发明中，环烷基优选是具有3-8个碳原子的环烷基，更优选具有3-6个碳原子的“低级环烷基”。环烷基的例子包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和金刚烷基。
[0050]
术语“烷基(环烷基)”或“环烷基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的环烷基取代。非限制性的环烷基烷基包括环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基等。
[0051]
术语“芳香基”是指平面环具有离域的π电子系统并且含有4n 2个π电子，其中n是整数。芳香基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。芳香基可以是任选取代的。术语“芳香基”包括碳环芳基(例如苯基)和杂环芳基(或“杂芳基”或“杂芳香基”)基团(例如吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(即共用相邻的碳原子对的环)基团。
[0052]
本文使用的术语“芳基”是指芳香基环中每一个构成环的原子都是碳原子。芳基环可以由五、六、七、八、九或多于九个原子构成。芳基可以是任选取代的。芳基的实例包括但不限于苯基、萘基、菲基、蒽基、芴基和茚基。根据结构，芳基可以是单价基团或双价基团(即亚芳基)。
[0053]
术语“芳氧基”是指-o-芳基，其中芳基如本文中定义。
[0054]
术语“杂芳基”是指芳基中包括一个或多个选自氮、氧和硫的环杂原子。含n“杂芳基”部分是指芳香基中环上至少有一个骨架原子是氮原子。根据结构，杂芳基可以是单价基团或双价基团(即亚杂芳基)。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基等。
[0055]
本文使用的术语“杂烷基”是指本文定义的烷基中的一个或多个骨架链原子是杂原子，例如氧、氮、硫、硅、磷或它们的组合。所述杂原子(一个或多个)可以位于杂烷基内部的任意位置或在杂烷基与分子的其余部分相连的位置。
[0056]
本文使用的术语“杂环烷基”或“杂环基”是指非芳香基环中一个或多个构成环的原子是选自氮、氧和硫的杂原子。杂环烷基环可以是由三、四、五、六、七、八、九或多于九个原子构成的单环或多环。杂环烷基环可以是任选取代的。杂环烷基的实例包括但不限于内酰胺、内酯、环亚胺、环硫代亚胺、环氨基甲酸酯、四氢噻喃、4h-吡喃、四氢吡喃、哌啶、1,3-二噁英、1,3-二噁烷、1,4-二噁英、1,4-二噁烷、哌嗪、1,3-氧硫杂环己烷、1,4-氧硫杂环己二烯、1,4-氧硫杂环己烷、四氢-1,4-噻嗪、2h-1,2-噁嗪、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、巴比妥酸、硫代巴比妥酸、二氧代哌嗪、乙内酰脲、二氢尿嘧啶、吗啉、三噁烷、六氢-1,3,5-三嗪、四氢噻吩、四氢呋喃、吡咯啉、吡咯烷、咪唑烷，吡咯烷酮、吡唑啉、吡唑烷、咪唑啉、咪唑烷、1,3-二氧杂环戊烯、1,3-二氧杂环戊烷、1,3-二硫杂环戊烯、1,3-二硫杂环戊烷、异噁唑啉、异噁唑烷、噁唑啉、噁唑烷、噁唑烷酮、噻唑啉、噻唑烷和1,3-氧硫杂环戊烷。根据结构，杂环烷基可以是单价基团或双价基团(即亚杂环烷基)。
[0057]
术语“烷基(杂环烷基)”或“杂环烷基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的杂环烷基取代。
[0058]
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
[0059]
术语“卤代烷基”、“卤代烷氧基”和“卤代杂烷基”包括烷基、烷氧基或杂烷基的结构，其中至少一个氢被卤原子置换。在某些实施方式中，如果两个或更多氢原子被卤原子置换，所述卤原子彼此相同或不同。
[0060]
术语“羟基”是指-oh基团。
[0061]
术语“氰基”是指-cn基团。
[0062]
术语“羧基”是指-cooh的基团。
[0063]
术语“酯基”是指具有式-coor的化学部分，其中r选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基(通过环碳连接)和杂环基(通过环碳连接)。
[0064]
术语“氨基”是指-nh2基团。
[0065]
术语“氨酰基”是指-co-nh2基团。
[0066]
术语“烷基氨酰基”是指-co-nh-r基团，其中r为本文定义的烷基。
[0067]
术语“酰胺基”或“酰氨基”是指-nr-co-r’，其中r和r’各自独立地为氢或烷基。
[0068]
术语“烷基氨基”是指进一步被一个或两个烷基取代的氨基取代基，具体是指基团-nrr’，其中r和r’各自独立地选自氢或低级烷基，条件是-nrr’不是-nh2。“烷基氨基”包括其中-nh2的氮连接至少一个烷基基团的化合物的基团。烷基氨基基团的例子包括但不限于，甲基氨基、乙基氨基等。“二烷基氨基”包括其中-nh2的氮连接至少两个其它烷基基团的基团。二烷基氨基基团的例子包括但不限于，二甲基氨基、二乙基氨基等。
[0069]
术语“环烷基氨基”是指进一步被一个或两个本文所定义的环烷基取代的氨基取代基。
[0070]
术语“杂环烷基氨基”是指本文定义的氨基被本文定义的杂环烷基取代。
[0071]
术语“烷基氨基烷基”是指本文定义的烷基被本文定义的烷基氨基取代。
[0072]
术语“氨基烷基”是指进一步被一个或多个氨基取代的烷基取代基。
[0073]
术语“氨基烷氧基”是指进一步被一个或多个氨基取代的烷氧基取代基。
[0074]
术语“羟烷基”或“羟基烷基”是指进一步被一个或多个羟基取代的烷基取代基。
[0075]
术语“氰基烷基”是指进一步被一个或多个氰基取代的烷基取代基。
[0076]
术语“羧基烷基”是指进一步被一个或多个羧基取代的烷基取代基。
[0077]
术语“酰基”是指有机或无机含氧酸去掉羟基后剩下的一价原子团，通式为r-m(o)-，其中m通常为c。
[0078]
术语“羰基”是由碳和氧两种原子通过双键连接而成的有机官能团(c＝o)。
[0079]
术语“烷酰基”或“烷基羰基”是指进一步被一个烷基取代的羰基。典型的烷酰基包括但不限于乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基等。
[0080]
术语“砜基”或“磺酰基”是指磺酸失去羟基后的官能团，具体是指-s(＝o)
2-基团。
[0081]
术语“氨基砜基”或“氨基磺酰基”是指-s(＝o)
2-nh2基团。
[0082]
术语“烷基砜基”或“烷基磺酰基”是指-s(＝o)
2-r，其中r为烷基。
[0083]
术语“烷基砜基氨基”或“烷基磺酰氨基”，以及“环烷基砜基氨基”或“环烷基磺酰氨基”是指本文定义的氨基被本文定义的烷基砜基或环烷基砜基取代，即-nh-s(＝o)
2-r，其中r分别为烷基和环烷基。
[0084]
术语“环烷基砜基”和“环烷基磺酰基”是指-s(＝o)
2-r，其中r为环烷基。
[0085]
术语“任选”指后面描述的一个或多个事件可以发生或可以不发生，并且包括发生的事件和不发生的事件两者。术语“任选取代的”或“取代的”是指所提及的基团可以被一个或多个额外的基团取代，所述额外的基团各自并且独立地选自烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂环基、羟基、烷氧基、氰基、卤素、酰胺基、硝基、卤代烷基、氨基、甲磺酰基、烷基羰基、烷氧基羰基、杂芳基烷基、杂环烷基烷基、氨酰基、氨基保护基等。其中，氨基保护基优选选自新戊酰基、叔丁氧羰基、苄氧羰基、9-芴甲氧羰基、苄基、对甲氧苄基、烯丙氧羰基、和三氟乙酰基等。
[0086]
本文术语“药学上可接受的盐”指的是保留主题化合物的所需生物学活性且显示最小的不希望的毒理学效应的盐。这些药学上可接受的盐可以在化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或通过单独使纯化化合物的游离酸或游离碱形式分别与合适的碱或酸反应来制备。
[0087]“溶剂化物”或“溶剂合物”指的是含有化学计量或非化学计量溶剂的溶剂加成形式。一些化合物趋于以晶状固态捕集固定摩尔比例的溶剂分子，从而形成溶剂合物。若溶剂是水，则形成的溶剂合物是水合物；若溶剂是醇，则形成的溶剂合物是醇化物。水合物通过使一个或多个水分子与所述物质的一个分子结合而形成，其中所述水保持其分子状态为h2o。
[0088]
本文公开的化合物的“代谢物”是当该化合物被代谢时形成的化合物的衍生物。术语“活性代谢物”是指当该化合物被代谢时形成的化合物的生物活性衍生物。本文使用的术语“被代谢”，是指特定物质被生物体改变的过程总和(包括但不限于水解反应和由酶催化的反应，例如氧化反应)。因此，酶可以产生特定的结构转变为化合物。例如，细胞色素p450催化各种氧化和还原反应，同时二磷酸葡萄糖甘酸基转移酶催化活化的葡萄糖醛酸分子至芳香醇、脂肪族醇、羧酸、胺和游离的巯基的转化。新陈代谢的进一步的信息可以从《the pharmacological basis of therapeutics》，第九版，mcgraw-hill(1996)获得。本文公开的化合物的代谢物可以通过将化合物给予宿主并分析来自该宿主的组织样品、或通过将化合物与肝细胞在体外孵育并且分析所得化合物来鉴别。这两种方法都是本领域已知的。在一些实施方式中，化合物的代谢物是通过氧化过程形成并与相应的含羟基化合物对应。在一些实施方式中，化合物被代谢为药物活性代谢物。
[0089]
本文使用的术语“调节”，是指直接或间接与靶标相互作用，以改变靶标的活性，仅仅举例来说，包括增强靶标的活性、抑制靶标的活性、限制靶标的活性或者延长靶标的活性。
[0090]
术语“前药”或“前体药物”是指如下衍生物，其可能不具有药理学活性，但在某些情况下，可口服或肠胃外给予并在这之后在体内代谢以形成具有药理学活性的本发明化合物。前药的非限制性实例包括：酯、碳酸酯、半酯、磷酸酯、硝基酯、硫酸酯、亚砜、酰胺、氨基甲酸酯、含氮化合物、磷酰胺、糖苷、醚、乙缩醛和酮缩醇等。
[0091]“有效量”指，将引发例如研究者或医师在研的组织、系统、动物或人的生物学或医学反应的药物或药学制剂的量。此外，术语“治疗有效量”指与没有接受该量的相应对象相比，引起疾病、紊乱、或副作用改良的治疗、治愈、预防、或缓解、或者疾病或紊乱发展速率降低的任何量。该术语范围内还包括有效提高正常生理功能的量。
[0092]
本文所用的术语“治疗”指缓解疾病、紊乱或病症的至少一种症状。该术语包括向对象给药和/或应用一种或多种本文所述化合物以提供病症的管理或治疗。用于本公开目的的“治疗”可以但不必须提供治愈；而是指，“治疗”可以是病症的管理形式。当本文所述化合物用于处理有害的增殖细胞(包括癌)时，“治疗”包括部分或完全破坏所述有害的增殖细胞，但对正常细胞的破坏影响最小。有害的快速增殖细胞(包括癌细胞)的所需处理机制在细胞水平上是凋亡。
[0093]
本文所用的术语“预防”包括共同预防或减缓临床上显著疾病发展的开始或者预防或减缓风险个体中的临床前显著疾病阶段的开始。这包括预防性治疗有疾病发展风险的个人。
[0094]
术语“受试者”或“患者”包括能患有病症或与降低的或不足的程序性细胞死亡(细胞凋亡)相关的病症的有机体或能以其他方式从本发明化合物的给药中获益的有机体，例如人类和非人类动物。优选的人类包括患有或倾向患有如本文所述的病症或相关状况的人
类患者。术语“非人类动物”包括脊椎动物，例如哺乳动物，如非人类灵长类动物、羊、牛、狗、猫和啮齿动物如小鼠，以及非哺乳动物，如鸡、两栖动物、爬行动物等。
[0095]
本文使用的gi
50
是指使50％细胞生长被抑制所需的药物浓度，即药物使50％细胞(如癌细胞)的生长得到抑制或控制时的药物浓度。
[0096]
本文使用的ic
50
是指在测量效应的分析中获得最大效应的50％抑制的特定测试化合物的量、浓度或剂量。
[0097]
本文使用的ec
50
是指测定化合物的剂量、浓度或量，其引起特定测定化合物诱导、刺激或加强的特定反应的50％的最大表达的剂量依赖反应。
[0098]
术语“与cdk9和/或其突变相关”或“由cdk9和/或其突变介导的病症”应包括与cdk9和/或其突变活性相关或涉及cdk9和/或其突变活性的疾病(如cdk9和/或其突变的过度活跃)，以及伴随这些疾病的病况。“与cdk9和/或其突变相关”或“由cdk9和/或其突变介导的病症”的实例包括由调节cdk9和/或其突变活性的基因(如larp7、hexim1/2或7sk snrna)突变引起的cdk9和/或其突变活性增加而导致的病症，由cdk9/细胞周期蛋白t/rna聚合酶ii复合物被病毒蛋白(如hivtat或htlv-tax)活化引起的cdk9和/或其突变活性增加而导致的病症，或由促有丝分裂信号转导途径的活化引起的cdk9和/或其突变活性增加而导致的病症。
[0099]
术语“cdk9的过度活跃”是指与正常非病变细胞相比cdk9和/或其突变的酶活性增加，或其是指导致不期望的细胞增殖或导致降低的或不足的程序性细胞死亡(细胞凋亡)的cdk9活性增加，或导致cdk9构成性活化的突变。
[0100]
术语“过度增殖性病症”包括涉及不期望的或不受控的细胞增殖的病症，并且其包括涉及降低的或不足的程序性细胞死亡(细胞凋亡)的病症。
[0101]
本发明的激酶抑制剂
[0102]
本发明涉及一种激酶抑制剂，其包括式(i)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0103][0104]
其中，a选自环己基、苯基、吡啶基和哌啶基；
[0105]
n为0或1；
[0106]
x为ch或n；
[0107]
z为-nh-或-nh-c(＝o)-；
[0108]
r1选自氢、卤素、氰基、(c1-c6)烷基、和(c1-c6)卤代烷基；
[0109]
r2选自氢和(c1-c6)烷基，或者两个r2一起形成(c3-c6)环烷基；
[0110]
m选自1-3的整数，且每个r3各自独立地选自氢、-nh-(c1-c3)烷基-(c1-c3)烷氧基、卤素、(c1-c6)烷基、(c1-c6)烷氧基、(c1-c6)卤代烷基、(c1-c6)烷基酰氨基、(c1-c6)烷
基磺酰基、(c1-c6)烷基磺酰氨基、氨基磺酰基、(c1-c6)烷基胺基磺酰基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基磺酰基、羧基(c1-c3)烷基、氨基磺酰基(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷基磺酰基(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷基磺酰基(c3-c6)环烷基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基氨酰基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基、-s(＝o)(＝nh)(c1-c3)烷基、和-(c1-c3)烷基-s(＝o)(＝nh)(c1-c3)烷基；
[0111]
r4选自氢和(c1-c6)烷基。
[0112]
在优选的实施方式中，本发明涉及式(ia)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0113][0114]
其中x、n、r1、r2、r3、和r4如前文所定义。
[0115]
在该实施方式中，x优选为n；在又一实施方式中，r3优选为-nh-(c1-c3)烷基-(c1-c3)烷氧基或羧基(c1-c3)烷基。
[0116]
在另外优选的实施方式中，本发明涉及式(ib)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0117][0118]
其中，y为ch或n；x、m、n、r1、r2、r3、和r4如前文所定义。
[0119]
在更优选的方面，x为n；在其他优选的方面，y为ch。
[0120]
在另外优选的方面，每个r3各自独立地选自卤素、(c1-c6)烷基、(c1-c6)烷氧基、(c1-c6)卤代烷基、(c1-c6)烷基磺酰基、(c1-c6)烷基磺酰氨基、氨基磺酰基、(c1-c6)烷基胺基磺酰基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基磺酰基、氨基磺酰基(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷基磺酰基(c1-c3)烷基、(c1-c3)烷基磺酰基(c3-c6)环烷基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基氨酰基、杂原子任选被(c1-c6)烷基取代的杂环基、-s(＝o)(＝nh)(c1-c3)烷基、和-(c1-c3)烷基-s(＝o)(＝nh)(c1-c3)烷基。
[0121]
在另外优选的实施方式中，本发明涉及式(ic)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0122][0123]
其中x、n、r1、r2、r3和r4如前文所定义。
[0124]
在更优选的方面，r3为(c1-c6)烷基酰氨基。
[0125]
在另外优选的实施方式中，本发明涉及式(id)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物或前体药物，
[0126]
其中x、n、r1、r2、r3和r4如前文所定义。
[0127]
在该实施方式中，x优选为n；在更优选的方面，r3为(c1-c6)烷基磺酰基。
[0128]
在本发明示例性的实施方式中，r1优选地选自氢、氯、氟、氰基、(c1-c3)烷基(更优选甲基)、和(c1-c3)卤代烷基(更优选三氟甲基)。
[0129]
在另外的示例性的实施方式中，r2优选地选自氢、(c1-c3)烷基(更优选甲基)、或两个r2一起形成环丙基、或环丁基。
[0130]
在其他的示例性的实施方式中，每个r3各自独立地选自氢、(2-甲氧基)乙基氨基、氯、氟、甲基、甲氧基、三氟甲基、乙酰氨基、甲磺酰基、甲磺酰基氨基、氨基磺酰基、甲氨基磺酰基、二甲氨基磺酰基、吗啉代磺酰基、羧基甲基、氨基磺酰基甲基、甲基磺酰基甲基、甲基磺酰基环丙基、(n-甲基哌啶-4-基)氨酰基、n-甲基哌嗪-1-基、n-乙基哌嗪-1-基、n-异丙基哌嗪-1-基、高哌嗪-1-基、-s(＝o)(＝nh)甲基、和-甲基-s(＝o)(＝nh)甲基。
[0131]
在另外的示例性的实施方式中，r4优选地选自氢和(c1-c3)烷基(更优选甲基)。
[0132]
本文描述的是新型的激酶抑制剂。本文也描述了此化合物的药学可接受的盐、溶剂化物、酯、酸、代谢物和前体药物。
[0133]
本发明的化合物可以游离形式存在，例如游离碱或游离酸或两性离子形式，或者可以盐的形式存在。所述盐可以为任何盐，可为有机或无机加成盐，特别是常用于药学的任何生理学上可接受的有机或无机加成盐。
[0134]
对于本发明的目的而言为优选的盐是本发明化合物的生理学上可接受的盐。然而，也包括自身不适于药学应用但例如可用于分离或纯化本发明化合物的盐。
[0135]
术语“药学可接受的盐”是指本发明化合物的相对无毒的无机酸或有机酸加成盐，
例如参见s.m.berge等人，“pharmaceutical salts,j.pharm.sci.1977,66,1-19。
[0136]
本发明化合物的药学可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如以下酸的盐：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、焦硫酸、磷酸、硝酸；或与有机酸的盐，例如甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)-苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、叔戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、己二酸、海藻酸、马来酸、富马酸、d-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸的盐。
[0137]
本发明化合物的药学可接受的盐还包括常用碱的盐，例如且优选碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)、以及衍生自氨或具有1至16个碳原子的有机胺的铵盐，所述有机胺例如且优选为乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄胺、n-甲基吗啉、精氨酸、赖氨酸、乙二胺、n-甲基哌啶、n-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、1,6-己二胺、氨基葡萄糖、肌氨酸、丝氨醇、三(羟甲基)氨基甲烷、氨基丙二醇、sovak碱和1-氨基-2,3,4-丁三醇。
[0138]
本发明包括本发明化合物的所有可能的盐，其可为单一盐或所述盐以任意比例的任意混合物。
[0139]
溶剂化物是为了本发明的目的对通过在固态或液态下的配位作用与溶剂分子形成络合物的本发明化合物的那些形式而使用的术语。水合物是其中与水发生配位的特殊溶剂合物形式。水合物优选作为本发明范围内的溶剂化物。
[0140]
此外，本发明还包括本发明化合物的前体药物。术语“前体药物”包括自身可以是有生物学活性的或是惰性的但在其于体内的保留时间中被转化成(例如通过代谢或水解)本发明化合物的化合物。
[0141]
此外，本发明包括本发明化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其作为单独的多晶型物，或作为多于一种多晶型物以任意比例的混合物。
[0142]
在本说明书中，在一些情况中为方便起见，化合物的结构式代表特定的异构体，但本发明包括所有异构体，例如几何异构体、基于不对称碳原子的光学异构体、立体异构体、互变异构体等。
[0143]
本发明所涉及带有手性的化合物，其构型可以是任意构型或者混合的外消旋体。当根据本发明使用的化合物包含多于一种手性中心时，其可以非对映体形式存在。所述非对映体异构体化合物可以通过本领域技术人员已知的方法分离(例如，色谱或结晶)，而单独对映体可以如上所述分离。本发明包括根据本发明使用的多种非对映体化合物及其混合物的应用。本发明使用的化合物可以不同互变异构形式或以不同几何异构体形式存在，本发明包括根据本发明使用的化合物的各个互变异构体和/或几何异构体及其混合物的应用。本发明使用的化合物可以两性离子形式存在。本发明包括根据本发明使用的化合物的各个两性离子形式及其混合物的应用。
[0144]
筛选和表征药学可接受的盐、多晶型和/或溶剂化物可以使用多种技术完成，所述技术包括但不限于热分析、x射线衍射、光谱、显微镜方法、元素分析。使用的各种光谱技术
包括但不限于raman、ftir、uvis和nmr(液体和固体状态)。各种显微镜技术包括但不限于ir显微镜检术和拉曼(raman)显微镜检术。
[0145]
因此，本发明包括本发明化合物的所有可能的盐、多晶型物、代谢物、水合物、溶剂化物、或前药(例如：酯)，其作为单独的盐、多晶型物、代谢物、水合物、溶剂化物、或前药，或作为多于一种盐、多晶型物、代谢物、水合物、溶剂化物、前药以任意比例的混合物。
[0146]
治疗方法和用途
[0147]
本发明的另一主题是本发明的激酶抑制剂用于治疗和/或预防病症的方法和用途，优选与cdk9及其突变活性相关或由cdk9及其突变活性介导的病症，特别是过度增殖性病症、病毒诱导的感染性疾病和/或心血管疾病，更优选过度增殖性病症。
[0148]
本发明的化合物可以用于抑制cdk9及其突变的活性或表达。因此，式(i)、(ia)、(ib)、(ic)或(id)的化合物作为治疗剂是有价值的。在一实施方案中，本发明提供在需要治疗的患者中治疗与cdk9及其突变活性相关或由cdk9及其突变活性介导的病症的方法，其包括向所述患者给药有效量的上文定义的式(i)、(ia)、(ib)、(ic)或(id)的化合物。在某些实施方案中，所述与cdk9及其突变活性相关的病症为过度增殖性病症、病毒诱导的感染性疾病和/或心血管疾病，更优选过度增殖性病症，特别是癌症，更优选为白血病、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、结直肠癌、胃肠间质瘤、或淋巴瘤。
[0149]
在本发明的上下文中，过度增殖性病症包括但不限于，例如银屑病、瘢痕疙瘩和影响皮肤其他的增生、子宫内膜异位、骨骼病症、血管生成性病症或血管增殖性病症、肺动脉高压、纤维化病症、系膜细胞增殖性病症、结肠息肉、多囊性肾病、良性前列腺增生，以及实体肿瘤如乳腺癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌以及它们的远端转移，淋巴瘤、肉瘤和白血病。
[0150]
乳腺癌的实例包括但不限于侵润性导管癌、侵润性小叶癌、原位导管癌和原位小叶癌、犬科或猫科乳腺癌。
[0151]
呼吸道癌的实例包括但不限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌以及支气管腺瘤、胸膜肺母细胞瘤和间皮瘤。
[0152]
脑癌的实例包括但不限于脑干和下丘脑胶质瘤、小脑和大脑星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤以及神经外胚层和松果体肿瘤。
[0153]
生殖器官癌包括但不限于前列腺癌、睾丸癌、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌以及子宫肉瘤。
[0154]
消化道癌包括但不限于肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食管癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌、唾液腺癌和肛腺腺癌。
[0155]
尿道癌包括但不限于膀胱癌、阴茎癌、肾脏癌、肾盂癌、输尿管癌、尿道癌以及遗传性和散发性乳头状肾癌。
[0156]
眼癌包括但不限于眼内黑素瘤和视网膜母细胞瘤。
[0157]
肝癌的实例包括但不限于肝细胞癌(有或无纤维板层变异的肝细胞癌)、胆管上皮癌(肝内胆管癌)和混合性肝细胞胆管上皮癌。
[0158]
皮肤癌的实例包括但不限于鳞状细胞癌、卡波氏肉瘤、恶性黑素瘤、默克尔细胞皮肤癌、非黑色素瘤皮肤癌、和肥大细胞瘤。
[0159]
头颈癌包括但不限于喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唇癌、口腔癌、鳞状细胞癌、和
口腔黑色素瘤。
[0160]
淋巴瘤包括但不限于aids相关性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍金奇病以及中枢神经系统的淋巴瘤。
[0161]
肉瘤包括但不限于软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤、横纹肌肉瘤、恶性组织细胞增生症、纤维肉瘤、血管肉瘤、血管外皮细胞瘤及平滑肌肉瘤。
[0162]
白血病包括但不限于急性髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病以及多毛细胞白血病。
[0163]
本发明的优选主题是用于治疗和/或预防肺癌(尤其是非小细胞肺癌)、前列腺癌(尤其是非激素依赖性人前列腺癌)、宫颈癌(包括多重耐药性人宫颈癌)、结肠直肠癌、黑色素瘤、卵巢癌或白血病(尤其是急性髓性白血病)。
[0164]
可以用本发明的化合物和方法治疗的纤维化的增殖性病症(即细胞外基质的异常形成)包括肺纤维化、动脉粥样硬化、再狭窄、肝硬化以及肾小球膜细胞增殖性病症，包括肾疾病如肾小球肾炎、糖尿病肾病、恶性肾硬化、血栓性微血管病综合征、移植排斥和肾小球病。
[0165]
可以通过本发明的化合物而治疗的人或其他哺乳动物的其他病况包括肿瘤生长、视网膜病(包括糖尿病性视网膜病变、缺血性视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病和年龄相关性黄斑变性)、类风湿关节炎、银屑病，以及与表皮下水疱形成相关的大疱性病症(包括大疱性类天疱疮、多形性红斑和疱疹样皮炎)。
[0166]
发明的化合物还可以用于预防和治疗呼吸道和肺部的疾病、胃肠道的疾病以及膀胱和胆管的疾病。
[0167]
上述病症已在人类中得到良好的表征，但是在包括哺乳动物在内的其他动物中也存在相似的病因学，并且可通过给药本发明的药物组合物来治疗。
[0168]
在本发明的另一方面，本发明的化合物可用于预防和/或治疗感染性疾病、特别是病毒诱导的感染性疾病的方法。这些疾病包括但不限于逆转录酶病毒、嗜肝dna病毒、疱疹病毒、黄病毒和/或腺病毒导致病毒诱导的感染性疾病，包括机会性疾病。在该方法的其他优选实施方案中，逆转录酶病毒选自慢病毒或致癌逆转录病毒，其中慢病毒选自hiv-1、hiv-2、fiv、biv、siv、shiv、caev、vmv或eiav，优选hiv-1或hiv-2；并且其中致癌逆转录病毒选自htlv-i、htlv-ii或blv。在该方法的其他优选实施方案中，嗜肝dna病毒选自hbv、gshv或whv，优选hbv；疱疹病毒选自hsv i、hsv ii、ebv、vzv、hcmv或hhv8，优选hcmv；并且黄病毒选自hcv、西尼罗河病毒或黄热病病毒。
[0169]
本发明的化合物还可用于预防和/或治疗心血管疾病，例如心脏肥大、成人先天性心脏疾病、动脉瘤、稳定型心绞痛、不稳定型心绞痛、心绞痛、血管神经性水肿、主动脉瓣狭窄、主动脉瘤、心律失常、心律失常性右心室发育不良、动脉硬化、动静脉畸形、心房纤维性颤动、贝赫切特综合征、心动过缓、心脏填塞、心脏扩大、充血性心肌病、肥厚型心肌病、限制型心肌病、心脑血管疾病预防、颈动脉狭窄、脑出血、churg-strauss综合征、糖尿病、爱泼斯坦异常、艾森门格复合征、胆固醇栓塞、细菌性心内膜炎、纤维肌性发育不良、先天性心脏缺陷、心脏疾病、充血性心脏衰竭、心脏瓣膜疾病、心力衰竭、硬膜外血肿、硬膜下血肿、hippel-lindau病、充血、高血压、肺动脉高压、肥大性生长、左心室肥大、右心室肥大、左心发育不良综合征、低血压、间歇性跛行、缺血性心脏疾病、klippel-trenaunay-weber综合
征、延髓背外侧综合征，长qt综合征、二尖瓣脱垂、烟雾病、皮肤粘膜淋巴结综合征、心肌梗塞、心肌缺血、心肌炎、心包炎、周围血管疾病、静脉炎、结节性多动脉炎、肺动脉闭锁、雷诺氏病、再狭窄、sneddon综合征、狭窄、上腔静脉综合征、x综合征、心动过速、高安动脉炎、遗传性出血性毛细血管扩张、毛细血管扩张、颞动脉炎、法洛氏四联症、血栓闭塞性脉管炎、血栓形成、血栓栓塞、三尖瓣闭锁、静脉曲张、血管疾病、血管炎、血管痉挛、心室纤维性颤动、威廉姆斯综合征、周围血管疾病、静脉曲张和下肢溃疡、下肢深静脉血栓形成、沃夫帕金森怀特氏综合征。
[0170]
本发明的化合物优选用于预防和/或治疗心脏肥大、成人先天性心脏疾病、动脉瘤、绞痛、心绞痛、心律失常、心血管疾病预防、心肌病、充血性心脏衰竭、心肌梗死、肺动脉高血压、肥大性生长、再狭窄、狭窄、血栓形成和动脉粥样硬化。
[0171]
本发明的另一主题是本发明通式(i)、(ia)、(ib)、(ic)或(id)的激酶抑制剂制备药物的用途。
[0172]
本发明的另一主题是本发明通式(i)、(ia)、(ib)、(ic)或(id)的激酶抑制剂在制备用于治疗和/或预防病症、特别是上述病症的药物中的用途。
[0173]
药物组合物
[0174]
本发明的另一方面涉及药物结合物，其包含本发明的激酶抑制剂和药学上可接受的稀释剂或载体，以及任选的一种或多种其他活性成分。
[0175]
本发明的另一方面涉及药物组合物，其包含本发明通式(i)、(ia)、(ib)、(ic)或(id)的激酶抑制剂与惰性无毒的药学上合适的辅剂的结合。
[0176]
本发明的另一方面涉及本发明的药物组合物用于治疗和/或预防病症、特别是上述病症的用途。
[0177]
本发明的另一方面涉及本发明的药物组合物用于治疗和/或预防肺癌(尤其是非小细胞肺癌)、前列腺癌(尤其是非激素依赖性人前列腺癌)、宫颈癌(包括多重耐药性人宫颈癌)、结肠直肠癌、黑色素瘤、卵巢癌或白血病(尤其是急性髓性白血病)的用途。
[0178]
本发明的化合物可以以单独的药剂或与一种或多种其他治疗剂组合的形式给药，其中所述组合不引发不可接受的副作用。该药物结合物包括给药包含式本发明的化合物和一种或多种其他治疗剂的单一药物剂量制剂以及以其自身的单独的药物剂量制剂形式给药本发明的化合物和各种其他治疗剂。例如，可以向患者以例如片剂或胶囊的单一口服剂量组合物形式将式(i)、(ia)、(ib)、(ic)或(id)的化合物和治疗剂一起给药，或者可以以单独的剂量制剂形式给药每一药剂。
[0179]
当使用单独的剂量制剂时，本发明的化合物和一种或多种其他治疗剂可以在基本上相同的时间(例如同时)或在分别错开的时间(例如，相继地)给药。
[0180]
特别地，本发明的化合物可以以与下列物质的固定组合或单独组合的形式使用：其他抗肿瘤剂，例如烷化剂、抗代谢剂、得自植物的抗肿瘤剂、激素治疗剂、拓扑异构酶抑制剂、喜树碱衍生物、激酶抑制剂、靶向药物、抗体、干扰素和/或生物反应修饰剂、抗血管生成化合物以及其他抗肿瘤药物。对此，下列是可与本发明的化合物结合使用的第二药剂的实例的非限制性列举：131i-chtnt、阿巴瑞克、阿比特龙、阿柔比星、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维甲酸、六甲蜜胺、氨基导眠能、氨柔比星、安吖啶、阿那曲唑、阿格拉宾、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷、巴利昔单抗、bay 80-6946、bay 1000394、贝洛替康、苯达莫司汀、贝伐
单抗、贝沙罗汀、比卡鲁胺、比生群、博来霉素、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、卡巴他赛、亚叶酸钙、左亚叶酸钙、卡培他滨、卡铂、卡莫氟、卡莫司汀、卡妥索单抗、塞来昔布、西莫白介素、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、氯地孕酮、氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸、克罗拉滨、克立他酶、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、阿法达贝泊汀、达沙替尼、柔红霉素、地西他滨、地加瑞克、地尼白介素、狄诺塞麦、德舍瑞林、二溴螺氯铵、多西他赛、去氧氟尿苷、阿霉素、阿霉素 雌素酮、艾库组单抗、依决洛单抗、依利醋铵、艾曲波帕、内皮抑素、依诺他滨、表柔比星、环硫雄醇、阿法依泊汀、倍他依泊汀、依铂、艾瑞布林、厄洛替尼、雌二醇、雌莫司汀、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、法倔唑、非格司亭、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟他胺、福美坦、福莫司汀、氟维司群、硝酸镓、加尼瑞克、吉非替尼、吉西他滨、吉妥珠单抗、谷胱甘肽、戈舍瑞林、二盐酸组胺、组氨瑞林、羟基脲、碘-125粒子、伊班膦酸、替伊莫单抗、依达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、咪喹莫特、英丙舒凡、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、ipilimumab、伊立替康、伊沙匹隆、兰瑞肽、拉帕替尼、来那度胺、来格司亭、香菇多糖、来曲唑、亮丙瑞林、左旋咪唑、麦角乙脲、洛铂、洛莫司汀、氯尼达明、马索罗酚、甲羟孕酮、甲地孕酮、马法兰、美雄烷、巯嘌呤、甲氨喋呤、甲氧沙林、氨基乙酰丙酸甲酯、甲睾酮、米伐木肽、米替福新、米铂、二溴甘露醇、米托胍腙、二溴卫矛醇、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、奈达铂、奈拉滨、尼洛替尼、尼鲁米特、尼妥珠单抗、尼莫司汀、二胺硝吖啶、奥法木单抗、奥美拉唑、奥普瑞白介素、奥沙利铂、p53基因治疗、紫杉醇、帕利夫明、钯-103粒子、帕米膦酸、帕尼单抗、帕唑帕尼、培门冬酶、聚乙二醇倍他依泊汀(甲氧基聚乙二醇倍他依泊汀)、培非格司汀、聚乙二醇干扰素α-2b、培美曲塞、喷他佐辛、喷司他丁、派来霉素、培磷酰胺、毕西巴尼、吡柔比星、普乐沙福、普卡霉素、聚氨葡糖、聚磷酸雌二醇、云芝多糖k、卟吩姆钠、普拉曲沙、泼尼莫司汀、甲基苄肼、喹高利特、氯化镭223、雷洛昔芬、雷替曲塞、雷莫司汀、雷佐生、refametinib、瑞格非尼、利塞膦酸、利妥昔单抗、罗咪酯肽、罗米司亭、沙格司亭、sipuleucel-t、西佐喃、索布佐生、甘氨双唑钠、索拉非尼、链脲霉素、舒尼替尼、他拉泊芬、他米巴罗汀、他莫昔芬、他索纳明、替西白介素、替加氟、替加氟 吉美拉西 奥替拉西、替莫泊芬、替莫唑胺、替西罗莫司、替尼泊苷、睾固酮、替曲膦、酞胺呱啶酮、硫涕巴、胸腺法新、硫鸟嘌呤、托珠单抗、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲贝替定、曲妥珠单抗、苏消安、维甲酸、曲洛司坦、曲普瑞林、曲磷胺、色氨酸、乌苯美司、戊柔比星、凡德他尼、伐普肽、威罗菲尼、长春花碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨、伏立诺他、伏氯唑、钇-90玻璃微球、净司他丁、净司他丁斯酯、唑来膦酸、和佐柔比星。
[0181]
本发明的化合物还可以连同放射疗法和/或手术介入来用于癌症治疗。
[0182]
本发明的化合物可全身和/或局部地发挥作用。为此，其可以以适当的方式给药，例如通过口服途径、肠胃外途径、肺途径、鼻途径、舌下途径、舌途径、含服途径、直肠途径、皮肤途径、经皮途径、结膜途径或耳途径，或以植入物或支架的形式。
[0183]
对于这些给药途径，可以以适当的施用形式给药本发明的化合物。
[0184]
适于口服给药是这样的给药形式，即如现有技术所述的那样起作用并且迅速和/或以改良方式递送本发明的化合物，其包含结晶和/或非晶和/或溶解形式的本发明的化合物，例如片剂(包衣或未包衣的，例如具有肠溶包衣、或者具有延迟溶解或不溶且控制本发明化合物释放的包衣的片剂)、在口腔中迅速分解的片剂、或薄膜剂/薄片剂、薄膜剂/冻干物、胶囊(例如硬胶囊或软明胶胶囊)、糖衣片、颗粒剂、丸剂、散剂、乳剂、混悬剂、气雾剂或
溶液剂。
[0185]
可以进行肠胃外给药，其避免吸收步骤(例如静脉内给药、动脉内给药、心脏内给药、脊柱内给药或腹腔内给药)或包括吸收(例如肌内给药、皮下给药、皮内给药、经皮给药或腹腔内给药)。适于肠胃外给药的给药形式尤其是溶剂、混悬剂、乳剂、冻干产物或无菌散剂形式的用于注射和输注的制剂。
[0186]
适于其他给药途径的实例为用于吸入的药物形式(尤其是粉末吸入器、喷雾器)、滴鼻剂/溶液剂/喷雾剂；用于舌部给药、舌下给药或含服给药的片剂，薄膜剂/薄片剂或胶囊剂、栓剂、用于眼部或耳部的制剂、阴道胶囊剂、水性混悬剂(洗液、振烫合剂)、亲脂性混悬剂、软膏剂、乳膏剂、经皮治疗系统(例如硬膏剂)、乳制剂、糊剂、泡沫剂、扑粉剂、植入物或支架。
[0187]
本发明的化合物可被转化成所述的给药形式。这可以以本领域已知的方式通过与惰性、无毒、药学合适的辅剂混合而进行。这些辅剂尤其包括载体(例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇)、溶剂(例如液体聚乙二醇)、乳化剂和分散剂或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠、聚氧基山梨聚糖油酸酯)、粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成和天然聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂，如抗坏血酸)、着色剂(例如无机颜料，如氧化铁)以及味道和/或气味掩蔽剂。
[0188]
此外，本发明提供包含至少一种本发明的化合物的药物，其通常与一种或多种惰性无毒的药学合适的辅剂一起，以及提供了它们用于上述目的的用途。
[0189]
不论所选的给药途径如何，都通过本领域技术人员已知的常规方法将本发明的激酶抑制剂和/或本发明的药物组合物配制成药学上可接受的剂型。
[0190]
本发明药物组合物中活性成分的实际给药剂量水平和时间进程可以变化，从而获得有效实现特定患者所期望的治疗响应并对所述患者无毒的活性成分的量。
[0191]
化合物的制备
[0192]
使用本领域技术人员已知的标准合成技术或使用本领域已知的方法与本文描述的方法组合，可以合成本发明的化合物。另外，本文给出的溶剂、温度和其它反应条件可以根据本领域技术而改变。作为进一步的指导，也可以利用以下的合成方法。
[0193]
所述反应可以按顺序使用，以提供本文描述的化合物；或它们可以用于合成片段，所述片段通过本文描述的方法和/或本领域已知的方法随后加入。
[0194]
用于合成本文描述的化合物的起始原料可以被合成或可以从商业来源获得。本文描述的化合物和其它相关具有不同取代基的化合物可以使用本领域技术人员已知的技术和原料合成。制备本文公开的化合物的一般方法可以来自本领域已知的反应，并且该反应可以通过由本领域技术人员所认为适当的试剂和条件修改，以引入本文提供的分子中的各种部分。
[0195]
如果需要，反应产物可以使用常规技术分离和纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等方法。这些产物可以使用常规方法表征，包括物理常数和图谱数据。
[0196]
制备式(i)的化合物的合成方案的非限制性实施例如下描述。
[0197]
实施例
[0198]
以下具体的非限制性实施例将被解释为仅仅是说明性的，并不以任何方式限制本发明。虽然无需进一步详细描述，但是可以相信本领域技术人员能基于本文的描述，完全利
用本公开。
[0199]
实施例1：6-(2-(((4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮的合成
[0200][0201]
((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(a2)：将化合物a1(10.0g，46.7mmol)、2-溴乙基甲基醚(5.2g，37.4mmol)和碳酸钾(12.9g，93.4mmol)加入乙腈(150ml)中，反应在80℃搅拌16小时。tlc监测反应，原料少量剩余，停止反应。将反应液冷却至室温，过滤，滤液旋干，硅胶拌样，硅胶柱层析(洗脱剂体系为：dcm/meoh＝100:1
→
40:1
→
20:1)，得到6.3g黄白色固体a2，产率为50％。
[0202]
(1r,4r)-n1-(2-甲氧基乙基)环己烷-1,4-二胺盐酸盐(a3)：将化合物a2(6g，22.0mmol)溶于hcl-ea(80ml)中，反应在室温搅拌2小时。有大量固体析出。将反应液过滤，滤饼干燥后得到5.1g白色固体(二盐酸盐)a3，产率：94.8％。
[0203]
6-(2-氯嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮(a6)：将a4(81mg，0.54mmol，1.5eq)溶于1,4-二氧六环(10ml)，接着加入a5(100mg，0.36mmol，1.0equiv.)、碳酸钾(99mg，0.72mmol，2equiv.)和pd(pph3)4(41mg，0.036mmol，0.1eq)，95℃下搅拌4小时，tlc显示反应已经完全。向反应体系加入粗硅胶拌样，柱层析分离(洗脱剂体系为：dcm/ea＝3:1)，得化合物a6(60mg，64％)。
[0204]
6-(2-(((4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮(1)：向瓶中分别加入化合物a6(50mg，0.19mmol，1.0equiv.)、a3(56mg，0.22mmol，1.2equiv.)、diea(73mg，0.57mmol，3.0equiv.)和dmso(2ml)，125℃下搅拌过夜。lc-ms显示原料已消耗完。加水，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经柱分离(洗脱剂体系为：dcm/meoh＝30:1)，得目标化合物1(白色固体，30mg，40％)。ms:(m 1)396.2。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.37(s,1h),8.08
–
7.97(m,3h),7.94(d,j＝8.0hz,1h),7.15(t,j＝6.5hz,2h),3.74(s,1h),3.41(s,4h),3.26(s,3h),2.98(t,j＝6.6hz,2h),2.75(d,j＝5.7hz,2h),2.46(s,1h),1.95(s,4h),1.35-1.27(m,2h),1.16(s,2h)。
[0205]
以下实施例2-25如无特殊说明，按照与实施例1类似的方法合成。
[0206]
实施例2：6-(5-氯-2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物2
[0207][0208]
ms(esi)m/z(m 1) ：430.2。
[0209]
实施例3：6-(5-氟-2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物3
[0210][0211]
ms(esi)m/z(m 1) ：414.22。
[0212]
实施例4：6-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-2-甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物4
[0213][0214]
ms(esi)m/z(m 1) ：410.26。
[0215]
实施例5：5-(2-(((1r,4r))-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)异吲哚啉-1-酮化合物5
[0216][0217]
ms(esi)m/z(m 1) ：382.22。
[0218]
实施例6：6-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)-5-甲基吡啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物6
[0219][0220]
化合物6的合成通过使用类似于实施例1中所述的步骤完成，用4-溴-2-氟-5-甲基吡啶取代2,4-二氯嘧啶。ms(esi)m/z(m 1) ：437.29。
[0221]
实施例7：6-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物7
[0222][0223]
ms(esi)m/z(m 1) ：410.26。
[0224]
实施例8：6-(5-氯-2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)吡啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物8
[0225][0226]
实施例8化合物的合成通过使用类似于实施例6中所述的步骤完成。ms(esi)m/z(m 1) ：429.21。
[0227]
实施例9：2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)-4-(1-氧杂-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-5-甲腈化合物9
[0228][0229]
ms(esi)m/z(m 1) ：421.24。
[0230]
实施例10：6-(5-氯-2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)吡啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物10
[0231][0232]
实施例10化合物的合成通过使用类似于实施例6中所述的步骤完成。ms(esi)m/z(m 1) ：457.24。
[0233]
实施例11：6-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物11
4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物16
[0249][0250]
ms(esi)m/z(m 1) ：442.26。
[0251]
实施例17：6-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧乙基)氨基)环己基)氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物17
[0252][0253]
ms(esi)m/z(m 1) ：438.29。
[0254]
实施例18：6-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-2,4,4-三甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物18
[0255][0256]
ms(esi)m/z(m 1) ：424.27。
[0257]
实施例19：6-(5-氯-2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-2,4,4-三甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物19
[0258][0259]
ms(esi)m/z(m 1) ：472.25。
[0260]
实施例20：5-(5-氟-2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物20
[0261]
[0262]
ms(esi)m/z(m 1) ：428.25。
[0263]
实施例21：5-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物21
[0264][0265]
ms(esi)m/z(m 1) ：410.26。
[0266]
实施例22：5-(5-氯-2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物22
[0267][0268]
ms(esi)m/z(m 1) ：444.22。
[0269]
实施例23：5-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-2,3,3-三甲基异吲哚啉-1-酮化合物23
[0270][0271]
ms(esi)m/z(m 1) ：424.27。
[0272]
实施例24：5-(5-氯-2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-2,3,3-三甲基异吲哚啉-1-酮化合物24
[0273][0274]
ms(esi)m/z(m 1) ：458.23。
[0275]
实施例25：6'-(2-(((1r,4r)-4-((2-甲氧基乙基)氨基)环己基)氨基)嘧啶-4-基)-2',3'-二氢-1'h-螺[环丁烷-1,4'-异喹啉]-1'-酮化合物25
[0276][0277]
ms(esi)m/z(m 1) ：436.27。
[0278]
实施例26：3-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苯磺酰胺的合成化合物26
[0279][0280]
4,4-二甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮(a8)：将化合物a7(1.0g，3.93mmol)、联硼酸频那醇酯(1.2g，4.72mmol，1.2equiv.)、醋酸钾(0.77g，7.86mmol，2equiv.)和pdcl2(dppf)(0.32g，0.39mmol，0.1equiv.)加入1,4-二氧六环(20ml)中，反应在100℃搅拌5小时。tlc监测反应，原料无剩余，停止反应。将反应液冷却至室温，硅胶拌样，硅胶柱层析(洗脱剂体系为：dcm/ea＝3:1)，得到红棕色固体a8(0.9g，76％)。
[0281]
6-(2-氯嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮(a9)：将a8(300mg，0.99mmol，1.0eq)溶于1,4-二氧六环(10ml)，接着加入a4(178mg，1.19mmol，1.2equiv.)、碳酸钾(0.27g，1.98mmol，2equiv.)和pd(pph3)4(0.11g，0.099mmol，0.1eq)，95℃下搅拌4小时，tlc显示反应已经完全。向反应体系加入粗硅胶拌样，柱层析分离(洗脱剂体系为：dcm/ea＝3:1)，得目标化合物a9(130mg，45％)。
[0282]
3-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苯磺酰胺(26)：向瓶中分别加入化合物a9(50mg，0.17mmol，1.0equiv.)、4-氨基苯磺酰苯胺(30mg，0.17mmol，1.0equiv.)、对甲苯磺酸(29mg，0.17mmol，1.0equiv.)和仲丁醇(2ml)，120℃下搅拌过夜。过滤，滤饼用少量甲醇和甲基叔丁醚洗涤，得淡黄色固体。将固体转移至小瓶中，加入饱和碳酸氢钠溶液搅拌，最后过滤，固体用甲醇和甲基叔丁醚洗涤得目标化合物26(白色固体，30mg，41％)。ms:(m 1)：424.14。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ10.08(s,1h),8.65(d,j＝5.2hz,1h),8.54(s,1h),8.20-8.18(m,2h),8.10(s,1h),8.01(d,j＝8.1hz,1h),7.97
–
7.94(m,1h),7.59(d,j＝5.2hz,1h),7.52
–
7.44(m,2h),7.31(s,2h),3.23(d,j＝3.0hz,2h),1.37(s,6h)。
[0283]
以下实施例27-95、99-101如无特殊说明，按照与实施例26类似的方法合成。
[0284]
实施例27：(3-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)甲磺酰胺化合物27
[0285][0286]
ms(esi)m/z(m 1) ：438.16。
[0287]
实施例28：4,4-二甲基-6-(2-((3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物28
[0288][0289]
ms(esi)m/z(m 1) ：437.16。
[0290]
实施例29：3-((4-(4,4-二甲基-1-氧代1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)-n,n-二甲基苯磺酰胺化合物29
[0291][0292]
ms(esi)m/z(m 1) ：452.18。
[0293]
实施例30：4,4-二甲基-6-(2-((3-(吗啉代磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物30
[0294][0295]
ms(esi)m/z(m 1) :494.19。
[0296]
实施例31：3-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)-n-甲基苯磺酰胺化合物31
[0297][0298]
ms(esi)m/z(m 1) ：438.16。
[0299]
实施例32：4,4-二甲基-6-(2-((3-(甲基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物32
[0300][0301]
ms(esi)m/z(m 1) ：423.15。
[0302]
实施例33：3-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)-n-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺化合物33
[0303][0304]
ms(esi)m/z(m 1) ：485.27。
[0305]
实施例34：n-(5-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氟苯基)甲磺酰胺化合物34
[0306][0307]
ms(esi)m/z(m 1) ：456.15。
[0308]
实施例35：6-(2-((3-(1,4-高哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮的合成化合物35
[0309][0310]
ms(esi)m/z(m 1) ：443.26。
[0311]
实施例36：6-(2-((4-氟-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物36
[0312][0313]
ms(esi)m/z(m 1) ：455.16。
[0314]
实施例37：4,4-二甲基-6-(2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物37
[0315][0316]
ms(esi)m/z(m 1) ：433.26。
[0317]
实施例38：4,4-二甲基-6-(2-((3-(s-甲基磺酰亚胺基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物38
[0318][0319]
ms(esi)m/z(m 1) ：422.17。
[0320]
实施例39：4,4-二甲基-6-(2-((4-(甲基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物39
[0321][0322]
ms(esi)m/z(m 1) ：423.15。
[0323]
实施例40：4,4-二甲基-6-(2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物40
[0324][0325]
ms(esi)m/z(m 1) ：443.26。
[0326]
实施例41：5-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)-2-氟-n-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺化合物41
[0327][0328]
ms(esi)m/z(m 1) ：503.26。
[0329]
实施例42：4,4-二甲基-6-(2-((4-甲基-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物42
[0330][0331]
ms(esi)m/z(m 1) ：451.18。
[0332]
实施例43：6-(2-((2,4-二氟-5-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物43
[0333][0334]
ms(esi)m/z(m 1) ：473.15。
[0335]
实施例44：4,4-二甲基-6-(2-((3-((甲基磺酰基)甲基)-4-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物44
[0336][0337]
ms(esi)m/z(m 1) ：505.15。
[0338]
实施例45：6-(2-((4-甲氧基-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物45
[0339][0340]
ms(esi)m/z(m 1) ：467.18。
[0341]
实施例46：6-(2-((4-氟-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)吡啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物46
[0342][0343]
ms(esi)m/z(m 1) ：454.16。
[0344]
实施例47：4,4-二甲基-6-(2-((2-((甲基磺酰基)甲基)吡啶-4-基)氨基)吡啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物47
[0345][0346]
ms(esi)m/z(m 1) ：437.16。
[0347]
实施例48：5-(2-((4-氟-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物48
[0348][0349]
ms(esi)m/z(m 1) ：441.14。
[0350]
实施例49：3,3-二甲基-5-(2-((4-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)异吲哚啉-1-酮化合物49
[0351][0352]
ms(esi)m/z(m 1) ：423.15。
[0353]
实施例50：5-(5-氟-2-((4-氟-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物50
[0354][0355]
ms(esi)m/z(m 1) ：459.13。
[0356]
实施例51：5-(5-氯-2-((4-氟-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物51
[0357][0358]
ms(esi)m/z(m 1) ：475.10。
[0359]
实施例52：5-(5-氯-2-((2,4-二氟-5-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物52
[0360][0361]
ms(esi)m/z(m 1) ：493.09。
[0362]
实施例53：5-(2-((2,4-二氟-5-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)-5-氟嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物53
[0363][0364]
ms(esi)m/z(m 1) ：477.12。
[0365]
实施例54：5-(5-氯-2-((4-甲基-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物54
[0366][0367]
ms(esi)m/z(m 1) ：471.13。
[0368]
实施例55：5-(5-氟-2-((4-甲基-3-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮化合物55
[0369]
[0370]
ms(esi)m/z(m 1) ：455.16。
[0371]
实施例56：4,4-二甲基-6-(2-((2-((甲基磺酰基)甲基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物56
[0372][0373]
ms(esi)m/z(m 1) ：438.16。
[0374]
实施例57：4,4-二甲基-6-(2-((4-((甲基磺酰基)甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物57
[0375][0376]
ms(esi)m/z(m 1) ：438.16。
[0377]
实施例58：4,4-二甲基-6-(2-((4-((s-甲基磺酰亚胺基)甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物58
[0378][0379]
ms(esi)m/z(m 1) ：437.18。
[0380]
实施例59：4,4-二甲基-6-(2-((4-(1-(甲基磺酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物59
[0381][0382]
ms(esi)m/z(m 1) ：463.18。
[0383]
实施例60：6-(5-氯-2-((4-(1-(甲基磺酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物60
[0384]
[0385]
ms(esi)m/z(m 1) ：497.14。
[0386]
实施例61：6-(5-氟-2-((4-(1-(甲基磺酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物61
[0387][0388]
ms(esi)m/z(m 1) ：481.17。
[0389]
实施例62：6-(5-氯-2-((4-氟-3-(1-(甲基磺酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物62
[0390][0391]
ms(esi)m/z(m 1) ：515.13。
[0392]
实施例63：6-(5-氟-2-((4-氟-3-(1-(甲基磺酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物63
[0393][0394]
ms(esi)m/z(m 1) ：499.16。
[0395]
实施例64：6-(5-氯-2-((2,4-二氟-5-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物64
[0396][0397]
ms(esi)m/z(m 1) ：507.11。
[0398]
实施例65：6-(2-((4-氟-3-(1-(甲基磺酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-2,4,4-三甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物65
[0399][0400]
ms(esi)m/z(m 1) ：495.19。
[0401]
实施例66：6-(5-氯-2-((4-氟-3-(1-(甲基磺酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-2,4,4-三甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物66
[0402][0403]
ms(esi)m/z(m 1) ：529.15。
[0404]
实施例67：6-(5-氟-2-((4-氟-3-(1-(甲基磺酰基)环丙基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-2,4,4-三甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物67
[0405][0406]
ms(esi)m/z(m 1) ：513.18。
[0407]
实施例68：6-(5-氯-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物68
[0408][0409]
ms(esi)m/z(m 1) ：477.22。
[0410]
实施例69：6-(5-氟-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物69
[0411][0412]
ms(esi)m/z(m 1) ：461.25。
[0413]
实施例70：4,4-二甲基-6-(5-甲基-2-((3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物70
[0414][0415]
ms(esi)m/z(m 1) ：457.27。
[0416]
实施例71：6-(5-氟-2-((4-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物71
[0417][0418]
ms(esi)m/z(m 1) ：475.26。
[0419]
实施例72：6-(5-氟-2-((4-氟-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物72
[0420][0421]
ms(esi)m/z(m 1) ：479.24。
[0422]
实施例73：6-(5-氟-2-((3-氟-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物73
[0423][0424]
ms(esi)m/z(m 1) ：479.24。
[0425]
实施例74：6-(5-氯-2-((4-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物74
[0426][0427]
ms(esi)m/z(m 1) ：491.23。
[0428]
实施例75：6-(5-氯-2-((4-氟-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物75
[0429][0430]
ms(esi)m/z(m 1) ：495.21。
[0431]
实施例76：6-(5-氯-2-((3-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物76
[0432][0433]
ms(esi)m/z(m 1) ：509.22。
[0434]
实施例77：6-(5-氯-2-((4-氟-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物77
[0435][0436]
ms(esi)m/z(m 1) ：523.24。
[0437]
实施例78：6-(5-氯-2-((3-(4-异丙基哌嗪-1-基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物78
[0438]
[0439]
ms(esi)m/z(m 1) ：519.26。
[0440]
实施例79：6-(2-((3-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-氟苯基)氨基)5-氟嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物79
[0441][0442]
ms(esi)m/z(m 1) ：493.25。
[0443]
实施例80：6-(5-氟-2-((4-氟-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物80
[0444][0445]
ms(esi)m/z(m 1) ：507.27。
[0446]
实施例81：6-(2-((4-氟-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物81
[0447][0448]
ms(esi)m/z(m 1) ：461.25。
[0449]
实施例82：4,4-甲基-6-(2-((4-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物82
[0450][0451]
ms(esi)m/z(m 1) ：457.27。
[0452]
实施例83：6-(5-氟-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物83
[0453][0454]
ms(esi)m/z(m 1) ：461.25。
[0455]
实施例84：6-(2-((3-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物84
[0456][0457]
ms(esi)m/z(m 1) ：475.26。
[0458]
实施例85：6-(2-((4-氟-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物85
[0459][0460]
ms(esi)m/z(m 1) ：489.28。
[0461]
实施例86：6-(2-((3-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物86
[0462][0463]
ms(esi)m/z(m 1) ：471.29。
[0464]
实施例87：6-(2-((3-(4-异丙基哌嗪-1-基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物87
[0465][0466]
ms(esi)m/z(m 1) ：485.30。
[0467]
实施例88：6-(5-氯-2-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物88
[0468][0469]
ms(esi)m/z(m 1) ：477.22。
[0470]
实施例89：6-(5-氟-2-((4-((甲基磺酰基)甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物89
[0471][0472]
ms(esi)m/z(m 1) ：456.15。
[0473]
实施例90：6-(5-氯-2-((4-((甲基磺酰基)甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物90
[0474][0475]
ms(esi)m/z(m 1) ：472.12。
[0476]
实施例91：4,4-二甲基-6-(5-甲基-2-((4-((甲基磺酰基)甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物91
[0477][0478]
ms(esi)m/z(m 1) ：452.18。
[0479]
实施例92：4,4-二甲基-6-(2-((4-((甲基磺酰基)甲基)吡啶-2-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物92
[0480][0481]
ms(esi)m/z(m 1) ：506.15。
[0482]
实施例93：6-(5-氟-2-((4-((s-甲磺酰亚胺基)甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物93
[0483][0484]
ms(esi)m/z(m 1) ：455.17。
[0485]
实施例94：6-(5-氯-2-((4-((s-甲磺酰亚胺基)甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物94
[0486][0487]
ms(esi)m/z(m 1) ：471.14。
[0488]
实施例95：4,4-二甲基-6-(5-甲基-2-((4-((s-甲磺酰亚胺基)甲基)吡啶-2-基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1(2氢)-酮化合物95
[0489][0490]
ms(esi)m/z(m 1) ：451.19。
[0491]
实施例96：(1s,3r)-3-乙酰胺-n-(5-氯-4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)吡啶-2-基)环己基-1-甲酰胺化合物96
[0492][0493]
((1r,3s)-3-((4-溴-5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(a11)：将化合物a10(1.0g，4.11mmol)溶于二氯甲烷中，随后冰浴下滴加1-氯-n,n,2-三甲基丙烯胺(0.82g，6.17mmol，1.5equiv.)，反应混合物在0℃下继续搅拌30分钟。然后，加入2-氨基-4-溴-5-氯吡啶(0.68g，3.28mmol，0.8equiv.)和吡啶(0.32g，4.11mmol，1equiv.)的四氢呋喃溶液，室温下搅拌3小时。tlc监测反应，原料无剩余，停止反应。加入饱和碳酸钠溶液，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶拌样，柱层析(洗脱剂体系为：pe/ea＝3:1)，得到白色固体a11(1.2g，68％)。
[0494]
((1r,3s)-3-((5-氯-4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(a12)：将a11(800mg，1.85mmol，1.0eq)溶于1,4-二氧六环(10ml)，接着加入a8(613mg，2.03mmol，1.1equiv.)、碳酸钾(0.51g，3.7mmol，2equiv.)和pd(pph3)4(0.21g，0.185mmol，0.1eq)，100℃下搅拌4小时，tlc显示反应已经完全。向反应体系加入粗硅胶拌样，柱层析分离(洗脱剂体系为：dcm/ea＝3:1)，得目标化合物a12(585mg，60％)。
[0495]
(1s,3r)-3-乙酰胺-n-(5-氯-4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)吡啶-2-基)环己基-1-甲酰胺(96)：将化合物a12(100mg，0.19mmol)溶于二氯甲烷(2ml)，滴加三氟乙酸(2ml)，室温下搅拌半小时。浓缩，残留物用饱和碳酸氢钠中和至ph＝10，二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得淡黄色油状物，直接用于下一步(60mg)。将上一步所得产物溶于二氯甲烷中，加入三乙胺(21mg，0.21mmol)，冰浴下滴加乙酰氯(16mg，0.21mmol)。tlc显示反应完成，停止反应。浓缩，柱层析(洗脱剂体系为：dcm/meoh＝30:1)得目标化合物96(白色固体，30mg，46％)。ms:(m 1)469.20。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ10.74(s,1h),8.49(s,1h),8.18(s,1h),8.08(d,j＝3.1hz,1h),7.98(d,j＝7.9hz,1h),7.78(d,j＝7.9hz,1h),7.50(d,j＝1.7hz,1h),7.44(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),3.60-3.51(m,1h),3.23(d,j＝3.0hz,2h),2.64-2.60(m,1h),1.88(d,j＝12.4hz,1h),1.77(s,6h),1.31-1.24(m,9h),1.07(q,j＝11.3,10.8hz,1h)。
[0496]
以下实施例97、98、102、107如无特殊说明，按照与实施例96类似的方法合成。
[0497]
实施例97：(1s,3r)-3-乙酰胺-n-(5-氯-4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异
喹啉-6-基)嘧啶-2-基)环己基-1-甲酰胺化合物97
[0498][0499]
ms(esi)m/z(m 1) ：470.20。
[0500]
实施例98：(1s,3r)-3-乙酰胺-n-(4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)-5-甲基嘧啶-2-基)环己基-1-甲酰胺化合物98
[0501][0502]
ms(esi)m/z(m 1) ：450.25。
[0503]
实施例99：6-(5-氯-2-((4-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二羟基喹啉-1(2氢)-酮化合物99
[0504][0505]
ms(esi)m/z(m 1) ：471.12。
[0506]
实施例100：6-(5-氟-2-((4-((((((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-4,4-二甲基-3,4-二羟基喹啉-1(2氢)-酮化合物100
[0507][0508]
ms(esi)m/z(m 1) ：455.15。
[0509]
实施例101：5-(2-((2,4-二氟-5-((甲基磺酰基)甲基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮化合物101
[0510][0511]
ms(esi)m/z(m 1) ：459.13。
[0512]
实施例102：(1s,3r)-3-乙酰氨基-n-(5-氯-4-(3,3-二甲基-1-氧代吲哚啉-5-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺化合物102
[0513][0514]
ms(esi)m/z(m 1) ：455.18。
[0515]
实施例103：(s)-4,4-二甲基-6-(2-((1-(甲基)哌啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二羟基喹啉-1(2氢)-酮化合物103
[0516][0517]
(s)-3-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(a14)：将a9(100mg，0.35mmol)，a13(105mg，0.52mmol)和diea(90mg，0.7mmol)溶于仲丁醇(2ml)，混合物在130℃下反应过夜，lcms显示反应已经完全，向反应体系加粗硅胶拌样，柱层析分离得a14(70mg，44％)。
[0518]
(s)-4,4-二甲基-6-(2-(哌啶-3-酰基氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二羟基喹啉-1(2氢)-酮(a15)：将a14(70mg)溶于dcm(3ml)，加入tfa(1ml)，室温下搅拌，lcms显示反应已经完全，饱和碳酸氢钠中和至碱性，乙酸乙酯萃取，有机相干燥，浓缩，残留物经柱层析分离a15(38mg，73％)。
[0519]
(s)-4,4-二甲基-6-(2-((1-(甲基)哌啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二羟基喹啉-1(2氢)-酮(103)：将a15(38mg，0.11mmol)溶于dcm(2ml)，冰浴下加入甲磺酰氯(18mg，0.16mmol)，lcms显示反应已经完全，浓缩，残留物经柱层析分离得103(22mg，48％)。1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.43(d,j＝5.1hz,1h),8.11
–
7.94(m,4h),7.32(d,j＝7.3hz,1h),7.27
(d,j＝5.2hz,1h),3.99
–
3.94(m,1h),3.47(s,1h),3.21-3.20(m,2h),2.87(s,3h),2.75(td,j＝11.3,2.8hz,1h),2.56(t,j＝10.3hz,1h),1.97
–
1.85(m,2h),1.62
–
1.51(m,2h),1.34(d,j＝6.0hz,6h).
[0520]
以下实施例104-106如无特殊说明，按照与实施例103类似的方法合成。
[0521]
实施例104：(r)-4,4-二甲基-6-(2-(((1-(甲基)哌啶-3-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二羟基喹啉-1(2氢)-酮化合物104
[0522][0523]
ms(esi)m/z(m 1) ：430.19。
[0524]
实施例105：4,4-二甲基-6-(2-((1-(甲基磺酰基)哌啶-4-基)氨基)嘧啶-4-基)-3,4-二羟基喹啉-1(2h)-酮化合物105
[0525][0526]
ms(esi)m/z(m 1) ：430.19。
[0527]
实施例106：2-(1r，4r)-4-((4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)嘧啶-2-基)氨基)环己基)乙酸化合物106
[0528][0529]
ms(esi)m/z(m 1) ：409.22。
[0530]
实施例107：(r)-n-(5-氯-4-(4,4-二甲基-1-氧代-1,2,3,4-四羟基喹啉-6-基)吡啶-2-基)哌啶-3-甲酰胺化合物107
[0531][0532]
ms(esi)m/z(m 1) ：413.17。
[0533]
实施例108：cdk9抑制剂对癌细胞生长的影响
[0534]
通过测试cdk9抑制剂对癌细胞的生长的影响，我们评估了化合物抑制癌细胞增殖的选择性。
[0535]
在该实施例中，选用急性髓系白血病细胞株oci-aml-3、mv4-11、molm13、molm14，组织细胞性淋巴瘤u-937，人慢性粒性白血病细胞k562，人结直肠癌细胞hct116、dld1，人卵巢颗粒肿瘤细胞cov434，人肝癌细胞系hepg2，淋巴瘤细胞wsu-dlcl2，宫颈癌细胞hela，胃肠间质瘤gist-t1(以上细胞均购自南京科佰)，长期加cdk9抑制剂bay1251152(购自中国mce)处理获得的molm13耐药株—molm13 br1，以及用通过crispr cas9技术敲入获得的hepg2耐药株—hepg2 ki c20-1，其具体构建方法：hepg2细胞通过转染guide rna-px459质粒，之后经过嘌呤霉素筛选以及bay1251152的筛选获得hepg2 cdk9 ki的细胞，后经过单克隆筛选，获得了hepg2 ki c20-1单克隆细胞，经测序检测含有cdk9耐药突变。
[0536]
在实施例中将不同浓度(0.000508μm、0.00152μm、0.00457μm、0.0137μm、0.0411μm、0.123μm、0.370μm、1.11μm、3.33μm、10μm)的本发明化合物及对照化合物dinaciclib、jsh-009和bay1251152(均购自中国mce)分别加入到上述细胞中，并孵育72小时，用cell(promega，美国)化学自发光法细胞活力检测试剂盒，通过对活细胞中的atp进行定量测定来检测活细胞数目，并基于此来计算gi
50
，结果示于表1-3中。
[0537]
通过检测发现，本发明的化合物对不同的癌症细胞系均有很强的抑制作用，如表1及其续表所示，其抑制效果和对照化合物pan-cdk抑制剂dinaciclib以及选择性cdk9抑制剂jsh-009相当，大部分化合物对细胞的抗增殖活性与选择性cdk9抑制剂bay1251152相当甚至优于bay1251152。另外，通过用bay1251152处理急性髓性白血病细胞molm13获得耐药株，表2显示针对该耐药株的很强的抗增殖作用。因此，本发明的化合物表现出克服耐药性的抑制效果。如表3所示，在肝癌细胞hepg2的耐药株上检测结果显示，本发明的化合物依然能克服耐药，而bay1251152存在明显的耐药性。
[0538]
表1
[0539]
gi
50
/μmu937aml3wsu-dlcl2helagist-t1dinaciclib0.0050.0040.0130.01650.015jsh-009
ꢀꢀ
0.0160.0180.034化合物11 0.020.0370.0230.039化合物20 0.0060.0070.0040.011化合物21 0.0130.0140.0120.014化合物26 0.0040.0050.0070.035化合物27 0.0060.0080.0130.04化合物280.0020.002
ꢀꢀꢀ
化合物290.1860.153
ꢀꢀꢀ
化合物310.0160.023
ꢀꢀꢀ
化合物320.0070.012
ꢀꢀꢀ
化合物330.0630.048
ꢀꢀꢀ
化合物340.0070.008
ꢀꢀꢀ
化合物350.0230.033
ꢀꢀꢀ
化合物390.00770.022
ꢀꢀꢀ
化合物400.00460.005
ꢀꢀꢀ
化合物410.0130.023
ꢀꢀꢀ
化合物42《0.00150.003
ꢀꢀꢀ
[0540]
表1(续)
[0541]
[0542][0543]
表2
[0544]
gi
50
(nm)molm13molm13 br1
化合物1127.2640.48化合物136.09910.03化合物147.0858.259化合物263.4836.143化合物276.65923.09化合物820.84451.705化合物35 1.689化合物37 3.052化合物40 4.387化合物42 8.449化合物731.640.345化合物8011.5912.3化合物96 5.6bay125115237.951188
[0545]
表3
[0546]
gi50(nm)hepg2hepg2 cdk9 ki c20-1化合物3587.42138.5化合物3727.7774.8bay125115236.07》1000
[0547]
实施例109：化合物与cdk9的结合活性检测
[0548]
利用分子克隆技术进行了split luciferase体系质粒的构建。分别将荧光素酶的n端结构域(nluc)和c端结构域(cluc)进行克隆，并插入载体pcdna3中，构建nluc-pcdna3以及cluc-pcdna3载体，并在序列两端保留多克隆位点，之后将cdc37和cdk9克隆至相对应的载体中构建c37-cl及cdk9-nl载体。c37-cl质粒序列如seq id no.1所示。cdk9-nl质粒序列如seq id no.2所示。
[0549]
hek-293t(购自美国atcc)接种在10cm细胞培养皿中，等待细胞密度达到70％后备用。将2μg c37-cl(seq id no.1)和2μg cdk9-nl质粒(seq id no.2)加入1ml的opti-mem(货号2120763，购自美国gibco)中，再加入6μl的转染试剂(货号：20200918，购自中国汉恒生物)后混匀备用。将混合好的转染复合物加入10cm的细胞培养皿中，37℃、5％co2培养24小时。24小时后，使用胰酶消化hek-293t细胞，计数后，将转染后的细胞铺入96孔白色corning细胞培养板(购自美国corning)中，接种100μl，密度为5000/孔。12小时后，吸出96孔板中的培养基，加入100μl含有相应浓度的待测化合物的培养基，继续培养12小时。12小时后，每孔加入20μl的luciferase-glo(购自美国promega)检测试剂。混匀后使用酶标仪检测荧光值。按照如下公式计算相对活性ic
50
值：相对活性＝(待测药物荧光值-背景值)/(dmso组荧光值-背景值)
×
100％。检测结果显示本发明的化合物与cdk9有很强的结合作用。
[0550]
表4
[0551] hek-293t细胞中与cdk9的结合活性(ic
50
：μm)化合物110.06
化合物120.098化合物200.036化合物210.044化合物260.016化合物270.019化合物280.015化合物310.129化合物320.049化合物340.05化合物350.3化合物360.19化合物370.049化合物390.087化合物400.067化合物410.114化合物420.09
[0552]
实施例110：体外抑制cdk9蛋白的酶活检定
[0553]
将dmso稀释的化合物及对照化合物dinaciclib、jsh-009、bay-1211152、azd4573(均购自中国mce)与检测的cdk9/cyclint1蛋白(invitrogen，美国)，cdk9-l156f mut/cyclint1突变蛋白(该突变与hepg2 ki c20-1中突变一致，如实施例108所述构建)混合，室温孵育30分钟；加入kinase peptide substrate mixture(invitrogen，美国)与4
×
atp混合，将混合体系转移至384孔白色不透明板中室温反应1小时；加入5μl development solution(invitrogen，美国)室温反应1小时，最后加入stop reagent(invitrogen，美国)终止反应，采用md spectramax i3x酶标仪(molecular devices，美国)读取荧光值。基于读取的荧光数值采用prism 5.0(graphpad software,san diego，ca)作图，计算本发明的化合物对所测试的cdk9/cyclint1蛋白和cdk9突变蛋白cdk9-l156f mut/cyclint1的ic
50
值，如下表5和表6所示。结果显示，本发明的化合物对cdk9及其突变均有很强的抑制作用，在野生型cdk9/cyclint1蛋白均优于对照化合物或与其相当，而对于cdk9突变蛋白cdk9-l156f mut/cyclint1，抑制作用明显优于对照化合物bay1251152。
[0554]
表5
[0555][0556][0557]
表6
[0558][0559]
本发明提供一种cdk9激酶抑制剂，其可以用于抑制cdk9和/或其突变激酶活性以及治疗或预防与cdk9和/或其突变活性相关或由cdk9和/或其突变活性介导的病症。因而，可将其制成相应的药物，适于工业应用。
[0560]
尽管本文对本发明作了详细说明，但本发明不限于此，本技术领域的技术人员可以根据本发明的原理进行修改，因此，凡按照本发明的原理进行的各种修改都应当理解为落入本发明的保护范围。