一种瓜类高密度育苗的生长调控方法和菌株及其应用

1.本发明属于高密度育苗技术领域，涉及一种瓜类高密度育苗的生长调控方法和菌株及其应用。


背景技术：

2.瓜类育苗目前多采用嫁接育苗的方式，而在瓜类高密度育苗的过程中存在一些技术问题。瓜类育苗移栽具有提高幼苗成活率、缩短作物生长周期、提高土地利用率的优点。目前，我国约60％以上的瓜菜品种采用育苗移栽的方式种植。瓜菜生产属于劳动密集型产业，移栽作为瓜菜生产过程中的首要关键环节更是劳动强度大、作业效率低。由于近年来人口老龄化加速，劳动力成本的不断上升，开发新型的瓜菜移栽技术则成为瓜菜种植的迫切需求。
3.高密度瓜菜育苗可以解决育苗成本上升的问题。采用高密度育苗，在相同的空间内可增加育苗的数量，降低成本。但是，高密度育苗过程中对砧木的生长调控非常重要，在夏季高温和高湿度条件下控制砧木和接穗的生长速度至关重要。但是，目前并没有特别好的控制砧木和接穗生长的方法。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺点，提供一种瓜类高密度育苗的生长调控方法和菌株及其应用，其解决了高密度育苗下，砧木和接穗的生长问题，为机械化育苗提供了技术支撑，可显著降低人工成本，提高生产效率。
5.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
6.一种苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11菌株，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，430072，保藏日期2021年07月23日，保藏编号cctcc no:m2021925。
7.优选地，所述苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11菌株采用完全营养培养基进行培养，培养温度为20-25℃，所述完全营养培养基的组成为：细菌蛋白胨10g、酪蛋白水解物1.0g、氯化钠3.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000ml，ph 7.0～7.2，在115.0℃灭菌25分钟。
8.此外，本发明还提供所述苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11菌株在瓜类高密度育苗生长调控中的应用。
9.优选地，先用植物生长调节剂调节接穗的生长和砧木的生长，其中，所述植物生长调节剂为多效唑且其浓度为：冬春季节为5-10ppm；夏秋季节为10-30ppm，用量为每立方米的基质中加入10-15ml的所述多效唑。
10.优选地，再用所述苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11菌株调控所述接穗和砧木的生长；其中，所述苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11 菌株的用量为每立方米的基质中加入3升菌液且所述菌液中所述苍白杆菌b11菌株的数量浓度为108cfu/ml-109cfu/ml。。
11.优选地，将生长后的所述接穗和砧木进行高密度嫁接，所述高密度嫁接是指采用
200孔穴盘或者288孔穴盘进行嫁接育苗。
12.优选地，在嫁接成活后，每个穴盘喷施壮苗生长调控剂10-12ml，所述壮苗生长调控剂包括下述质量浓度的组分：2.5-10mg/l的5-氨基乙酰丙酸，0.1-0.2mg/l的油菜素内脂，20-35mg/l的水杨酸和 0.1-0.6mg/l的氯吡脲。
13.与现有技术相比，本发明的瓜类高密度育苗的生长调控方法和菌株及其应用具有如下有益技术效果中的一者或多者：
14.1、其解决了瓜类高密度育苗下，砧木和接穗的生长问题。
15.2、其为机械化育苗提供了技术支撑，可显著降低人工成本，提高生产效率。
具体实施方式
16.下面结合实施例对本发明进一步说明，实施例的内容不作为对本发明的保护范围的限制。
17.本发明涉及一种瓜类高密度育苗的生长调控方法和菌株及其应用。所述菌株为苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11菌株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，430072，保藏日期2021年07月23日，保藏编号cctcc no:m2021925。
18.所述苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11菌株是从土壤中筛选出来的，其具体筛选过程为：
19.1、取10g土壤溶于盛有90ml无菌水的锥形瓶中，摇晃震荡 15-20min，将其配制成悬浮液，然后按10倍浓度梯度稀释成10-5g/ml 或者10-9g/ml的稀释液。
20.2、将培养基配制好以后，采用平板涂布稀释法，取150-200μl 稀释液分别涂布于培养基上，每个浓度梯度做3个重复，倒置放于 20-25℃培养箱中培养3-5天。
21.其中，所述培养基为完全营养培养基。所述完全营养培养基的组成为：细菌蛋白胨10g、酪蛋白水解物1.0g、氯化钠3.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000ml，ph 7.0～7.2，在115.0℃灭菌25分钟。
22.3、根据细菌菌株特征，挑取形态各异的菌株在平板培养基上纯化3-5次，采用斜面培养基于4℃冰箱保存，备用。
23.4、将筛选获得的菌株接种至砧木和接穗中，其中，接种菌株的浓度为106cfu/ml，每株苗接种200μl，对照组接种清水。
24.采用测定植株高度等方法，筛选具有促进砧木和接穗生长作用的菌株，最终筛选获得本发明的菌株。
25.5、菌株的鉴定，采用生理形态观察和分子检测的方法确定本菌株为苍白杆菌b11。
26.具体地，16s rrna基因pcr扩增反应体系为50μl：采用通用引物27f和1492r各1μl，pcr mix 25μl,模板dna 0.5μl，ddh2o 22.5 μl。反应条件:94℃预变性5min；94℃变性1min，59℃退火1min， 72℃延伸2min，32个循环；72℃总延伸5min，进行测序。根据测序结果的16sr dna序列，提交到ncbi网站，查找相似性最高的典型菌株，进行比对。
27.本发明还涉及所述苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11菌株在瓜类高密度育苗生长调控中的应用。其中，所述瓜类包括：西瓜、甜瓜、黄瓜等瓜类作物。
28.具体地，先用植物生长调节剂调节接穗的生长和砧木的生长。其中，所述植物生长调节剂为多效唑且其浓度为：冬春季节为5-10ppm；夏秋季节为10-30ppm。并且，所述多效唑
的用量为每立方米的基质中加入10-15ml的所述多效唑。也就是，在所述接穗和砧木的生长基质中加入所述多效唑，且使得所述多效唑的加入量为：每立方米的基质中加入10-15ml。
29.所述多效唑是一种植物生长调节剂，具有延缓植物生长、抑制茎秆伸长、缩短节间、促进植物分蘖、增加植物抗逆性能，提高产量等效果。由于嫁接在夏季高温时进行，采用多效唑可以调控接穗和砧木的生长状态，尤其是控制接穗和砧木茎部的生长速度，易于嫁接苗的生产。由此，可以根据嫁接的时间调控接穗和砧木的生长状态，避免砧木徒长与接穗生长嫁接期不匹配。
30.接着，再用所述苍白杆菌(ochrobactrum sp.)b11菌株调控所述接穗和砧木的生长。具体地，将含有所述苍白杆菌b11菌株的菌液加入到所述接穗和砧木的生长基质中，且所述苍白杆菌(ochrobactrumsp.)b11菌株的用量为每立方米的基质中加入3升所述菌液且所述菌液中所述苍白杆菌b11菌株的数量浓度为108cfu/ml-109cfu/ml。通过使用所述苍白杆菌b11，可以促进接穗和砧木苗植株吸收养分，达到壮苗的目的，避免形成茎杆细的弱苗等。
31.在采用多效唑控制了接穗和砧木茎部的生长后，通过所述苍白杆菌b11可以提高接穗和砧木的养分吸收，促进接穗和砧木生长，避免接穗和砧木苗在生长过程中降低对养分的吸收，有利于培育优质、生长壮的砧木苗，利于嫁接苗的生产。
32.然后，将生长后的所述接穗和砧木进行高密度嫁接。所述高密度嫁接是指采用200孔穴盘或者288孔穴盘进行嫁接育苗。
33.在本发明中，可以采用常规双断根贴接的方法，扦插至育苗基质；利用常规管理嫁接苗，操作常规嫁接苗愈合过程；嫁接愈合时间在6-7 天左右。
34.高密度嫁接育苗不同于常规穴盘32孔，50孔和72孔以下的穴盘，其最大的优点在于为瓜类高密度育苗提高了空间的利用率，降低了人工成本。在相同的生产过程中，增加了育苗的数量，因而提高了生产的效率，节约成本。
35.最后，在嫁接成活后，每个穴盘喷施壮苗生长调控剂10-12ml。其中，所述壮苗生长调控剂包括下述质量浓度的组分：2.5-10mg/l的 5-氨基乙酰丙酸，0.1-0.2mg/l的油菜素内脂，20-35mg/l的水杨酸和 0.1-0.6mg/l的氯吡脲。
36.本发明按照上述特定浓度将上述组分进行配比，使得以上组分可以发挥协同增效作用，将砧木幼苗的株高、茎粗及干重控制在合理的数值，避免了幼苗的烧根、徒长，降低了病虫害的发生率。
37.下面的表1是使用和未使用苍白杆菌b11处理砧木后，砧木的单株干重的对照表。由表1可知，使用苍白杆菌b11处理砧木后，其单株干重显著增加。
38.表1
39.处理单株干重g200 ck 激素0.111200 b11 激素0.124288 ck 激素0.122288 b11 激素0.144
[0040] 下面的表2是使用和未使用苍白杆菌b11处理砧木后，测定的砧木植株的氮(n),磷(p)和钾(k)含量的对照表。由表2可知，使用苍白杆菌b11处理砧木后，砧木植株的氮(n),
磷(p)和钾(k)含量显著增加。
[0041]
表2
[0042]
处理组n(％)p(％)k(％)200 ck 激素-茎6.2001.5002.110200 b11 激素-茎6.5701.5702.220
ꢀꢀꢀꢀ
200 ck 激素-根4.1500.8030.702200 b11 激素-根4.3800.8970.807
ꢀꢀꢀꢀ
288 ck 激素-茎5.1901.3101.340288 b11 激素-茎5.9601.4401.590
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288 ck 激素-根4.1800.7550.516288 b11 激素-根4.5100.8810.796
[0043]
下面的表3是使用和未使用苍白杆菌b11处理的砧木生产的嫁接苗的数值比较表。由表3可知，使用苍白杆菌b11处理砧木后，嫁接苗的株高、茎粗、全株干重和地上部干重都显著增加。
[0044]
表3
[0045][0046]
本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。