一种ENU诱导鱼类产生身体透明现象的方法

一种enu诱导鱼类产生身体透明现象的方法
技术领域
1.本发明涉及生物技术技术领域，具体为一种enu诱导鱼类产生身体透明现象的方法。


背景技术：

2.金鱼是一种最常使用的实验室研究用鱼类之一，为研究激素调节和细胞周期调节提供了充足的表征模型，鱼类卵母细胞成熟的研究为我们理解类固醇激素的作用机制有重要意义，在卵母细胞成熟过程中，类固醇激素mih通过其膜受体作用于细胞表面，因此人们认为mih是通过非基因组途径激活卵母细胞成熟的主要途径，其中翻译后修饰激活负责卵母细胞成熟的酶或因子，所以鱼类卵母细胞成熟的体外分析对于类固醇激素的非基因组作用机理的研究是理想的研究模型。
3.但是由于金鱼身体本身不透明，导致从外部无法观察到卵巢结构，因此在很多研究实验中中很难确定在最佳实验时间。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种enu诱导鱼类产生身体透明现象的方法，具备了通过n-乙基-n-亚硝基脲诱变剂enu诱发正常金鱼建立了透明金鱼品系，这种金鱼身体非常透明，可以清晰的观察到活体金鱼体内的器官，具有提高实验便捷性的效果，解决了上述背景技术中所提出的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种enu诱导鱼类产生身体透明现象的方法，包括以下步骤：
6.步骤s1：工作液的配制，100mm的enu溶解于5mm2-吗啉乙磺酸mes，ph7.0中-20℃保存，enu为1000倍浓缩保存液；
7.步骤s2：材料的准备，鱼类材料为：变异的名为muse的女王雌性金鱼和名为wakin的雄性金鱼；器材的准备；激素的准备；
8.步骤s3：金鱼养殖，将20-50只雄性和雌性的成年金鱼饲养在养殖缸中；并每天饲喂金鱼两次干料；并在饲养金鱼的两个月内清理一次养殖缸；
9.步骤s4：工作液的注射，对雄性金鱼先注射所述激素250iu，然后再进行室温条件下饲养；将注射后的雄性金鱼放入含有0.1mm的enu水内处理15小时；并在一周内用enu对雄性金鱼处理三次；
10.步骤s5：金鱼的配对，处理后的雄性金鱼和雌性金鱼进行交配进行自然产卵；
11.步骤s6：后续处理，雄性金鱼和雌性金鱼交配后产生的封闭群落为f1世代；选择f1世代的年幼金鱼分别进行了两次近交交配此过程为f1世代-f3世代；通过f3世代选取年幼金鱼再进行交配得到f4世代，且得到的金鱼为100％透明；
12.步骤s7：分析,得出f4世代的无眼突变体也表明了enu诱变了金鱼的身体出现透明现象；
13.步骤s8：结论，建立了透明的金鱼变异体，该金鱼变异体具有繁殖力且可作为一种实验模型。
14.可选的，所述步骤s2中的器材的准备为150cm
×
60cm，高90cm的带有过滤装置的正方形养殖缸；20cm
×
20cm，高25cm透明玻璃缸；60cm
×
30cm，高45cm的玻璃缸；塑料水草。
15.可选的，所述步骤s2中的激素的准备为人绒毛膜促性腺激素。
16.可选的，所述步骤s3中的清理养殖缸，还包括对养殖缸的换水和清理底沙。
17.可选的，所述步骤s5金鱼的配对具体为雌性和雄性金鱼在12个月龄之后进行配对，性成熟的雌性和雄性金鱼从养殖缸中挑选出来，然后把每一条金鱼放置在透明玻璃缸中；在产卵季金鱼在20-24℃的环境内用2-3周的时间分别进行饲喂；每一对配对的金鱼直到产卵都饲养在60cm
×
30cm，高45cm的玻璃缸中，连续不断地用空气泵输入氧气，并用塑料水草当做产卵窝；在金鱼产卵之后，交配的金鱼被取出，鱼卵留在养殖缸内；一周之后幼鱼开始孵出，对幼鱼饲喂草履虫或河虾卵干粉；幼鱼在同一个养殖缸中饲喂一个月，然后幼鱼标号后放置在其他的缸中。
18.可选的，所述步骤s6中配对f0世代的时间为130606。
19.可选的，所述步骤s6中后代的金鱼中，一半的幼鱼体现出muse的表现型，通过挑选没有银色鳞片的金鱼用来交配产生下一个世代。
20.可选的，所述步骤s6中得到的f2世代的鱼苗几乎都是透明的金鱼。
21.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
22.一、本发明通过muse雌性金鱼和enu工作液处理后wakin的雄性金鱼交配f1-f4世代后，在f4世代中出现100％透明的金鱼，幼鱼成长至几个月身体还是呈现透明，并且能清晰的看到身体内脏，从身体外面可以看到生殖器官。
23.二、本发明通过对雄性金鱼先注射人绒毛膜促性腺激素250iu，然后再进行室温条件下饲养，以促进其射精。
24.三、本发明建立了透明的金鱼变异体，该金鱼变异体具有繁殖力且可作为一种实验模型，这种透明金鱼可以帮助研究者们对活体组织和器官进行观察，也可以作为评价化学医药品对器官发育影响的生物模型。
附图说明
25.图1为本发明muse雌性金鱼和wakin的雄性金鱼的示意图；
26.图2为本发明透明金鱼的发育系谱图；
27.图3为本发明f3世代的雄性透明金鱼的示意图；
28.图4为本发明f3世代的雌性透明金鱼的示意图；
29.图5为本发明f4世代产生的透明金鱼示意图，其中a为幼年透明金鱼；b为幼年金鱼放大照片；c为一年生雄性和雌性金鱼；
30.图6为本发明f4世代产生的无眼变异透明金鱼的示意图。
具体实施方式
31.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于
本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
32.请参阅图1至图6，本实施例提供一种技术方案：一种enu诱导鱼类产生身体透明现象的方法，包括以下步骤：
33.步骤s1：工作液的配制，100mm的enu溶解于5mm2-吗啉乙磺酸mes，ph7.0中-20℃保存，enu为1000倍浓缩保存液。
34.步骤s2：材料的准备，鱼类材料为：变异的名为muse的女王雌性金鱼和名为wakin的雄性金鱼；器材的准备；激素的准备，muse的女王雌性金鱼做为一种金鱼变异体，其失去了其大多数的色素细胞，但是身体呈现白色，仍是不完全透明的。
35.步骤s3：金鱼养殖，将20-50只雄性和雌性的成年金鱼饲养在养殖缸中；并每天饲喂金鱼两次干料；并在饲养金鱼的两个月内清理一次养殖缸，养殖缸的水通过木炭过滤，养殖缸内的ph控制在6.5-7.4，温度控制在14-20℃。
36.步骤s4：工作液的注射，对雄性金鱼先注射激素250iu，然后再进行室温条件下饲养；将注射后的雄性金鱼放入含有0.1mm的enu水内处理15小时；并在一周内用enu对雄性金鱼处理三次。
37.步骤s5：金鱼的配对，处理后的雄性金鱼和雌性金鱼进行交配进行自然产卵。
38.步骤s6：后续处理，雄性金鱼和雌性金鱼交配后产生的封闭群落为f1世代；选择f1世代的年幼金鱼分别进行了两次近交交配此过程为f1世代-f3世代；通过f3世代选取年幼金鱼再进行交配得到f4世代，且得到的金鱼为100％透明，幼鱼成长至几个月身体还是呈现透明，并且能清晰的看到身体内脏，随着时间的变化身体稍微呈现白色，但是生长了1年时间仍然是透明的，从身体外面可以看到生殖器官。
39.步骤s7：分析,得出f4世代的无眼突变体也表明了enu诱变了金鱼的身体出现透明现象，鱼类有四种主要的色素细胞：黑色素细胞，虹色素细胞，白色素细胞和黄色素细胞，这些色素细胞的主要作用就是让金鱼身体不透明，虹膜基团通过反射血小板均匀分布的细胞器表面的光而显示出各种结构的颜色和彩虹色，透明变异体的斑马鱼的表型来源于虹色素细胞的缺失，因此我们推断本次研究中确立的金鱼类型不能产生虹色素细胞，鱼类身体显示白色则是可以考虑为白色素细胞是一种类似于虹色素细胞的色素细胞，因此本研究建立的透明金鱼仍然保留了形成白细胞色素细胞的能力，可以提高透明金鱼的透明度，尽管我们无法确定是否是由enu处理产生的透明，但是f4世代的无眼突变体也表明enu诱变了金鱼如图6所示，然而基因组中受到影响的基因很难被确定，因此由突变引起透明的基因在未来的研究中还有待被阐明。
40.步骤s8：结论，建立了透明的金鱼变异体，该金鱼变异体具有繁殖力且可作为一种实验模型，这种透明金鱼可以帮助研究者们对活体组织和器官进行观察，也可以作为评价化学医药品对器官发育影响的生物模型。
41.进一步的，在实施例中：步骤s2中的器材的准备为150cm
×
60cm，高90cm的带有过滤装置的正方形养殖缸；20cm
×
20cm，高25cm透明玻璃缸；60cm
×
30cm，高45cm的玻璃缸；塑料水草。
42.进一步的，在实施例中：步骤s2中的激素的准备为人绒毛膜促性腺激素，以促进雄性金鱼射精。
43.进一步的，在实施例中：步骤s3中的清理养殖缸，还包括对养殖缸的换水和清理底沙，以彻底清理出养殖缸内的杂质和金鱼的排泄物。
44.进一步的，在实施例中：步骤s5金鱼的配对具体为雌性和雄性金鱼在12个月龄之后进行配对，性成熟的雌性和雄性金鱼从养殖缸中挑选出来，然后把每一条金鱼放置在透明玻璃缸中；在产卵季金鱼在20-24℃的环境内用2-3周的时间分别进行饲喂，产卵季为在金鱼养殖室的1-5月；每一对配对的金鱼直到产卵都饲养在60cm
×
30cm，高45cm的玻璃缸中，连续不断地用空气泵输入氧气，以保证金鱼的生活所需，并用塑料水草当做产卵窝，便于金鱼进行产卵；在金鱼产卵之后，交配的金鱼被取出，鱼卵留在养殖缸内；一周之后幼鱼开始孵出，对幼鱼饲喂草履虫或河虾卵干粉，提供幼鱼正常生长所需的能量；幼鱼在同一个养殖缸中饲喂一个月，然后幼鱼标号后放置在其他的缸中。
45.进一步的，在实施例中：步骤s6中配对f0世代的时间为130606，如图2所示，f0、f1、f2和f3世代的时间分别为130606、150122、160101和161208，f1-f4配对的方法均与f0的配对方法相同。
46.进一步的，在实施例中：步骤s6中后代的金鱼中，一半的幼鱼体现出muse的表现型，通过挑选没有银色鳞片的金鱼用来交配产生下一个世代，表明muse表现型不是劣势隐形性状。
47.进一步的，步骤s6中得到的f2世代的鱼苗几乎都是透明的金鱼。
48.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。