一种评估冰毒成瘾者免疫力低下的方法与流程

1.本发明涉及生物检测领域，尤其是一种评估冰毒成瘾者免疫力低下的方法。


背景技术：

2.冰毒是非儿茶酚胺拟交感神经类中枢兴奋剂，可选择性作用于脑干以上的中枢神经系统部位，提高大脑皮质兴奋性，增强中枢神经系统活动。研究表明，冰毒的兴奋作用主要与突触间隙单胺类神经递质(包括多巴胺、去甲肾上腺素、5-羟色胺等)的含量增加有关。冰毒促进神经末梢释放多巴胺；抑制多巴胺转运体从突触间隙再摄取多巴胺；抑制胞质合成的多巴胺经囊泡单胺转运体2储存到囊泡；抑制单胺氧化酶代谢失活多巴胺。
3.冰毒滥用者因免疫系统紊乱患各种感染性疾病的风险增加。2018年1130多万注射毒品患者中，约1/8感染人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，hiv)、1/2感染丙型肝炎，1/11感染乙型肝炎。研究表明，冰毒改变免疫细胞的比例；抑制t细胞增殖，延长g1/s期转换；诱导t细胞线粒体氧化损伤，功能障碍；损害巨噬细胞吞噬病原体和抗原呈递。冰毒诱导大鼠脾脏和胸腺淋巴细胞凋亡，产生严重的免疫耐受。冰毒减少小鼠脾脏和淋巴结中活化的cd4 t细胞、cd8 t细胞比例；减少肺中t细胞浸润，升高肺组织匀浆中il-6、il-10水平，降低t细胞对呼吸道病原体维持保护性免疫反应的能力。在真菌感染的小鼠模型中，冰毒具有负性免疫调节活性，抑制th1细胞因子il-2、ifn-γ的产生，增强部分th2细胞因子分泌。诱导t细胞产生大量il-4、il-10，抑制t细胞的激活、增殖。对抗真菌病原体的免疫应答以非保护性th2反应为主。另外，冰毒减少小鼠脾脏nk细胞的数量和比例，促进nk细胞终末分化。同时，冰毒减少小鼠脾脏gr-1(ly6c) 单核巨噬细胞的数量和比例。冰毒增加巨噬细胞感染hiv的风险，具体表现在：显著、剂量依赖性地增加hiv逆转录酶活性；增加hiv进入细胞的辅助受体ccr5的表达水平；抑制ifn-α和转录激活因子stat1的表达，以上作用可被drd1拮抗剂阻断。
4.但在现有的技术中均没有简单有效的方法去评估冰毒对机体免疫的影响，以及冰毒成瘾者的免疫力。


技术实现要素：

5.针对现有的不足，本发明提供一种评估冰毒成瘾者免疫力低下的方法。
6.本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种评估冰毒成瘾者免疫力低下的方法，包括以下步骤：
7.s1，采取受检者的外周静脉血，并对其离心分离获得血浆；
8.s2，对血浆进行il-1β、s100a8、ifnγ和isg15的elisa检测获得它们对应的血浆蛋白水平；
9.s3，将检测到的il-1β、s100a8、ifnγ和isg15血浆蛋白水平与正常人的il-1β、s100a8、ifnγ和isg15血浆蛋白水平进行比较，当检测到的血浆蛋白水平比正常人的血浆蛋白水平降低50％以上，就认为受检者免疫力降低，感染风险增加。
10.作为优选，在步骤s1中采取外周静脉血于edta抗凝试管中，立即离心，离心速度7000rpm,离心时间10min,离心后将上清的血浆转至另一ep管并将其置于4℃温度下待用。
11.作为优选，所述外周静脉血采集的量为1.5ml，所述il-1β、s100a8、ifnγ和isg15的elisa检测采用对应的il-1βelisa试剂盒、s100a8 elisa试剂盒、ifnγelisa试剂盒和isg15 elisa试剂盒，每次血浆用量为100μl。
12.本发明的有益效果在于：该发明提供基于冰毒成瘾者外周血血浆中4个免疫功能相关生物标志物组蛋白水平下降，用elisa检测的方法，该检测评估方法是以外周血作为检测样本；用离心分离血液中血浆成分；用elisa方法检测冰毒成瘾者特有免疫功能下降血浆中相关生物标志物组蛋白水平，以健康无冰毒接触者为阴性对照进行评估，检测样本为常规血样，用量少，取样方便；检测试剂、仪器及检测过程简单、方便，能快速简便的评估冰毒成瘾者的免疫力。
附图说明
13.图1是慢性冰毒成瘾模型小鼠血常规检测免疫细胞结果图；
14.图2是本发明实施例血浆酶联免疫吸附测定结果图；
具体实施方式
15.为了更清楚地说明本发明实施例的目的、技术方案和优点，下面将结合实施例对本发明作进一步说明，进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
16.在本发明中，如图2中所示，一种评估冰毒成瘾者免疫力低下的方法，包括以下步骤：
17.s1，采取受检者的外周静脉血，并对其离心分离获得血浆，在应用中采取外周静脉血1.5ml于edta抗凝试管中，立即离心，离心速度7000rpm,离心时间10min,离心后将上清的血浆也就是上层清液的血浆转至另一ep管并将其置于4℃温度下待用；
18.s2，对血浆进行il-1β、s100a8、ifnγ和isg15的elisa检测获得它们对应的血浆蛋白水平，il-1β的elisa检测采用il-1βelisa试剂盒、s100a8的elisa检测采用s100a8 elisa试剂盒、ifnγ的elisa检测采用ifnγelisa试剂盒和isg15的elisa检测采用isg15 elisa试剂盒，每次血浆用量为100μl。il-1β、s100a8、ifnγ和isg15均是免疫反应的重要介质，而ifng和isg15被认为是抗病毒基因。il-1β参与多种细胞活动，包括细胞增殖、分化和凋亡，如t淋巴细胞活化和ifn-γ细胞因子的产生，b淋巴细胞活化和抗体的产生；ifnγ由先天和适应性免疫系统的细胞分泌，主要由免疫细胞如t细胞和nk细胞产生，通过激活效应免疫细胞和增强抗原呈递，在抗菌、抗病毒和抗肿瘤反应中发挥关键作用，它与干扰素受体结合，引发细胞对病毒和微生物感染的反应，增强杀伤病毒感染靶细胞能力，该基因的突变与病毒、细菌和寄生虫感染以及多种自身免疫疾病的易感性增加有关；isg15是通过干扰素激活的细胞内靶蛋白，具有多种功能，包括对中性粒细胞的趋化活性、细胞间信号转导以及病毒感染期间的抗病毒活性，在病毒感染的先天免疫反应中起关键作用，对dna和rna病毒都表现出抗病毒活性，诱导自然杀伤细胞增殖，中性粒细胞趋化因子，诱导细胞因子ifn，在抗真
菌免疫中也发挥重要作用；s100a8则是在炎症过程和免疫反应的调节中发挥重要作用；il-1β、s100a8、ifnγ和isg15均有抗病毒抗感染能力，通过检测它们的表达水平来体现机体的免疫功能，血浆蛋白水平的下降用来评估机体免疫能力的低下；
19.s3，将检测到的il-1β、s100a8、ifnγ和isg15血浆蛋白水平与正常人的il-1β、s100a8、ifnγ和isg15血浆蛋白水平进行比较，当检测到的血浆蛋白水平比正常人的血浆蛋白水平降低50％以上，就认为受检者免疫力降低，感染风险增加，其中正常人也就是健康无冰毒接触者，将其作为阴性对照来进行评估。
20.具体实施例如下：
21.1慢性冰毒成瘾模型小鼠血常规检测血细胞比例无变化：
22.1.1慢性冰毒成瘾模型小鼠及血常规检测：
23.用c57野生型小鼠建立慢性冰毒成瘾模型，实验分为2组，冰毒组(m组)和盐水组(s组)阴性对照组，每组6-8只；m组：腹腔注射病毒。模拟毒品滥用者最初间歇性地使用少量冰毒，然后逐渐增加用量的行为，采用剂量递增的给药方式；给药浓度为第1周1mg/kg/d，第2周2mg/kg/d；建立慢性冰毒暴露的小鼠模型；s组：相应时间腹腔注射生理盐水；给药完成后24小时，麻醉，摘眼球取血，颈椎脱臼法处死小鼠；小鼠外周血用血常规方法检测。
24.1.2结果：
25.从两组血常规检测结果见图1，其中阴影部分的是冰毒组(m组)，非阴影部分的是盐水组(s组)阴性对照组相比，冰毒组总血白细胞(wbc))和中性粒细胞(neu)呈下降趋势，而淋巴细胞(lymph)单核细胞(mo)增加，但都没有统计学显著性差异。
26.1.3小结：
27.以上结果说明，外周血血常规检测，不能检测出慢性冰毒暴露或冰毒成瘾对免疫细胞的影响，也无法评估冰毒成瘾者免疫功能，只能作为参考。
28.2慢性冰毒成瘾模型小鼠外周血血浆4个免疫功能相关指标蛋白水平显著下降：
29.2.1模型小鼠外周血血浆4个免疫功能相关指标elisa检测
30.用血浆酶联免疫吸附实验(elisa)方法检测il-1β、s100a8、ifnγ和isg15血浆含量。
31.2.2结果：
32.结果如图2显示，其中右边是冰毒组(m组)，左边是盐水组(s组)阴性对照组，冰毒组小鼠il-1β、s100a8、ifnγ和isg15血浆含量均显著下降，其中il-1β下降了84.3％，ifnγ下降了85.1％，s100a8降了85.0％和isg15降了85.4％，每组5只，*代表差异有统计学意义，*p《0.05、**p《0.001。
33.2.3小结：
34.以上结果说明，il-1β、s100a8、ifnγ和isg15抗病毒细胞因子组在慢性冰毒暴露血浆水平非常显著下降，就可作为冰毒成瘾者冰毒免疫功能低下的评估指标，也可作为成瘾者或戒毒等治疗疗效指标。
35.应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。