具有预防或改善呼吸道疾病的功效的茶组合物及包含该茶组合物的药物组合物的制作方法

1.本发明涉及抗呼吸道病毒组合物，尤其是茶组合物，并且提供了具有治疗和预防呼吸道病毒相关疾病的功效的天然组合物。


背景技术：

2.一般而言，病毒的起源几乎始于人类历史，并且已经极大发展至今，其变异给人类带来了巨大的痛苦。特别是从果子狸传播的病毒因表现出被称为sars的巨大毒性而给人类带来了巨大的痛苦，这种病毒被称为达菲的植物提取物所征服。由沙漠中的骆驼繁殖的mers让人类感到恐惧，但也被从诸如达菲的植物中提取的药物所征服。然而目前的情况是，mers仍处于无休止的潜伏期。
3.特别是，目前席卷全球的covid-19是一种由来自马蹄蝠到野鼠的病毒组合产生的病毒。在2015年未能通过研究开发疫苗和疗法之后，covid-19于2020年开始出现在地球上并已大规模传播。人类社会目睹了这种巨大的蔓延，在努力开发疫苗或疗法的同时，人类非常窘迫。此外，除了诸如洗手和戴口罩等非常前现代的方法中的原始应对外，没有特定的对策。在发明多种食品的过程中，发现可以从大青叶中检测出氯喹成分，并且在研究中，氯喹成分很容易被提取出来并与其它原料混合。
4.特别是，在认为人类永远无法解决不断发生的病毒的情况下，对病毒的研究似乎有所松动或被忽视，但遗憾的是，许多人都在与恐惧和疾病作斗争。对此，通过持续认真的研究，发现重要的是预防和捕获不断变异的病毒的最终终点，并且还发现由此产生的突变病毒也被杀死，并且发明了天然茶用于预防具有二级和三级突变的病毒以及用于抗病毒用途。


技术实现要素：

5.技术问题
6.本发明的一个目的是提供一种有效治疗和预防由呼吸道病毒，特别是突变病毒如covid-19的出现引起的疾病的天然组合物。
7.本发明的另一个目的是提供一种无副作用的抗呼吸道病毒药物组合物。
8.本发明的又一个目的是提供一种无副作用的抗呼吸道病毒保健功能食品。
9.问题的解决方案
10.为实现本发明的目的，本发明提供了抗呼吸道病毒组合物，包含晚红瓦松提取物作为活性成分。
11.根据一个实施方案，当呼吸道病毒是选自由腺病毒、偏肺病毒、鼻病毒、副流感病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和冠状病毒组成的组中的一种或多种时，抗呼吸道病毒组合物更有效。
12.根据一个实施方案，呼吸道病毒优选是冠状病毒。
13.根据一个实施方案，可以通过使用选自水和具有1至4个碳原子的醇的一种或多种溶剂来提取大青叶提取物。
14.根据一个实施方案，抗呼吸道病毒组合物还可包含沙参提取物。
15.根据一个实施方案，所述抗呼吸道病毒组合物还可包含选自由以下组成的组的一种或多种的提取物：羊乳参天门冬玉竹黄芪蒲公英黄芩干姜山药人参甘草和枣党参苍术贯众羌活藿香陈皮五味子枸杞槐花菟丝子丹参蛇床子远志和郁金
16.抗呼吸道病毒组合物优选作为保健功能食品提供，并且优选以茶组合物的形式使用。
17.为实现本发明的目的，本发明可包括：根据本发明的抗呼吸道病毒组合物；和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
18.根据一个实施方案，药物组合物可具有选自由以下组成的组的剂型：片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、混悬乳剂、糖浆剂、气雾剂、外用制剂、栓剂和注射剂。
19.根据一个实施方案，该药物组合物可用于治疗和预防抗呼吸道病毒相关疾病。
20.根据一个实施方案，可以包括根据本发明的抗呼吸道病毒组合物和食品学上可接受的补充添加剂。
21.根据一个实施方案，保健功能食品可具有选自由以下组成的组的剂型：粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、糖果、口香糖、果冻和饮料。
22.根据一个实施方案，该保健功能食品可用于治疗和预防抗呼吸道病毒相关疾病。
23.本公开的有益效果
24.根据本发明的抗呼吸道病毒组合物可适用于多种呼吸道病毒，特别是可以对由病毒突变体产生的突变病毒也有效。因此，抗呼吸道病毒组合物可以快速应对以连续突变形式出现的病毒。此外，持续使用时，可增强对各种病毒的免疫力，从而保持健康状态。
25.根据本发明的抗呼吸道病毒组合物可以提供一种药物组合物，其对呼吸道病毒相关疾病的治疗或预防有效，并且由天然物质制成，因此不会有副作用。
26.根据本发明的抗呼吸道病毒组合物可以提供一种保健功能食品，其对呼吸道病毒相关疾病的预防有效，并且在持续使用时可以增强免疫力。
具体实施方式
27.在下文中，将更详细地描述本发明。
28.本发明提供了一种抗呼吸道病毒组合物，包含晚红瓦松提取物作为活性成分。
29.当呼吸道病毒选自由腺病毒、偏肺病毒、鼻病毒、副流感病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和冠状病毒组成的组时，抗呼吸道病毒组合物更有效。
30.呼吸道病毒可以是冠状病毒，特别是突变病毒，更特别是covid19病毒。
31.冠状病毒是属于冠状病毒科的病毒，并且很多种疾病由冠状病毒感染引起。冠状病毒是一种rna病毒，其造成哺乳动物和鸟类的呼吸系统疾病、消化系统疾病、肝脏疾病和脑部疾病[thomas m gallagher tm,and michael j buchmeier mj(2001)coronavirus spike proteins in viral entry and pathogenesis virology,279(2):371-374]。冠状病毒是引起普通感冒的病毒之一(baker scpediatric infect dis j(2004)23(11):1049-1050)，但sars病毒也是冠状病毒的一种。sars病毒于2002年首次出现，到2003年春季，全球32个国家约9000名重症急性呼吸道疾病患者具有约15％的高死亡率。此外，冠状病毒也会给畜牧业造成严重的经济损失。另一种冠状病毒，猪流行性腹泻病毒(pedv)，是一种高传染性病毒性疾病，其侵入胃肠道引起呕吐和腹泻导致的脱水以及高热并且具有高死亡率，从而造成重大经济损失[duarte m,laude h(1994)sequence of the spike protein of the porcineepidemic diarrhoea virus j gen virol,75(pt 5):1195-200]。此外，在猪中具有高死亡率的猪传染性胃肠炎病毒(tgev)也属于冠状病毒，其在不同动物中引起多种疾病，包括引起肝炎的小鼠冠状病毒、引起严重呼吸道疾病的大鼠冠状病毒、和引起神经系统疾病的牛冠状病毒[brianda,baric rs curr top microbiol immunol(2005)287:1-30]。
[0032]
晚红瓦松(orostachys japonicus)，也称为顿叶瓦松(orosrachys malacophyllus)是景天科植物，附着而栖息于山中向阳的岩石裂缝或传统房屋的瓦片和石墙上。然而，如今晚红瓦松已难觅踪迹，濒临灭绝，因此，为了药用，晚红瓦松是人工栽培和繁殖的。自古以来，晚红瓦松就用于治疗痔疮、肝炎、湿疹、痢疾腹泻、痔疮、疖疮、烧伤等，并且已知将其擦在疖子或伤口上可有效吸收脓液。还知道晚红瓦松有效促进血液流动、镇痛、免疫、皮炎、促进毛发生长、皮肤皲裂皮炎。
[0033]
可用于制备晚红瓦松提取物的提取溶剂可以包括例如水、c
1-c4低级醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸丁酯和1,3-丁二醇，其可以是单独或组合使用。在一个实施方案中，提取溶剂是乙醇，更具体地约70％乙醇。提取溶剂的量为晚红瓦松干重的约1至15倍，并且可为5至12倍或10倍，但不限于此。另外，作为提取方法，可以采用热水提取、冷提取、回流冷却提取、超声波提取等，并且提取可以重复一次或多次。此外，提取温度没有特别限制，只要不去除晚红瓦松的有用成分的有效活性即可。在一种实施方式中，优选通过在室温下浸渍进行提取。
[0034]
根据本发明的一个实施方案，可以进一步包括沙参提取物。
[0035]
沙参提取物，即沙参叶提取物，可以用但不限于选自由以下组成的组的一种溶剂提取：水、具有1至4个碳原子的低级醇及其混合物，并且优选用乙醇提取。
[0036]
根据本发明的一个实施方案，还可以包含选自由以下组成的组的一种或更多种的提取物：羊乳参、天门冬、玉竹、黄芪、蒲公英、黄芩、干姜、山药、人参、甘草和枣、党参、苍术、贯众、羌活、藿香、陈皮、五味子、枸杞、槐花、菟丝子、丹参、蛇床子、远志和郁金。
[0037]
可以包含羊乳参提取物作为活性成分以进一步增强抗呼吸道病毒组合物的功效。本发明的发酵羊乳参提取物可以通过多种方法制备，可以包括例如获得来自通过使用芽孢杆菌属的特定微生物的羊乳参发酵产物的提取物的方法，或通过使用芽孢杆菌属的特定微生物发酵羊乳参提取物的方法。此处，芽孢杆菌属的特定微生物选自枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)或其混合物。此外，为了获得本发明的发酵羊乳参提取物，可以将羊乳参的各种器官或部位，例如叶、花、根、茎、根茎、果实、种子等用作原材料，并且其中，优选使用羊乳参的根。同时，为了从羊乳参获得发酵羊乳
参提取物，需要进行提取工序，并且作为提取方法，可以使用本领域已知的一般提取方法，例如溶剂提取法。采用溶剂提取法制备发酵羊乳参提取物时可使用的提取溶剂可以选自由以下组成的组：水、c
1-c4低级醇(例如甲醇、乙醇、丙醇和丁醇)或作为其混合物的含水低级醇、丙二醇、1,3-丁二醇、甘油、丙酮、乙醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、氯仿、己烷及其混合物，其中优选选择水、醇或其混合物。当使用水作为提取溶剂时，水优选为热水。另外，当使用醇作为提取溶剂时，醇优选为c
1-c4低级醇，更优选选自甲醇和乙醇中的低级醇。另外，当使用含水醇作为提取溶剂时，其含量优选为50％至90％。
[0038]
通过以正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇的顺序对用水、醇或其混合物提取的天门冬(asparagus cochinchinensis)提取物进行进一步系统性分级，本发明可以包含作为活性成分的二氯甲烷、乙酸乙酯，或用正丁醇分级的乙酸乙酯或正丁醇级分作为活性成分。对于天门冬根，可以使用栽培的或市售的，而没有限制。此外，根据本发明的天门冬提取物可以按以下方式制备。将天门冬根用水彻底清洗，然后在阴凉处和室温下干燥7天。将干燥的天门冬根粉碎并且然后放入提取容器中，然后在适当温度下用提取溶剂提取一定时间。得到天门冬提取物后，可以用滤纸等除去固形物，可以离心混悬液并且可以减压过滤上清液。提取溶剂可以是水、醇或其混合物，优选选自c
1-c4低级醇或其混合溶剂的溶剂，更优选使用70％乙醇，但不限于此。提取溶剂的量为天门冬根干重的2至10倍。
[0039]
作为提取方法，可以使用诸如热水提取、浸渍提取、回流冷却提取和超声波提取的提取方法，并且优选地可以通过使用热水提取法进行提取1至5次。提取过程中，提取温度优选为50℃至100℃，并且更优选为50℃至60℃。提取时间为1至4小时，优选2小时。
[0040]
关于玉竹(polygonatum odoratum)提取物，玉竹有多种类型，包括毛筒玉竹odoratum)提取物，玉竹有多种类型，包括毛筒玉竹二苞黄精等，并且在韩国，有18种玉竹，包括16个种和2个变种(1995)，二者均可用于食用、观赏和药用(1991)。玉竹的其他名称可能包括玉树萎蕤黄精玉竹黄芝小笔管叶仙人饭菟竹怪物花陈黄精等。另外，根据本发明的方法可以使用的玉竹可以是任何种类玉竹，并且可以通过主要在深秋和早春采集其根并彻底清洗来使用。
[0041]
作为用于产生根据本发明的玉竹提取物的方法，可以使用公知的方法。例如，将玉竹根等采集然后切成未加工的根形式的小块，或者在阳光下自然干燥或以机械方式强行干燥后切成小块，然后添加极性溶剂如水、甲醇、乙醇、丁醇和非极性溶剂如乙醚、己烷和氯仿，并且在室温下浸提或温提。
[0042]
在本发明的一个优选实施方案中，从通过将玉竹在甲醇溶剂中在80℃下加热48小时然后提取制备的丁醇层中获得的提取物表现出良好的生理活性，例如降血糖作用和降低血脂作用(总胆固醇和甘油三酯，p《001)。更具体地，本发明人将干燥的玉竹和甲醇放入研磨机中粉碎，然后将粉碎的玉竹-甲醇溶液通过连接冷却器和机械搅拌器在80℃水浴中48小时，重复提取1-3次，将上述过程得到的提取溶液使用过滤器过滤，得到甲醇层。然后使用减压装置去除甲醇层中所含的甲醇，将通过上述过程得到的甲醇提取物按甲醇提取物:h2o:甲醇:提取溶剂＝10:9:1:10的比例混合。然后，使用己烷、氯仿、正丁醇按该顺序作为
提取溶剂依次进行提取，最终得到具有药理作用的丁醇提取物。
[0043]
黄芪(astragali radix)提取物可以采用本领域已知的黄芪提取方法进行提取，并且可以是例如溶剂提取法，但不限于此。此外，黄芪提取物可以通过使用柱色谱进一步进行额外的分级过程而制备为纯化级分。对于待提取的黄芪，可以购买和使用市售的黄芪，并且优选地购买的黄芪在进行提取工序前去除土壤等异物后使用。
[0044]
蒲公英(dandelion；taraxacum playtcarpum h dahlst)是菊科多年生草本蒲公英的露头，并且在其根中含有蒲公英甾醇(taraxasterol)、胆碱、菊粉、果胶等，特别是蒲公英醇(taraxol)、蒲公英赛醇(taraxerol)、φ-蒲公英甾醇、蒲公英甾醇、β-香树精(β-amyrin)、豆甾醇、β-谷甾醇、胆碱、有机酸、果糖、维生素c等。对于蒲公英的药理作用，已知蒲公英对胃炎等有效。蒲公英提取物可以通过本领域已知的方法提取，也可以通过本发明公开的方法获得，例如用水或有机溶剂提取法。
[0045]
黄芩(scutellaria baicalensis georgi)是唇形科的多年生植物，在中国、日本和韩国被广泛用作药用植物。关于主要功效，已知黄芩对炎症、呼吸道感染和消化道感染有效。已知黄芩的主要成分包括黄芩素、黄芩苷、汉黄芩素、去甲汉黄芩素、木蝴蝶素a(oroxylin a)、β-谷甾醇、荠苧黄酮(mosloflavone)等。本发明的黄芩提取物可如下制备。在将黄芩的干燥前端清洗和切碎后，与选自水(包括纯净水)、具有1至4个碳原子的低级醇如甲醇、乙醇、丁醇或其混合溶剂，优选水、甲醇、乙醇及其混合溶剂的溶剂多次混合，然后超声提取、热水提取、常温提取或回流提取，优选常温提取，重复进行约1至20次，优选2至10次：在30℃至150℃，优选在室温下，持续12小时至30天，优选1天至7天。结果，将获得的提取液过滤、减压浓缩并干燥，从而获得本发明的粗提取物。
[0046]
如本文所用，术语“姜(zingiber officinal)”是原产于亚洲热带的多年生草本，属于姜科姜属。姜科主要分布于热带地区，全世界有47个属约1400个种。约50个种的姜分布于东亚、印度、马来西亚等地。在韩国，种植姜属的襄荷和姜，种植姜花属中的姜花，并且襄荷花属中的襄荷花生长在韩国南部岛屿的森林土壤中。姜高约40至100cm，其根茎为根部，多汁肥厚、略扁平和呈水平延伸的圆形。姜的根茎为块状分枝的，呈黄色，气味芳香，味辛辣。姜的叶为互生叶序，一分为二，没有叶柄，茎周围有长叶鞘。姜的叶片呈线状披针形，长15-20cm，宽约2cm，叶尖渐尖，基部狭窄，有光泽，无毛。姜的花为淡黄色，穗状花序浓密，长约7cm。姜的花在7-9月开花，但栽培花很少开花。姜的结果期为12月至次年1月。姜的干燥根茎称干姜，其根茎软木皮称姜壳，其叶称姜叶，均用于医药用途。在本发明中，可以优选使用干姜。
[0047]
本发明中，姜提取物可通过将姜清洗、干燥和粉碎；用选自水、c
1-c4低级醇或其混合溶剂的溶剂对粉碎的姜进行提取来获得。姜提取物可以包括使用选自由以下组成的组的溶剂提取的产物：水、c
1-c4低级醇及其混合溶剂，优选甲醇或乙醇，更优选甲醇。此外，在本发明中，提取物还包括提取处理得到的提取物、提取物的稀释或浓缩溶液、提供干燥提取物得到的干燥产物，或这些粗产物或纯化产物中的任一种。
[0048]
提取方法没有特别限制，可以在室温下或通过在活性成分不被破坏或破坏程度最小的条件下加热来提取活性成分。更具体地说，本发明的姜提取物的获得方法如下。在提取干姜时，作为提取溶剂，使用体积为干姜干重的约2至20倍、优选约3至5倍的水、c
1-c4低级醇如甲醇、乙醇、丁醇等的极性溶剂，或其混合比例为1:01至约1:10的混合溶剂。提取通过使
用提取方法如摇动提取、热水提取、冷提取、回流冷却或超声提取等在20至100，优选25至35的温度下进行约5小时至10天，优选5-48小时。根据本发明的一个具体实施方案，将姜的自然干燥粉末在室温下用甲醇提取后，将提取物用滤纸过滤，并且通过在真空下蒸发和浓缩来提取。
[0049]
姜提取物可以从天然、杂交和变种植物的各种器官中提取，并且可以从例如根、茎、叶和花以及植物组织培养物中提取。根据本发明的一个具体实施方案，回收通过向姜的干燥根中加入甲醇并混合得到的混合物，然后浓缩和冷冻干燥来制备姜提取物。
[0050]
在本发明中，可以通过将姜提取物混悬于甲醇中，然后用极性溶剂或非极性溶剂对其进行分级，分别得到极性溶剂级分和非极性溶剂级分来获得姜提取物的级分。作为本发明的具体实施方案，作为溶剂级分，可以提供meoh级分、水级分、乙腈级分、正己烷级分、乙酸乙酯级分或氯仿级分。根据本发明的一个具体实施方案，通过使用chcl3-meoh洗脱的硅胶柱色谱对姜提取物进行分级来获得姜级分。此外，溶剂级分也可以通过使用由选自极性溶剂如h2o、乙腈、甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇和非极性溶剂如乙酸乙酯、正己烷、二氯甲烷或氯仿的两种或更多种组成的混合溶剂作为流动相的柱色谱分离，然后通过分离对预防和治疗弓形体病有效的活性成分来使用。
[0051]
山药(dioscorea batatas)是百合科多年生单子叶植物，又名山芋或薯囊，原产于中国，作为药材栽培，并且野外生长在山区。山药的块茎含有15％至20％的淀粉为主要成分和各种成分，包括各种氨基酸如精氨酸、组氨酸、赖氨酸和色氨酸，以及矿物质如钙、钠、镁和钾，以及维生素b1和维生素c。在本发明中，使用山药的块根。
[0052]
甘草(glycyrrhiza uralensis)是豆科多年生植物，原产于或栽培于中国北部、西伯利亚、意大利南部、满洲和蒙古。甘草是一种用作镇咳药的药草，同时作为降低毒性的成分包含在所有草药处方中(rauchensteiner f et al,jpharmbiomedanal,38(4),pp.594-600,2005)，并且在欧洲，甘草也可用于使烟草、口香糖和糖果变甜。根据最近的一项研究结果，甘草减轻对肾脏的氧化损伤(yokozawa t.et al,freeradic res,39(2),pp.203-211,2005)，并且已经证实甘草还具有保护被镉损伤的肝细胞的作用(kim s.c.et al,toxicology,197(3),pp.239-251,2004)。
[0053]
在本发明中，甘草可以商业购买和使用，或在自然界中直接收获或生长。在本发明中，可以购买和使用市售的甘草，或可以使用从自然界直接收获或生长的甘草。在甘草提取物的制备方法中，可以采用本领域常用的提取方法，例如超声提取、过滤、回流提取等。优选地，甘草可以是通过将已经通过清洗和干燥去除异物的甘草粉碎，并用水、c
1-c4醇或其混合溶剂提取甘草干燥产物而获得的提取物，更优选地用c
1-c4醇提取的提取物，并且最优选用甲醇或乙醇提取的提取物。此处，提取溶剂优选为甘草干重的2至20倍。例如，在切碎后，可以将甘草干燥产物放入提取容器中，可以向其中加入c
1-c4低级醇或其混合溶剂，优选甲醇或乙醇，并且在室温下放置一段时间，然后过滤，从而获得醇提取物。这里，提取优选在室温下放置一周，然后可以另外进行诸如浓缩或冷冻干燥的方法。
[0054]
枣是自古以来的保健食品，营养丰富，并且与甘草一起是东方医学的重要成分。据报道，枣基本上含有大量的碳水化合物和抗坏血酸，并且包含作为药用成分的各种甾醇、生物碱、皂苷、维生素、有机酸、氨基酸等，并且其药理作用，如通便、利尿、滋补、利胆、兴奋、恢复体力、祛痰、抗炎等作用也有报道和鉴定，使枣在医药工业中得到广泛应用。由于农产品
20℃以用于所有分析。
[0068]
制备例2:沙参提取物的制备
[0069]
将沙参的叶、茎和根风干并粉碎，然后加入10倍甲醇并提取2次，每次12小时。收集滤液，在旋转蒸发器中蒸发溶剂，将剩余的残余物部分取出并冷冻(在-70℃)，而其余部分用于顺序溶剂分级。即，在依次用己烷、乙酸乙酯和蒸馏水(水)进行溶剂分级后，在旋转蒸发器中蒸发溶剂并干燥以用作样品。
[0070]
制备例3：羊乳参、天门冬、玉竹、黄芪、蒲公英、黄芩、干姜、山药、人参、甘草、枣、党参、苍术、贯众、羌活、藿香、陈皮、五味子、枸杞、槐花、菟丝子、丹参、蛇床子、远志和郁金的提取物的制备
[0071]
将各植物清洗和称重，并按照制备例1的方法制备提取物。
[0072]
实施例1：
[0073]
使用制备例1中制备的晚红瓦松提取物。
[0074]
实施例2：
[0075]
将制备例1的提取物和制备例2的提取物以10:5的重量比混合，使用混合提取物。
[0076]
实施例3至5：
[0077]
通过使用具有下表1所示组成的制备例1至3的提取物制备组合物。
[0078]
[表1]
[0079]
[0080]
[0081][0082]
实验例1：病毒培养
[0083]
用于测量实施例1-5中获得的水提物的抗病毒活性的目标病毒为传染性胃肠炎病毒(tgev)和猪流行性腹泻病毒(pedv)，将tgev培养在st细胞中，并且pedv培养在vero细胞中。将st细胞和vero细胞在37℃培养箱中使用含有10％胎儿血清的基本必需培养基(mem)培养。
[0084]
实验例2：病毒抑制能力分析
[0085]
为了测量实施例1-5中获得的水提物对tgev的病毒增殖抑制能力，将st细胞和vero细胞培养在96孔板中，每种细胞在孔底填充至少90％。去除现有培养基，向每个孔加入含有tgev的新培养基，向每个孔按浓度(250、500、1000μg/ml培养基)加入各植物提取物。每种提取物的病毒增殖抑制能力通过tgev感染st或vero细胞48小时，然后通过srb测定法测量活细胞来测量[martin a,martin c(1997)comparison of 5 microplate colorimetric assay for in vitro cytoxicity testing and cell proliferation assay cytotechnology,11:49-54]。向每个孔加入100μl 10％三氯乙酸(tca)，将所得产物4℃放置1小时，并且用蒸馏水清洗数次。在室温下干燥后，加入100μl的04％(w/v)srb(磺胺罗丹明b)溶解在1％(v/v)乙酸中的溶液并染色30分钟。未与细胞结合的srb染色溶液用1％(v/v)乙酸洗涤数次，然后再次干燥。用显微镜相机(zeiss,model axivert10)拍摄每个孔底部细胞的形态，并且向每个孔加入100μl10mm tris溶液(ph 105)以充分溶解细胞结合染料。然后，在560nm处测量吸光度。处理组，包括未用病毒处理的组、仅用植物提取物处理的组(实施例1至3)、仅用病毒处理的组以及用病毒和水溶性提取物处理的组分别用a、b、c、d标记，并且计算各植物提取物的病毒增殖抑制能力(％)[等式1]。
[0086]
[等式1]
[0087]
病毒抑制能力(％)＝[(d-c)/(b-c)]x100
[0088]
实验结果1:针对tgev的抗病毒活性的分析
[0089]
实施例1至5的所有提取物的针对tgev的抗病毒活性示于下表2中。实施例1至5表现出较高的病毒增殖抑制能力，并且特别地，实施例5的提取物最高。
[0090]
表2
[0091]