一种蜗牛秋海棠离体组培繁殖方法

1.本发明涉及一种蜗牛秋海棠离体组培繁殖方法，属于植物繁育技术领域。


背景技术：

2.秋海棠是世界上广为栽培的重要园艺植物，主要分为：观花类、观叶类和花叶兼赏三类，其中观叶类秋海棠因其丰富的叶色、奇特的叶形深受人们喜爱，代表品种——蜗牛秋海棠叶片形似蜗牛壳，逐渐成为园艺爱好者的新宠。现有技术中，蜗牛秋海棠可采用叶片扦插方式来进行繁殖，但繁殖系数较低，一个叶片只能繁殖出4-6株小苗，在短时间内难以形成规模化生产，无法满足市场需求。因此，有必要对蜗牛秋海棠繁殖方法加以改进。


技术实现要素：

3.针对蜗牛秋海棠扦插繁殖系数低、短时间内难于形成规模化生产、无法满足市场需求等问题，本发明提供一种蜗牛秋海棠离体组培繁殖方法，通过该方法提高繁殖系数，促进蜗牛秋海棠的高效繁育，尽快形成规模化生产，满足市场需求。
4.本发明通过下列技术方案完成: 一种蜗牛秋海棠离体组培繁殖方法，其特征在于包括下列各步骤：1）采集蜗牛秋海棠叶片，置于4℃冰箱15-20 h；2）取出步骤1）的叶片后，用质量浓度为75%的酒精擦拭，再用质量浓度为0.15%的次氯酸钠液消毒处理12-20 min，之后用无菌水冲洗3-4次，每次30s；3）将步骤2）处理的叶片放在无菌滤纸上，切割成3-4个5
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5cm的方块叶片；4）将步骤3）切好的方块叶片接种在 ms 6-ba 1.0 mg/l naa 0.5 mg/l的培养基上，在空气相对湿度为70-80%、光照10-12个小时的室内条件下，培养7-10天后，叶片微隆起，再在相同室内条件下继续培养15-20天后，叶片上冒出丛生芽点，又在同样的培养基和室内条件下继续培养30-35天，在丛生芽点萌发并长出小叶；5）将步骤4）的带有芽点的丛生叶片从基部切割下来后，接种到ms 6-ba 1.0mg/l naa 0.5 mg/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，扩繁25-35天，得到增殖苗；6）将步骤5）的增殖苗接种到1/2ms naa0.1 mg/l 活性炭0.7g/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，进行6-8天的生根培养，使增殖苗基部冒出细小根系，继续在本步骤相同条件下培养12-16天，得生根苗；7）将步骤6）的生根苗移栽到以泥炭为基质的穴盘中，每天喷水数次，控制空气湿度为80-90%，遮荫度为60-70%，15-20天后，使生根苗生长出新叶，得到成活率达80-85%的蜗牛秋海棠植株。
5.所述步骤1）置于4℃冰箱15-20 h，可在低温下抑制酚类化合物氧化，降低多酚氧化酶的活性，从而减轻褐化。
6.所述步骤2）的叶片用75%酒精擦拭，而不是直接用水冲洗，避免水流冲刷导致叶片破损，加重叶片褐化。
7.所述步骤3）将叶片放置在无菌滤纸上切割成5cm
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5cm的方块，滤纸可以吸去叶片上的部分水分，避免残留水分导致叶片破损，方块太小，叶片容易褐化死亡，方块太大，降低繁殖系数。
8.所述步骤4）、5）均采用ms 6-ba 1.0mg /l naa 0.5 mg /l，减少培养基配制流程，使用方便。
9.所述步骤6）采用1/2ms naa 0.1 mg /l 活性炭0.7g /l为生根培养基，活性炭可以吸附有害物质，使培养基颜色加深，利于植物生根和壮苗。
10.所述步骤7）移栽时采用泥炭为基质，栽植带有芽点的小苗，泥炭可以为组培苗提供营养，促进植物生长，芽点可以不断长出新的叶片，提高成活率。
11.本发明具有下列优点和效果：采用上述方案，可用一个叶片繁殖出30-60株小苗，且诱导和扩繁培养采用同一种培养基，培养条件一致，简化了培养流程，110—140天，就可得到新的蜗牛秋海棠植株，并且培养过程中，通过添加活性炭，使用泥炭培养可以促进小苗长势健壮。
具体实施方式
12.下面结合实施例对本发明做进一步说明。
13.实施例1本发明通过下列技术方案完成: 一种蜗牛秋海棠离体组培繁殖方法，其特征在于包括下列各步骤：1）采集蜗牛秋海棠叶片，置于4℃冰箱15 h；2）取出步骤1）的叶片后，用质量浓度为75%的酒精擦拭，再用质量浓度为0.15%的次氯酸钠液消毒处理12min，之后用无菌水冲洗3次，每次30s；3）将步骤2）处理的叶片放在无菌滤纸上，切割成3个5
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5cm的方块叶片；4）将步骤3）切好的方块叶片接种在 ms 6-ba 1.0 mg/l naa 0.5 mg/l的培养基上，在空气相对湿度为70%、光照12个小时的室内条件下，培养7天后，叶片微隆起，再在相同室内条件下继续培养15天后，叶片上冒出丛生芽点，又在同样的培养基和室内条件下继续培养30天，在丛生芽点萌发并长出40个小叶；5）将步骤4）的带有芽点的丛生叶片从基部切割下来后，接种到ms 6-ba 1.0mg/l naa 0.5 mg/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，扩繁25天，得到40个增殖苗；6）将步骤5）的40个增殖苗接种到1/2ms naa0.1 mg/l 活性炭0.7g/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，进行6天的生根培养，使增殖苗基部冒出细小根系，继续在本步骤相同条件下培养12天，得40个生根苗；7）将步骤6）的生根苗移栽到以泥炭为基质的穴盘中，每天喷水数次，控制空气湿度为80%，遮荫度为60%，20天后，使40个生根苗生长出新叶，得到成活率达80%的蜗牛秋海棠植株32株。
14.实施例2本发明通过下列技术方案完成: 一种蜗牛秋海棠离体组培繁殖方法，其特征在于包括下列各步骤：1）采集蜗牛秋海棠叶片，置于4℃冰箱20 h；
2）取出步骤1）的叶片后，用质量浓度为75%的酒精擦拭，再用质量浓度为0.15%的次氯酸钠液消毒处理20 min，之后用无菌水冲洗4次，每次30s；3）将步骤2）处理的叶片放在无菌滤纸上，切割成4个5
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5cm的方块叶片；4）将步骤3）切好的方块叶片接种在 ms 6-ba 1.0 mg/l naa 0.5 mg/l的培养基上，在空气相对湿度为80%、光照10个小时的室内条件下，培养10天后，叶片微隆起，再在相同室内条件下继续培养20天后，叶片上冒出丛生芽点，又在同样的培养基和室内条件下继续培养35天，在丛生芽点萌发并长出50小叶；5）将步骤4）的带有芽点的丛生叶片从基部切割下来后，接种到ms 6-ba 1.0mg/l naa 0.5 mg/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，扩繁35天，得到50个增殖苗；6）将步骤5）的增殖苗接种到1/2ms naa0.1 mg/l 活性炭0.7g/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，进行8天的生根培养，使增殖苗基部冒出细小根系，继续在本步骤相同条件下培养16天，得50个生根苗；7）将步骤6）的生根苗移栽到以泥炭为基质的穴盘中，每天喷水数次，控制空气湿度为90%，遮荫度为70%，15天后，使生根苗生长出新叶，得到成活率达85%的蜗牛秋海棠植株42株。
15.实施例3本发明通过下列技术方案完成: 一种蜗牛秋海棠离体组培繁殖方法，其特征在于包括下列各步骤：1）采集蜗牛秋海棠叶片，置于4℃冰箱18 h；2）取出步骤1）的叶片后，用质量浓度为75%的酒精擦拭，再用质量浓度为0.15%的次氯酸钠液消毒处理16min，之后用无菌水冲洗3次，每次30s；3）将步骤2）处理的叶片放在无菌滤纸上，切割成3个5
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5cm的方块叶片；4）将步骤3）切好的方块叶片接种在 ms 6-ba 1.0 mg/l naa 0.5 mg/l的培养基上，在空气相对湿度为75%、光照11个小时的室内条件下，培养8天后，叶片微隆起，再在相同室内条件下继续培养17天后，叶片上冒出丛生芽点，又在同样的培养基和室内条件下继续培养32天，在丛生芽点萌发并长出60个小叶；5）将步骤4）的带有芽点的丛生叶片从基部切割下来后，接种到ms 6-ba 1.0mg/l naa 0.5 mg/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，扩繁30天，得到60个增殖苗；6）将步骤5）的增殖苗接种到1/2ms naa0.1 mg/l 活性炭0.7g/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，进行7天的生根培养，使增殖苗基部冒出细小根系，继续在本步骤相同条件下培养13天，得60个生根苗；7）将步骤6）的生根苗移栽到以泥炭为基质的穴盘中，每天喷水数次，控制空气湿度为85%，遮荫度为65%，18天后，使生根苗生长出新叶，得到成活率达82%的蜗牛秋海棠植株49株。
16.实施例4本发明通过下列技术方案完成: 一种蜗牛秋海棠离体组培繁殖方法，其特征在于包括下列各步骤：1）采集蜗牛秋海棠叶片，置于4℃冰箱17 h；2）取出步骤1）的叶片后，用质量浓度为75%的酒精擦拭，再用质量浓度为0.15%的
次氯酸钠液消毒处理18 min，之后用无菌水冲洗4次，每次30s；3）将步骤2）处理的叶片放在无菌滤纸上，切割成3个5
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5cm的方块叶片；4）将步骤3）切好的方块叶片接种在 ms 6-ba 1.0 mg/l naa 0.5 mg/l的培养基上，在空气相对湿度为76%、光照11个小时的室内条件下，培养9天后，叶片微隆起，再在相同室内条件下继续培养17天后，叶片上冒出丛生芽点，又在同样的培养基和室内条件下继续培养33天，在丛生芽点萌发并长出55个小叶；5）将步骤4）的带有芽点的丛生叶片从基部切割下来后，接种到ms 6-ba 1.0mg/l naa 0.5 mg/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，扩繁29天，得到55个增殖苗；6）将步骤5）的增殖苗接种到1/2ms naa0.1 mg/l 活性炭0.7g/l培养基上，并在与步骤4）相同的室内条件下，进行7天的生根培养，使增殖苗基部冒出细小根系，继续在本步骤相同条件下培养15天，得55个生根苗；7）将步骤6）的生根苗移栽到以泥炭为基质的穴盘中，每天喷水数次，控制空气湿度为86%，遮荫度为68%，16天后，使生根苗生长出新叶，得到成活率达84%的蜗牛秋海棠植株46株。
17.上述实施例1-4中，所述步骤1）置于4℃冰箱15-20 h，可在低温下抑制酚类化合物氧化，降低多酚氧化酶的活性，从而减轻褐化；所述步骤2）的叶片用75%酒精擦拭，而不是直接用水冲洗，避免水流冲刷导致叶片破损，加重叶片褐化；所述步骤3）将叶片放置在无菌滤纸上切割成5cm
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5cm的方块，滤纸可以吸去叶片上的部分水分，避免残留水分导致叶片破损，方块太小，叶片容易褐化死亡，方块太大，降低繁殖系数；所述步骤4）、5）均采用ms 6-ba 1.0mg /l naa 0.5 mg /l，减少培养基配制流程，使用方便；所述步骤6）采用1/2ms naa 0.1 mg /l 活性炭0.7g /l为生根培养基，活性炭可以吸附有害物质，使培养基颜色加深，利于植物生根和壮苗；所述步骤7）移栽时采用泥炭为基质，栽植带有芽点的小苗，泥炭可以为组培苗提供营养，促进植物生长，芽点可以不断长出新的叶片，提高成活率。
18.本发明与常规扦插方法比较：1.扦插方法的一个叶片繁殖系数仅为4-8；本发明方法的一个叶片繁殖系数高达30-60。
19.2. 扦插方法采用珍珠岩为基质，珍珠岩无营养成分，不能促进扦插苗生长；本发明方法采用泥炭为基质，泥炭中含有多种矿物质营养，可促进组培苗快速生长。
20.本发明仅用一个叶片，110—140天，就能繁殖出30-60株小苗，大大提高了繁殖系数，促进了蜗牛秋海棠的高效繁育，尽快形成规模化生产，满足市场需求。