一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法

技术特征：
1.一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)根据cla97c04g076510的cds序列设计基因编辑的靶位点，包含两个靶点target1和target2；target1序列：5
’‑
gtggaaggtgaacaaagta-3’；seq id no.2；target2序列：5
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gctaagagaacaagcaacg-3’；seq id no.3；(2)构建crispr/cas9编辑载体
①
以中间载体pcbc-dt1t2为模板，利用引物target1f/target2r进行pcr扩增，回收目的片段；
②
利用限制性内切酶bsai-hf对crispr/cas9载体pbse402进行酶切，回收酶切后的载体pbse402；
③
将步骤
①
回收的目的片段与步骤
②
酶切后的载体pbse402进行同源重组连接，获得连接产物；
④
将连接产物转化大肠杆菌感受态dh5α，经测序正确，抽提重组质粒，转化至农杆菌感受态细胞eha105；(3)西瓜遗传转化经验证正确后，用于西瓜遗传转化，获得基因编辑植株cla97c04g076510-cr。2.根据权利要求1所述的一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法，其特征在于，步骤(2)
①
所述引物target1f/target2r序列如下：target1f：5
’‑
ttctagctctaaaactactttgttcaccttccaccaatctcttagtcgactctac-3’；seq id no.4；target2r：5
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tcgaagtagtgattggctaagagaacaagcaacggttttagagctagaaatagc-3’；seq id no.5。3.根据权利要求1所述的一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法，其特征在于，创制的西瓜全缘叶种质在杂交种生产或群体改良中的应用。

技术总结
本发明公开了一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法，属于植物基因工程技术领域。本发明首次利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，对HD-ZIP转录因子Cla97C04G076510或其保守结构域进行基因编辑敲除，使得该基因功能缺失或者出现突变，从而形成全缘叶片表型西瓜种质。通过本方法创制的西瓜叶片全缘系与正常的材料相比，除了叶片形状不同外，其他组织如根、茎、卷须、雌花、雄花、生长势等都无可见表型变化；如果将创制的西瓜全缘种质用于杂交种生产或群体改良，将对西瓜商品杂交种纯度的鉴定及改良西瓜叶型具有重要意义。改良西瓜叶型具有重要意义。改良西瓜叶型具有重要意义。


技术研发人员：魏春华 张显 闫星 岳贞 张勇 马建祥 李好 杨建强
受保护的技术使用者：西北农林科技大学
技术研发日：2021.12.09
技术公布日：2022/4/26