多剂眼科制剂和治疗方法

多剂眼科制剂和治疗方法
1.相关申请
2.本技术要求于2019年7月11日提交的美国临时申请序列号62/873,121的权益，其通过引用并入本文。


背景技术：

3.近视是一种常见的视力问题，估计其影响了几乎1/4的世界人口，而且在过去50年中发病率越来越高。在近视中，远处的物体看起来很模糊，而近处的物体看起来很正常。近视可能导致的一些并发症包括视网膜脱离、白内障和青光眼。遗传和环境因素的结合可能导致近视，其中一些风险因素包括家族史、涉及专注于近距离物体的工作以及在室内度过的时间过多。导致近视的机制可能包括眼球太长，或者不太常见的晶状体太强或角膜太弯曲。
附图说明
4.图1a是用硫酸阿托品一水合物进行60天治疗方案期间豚鼠中治疗眼睛的屈光不正的图。
5.图1b是在60天治疗方案期间豚鼠中对照眼睛的屈光不正的图。
6.图1c是在用硫酸阿托品一水合物进行60天治疗方案期间豚鼠中治疗眼睛和对照眼睛的屈光不正的图。
7.图2是显示响应于硫酸铜处理的角膜强度增加的图。
8.图3是在用五水合硫酸铜进行60天治疗方案期间兔中治疗眼睛(od)和未治疗眼睛(os)的屈光不正的图。
9.图4是6周治疗方案后兔中治疗眼睛(五水硫酸铜)、对照眼睛和载体眼睛(vehicle eye)中的或赖氨酸正亮氨酸(lnl)浓度的图。
10.图5a是在使用铜的14天治疗方案期间豚鼠中治疗眼睛的屈光不正的图。
11.图5b是在用硫酸阿托品一水合物和铜的14天治疗方案期间豚鼠中治疗眼睛的屈光不正的图。
12.图5c是在14天治疗方案期间豚鼠中对照眼睛的屈光不正的图。
13.提供这些附图是为了说明本发明的各个方面并且不旨在限制尺寸、材料、配置、布置或比例方面的范围，除非权利要求另有限制。
具体实施方式
14.尽管出于说明的目的，以下详细描述包含许多细节，但本领域普通技术人员将理解，可以对以下细节做出许多变化和改变并且被认为包括在本文中。因此，在不损失任何一般性并且不对所阐述的任何权利要求施加限制的情况下阐述以下实施方式。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方式的目的，并且不旨在是限制性的。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相
同含义。
15.如在本说明书和所附权利要求中所使用，单数形式“一(a)”、“一个(an)”和“所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，提及“一个单元”包括多个这种单元。
16.在本公开内容中，“包括(comprise)”、“包括(comprising)”、“含有(containing)”和“具有(having)”等可以具有美国专利法中赋予它们的含义，并且可以表示“包括(include)”、“包括(including)”等，并且是通常被解释为开放式术语。术语“由
……
组成(consisting of)”或“由
……
组成(consist of)”是封闭式术语，仅包括与这种术语一起特别列出的部件、结构、步骤等，以及符合美国专利法的那些。“基本上由
……
组成(consisting essentially of)”或“基本上由
……
组成(consist essentially of)”具有美国专利法通常赋予它们的含义。特别是，这些术语通常是封闭式术语，但除外的是，允许包括不会对相关制品的基本和新颖特性或功能产生重大影响的附加制品、材料、组分、步骤或元素。例如，组合物中存在但不影响组合物性质或特性的微量元素，如果以“基本上由...组成”的语言呈现，即使没有在这种术语后的制品列表中明确列出，也是允许的。当在书面描述中使用开放式术语，如“包括(comprising)”或“包括(including)”时，应理解，还应直接支持“基本上由
……
组成”的语言以及“由
……
组成”的语言，就像明确说明的那样，反之亦然。
17.说明书和权利要求中的术语“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等，如果存在，用于区分相似的元素，而不一定用于描述特定的顺序或时间顺序。应当理解，如此使用的任何术语在适当情况下是可互换的，使得本文描述的实施方式，例如，能够以不同于本文所示或以其他方式描述的顺序操作。类似地，如果一种方法在本文中被描述为包括一系列步骤，那么本文所呈现的这些步骤的顺序不一定是可以执行这些步骤的唯一顺序，并且所述步骤中的某些可能被省略和/或本文未描述的某些其他步骤可能会被添加到该方法中。
18.本文中出现的短语“在一个实施方式中”或“在一方面”不一定都指相同的实施方式或方面。
19.如本文所用，术语“治疗剂”、“活性剂”等可以互换使用并且是指当以适当或有效量施用于受试者时可以对受试者具有有益或积极作用的试剂。在一方面，治疗剂或活性剂可以是直接或间接刺激角膜交联的交联剂。在一个实施方式中，交联剂可以是含铜化合物。
20.如本文所用，术语“辅助治疗剂”、“辅助治疗”、“辅助活性剂”、“补充治疗剂”、“补充治疗”、“补充活性剂”等可以互换使用并且是指一种治疗剂或活性剂，其与交联剂不同并且是除交联剂之外提供的，并且具有不直接或间接影响角膜交联的作用机制。在一个实例中，但不限于，辅助治疗剂可具有一种包括对近视状况产生积极影响的活动的作用机制，其包括控制、预防或矫正近视，诸如减少轴向长度增长、脉络膜厚度或晶状体度数(lenticular power)。
21.如本文所用，试剂的“有效量”是足以完成试剂所需的特定任务或功能的量。组合物、药物或试剂的“治疗有效量”是指组合物、药物或试剂的无毒但足以实现治疗或预防病况的治疗结果的量，已知或预期该组合物、药物、或试剂对于该病况有效。可以理解，各种生物因素可能会影响物质执行其预期任务的能力。因此，“有效量”或“治疗有效量”在某些情况下可能取决于这种生物因素。进一步地，虽然治疗效果的实现可以由医师、兽医或其他合
格的医务人员使用本领域已知的评估来测量，但应认识到个体差异和对治疗的反应可能使治疗效果的实现在某种程度上成为主观决定。有效量或治疗有效量的确定完全在药物科学和医学领域的普通技术范围内。例如，参见meiner and tonascia,“clinical trials:design,conduct,and analysis,”monographs in epidemiology and biostatistics,vol.8(1986)。
22.如本文所用，“给药方案”或“方案”，诸如“治疗给药方案”或“预防性给药方案”是指，为了达到预期的治疗或效果，可以或应当如何、何时、多少剂量以及多长时间向受试者施用活性试剂或组合物。
23.如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是指将治疗剂施用于无症状或有症状的受试者。换句话说，“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”可以是减少、改善或消除与受试者中存在的病况相关的症状，或者可以是预防性的(即，预防或减少受试者中症状的发生)。这种预防性治疗也可以称为病况的预防。
24.如本文所用，术语“制剂”和“组合物”可互换使用，是指两种或多种化合物、元素或分子的混合物。在一些方面，术语“制剂”和“组合物”可用于指一种或多种活性剂与载体或其他赋形剂的混合物。组合物几乎可以呈现任何物理状态，包括固体、液体(例如，溶液)或气体。此外，术语“剂型”可以包括以用于施用于受试者的形式提供的一种或多种制剂(一种或多种)或组合物(一种或多种)。例如，可注射剂型可以是以适合通过注射施用的方式制备的制剂或组合物。
25.在一个实例中，术语“辅助治疗”可以指辅助治疗剂和任何功能相似的化合物，其包括但不限于，类似物、同系物、异构体、代谢物、衍生物等。
26.如本文所用，“受试者”是指动物。在一方面，动物可以是哺乳动物。在另一个方面，哺乳动物可以是人。
27.如本文所用，“药学上可接受的载体”和“载体”可以互换使用，是指任何惰性和药学上可接受的材料，其基本上没有生物活性，并构成制剂的主要部分。载体可以是聚合的，诸如粘合剂，或非聚合的，并且通常与组合物的其他组分(例如，药物、粘合剂、填充剂、渗透促进剂、抗刺激剂、润肤剂、润滑剂等)混合以组成制剂。
28.术语“混合”是指药物和/或其他成分可以溶解、分散或悬浮在载体中。在某些情况下，药物可以均匀地混合在载体中。
29.如本文所用，术语“基本上”是指动作、特性、性质、状态、结构、项目或结果的完成或接近完成的范围或程度。例如，“基本上”封闭的对象意味着该对象完全封闭，或几乎完全封闭。在某些情况下，与绝对完成的确切允许偏差程度可能取决于特定的上下文。然而，一般而言，完成的接近程度将具有与获得绝对完成和完全完成相同的总体结果。当用于否定含义时，“基本上”的使用同样适用于指完全或几乎完全缺乏动作、特性、性质、状态、结构、项目或结果。例如，“基本上不含”颗粒的组合物完全没有颗粒，或者几乎完全没有颗粒以至于效果与完全没有颗粒一样。换言之，“基本上不含”某种成分或元素的组合物实际上仍可能含有该项目，只要其没有可测量的效果即可。
30.如本文所用，术语“约”用于通过提供给定值可以“略高于”或“略低于”端点来为数值范围端点提供灵活性。除非另有说明，根据特定数字或数值范围使用术语“约”也应理解
为也为在没有术语“约”的情况下的这种数字术语或范围提供支持。例如，为了方便和简洁，“约50微克至约80微克”的数值范围也应理解为对“50微克至80微克”的范围提供支持。此外，应当理解，在本说明书中，即使使用术语“约”，也提供对实际数值的支持。例如，“约”30的列举应该被解释为不仅为略高于和略低于30的值提供支持，而且也为30的实际数值提供支持。
31.如本文所用，多个项目、结构要素、组成要素和/或材料可以为了方便而呈现在共同列表中。然而，这些列表应该被解释为好像列表的每个成员都被单独标识为一个单独的和唯一的成员。因此，这种列表中的任何单个成员均不应仅基于其在共同组中的表现而被解释为事实上等同于同一列表中的任何其他成员，而没有相反的指示。
32.浓度、量和其他数值数据可以在本文中以范围格式表示或呈现。应当理解，使用这种范围格式仅仅是为了方便和简洁，因此应该灵活地解释为不仅包括明确列举为范围限制的数值，而且包括该范围内包含的所有单独的数值或子范围，就好像每个数值和子范围都被明确列举一样。作为说明，“约1至约5”的数值范围应被解释为不仅包括明确列举的约1至约5的值，而且还包括指示范围内的单个值和子范围。因此，该数值范围分别包括诸如2、3和4的单个值和诸如1-3、2-4和3-5等的子范围，以及1、2、3、4和5。
33.同样的原则适用于仅将一个数值列举为最小值或最大值的范围。此外，无论范围的广度或所描述的特性如何，都应适用这种解释。
34.在整个说明书中对“实例”的引用意味着结合实例描述的特定特征、结构或特性被包括在至少一个实施方式中。因此，贯穿本说明书的各个地方出现的短语“在实例中”不一定都指代相同的实施方式。
35.实例实施方式
36.下面提供本发明实施方式的初步概述，然后更详细地描述具体实施方式。该初步概述旨在帮助读者更快地理解技术概念，但不旨在识别其关键或基本特征，也不旨在限制要求保护的主题的范围。
37.预计到2050年，近视将影响全球人口的一半。导致近视的机制可能包括眼球过长，或者不太常见的晶状体过强。当眼球过长时，入射光线可能会聚焦在视网膜前面的点上，而不是在视网膜表面上。在退行性或病理性近视中，视网膜脱离、眼睛出血、白内障的风险会显著增加。
38.虽然导致近视的潜在机制可能是眼球拉长，但已经假设和研究了各种原因。科学家们研究了大约24种近视的遗传风险因素，包括与神经细胞功能、新陈代谢和眼睛发育有关的基因。携带大量遗传风险因素的个体患近视的风险可能增加十倍。
39.环境因素也可以在近视的发展中起作用。一些通常与近视相关的环境因素包括缺乏在户外度过的时间和越来越多的时间做近距离工作(例如，阅读、写作和计算机工作)。研究表明，在近视通常发展期间(6至14岁的儿童)在户外度过的时间可以降低患近视的风险，而与近距离工作的时间无关。然而，一旦近视开始发展，在户外度过的时间可能不会减缓其进展。因此，对近视(尤其是6至14岁儿童)的改进治疗是期望的。
40.本公开涉及多试剂眼部组合物和相关方法，诸如用于治疗受试者的近视和/或预防近视的进展。在一些实例中，治疗受试者的近视和/或预防近视的进展可以包括施用治疗有效量的多试剂眼科剂型，诸如局部剂型。
41.在一个实例中，本文描述了眼科组合物、眼科剂型或眼科药物。眼科组合物、眼科剂型或眼科药物可以包括足以增加受试者眼睛中的赖氨酰氧化酶活性或以其他方式增加受试者的角膜中的交联的一定量的含铜试剂或交联剂。眼科组合物、眼科剂型或眼科药物可进一步包括足以减少近视的一定量的辅助治疗剂，例如，通过减少轴向长度增长、脉络膜厚度或晶状体度数中的一种或多种。眼科组合物、眼科剂型或眼科药物可以进一步包括药学上可接受的载体。在一些实例中，眼科剂型可以是配制成局部滴眼剂的眼科组合物，其可以以约5μl至约50μl的滴体积从容器中以逐滴方式分配。在一些实例中，描述了使用这种眼科组合物、眼科剂型或眼科药物的方法。该方法可以包括在治疗期间施用治疗有效量的如本文所述的眼科组合物、眼科剂型或眼科药物。
42.在一些实例中，近视可以包括硬度降低的角膜。本文所述的眼科组合物、眼科剂型和眼科药物可以增加受试者眼睛中的赖氨酰氧化酶活性。增加的赖氨酰氧化酶活性可以增加角膜硬度并提供可以治疗或预防个体近视进展的其他益处。在另一个实例中，本文所述的眼科组合物、眼科剂型和眼科药物可以通过以下一项或多项来减少近视：减少轴向长度增长、脉络膜厚度或晶状体度数。
43.在一个实例中，含铜试剂可以是赖氨酰氧化酶(lox)的辅助因子，赖氨酰氧化酶(lox)是一种促进各种类型胶原交联形成的酶。因此，含铜试剂(例如，含铜盐、含铜化合物、含铜螯合物等)可以促进胶原蛋白键的增加以及角膜的生物力学性质的伴随增强。因为低角膜硬度可能与近视有关，补充含铜试剂可以增强角膜的硬度，用含铜试剂治疗可以提供一种非侵入性和低成本的治疗或预防近视进展的方法。
44.在一些实例中，本文描述了眼科组合物、眼科剂型或眼科药物，其可包括一定量的可增加受试者眼睛中的lox活性或以其他方式增加角膜交联的含铜试剂。可以使用多种含铜试剂，诸如含铜盐、含铜化合物、含铜螯合物等。铜盐可以包括以下中的一种或多种：硫酸铜、碳酸铜、乙酸铜、氯化铜、溴化铜、氟化铜、硝酸铜、氢氧化铜、碘化铜、高氯酸铜、钼酸铜、硫氰酸铜、酒石酸铜、四氟硼酸铜、硒化铜、焦磷酸铜、其水合物等，或其任意组合。其他铜载体可以包括以下中的一种或多种：ghk-铜、四胺硫酸铜、组氨酸铜、甘氨酸铜、葡萄糖酸铜、其水合物等，或其任意组合。
45.因此，含铜试剂可以是可以提供治疗有效量的铜的任何合适的含铜试剂。治疗有效量可以足以：(a)增加眼睛中的角膜lox活性；(b)与治疗前的胶原交联相比，增加了胶原交联；(c)与治疗前角膜的生物力学强度相比，增加了角膜的生物力学强度；(d)与治疗前的角膜屈光度相比，降低所治疗的眼睛中角膜的屈光度。
46.治疗有效量的含铜试剂可以基于含铜试剂携带的铜的量。在一些实例中，含铜试剂可以提供具有小于约0.625mg/ml、约0.05mg/ml、约0.02mg/ml、约0.005mg/ml或约0.002mg/ml的铜水平的组合物，但是在增加赖氨酰氧化酶活性方面仍然有效。在另一个实例中(例如，当含铜试剂与辅助治疗剂一起施用时)，含铜试剂可提供具有如下铜水平的组合物：小于约0.0625mg/ml、约0.005mg/ml、约0.002mg/ml、约0.0005mg/ml、或约0.0002mg/ml、或约0.00002mg/ml。重要的是保持铜水平足够低以避免铜诱导的毒性，同时保持足够量的生物可利用的铜以增加赖氨酰氧化酶活性。
47.因此，含铜试剂的治疗有效量可以基于递送载体的类型、含铜试剂的类型、所期望的递送持续时间等来确定。例如，取决于组合物的配制方式，组合物可包含约0.000005mg/
ml或0.00005mg/ml至约5mg/ml或约50mg/ml的铜量。在其他实例中，组合物可包括约0.000006mg/ml至约0.007mg/ml、约0.00006mg/ml至约0.07mg/ml、约0.0006mg/ml至约0.007mg/ml、约0.0005mg/ml至约0.03mg/ml、约0.01mg/ml至约5mg/ml或约0.001至约0.005mg/ml的铜量。在一些另外的实例中，组合物可以包括约0.0001mg/ml至约0.05mg/ml、约0.00025mg/ml至约0.015mg/ml、约0.0005mg/ml至约0.00075mg/ml或约0.0008至约0.0011mg/ml的铜量。因此，在一些实例中，治疗有效量可以定义为组合物中包括的铜量。例如，0.0025mg/ml的硫酸铜(ii)五水合物的量提供具有约0.000636mg/ml铜的铜含量的组合物。这是因为硫酸铜(ii)五水合物的原子量约为249.677g/mol，但只有约63.5g/mol或约25％的试剂是铜本身。因此，治疗有效量可以基于由含铜试剂提供的铜含量而不是含铜试剂本身的量来确定。作为可选实例，0.0018mg/ml的无水乙酸铜(ii)的量提供具有约0.00063mg/ml铜含量的组合物。
48.可选地，治疗有效量可以定义为组合物中含铜试剂的wt％。再次，取决于组合物的配制方式，含铜试剂的治疗有效量可以是约0.00001wt％或0.0001wt％至约5wt％、10wt％或15wt％的量。在一些实例中，治疗有效量的含铜试剂可以是约0.05wt％至约15wt％、约0.01wt％至约10wt％、或约0.005wt％至约5wt％。在其他实例中，治疗有效量的含铜试剂可以是约0.00001wt％至约0.0001wt％、约0.0001wt％至约0.0005wt％、约0.0001wt％至约0.0002wt％、约0.0002wt％至约0.0003wt％、或约0.0003wt％至约0.0004wt％的量。在又其他实例中，治疗有效量的含铜试剂可以是约0.001wt％至约0.01wt％或约0.003wt％至约0.008wt％的量。在又其他实例中，治疗有效量的含铜试剂可以是约0.01wt％至约0.1wt％、或约0.03wt％至约0.08wt％的量。值得注意的是，这些重量百分比是基于无水硫酸铜(ii)计算的。因此，当使用替代的含铜试剂时，可以相应地转换重量百分比。
49.在另一个实例中(例如，当含铜试剂与辅助治疗剂一起施用时)，治疗有效量的含铜试剂可以是约0.000001wt％或0.00001wt％至约5wt％、10wt％，或15wt％的量。在一些实例中，治疗有效量的含铜试剂可为约0.005wt％至约15wt％、约0.001wt％至约10wt％、或约0.0005wt％至约5wt％。在其他实例中，治疗有效量的含铜试剂可以是约0.000001wt％至约0.00001wt％、约0.00001wt％至约0.00005wt％、约0.00001wt％至约0.00002wt％、约0.00002wt％至约0.00003wt％、或约0.00003wt％至约0.00004wt％的量。在又一些实例中，治疗有效量的含铜试剂可以是约0.0001wt％至约0.001wt％或约0.0003wt％至约0.0008wt％的量。在又其他实例中，治疗有效量的含铜剂可以是约0.001wt％至约0.01wt％，或约0.003wt％至约0.008wt％的量。
50.铜的生物利用度可以从一种含铜试剂到另一种含铜试剂变化。含铜试剂的酸度或碱度(例如，ph)和其他组成要素也可以提供铜的生物利用度的变化。进一步地，特定剂型中铜的释放速率可以基于剂型中使用的特定含铜试剂进行调整。例如，在一些情况下，可使用溶解度较低的含铜试剂(例如，氟化铜、氢氧化铜、碳酸铜等)来延长含铜试剂从组合物中的释放。
51.含铜试剂也可以与治疗有效量的辅助治疗剂一起使用。在一个实例中，辅助治疗剂可以包括以下中的一种或多种：阿托品、后马托品、环喷托酯、哌仑西平、7-甲基黄嘌呤等，或其任意组合。在另一个实例中，辅助治疗剂可包括以下中的一种或多种：东莨菪碱、托吡卡胺、苯托品、比哌立登、苯海索、奥昔布宁、托特罗定、索利那新、双环胺、达非那新或其
任意组合。在另一个实例中，辅助治疗剂可以包括以下中的一种或多种：格隆溴铵(glycopyrrolate)、异丙托溴铵、噻托溴铵或其任意组合。在另一个实例中，辅助治疗剂可以包括以下中的一种或多种抗毒蕈碱剂(即，抗胆碱能药)，其包括以下中的一种或多种：抗精神病药(例如，氯氮平或喹硫平)、扑尔敏、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(例如，西酞普兰或舍曲林)、茶苯海明、苯海拉明、多塞平、多西拉敏、格隆溴铵、格隆铵(glycopyrronium)、莨菪碱、异丙托铵、奥芬那君、氧托溴铵、异丙嗪、溴化丙胺太林、托特罗定、噻托铵、三环抗抑郁药或其任意组合。在另一个实例中，阿托品可以包括以下中的一种或多种：托品酰莨菪烷-3β-醇(tropoyl tropan-3β-o1)、托品酰石榴皮烷-3α-醇(tropoyl granatan-3α-ol)、托品酰石榴皮烷-3β-醇、托品酰莨菪烷-3α-醇，或其任意组合。出于本公开的目的，“阿托品”可包括任何前述试剂，包括其任意组合、类似物、同系物、异构体、衍生物、盐或代谢物。
52.因此，在一个实例中，辅助治疗剂可以是任何合适的可提供治疗有效量的阿托品的含阿托品试剂。阿托品的治疗有效量可以足以：通过减少以下一项或多项来减少近视：轴向长度增长、脉络膜厚度、晶状体度数或其任何组合。辅助治疗剂的治疗有效量可以基于辅助治疗剂携带的阿托品的量。在一些实例中，辅助治疗剂可提供阿托品水平低于约20.0mg/ml、约2.0mg/ml、约0.2mg/ml、约0.02mg/ml、约0.005mg/ml或约0.001mg/ml但在减少近视方面仍然有效的组合物。重要的是保持阿托品水平足够低以避免毒性，同时保持足够量的生物可利用阿托品以减少近视。
53.因此，辅助治疗剂的治疗有效量可以基于递送载体的类型、辅助治疗剂的类型、期望的递送持续时间等来确定。例如，根据组合物的配制方式，组合物可包括约0.001mg/ml至约5mg/ml或约20mg/ml的阿托品量。在其他实例中，组合物可包括约0.005mg/ml至约0.05mg/ml、约0.005mg/ml至约0.050mg/ml、约0.050mg/ml至约0.5mg/ml、约0.5mg/ml至约5mg/ml或约0.01mg/ml至约0.1mg/ml的阿托品量。在一些另外的实例中(例如，当辅助治疗剂与含铜试剂一起施用时)，组合物可以包括约0.0001mg/ml至约0.005mg/ml、约0.001mg/ml至约0.015mg/ml、约0.015mg/ml至约0.75mg/ml或约0.75mg/ml至约7.5mg/ml的阿托品量。
54.因此，在一些实例中，治疗有效量可以定义为组合物中包含的阿托品量。因此，治疗有效量可以基于辅助治疗剂提供的阿托品含量而不是辅助治疗剂本身的量来确定。
55.可选地，治疗有效量可以定义为组合物中辅助治疗剂的wt％。再次，根据组合物的配制方式，辅助治疗剂的治疗有效量可以是约0.0001wt％或0.001wt％至约1wt％、5wt％、10wt％或15wt％的量。在一些实例中，辅助治疗剂的治疗有效量可以是约0.0005wt％至约2wt％、约0.001wt％至约1wt％、或约0.005wt％至约5wt％。在其他实例中，辅助治疗剂的治疗有效量可以是约0.00001wt％至约0.0001wt％、约0.0001wt％至约0.0005wt％、约0.0001wt％至约0.0002wt％、约0.0002wt％至约0.0003wt％、或约0.0003wt％至约0.0004wt％的量。在又一些实例中，辅助治疗剂的治疗有效量可以是约0.001wt％至约0.01wt％或约0.003wt％至约0.008wt％的量。在又其他实例中，辅助治疗剂的治疗有效量可以是约0.01wt％至约0.1wt％或约0.03wt％至约0.08wt％的量。在一些另外的实例中(例如，当辅助治疗剂与含铜试剂一起施用时)，辅助治疗剂的治疗有效量可以是0.0001wt％至约2wt％。值得注意的是，这些重量百分比是基于硫酸阿托品一水合物计算的。因此，在使用替代的辅助治疗剂的情况下，可以相应地转换重量百分比。
56.在另一个实例中，治疗有效量的交联剂和治疗有效量的辅助治疗剂可以包括交联剂的量与辅助治疗剂的量的比率在约2:1至约1:700范围内。在一个实例中，该比率可以在约1:5至约1:100的范围内。在另一个实例中，该比率可以在约1:5至约1:25的范围内。在另一个实例中，该比率可以在约1:10至约1:20的范围内。
57.在另一个实例中，当交联剂为含铜试剂且辅助治疗剂为阿托品时，含铜试剂的量与阿托品的量的比率可为约2:1至约1:700。在一个实例中，该比率可以在约1:5至约1:100的范围内。在另一个实例中，该比率可以在约1:5至约1:25的范围内。在另一个实例中，该比率可以在约1:10至约1:20的范围内。
58.阿托品的生物利用度可以从一种辅助治疗剂到另一种辅助治疗剂而变化。辅助治疗剂的酸度或碱度(例如，ph)和其他组成要素也可以提供阿托品生物利用度的变化。进一步地，阿托品从特定剂型中的释放速率可以基于剂型中使用的特定辅助治疗剂进行调整。例如，在一些情况下，可使用不易溶解的辅助治疗剂来延长辅助治疗剂从组合物中的释放。
59.含铜试剂和辅助治疗剂也可以与另外的活性剂一起施用。另外的活性剂可包括以下中的一种或多种：核黄素、孟加拉玫瑰红、羟基赖氨酸、含钙试剂、含镁试剂、含银试剂、含铝试剂、含锌试剂、含铁试剂、巴西莓提取物、核心蛋白聚糖、双糖链蛋白聚糖、角质层聚糖、内腔蛋白(lumican)、mimican、纤维调节蛋白、vi型胶原蛋白、x型胶原蛋白、xii型胶原蛋白、xiv型胶原蛋白或其任意组合。
60.在一些实例中，可以施用一种或多种替代的交联剂来代替含铜试剂。例如，在一些情况下，替代的交联剂可以是或包括任何适合在角膜中诱导或促进交联的二价或多价离子或化合物。在一些实例中，交联剂可以是或包括金属离子，诸如碱土金属、过渡金属、后过渡金属或其组合。在一些实例中，交联剂可以是或包括阳离子。在一些具体实例中，交联剂可以是或包括二价金属离子，诸如镁、铁、锌等。
61.在一些实例中，替代的交联剂可以包括但不限于：含钙试剂、含镁试剂、含银试剂、含铝试剂、含锌试剂、含铁试剂，或其他合适的交联剂。交联剂的一些具体但非限制性实例可包括巴西莓提取物、核心蛋白聚糖、硫酸铜(ii)或其组合。
62.在一些实例中，治疗有效量的交联剂和/或治疗有效量的辅助治疗剂的组合可用于治疗和/或预防受交联不足(例如交联，诸如胶原交联，缺乏)影响的病况的进展的方法。除近视外，其他病况可包括但不限于：圆锥角膜、扩张、角膜扩张、散光、远视、角膜炎、老视、大疱性角膜病、cogan综合征、角膜溃疡、间质性角膜炎、干燥性角膜结膜炎、角膜软化症、外周溃疡性角膜炎、疱疹性角膜结膜炎、浅表点状角膜炎等，以及其组合。
63.在其他实例中，辅助治疗剂可作为主要治疗剂用于治疗和/或预防近视、圆锥角膜、扩张、角膜扩张、散光、远视、角膜炎、老视、大疱性角膜病、cogan综合征、角膜溃疡、间质性角膜炎、干燥性角膜结膜炎、角膜软化症、外周溃疡性角膜炎、疱疹性角膜结膜炎、浅表点状角膜炎等，以及它们的组合的方法中。在这些实例中，交联剂可以为辅助治疗剂提供支持作用。
64.可以在药学上可接受的载体中提供含铜试剂和辅助治疗剂。药学上可接受的载体可以以多种方式配制以递送含铜试剂和辅助治疗剂。非限制性实例可包括溶液、悬浮液、乳液、凝胶、水凝胶、热响应凝胶、结膜下注射用制剂、球结膜下(sub-tenon’s)注射制剂、贮库(depot)、薄膜、持续递送基质、隐形眼镜、纱布等，或其组合。
65.在一些实施例中，可以配制组合物用于被动递送至眼睛。在其他实例中，可以配制组合物用于主动递送至眼睛，诸如离子电渗疗法、电穿孔、声穿孔等。在一个具体实例中，制剂可以是滴眼剂。在一些实例中，该组合物可以配制成铜洗脱隐形眼镜或辅助治疗剂洗脱隐形眼镜，诸如软透镜、复曲面透镜、硬透镜、巩膜透镜等，或其组合。在一些实例中，组合物可以配制成持续递送基质，用于与眼表接触放置，诸如在穹窿(cul-de-sac)、结膜、球结膜囊(tenon’s capsule)等中。
66.在一些实例中，如发明人于2018年9月10日提交的美国专利申请序列号16/083,865和2020年7月4日提交的美国专利申请序列号16/960,077中所提及，其通过引用并入本文，药学上可接受的载体可以包括但不限于增溶剂、张度剂、ph调节剂、增稠剂或胶凝剂、聚合物或聚合物基质、防腐剂、水等，以及其组合中的一种或多种。
67.增溶剂可包括，但不限于以下中的一种或多种：磷酸盐缓冲盐水(pbs)、dulbecco's pbs、alsever's溶液、tris缓冲盐水(tbs)、水、平衡盐溶液(bss)，诸如hank's bss、earle's bss、grey's bss、puck's bss、simm's bss、tyrode's bss、bss plus、ringer's乳酸溶液、生理盐水(即，0.9％盐水)、1/2生理盐水等或其组合。取决于特定的制剂、治疗方法等，增溶剂可以以不同的量存在于药学上可接受的载体中。
68.张度剂可包括但不限于以下中的一种或多种：先前列出的增溶剂、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、甘露醇、山梨糖醇、右旋糖、甘油、丙二醇、乙醇、海藻糖等，或其组合。张度剂可用于提供制剂的适当张力。一方面，制剂的张力可以为约250至约350毫摩尔/升(mosm/l)。在另一方面，制剂的张力可以为约270至约330mosm/l。取决于特定制剂、治疗方法等，张度剂可以以不同的量存在于药学上可接受的载体中。
69.在一些实例中，ph调节剂可包括但不限于多种酸、碱及其组合，诸如：盐酸、磷酸、柠檬酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等。ph调节剂可用于为制剂提供合适的ph。在适用的情况下，在一方面，ph可为约5.5至约8.5。在另一方面，ph可为约5.8至约7.8。在又另一方面，ph可为约6.5至约7.8。在又另一方面，ph可为约7.0至约7.6。取决于特定制剂、治疗方法等，ph调节剂可以以不同的量存在于药学上可接受的载体中。
70.增稠剂或胶凝剂可包括但不限于以下中的一种或多种：甘油、丙二醇、聚乙二醇、聚乙烯醇、纤维素衍生物(诸如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素等)、乙基乙烯醇、透明质酸等，或其组合。取决于特定制剂、治疗方法等，增稠剂或胶凝剂可以以不同的量存在于药学上可接受的载体中。
71.可用于制备用于薄膜、隐形眼镜等的聚合物基质的聚合物可包括可生物降解的或不可生物降解的聚合物。聚合物或聚合物组合可包括但不限于以下中的一种或多种：聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚原酸酯、甲基丙烯酸羟乙酯、聚硅氧烷、聚(乳酸-共-乙醇酸)(乳酸与乙交酯含量的不同比率，以及端基诸如酸或酯终止)、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、乙烯乙酸乙烯酯、聚乙二醇、聚乳酸、聚乙醇酸、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素、聚己内酯、透明质酸、白蛋白、其氯化钠嵌段共聚物、其盐等，或其组合。特定的共聚物诸如聚乳酸-聚乙醇酸嵌段共聚物(plga)、聚乙醇酸-聚乙烯醇嵌段共聚物(pga/pva)、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、聚己内酯-聚乙二醇嵌段共聚物、交联羧甲基纤维素等可特别有效地用于生物可降解基质。
72.在一些实例中，组合物可以包括热响应聚合物。热响应聚合物可以包括但不限于
以下中的一种或多种：聚(n-异丙基丙烯酰胺)、聚[2-(二甲氨基)乙基甲基丙烯酸酯]、羟丙基纤维素、聚(乙烯基己内酰胺)、聚乙烯基甲基醚、聚环氧乙烷、聚甲基丙烯酸羟乙酯、abcba型五嵌段聚合物、壳聚糖等或其组合。这种热响应聚合物可以结合或可以被官能化以在一定温度范围内结合特定的含铜试剂或特定的辅助治疗剂，并在改变周围环境的温度时释放含铜试剂或辅助治疗剂，诸如使组合物与眼睛接触，在施用组合物后对眼睛施加热源等。
[0073]
防腐剂可包括但不限于以下中的一种或多种：苯扎氯铵(bak)、西曲铵、过硼酸钠、乙二胺四乙酸(edta)及其各种盐形式、氯丁醇等。取决于特定制剂、治疗方法等，防腐剂可以以不同的量存在于药学上可接受的载体中。
[0074]
在一个实例中，药学上可接受的载体可以配制成眼科滴剂并且可以包括bss或其他合适的溶解度或张度剂。在另一个实例中，药学上可接受的载体可以配制成眼科滴剂并且可以包括人工泪液(例如，refreshoasis等)。药学上可接受的载体可以配制成薄膜、软膏、凝胶悬浮液、泪点塞或隐形眼镜(或其上的涂层)。
[0075]
在一个实例中，眼科组合物可用作眼科剂型以施用治疗有效剂量的含铜试剂和辅助治疗剂。在一些实例中，眼科剂型可以在每次施用事件中提供约0.0005μg至约0.5μg的铜。在又其他实例中，眼科剂型可以在每次施用事件中提供约0.006μg至约0.06μg、约0.01μg至约0.03μg、或约0.016μg至约0.044μg的铜。在又其他实例中，眼科剂型可以每天提供约0.0005μg至约5μg的铜。在又其他实例中，眼科剂型可以每天提供约0.001μg至约2μg、约0.006μg至约0.24μg、约0.01μg至约0.12μg、或约0.016μg至约0.18μg的铜。在一些另外的实例中(例如，当辅助治疗剂与含铜试剂一起施用时)，眼科剂型可以在每次施用事件中提供约0.00005μg至约0.05μg的铜。
[0076]
在一些实例中，眼科剂型可以在每次施用事件中提供约0.05μg至约0.5μg的辅助治疗剂。在又其他实例中，眼科剂型可以在每次施用事件中提供约0.06μg至约0.6μg、约0.1μg至约0.3μg、或约0.16μg至约0.44μg的辅助治疗剂。在又其他实例中，眼科剂型可以每天提供约0.05μg至约5μg的辅助治疗剂。在又其他实例中，眼科剂型可以每天提供约0.01μg至约200μg、约0.01μg至约100μg、约0.01μg至约10μg、或约0.01μg至约1μg的辅助治疗剂。在一些另外的实例中(例如，当辅助治疗剂与含铜试剂一起施用时)，眼科剂型可以每天提供约0.001μg至约20μg，或约0.001μg至约10μg，约0.001μg至约1μg，或约0.001μg至约0.1μg的辅助治疗剂。值得注意的是，并非所有由剂型提供的铜或辅助治疗剂都必须成为生物可利用的，但在一些实例中它可以。
[0077]
在一些实例中，眼科剂型可用于有效剂量方案中以提供治疗有效量的含铜试剂和辅助治疗剂。有效剂量方案可以包括每天一次、每天两次、每天三次、每天四次或更多次施用眼科剂型。
[0078]
在一些实例中，眼科剂型可配制成生物降解的以在选定的时间段内提供含铜试剂或辅助治疗剂的受控和持续释放。在其他实例中，眼科剂型可以配制成以受控和持续的方式从不可生物降解的基质中释放含铜试剂或辅助治疗剂。根据需要，可以将剂型配制成在数小时、数天或数周的时间段内释放含铜试剂或辅助治疗剂。在一些实例中，可以将剂型配制成每周递送约0.005mcg的铜至约250mcg的铜。在又其他实例中，可以将剂型配制成每周递送约0.008mcg至约200mcg、每周约0.01mcg至约150mcg、或每周约0.1mcg至约100mcg。在
一些实例中(例如，当辅助治疗剂与含铜试剂一起施用时)，可以将剂型配制成每周递送约0.0005mcg的铜至约25mcg的铜。
[0079]
在一些实例中，可以将剂型配制成每周递送约0.1mcg的辅助治疗剂至约250mcg的辅助治疗剂。在又其他实例中，可以将剂型配制成每周递送约0.8mcg至约200mcg、每周约0.1mcg至约150mcg、或每周约1.0mcg至约100mcg。在一些实例中(例如，当辅助治疗剂与含铜试剂一起施用时)，可以将剂型配制成每周递送约0.01mcg的辅助治疗剂至约25mcg的辅助治疗剂。也可以将剂型配制成具有零级药物释放动力学。
[0080]
在一些实例中，剂型可以作为预混合组合物保存或储存在容器中，该组合物无需进一步稀释或制备即可施用。在一些实施方式中，单个容器可以保存足以用于单剂量或多剂量的组合物的体积或量。
[0081]
在一些实例中，容器可由但不限于以下中的一种或多种制成：玻璃、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、聚氯乙烯等或其组合。在一些实例中，容器可以具有约0.5ml至约50ml的体积。在另一方面，容器可以具有约1ml至约30ml、约5ml至约20ml、或约3ml至约15ml的体积。一方面，容器可以保存单剂量或多剂量的治疗组合物或剂型。在一些实例中，容器可以是小瓶、瓶子、泡罩包装、小袋等。
[0082]
在一些实例中，容器中可包含约0.005mg至约1mg的含铜试剂。在又其他实例中，容器中可包含约0.01mg至约0.5mg的含铜试剂。在一些实例中，容器中可包含约0.001mg至约0.5mg的铜。在一些实例中，容器中可包含约0.005mg至约0.2mg的铜。在另一实例中(例如，当含铜试剂与辅助治疗剂一起施用时)，容器中可包含约0.0005mg至约0.1mg的含铜试剂。
[0083]
在一些实例中，容器中可包含约0.05mg至约1mg的辅助治疗剂。在又其他实例中，容器中可包含约0.1mg至约0.5mg的辅助治疗剂。在一些实例中，容器中可包含约0.01mg至约0.5mg的辅助治疗剂。在一些实例中，容器中可包含约0.05mg至约0.2mg的辅助治疗剂。
[0084]
在一个实例中，剂型可以是局部眼科剂型，其被配制为滴眼剂并装入到适于以约5μl至约50μl的液滴体积以逐滴方式分配组合物的容器中。例如，容器可以适于以约5μl至约50μl，诸如约15μl、约20μl、约25μl、约30μl、约35μl、约40μl、约45μl或约50μl的液滴体积分配眼科组合物。在一些具体实例中，液滴体积可为约15μl至约40μl、约5μl至约30μl、约20μl至约30μl、约25μl至约35μl、或约30μl至约40μl。剂型可以进一步包括施用机构(例如，注射器、滴管或其他机构)。
[0085]
本文所述的组合物或剂型也可用于治疗和/或预防近视进展的方法。这种方法可以包括在治疗期间将治疗有效量的组合物或剂型施用于受试者的眼睛。在一个实例中，组合物或剂型可以在每只需要其的眼睛每天1至4个时间点施用。在一些实例中，诸如在组合物是滴眼剂的情况下，在每个时间点组合物的剂量可以为约5μl至约50μl、约5μl至约30μl、约20μl至约30μl、约25μl至约35μl、或约30μl至约40μl。在一些进一步的实例中，组合物或剂型可以以每2-5天一次、每周一次、每两周一次等施用。在一些情况下，可以将组合物配制成具有约2-5天、约1周、约2周等的缓释曲线。
[0086]
治疗期可以取决于许多因素，诸如病况的严重程度、诊断时受试者的年龄等。例如，在一些情况下，在受试者是学龄儿童或青少年(例如，从出生之日起约5岁至约18岁)的情况下，受试者可以接受约6个月至慢性治疗、或约1年至约5年、或约2年至约3年、或其他合适时间段的治疗，直至达到期望的结果。
[0087]
在一些实例中，眼科组合物可以作为以下中的一种或多种施用：滴眼药水、结膜下注射剂、球结膜下注射剂、局部用薄膜、凝胶、溶液、隐形眼镜(或其上的涂层)等，或任意组合。在一些实例中，局部用薄膜、凝胶、隐形眼镜等可以配置为随时间生物可降解以提供含铜试剂或辅助治疗剂的受控和持续释放。
[0088]
在一些实例中，含铜试剂或辅助治疗剂可以与眼部塑形装置(例如，角膜塑形术式透镜)一起施用。眼部塑形装置可以将眼睛重新塑形或以其他方式将眼睛保持在期望的或预期的形状(例如，非拉长形状)以矫正近视眼的拉长，同时提高处于期望的形状时眼睛的生物力学强度。在一些实例中，塑形装置的使用可以进一步改善治疗方法的结果或改善率。
[0089]
通常，与未治疗眼睛的角膜相比，本文所述的方法可以增加角膜中的胶原蛋白交联。方法可以增加赖氨酸正亮氨酸交联密度、组氨酰-羟基赖氨酸正亮氨酸交联密度或二者。进一步地，与未治疗的角膜的径向应变相比，本文所述的方法可以将角膜的径向应变降低至少约10％、25％或50％。此外，与未治疗的近视角膜的角膜屈光度相比，本文所述的方法可以降低近视角膜的角膜屈光度。此外，本文所述的包括辅助治疗剂的方法可以通过减少轴向长度生长、脉络膜厚度或晶状体度数中的一种或多种来减少近视。
[0090]
实施例
[0091]
实施例1——阿托品治疗减缓豚鼠近视的进展
[0092]
在豚鼠大约1周龄时，使用0.001％硫酸阿托品一水合物滴眼剂进行治疗。滴眼剂每天施用2次，持续大约60天。屈光不正由眼科医生在治疗前的第1天和随后的时间点(例如，治疗开始后的第14天、27天、44天和62天)测量，如图1a-1c所示。更具体地，屈光不正是通过手持式清醒动物的条纹视网膜检影法测量的，在这些动物中先前已用大约2滴1％环戊醇诱导了睫状肌麻痹(cyloplegia)。当没有瞳孔反应时，通常会在15分钟后获得稳定的屈光不正。图1a
–
1c以线性拟合呈现了测试对象在每只眼睛中的平均屈光不正测量值。
[0093]
实施例2——硫酸铜对家兔角膜形状的影响
[0094]
眼反应分析仪(ocular response analyzer)(ora；reichert,inc,buffalo，ny)是一种商业上可获得的非接触式眼压计，其还通过双向检测压平事件来评估角膜的粘弹性性质，从而允许在喷气载荷42下进行角膜生物力学响应参数的体内测量。系统包括对齐的红外发射器和检测器，使得压平在检测器上产生一个尖峰，其中从变平的角膜表面产生镜面反射。记录两个信号，一个与气压相关，一个与用于检测压平事件的红外信号相关，如图2所示。
[0095]
ora报告了两个压平压力测量值：一个是在角膜向内移动时，在压力p1下达到第一个压平，另一个是在角膜从轻微凹陷中恢复后，当角膜向外移动时，在压力p2下通过第二个压平。因此，这两个值p1和p2表示在加载和卸载循环期间与变平的角膜相关的压力，其中对于有效测量值，p2《p1。p1和p2之间的差被称为角膜滞后(ch)。据报道，ch在与uva核黄素交联一年后不会发生变化，因为它对弹性和粘度43的变化都有反应。然而，据报道，所产生的压平信号发生了显著变化，其与角膜硬化一致。这些变化包括两个压平尖峰——峰值1和峰值2的幅度增加。峰值1或峰值2的较大的值表示较大的压平区域，这与更硬的响应相关联。因此，对于当前的研究，使用定制软件分析ora压力和压平信号以确定峰值1和峰值2的大小。在2.4.b中描述的同一组兔子(包括4组sol a、sol b和载体，不含滴剂)上，在基线处且每周评估ora测量值，持续6-8周。硬化后会呈现峰值1和峰值2的增加；因此，单尾t检验用于
进行统计分析以对各组进行比较。
[0096]
如通过对吹气(air puff)变形的波形响应测量，硫酸铜在体内产生硬化。对联合ab(治疗sol a和治疗sol b)治疗组在第3、4、5和6周的时间进行平均，以与无治疗和载体组进行比较。将峰值1和峰值2与两个对照进行比较。对于峰值1，ab组显著大于无治疗组，其中p值为0.0244，表明治疗组的响应更强烈。治疗组和载体之间没有显著差异(p＝0.0763)。对于峰值2，治疗组ab显著大于无治疗组(p＝0.0098)或载体组(p《0.0001)，表明治疗组的响应显著更强。对于峰值1(p＝0.5526)或峰值2(p＝0.7049)，无治疗组与载体组之间没有显著差异。
[0097]
实施例3——铜治疗减缓家兔近视的进展
[0098]
在大约6周龄时，使用眼科载体中0.15mg/ml五水硫酸铜对家兔进行治疗。滴眼剂每天施用2次，持续大约60天。屈光不正由眼科医生在治疗前的第1天和随后的时间点(例如，治疗开始后的第14天、27天、44天和62天)测量，如图3所描绘。更具体地，屈光不正是通过在手持式清醒动物的条纹视网膜检影法测量的，在这些动物中先前已用大约2滴1％环戊醇诱导了睫状肌麻痹。当没有瞳孔反应时，通常会在15分钟后获得稳定的屈光不正。图3呈现了测试对象在每只眼睛中的屈光不正测量值。如图3所描绘，与对照相比，五水硫酸铜治疗可有效减少治疗眼睛的近视进展约63％。
[0099]
实施例4——铜治疗增加了体内角膜赖氨酸正亮氨酸(lnl)的量
[0100]
lox将赖氨酸转化为ε-醛赖氨酸，ε-醛赖氨酸自发与赖氨酸或羟赖氨酸结合，成为lnl或hlnl。为了测试铜可以增强lox活性并因此增加角膜中lnl量的假设，使用3组(每组n＝6)治疗新西兰白兔。一组每天两次用五水硫酸铜0.15mg/ml滴眼剂治疗，第二组每天两次用载体治疗，第三组为未治疗(无滴眼剂)的对照，每组持续6周。六周后，每组角膜被解剖、称重并用于lnl分析。样品在室温下用nabh4还原，然后用水洗涤两次，干燥，并在110℃下用6n hcl在真空中水解18小时。将水解产物干燥以蒸发hcl，用h2o复原，并重新干燥以除去残留的hcl。水解后，使用纤维素微柱法进行交联富集。然后提供样品用于通过质谱(lc/ms)进行lnl分析。
[0101]
为了进行液相色谱/质谱(lc/ms)，将1μl的100μg/ml d9-赖氨酸作为内标添加到所有样品中。使用连续稀释创建校准曲线。使用sciex 6500q-trap(sciex,farmington,ma)进行半定量质谱分析。helicon ihilic-fusion 2.1
×
100mm色谱柱(瑞典)用于使用10mm nh4oac(缓冲液a)和acn(缓冲液b)的色谱分析。lc/ms以使用优化的源条件的turbolon源在正模式下进行。使用sciex multiquant软件进行定量数据分析。在家兔研究中，lc-ms显示与对照组(未治疗)和载体组相比，治疗的兔角膜中lnl交联显著增加(图4)。对照和载体治疗的兔角膜之间的lnl水平没有统计学上的显著差异。上述提供的证据显示铜滴眼剂对胶原蛋白交联途径中蛋白质的作用机制。
[0102]
实施例5——联合的阿托品和铜治疗减缓豚鼠近视的进展
[0103]
在大约1周龄时，使用铜滴眼剂或含铜的0.001％硫酸阿托品一水合物滴眼剂或对照滴眼剂对豚鼠进行治疗。滴眼剂每天施用4次，持续大约14天。屈光不正由眼科医生在治疗前的第1天和随后的时间点(例如，治疗开始后14天)测量，如图5a-5c所示。更具体地，屈光不正是通过手持式清醒动物的条纹视网膜检影法测量的，在这些动物中先前已用大约2滴1％环戊醇诱导了睫状肌麻痹。当没有瞳孔反应时，通常会在15分钟后获得稳定的屈光不
正。图5a-5c以线性拟合呈现了测试对象在每只眼睛中的平均屈光不正测量值。
[0104]
应当理解，上述方法仅用于说明本发明的一些实施方式。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，本领域技术人员可以设计出许多修改和替代布置，并且所附权利要求旨在覆盖这些修改和布置。因此，虽然本发明已在上文中结合目前被认为是本发明最实用和优选实施方式进行了具体和详细的描述，但是对于本领域普通技术人员来说显而易见的是，可以在不背离本文阐述的原理和概念的情况下进行各种变化。