一种分离藻红蛋白的亲和树脂、制备方法及其应用与流程

技术特征：
1.一种亲和树脂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)称取一定量的胆色素溶解于有机溶剂中，得到浓度为30～50mmol/l的胆色素溶液；(2)按体积比1：0.5～1：1将用相同有机溶剂清洗过的氨基树脂与胆色素溶液混合，然后加入偶联剂至终浓度为0.1～0.6mol/l，避光振荡混匀12～24h，制得亲和树脂；(3)离心去除上清，以相同有机溶剂清洗亲和树脂，再以纯水清洗，之后以酸性和碱性溶液交替清洗，保存。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)至(3)中的有机溶剂为乙醇、异丙醇或二甲基亚砜中的任一种；所述胆色素包括胆红素和胆绿素。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(edc)或者n，n'-二异丙基碳二亚胺(dic)偶联剂粉末，所述氨基树脂选用eah sepharose 4b氨基琼脂糖。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的酸性溶液为含0.5mol/lnacl的0.1mol/l ph 4乙酸盐缓冲液，碱性溶液为ph 8的tris-hcl缓冲液；保存条件为以0.02％～0.05％proclin 300溶液避光4℃保存。5.权利要求1至4任一项所述制备方法得到的亲和树脂。6.权利要求5所述亲和树脂在制备高纯度藻红蛋白的亲和树脂柱层析纯化工艺中的应用。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述亲和树脂柱层析纯化工艺包括以下步骤：将亲和树脂装柱，得到亲和树脂层析柱，采用结合缓冲液冲洗平衡亲和树脂层析柱；将适量的藻红蛋白粗提液加到亲和树脂层析柱上，先以结合缓冲液冲洗去除杂蛋白，然后加入ph 3～5的洗脱缓冲液，以不超过2ml/min的流速洗脱，收集洗脱液；向收集到的洗脱液中加入ph 7～9的调节缓冲液调节ph至中性；测定洗脱液中藻红蛋白的纯度。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述结合缓冲液为20mmol/l ph 5.5磷酸钠缓冲液或20mmol/l ph 8磷酸钠盐缓冲液，结合缓冲液的冲洗流速为2ml/min；所述洗脱缓冲液为20mmol/l ph 4的乙酸盐缓冲液或20mmol/l ph 4柠檬酸盐缓冲液；所述调节缓冲液为0.5mol/l ph 8磷酸钠缓冲液。9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述藻红蛋白粗提液的制备方法包括如下步骤：将干净的新鲜红藻藻体用粉碎机打碎，按固液比1:5～1:8(g/ml))加入10～50mmph 5～8缓冲液，以及1～5％纤维素酶，再用均质机粉碎，4℃静置24～48h，10000rpm低温离心25min，取上清即为藻红蛋白粗提液，4℃暂存；或者，所述藻红蛋白粗提液的制备方法包括如下步骤：将干净的新鲜红藻藻体静置阴干，阴干至水分低于10％后，在粉碎机中磨成粉末，将粉末和10～50mm ph 5～8缓冲液按1:5～1:8(g/ml)混合，加入1～5％纤维素酶，4℃静置2～4天；10000rpm低温离心25min，取上清即为藻红蛋白粗提液，4℃暂存。

技术总结
本发明涉及一种亲和树脂及其制备方法，包括如下步骤：(1)称取一定量的胆色素溶解于有机溶剂中，得到浓度为30～50mmol/L的胆色素溶液；(2)按体积比1：0.5～1：1将用相同有机溶剂清洗过的氨基树脂与胆色素溶液混合，然后加入偶联剂至终浓度为0.1～0.6mol/L，避光振荡混匀12～24h，制得亲和树脂；(3)离心去除上清，以相同有机溶剂清洗亲和树脂，再以纯水清洗，之后以酸性和碱性溶液交替清洗，保存。制备得到的亲和树脂应用于本发明建立的用其纯化藻红蛋白的柱层析工艺中；分离纯化得到的藻红蛋白纯度均达到4以上，纯度较高。纯度较高。纯度较高。


技术研发人员：王硕硕 王瑞璇 宁平 孙谧
受保护的技术使用者：青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司
技术研发日：2021.12.22
技术公布日：2022/3/25