一种海洋益生元组合物及其制备方法和用途与流程

1.本发明涉及海洋生物技术领域，尤其是一种海洋益生元组合物及其制备方法和用途。


背景技术：

2.随着生活水平提高，肥胖人群数目不断升高，而肥胖诱发的心血管疾病、糖尿病等正成为全世界棘手问题。爱美是永恒的主题，为了减肥人们通常使用减肥药、节食、运动等来降低体重，其中，已上市的减肥药存在安全性不足的问题，如奥利司他可能引起肝损伤，氯卡色林等食欲抑制药可能引起大脑中枢和心血管系统等方面的问题，而节食难坚持易反弹，还会引起营养不良，运动难坚持。一些减肥食品甚至可能含有西布曲明等违禁成分，因此市场上亟需有健康有效的解决措施。
3.海洋生物活性成分有不同于陆地生物的独特生物特性，成为了当前研究开发热点。本发明探索海洋生物活性成分的独特优势，结合人体微生态学理论，研究海洋益生元配伍组方，实现有效应用。


技术实现要素：

4.本发明的目的是为了克服现有减肥产品存在的问题，提供一种海洋益生元组合物。本发明将提取自深海虾蟹的壳聚糖降解所得的壳寡糖，冻干后超微粉碎所得的海参粉，鱼皮胶原蛋白酶解所得的胶原肽，三者复配组合成海洋益生元。经体外益生元试验、肥胖预防和改善试验和美容试验测试，海洋益生元具有益生元效果，能预防和改善肥胖，有助于提高皮肤弹性和降低皱纹深度，有美容功效。该产品来源天然安全性高，有明确功效，本发明的海洋益生元组合物可作为日常的健康营养食品和功能美容护肤品原料或直接使用的产品。
5.壳聚糖分子量比较大，不溶于水，人体难以体吸收利用，本发明中壳聚糖采用安全环保无放射残留的高能电子束加速器产生的电离辐射进行辐照降解，获得小分子的壳寡糖，具有良好的水溶性，且溶液稳定性高，极大提高壳寡糖的生物利用度。
6.壳聚糖的降解的方法有化学法、酶催化法、超声波等物理法，化学降解和酶降解法副产物多、过程不易控制。与化学法和酶法相比，高能电子束辐照法操作简单，可控性好。本项目采用的高能电子器产生的γ射线，与钴-60辐射源不同，不产生辐射残留及环境污染。
7.海参被赋予海中人参称号，具有很高的营养价值，通过超微粉碎技术处理的海参，可以让海参的营养物质更好的被吸收利用，同时制成的海参粉有利于产品制剂的加工生产，利于产品的复配，混合均匀，提高产品的质量控制水平。
8.本发明通过科学学研究配伍筛选考察，项目筛选出高活性、高营养的海洋活性物质，起到协同增效的目的。结合中医药的理论，人体是一个有机整体，各个功能器官及生理功能是相互联系制约的，一个疾病需要从多方面综合治疗，才能达到标本兼治。胶原蛋白、海参粉虽然本身就有一定美白作用，但各自作用单一，效果不佳。通过科学配伍组合后，则
能起到良好的综合功效。体现出整体的减肥美容等功效。
9.胶原蛋白对皮肤起到支撑的作用，快速起效，而海参粉中处理有胶原蛋白为，还有许多其他营养成分，起到多靶点的补充营养所需，在美容养颜、延缓衰老、免疫调节、抗疲劳、改善睡眠等方面有良好的功效，壳寡糖作为自然界中唯一带正电荷阳离子碱性氨基低聚糖，具有良好的改善胃肠道微生态环境，促进营养物质的吸收利用，试验研究标明壳寡糖对人体的免疫调节、抗肿瘤、降血脂、调节血糖、改善肝脏和心肺功能及其他多种生理功能有着重要作用，另外壳寡糖还具促进伤口愈合，有较好的抑菌性能，有利于皮肤组织的修复。
10.具体方案如下：
11.一种海洋益生元组合物，所述海洋益生元组合物按照重量比由以下组分组成：壳寡糖：海参粉：鱼皮低聚肽粉＝0.1-1：0.1-2：0.1-5，所述鱼皮低聚肽粉是由鱼皮胶原蛋白酶解得到，分子量低于1000da。
12.进一步的，所述海洋益生元组合物按照重量比由以下组分组成：壳寡糖：海参粉：鱼皮低聚肽粉＝0.1-1：1-2：1-4。
13.进一步的，所述海洋益生元组合物按照重量比由以下组分组成：壳寡糖：海参粉：鱼皮低聚肽粉＝0.1-0.5：1-2：1-2。
14.进一步的，所述壳寡糖是由壳聚糖酶解或者高能电子加速器电离辐照降解，分离纯化后得到10个聚合物以下的寡糖和单糖组成的混合物。
15.进一步的，所述壳寡糖采用深海虾蟹来源的壳聚糖。
16.进一步的，所述海洋益生元组合物促使生物体内有益菌增殖，抑制动物长胖，改善动物肥胖现状，同时具有美容效果。
17.本发明还保护一种海洋益生元组合物的制备方法，包括：
18.获得壳寡糖：将壳聚糖进行酶解或者高能电子加速器电离辐照降解，得到壳寡糖；
19.获得海参粉：取新鲜海参进行热处理；之后经冻干和超微粉碎，得到海参粉；
20.获得鱼皮低聚肽粉；以海洋鱼皮为主要原料通过生物酶解技术获取海洋鱼低聚肽。
21.将壳寡糖、海参粉、海洋鱼皮低聚肽粉按照重量比为0.1-1：0.1-2：0.1-5混合均匀，得到所述海洋益生元组合物。
22.进一步的，壳寡糖：海参粉：鱼皮低聚肽粉的重量比为0.1-1：1-2：1-4，优选为0.1-0.5：1-2：1-2。
23.本发明还保护所述海洋益生元组合物在制备预防和/或改善肥胖的保健品上的运用。
24.本发明还保护所述海洋益生元组合物，作为健康营养食品和/或美容护肤产品的用途。
25.有益效果：
26.本发明从人体微生态学寻找解决肥胖问题的方案。肠道菌群能促进肠道结构稳定，参与肠道免疫系统形成及免疫反应，并通过肝-肠轴、脑-肠轴影响肝脏、脑部健康等，因此超过50种疾病与肠道菌群丰度变化有关，如肥胖、糖尿病、肝病、肠道疾病、抑郁症等，从而也会加快机体的衰老。本发明所述海洋益生元组合物可以作用于肠道菌群，活性成分发
挥效果不一定要吸收，如果能有益于微生态丰度，可间接达到缓解疾病症状、预防肥胖等效果。本发明将对人体及人体微生物有益的成分复配使用，使其既能被人体吸收利用，直接作用，又能助益微生物丰度，间接作用，共同改善人体亚健康状态。
27.再则，皮肤是人体的第一道防线，而皮肤的最外层是微生物层，其参与免疫反应、形成抗菌肽抵抗病原菌侵袭、合成维生素b等营养素，是皮肤强有力的屏障。本发明所述海洋益生元组合物可以修复皮肤，改善表层皮肤的微生物状态，从而具有美容效果。
附图说明
28.为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅涉及本发明的一些实施例，而非对本发明的限制。
29.图1是本发明一个实施例提供的体外益生元试验结果图；
30.图2是本发明一个实施例提供的肥胖预防试验结果图。
具体实施方式
31.下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。在下面的实施例中，如未明确说明，“％”均指重量百分比。
32.实施例1
33.制备海洋益生元组合物，方法如下：
34.获得壳寡糖：将壳聚糖进行酶解或者高能电子加速器电离辐照降解，得到壳寡糖。例如采用酶解木瓜蛋白酶或纤维素酶，酶解温度45-60℃，时间10-30min，ph值4-6。或者采用电离辐照剂量为100-200kgy，时间0.1-5min。
35.获得海参粉：取新鲜海参清除内脏，灭菌；之后经-18℃保存，冻干粉碎，得到粒径300-500目，得海参粉；
36.获得鱼皮低聚肽粉；以海洋鱼皮为主要原料，通过生物酶解技术获取海洋鱼低聚肽，具体是将海洋鱼皮清洗粉碎等预处理后经中性蛋白酶酶解，膜分离、浓缩、喷雾干燥等工艺，最后得到分子量低于1000da的鱼皮低聚肽粉。
37.然后将壳寡糖：海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉按照质量比为0.1：0.1：0.1混合均匀得海洋益生元组合物。
38.取制备的海洋益生元组合物，进行体外益生元试验：
39.收集4名健康志愿者(至少3个月没有服用抗生素)的粪便样品，等质量混合后，用无菌pbs缓冲液按照100g/l稀释，涡旋均质，用无菌纱布过滤掉明显的杂质，得到的粪便匀浆用于接种。按比例(0.5wt％)将实施例的益生元组合物添加到培养基中，另有不添加的作为空白对照组。于厌氧管中接入5ml培养基，再将粪浆接种液按8wt％的接种量分别接到培养基中，在37℃厌氧环境中培养，在0、48小时，取发酵液测定ph值、scfas(短链脂肪酸)含量。
40.1.1 ph值变化
41.表1发酵液的ph值
42.分组0h48h空白7.04
±
0.096.93
±
0.21海洋益生元组合物7.07
±
0.115.31
±
0.20
43.结果表明，添加海洋益生元组合物后发酵液的ph值明显降低，说明其可能促进有益菌增殖从而降低ph值。
44.1.2 scfas含量变化
45.肠道微生物发酵的主要代谢产物是scfas，包括乙酸、丙酸和丁酸等。scfas在调节宿主代谢、降低结肠ph、免疫系统调节等方面具有关键作用。采用气相色谱法定量测定了发酵液中乙酸、丙酸和丁酸的浓度，结果见图1。
46.图1表明，添加海洋益生元组合物后发酵液中乙酸、丙酸、丁酸的浓度均显著高于空白，说明海洋益生元组合物能促进有益菌增殖。
47.实施例2
48.制备海洋益生元组合物，方法同实施例1。其中，壳寡糖：海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉按照质量比为0.5：1.5：2.5混合均匀得海洋益生元组合物。
49.取制备的海洋益生元组合物，进行肥胖预防试验：
50.选用3周龄的c57bl/6n雄性小鼠作为实验动物，12只。分为2组，对照组和益生元组合物组，各6只。
51.12只小鼠每天饲喂高脂饲料共8周，在饲喂高脂饲料的同时，对照组每天灌胃无菌pbs溶液，益生元组合物组每天灌胃益生元组合物溶液(5wt％)。每只小鼠每天的灌胃体积固定为0.4ml。每2周称一次小鼠体重，记下小鼠体重的改变趋势，以观察益生元组合物对小鼠肥胖的预防效果。
52.试验结果如图2，可以看到，在实验初始时两组基本无差异，随着时间的延长，第2周起，对照组的体重已经高于益生元组合物组，第6周之后，两组的差异逐渐明显，对照组的体重的增长幅度变大，而益生元组合物组的体重的增长趋势则趋于平缓，说明益生元组合物对高脂饲料饲喂小鼠的体重增长具备明显的抑制作用，且随着时间的延长，差异越显著。
53.实施例3
54.制备海洋益生元组合物，方法同实施例1。其中，样品1是将壳寡糖：海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉按照质量比为0.5：2：5混合均匀得海洋益生元组合物。
55.样品2是将海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉按照质量比为2:5混合均匀得试样组合物
56.取制备的样品组合物，进行肥胖改善试验：
57.选用3周龄的c57bl/6n雄性小鼠作为实验动物，36只。分为2组，空白对照组6只、肥胖模型组30只。
58.空白对照组6只小鼠饲喂普通低脂饲料，共饲喂8周，其他小鼠每天饲喂高脂饲料，8周后，以高脂饲喂组的小鼠体重高出模型对照组体重的15％作为肥胖小鼠造模成功的判断标准。挑选体重相近且肥胖造模成功的21只小鼠，模型对照组灌胃无菌pbs溶液，样品1组灌胃样品1制成的溶液(5wt％)。样品2组灌胃样品2制成的溶液(5wt％)，每只小鼠每天的灌胃体积固定为0.4ml。每2周称一次小鼠体重，记下小鼠体重的改变趋势，以观察组合物对小鼠肥胖的改善效果。
59.空白对照组的平均体重是26.2g，8周的高脂饲喂结束时，高脂饲喂组的小鼠平均体重45.3g，成功建立饮食诱导的肥胖小鼠模型。灌胃结束后，样品1组的体重减少明细，与模型组和样品2组比较差异均有统计学意义(p《0.05)，样品2组的体重没有减少，充分说明样品1(即益生元组合物)可以显著改善肥胖现状。
60.实施例4
61.制备海洋益生元组合物，方法同实施例1。其中，组合1是将壳寡糖：海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉按照质量比为1：1：2混合均匀得海洋益生元组合物。
62.组合2是将海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉按照质量比为1：2混合均匀得试样组合物。
63.取制备的样品进行皮肤改善试验：
64.随机对照试验，30位女性志愿者参与，年龄30-50岁，分为3组，分别每天早晚涂抹样品1精华、样品2精华、空白精华(对照组)，试验周期8周，第4周和第8周为测试点。测试指标为皮肤弹性和眼部皱纹。
65.结果表明，添加益生元组合物的精华(组合1)提高皮肤弹性效果明细，能改善皱纹深度，具有良好的美容效果，好评率超出空白精华(对照组)，差异均有统计学意义(p《0.05)。组合2有一定作用，但比起组合1的效果差，且起效慢，只有到第8周时才体现出比空白精华组较好的效果，但差异不显著。
66.实施例5
67.制备海洋益生元组合物，方法同实施例1。其中，壳寡糖：海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉是按照质量比为0.5：1：3混合均匀，得海洋益生元组合物。
68.实施例6
69.制备海洋益生元组合物，方法同实施例1。其中，壳寡糖：海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉是按照质量比为1：2：4混合均匀，得海洋益生元组合物。
70.实施例7
71.制备海洋益生元组合物，方法同实施例1。其中，壳寡糖：海参粉：海洋鱼皮低聚肽粉是按照质量比为0.5：0.5：2混合均匀，得海洋益生元组合物。
72.以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
73.另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
74.此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。