一种抗炎止痒的中药组合物及其制备方法和用途与流程

1.本发明涉及中医药技术领域，具体而言，涉及一种抗炎止痒的中药组合物及其制备方法和用途。


背景技术：

2.皮肤瘙痒，其定义为皮肤内出现不适感，促使动物和人具有抓挠欲望的症状。其病因复杂，包括内脏系统疾患、局部疾患、理化生物因素诱导等。瘙痒的机制复杂，涉及免疫系统、皮肤屏障及神经系统之间的交互作用。对于有明确原因引起的瘙痒症，治疗原发病之后，瘙痒即可得到控制。而对于过敏性皮肤病引起的瘙痒症，由于很多过敏原不可能彻底避免接触，导致瘙痒症反复发作，发展为慢性瘙痒。临床中多使用药物控制瘙痒的临床症状，常用药物包括：糖皮质激素、抗组胺剂、钙调磷酸酶抑制剂、jak抑制剂和靶向治疗等。但目前临床常用的止痒药，大多存在药物副作用大、靶点单一和价格昂贵等问题。
3.目前，止痒西药多具有副作用大、靶点单一和价格昂贵等不足，如糖皮质激素容易引起胃肠道症状、内分泌紊乱等全身性副作用；抗组胺药物，在慢性瘙痒中止痒效果不佳；环孢菌素，抑制免疫系统，易出现全身性不良反应，容易发生继发感染；靶向药价格昂贵等问题。
4.在临床上，传统中医药对各种病因导致的瘙痒症有较好的治疗效果，为瘙痒的治疗研究提供了新思路。中医学将瘙痒性皮肤病归属于“虫痒”、“风痒”、“湿痒”、“毒痒”等范畴，其病因归结为血瘀、血虚、血热等因素，临床多以润燥、疏风、养血为主要治法，从而减轻病患的瘙痒程度，并为病患进行皮肤润滑和保护，避免抓挠而影响皮肤健康。
5.但是，止痒中药的相关研究多停留于单体药及其有效成分的止痒机制研究与探索中，有的止痒组方对于部分慢性瘙痒病患存在效果不佳的问题。
6.有鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

7.本发明的第一目的在于提供一种抗炎止痒的中药组合物，以完全或部分解决上述问题，所述中药组合物可从多靶点、多方面起到抗炎止痒疗效，尤其可对多种慢性的皮肤瘙痒起到止痒的功效，并且无明显的毒副反应。
8.本发明的第二目的在于提供如上所述的抗炎止痒的中药组合物的制备方法，该方法简单且操作方便，提取效率高，适合批量化生产。
9.本发明的第三目的在于提供如上所述中药组合物的用途。
10.为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：本发明提供的一种抗炎止痒的中药组合物，主要由按重量份计的以下原料制成：苦参3-10份、赤芍1-5份、黄芩3-10份、生地黄1-5份、地骨皮1-5份、车前草3-10份、白鲜皮3-10份、蛇床子3-10份和地肤子3-10份。
11.其中，苦参主要有效成分包括苦参碱和氧化苦参碱。苦参碱的作用包括：（1）止痒
作用：可抑制肥大细胞脱颗粒，降低组胺的释放；对acd（接触性过敏性皮炎）小鼠模型的瘙痒有抑制作用；可抑制突触前drg神经元n型钙通道，从而减弱或阻断瘙痒；（2）抗肿瘤作用；（3）抗炎作用：可降低tnf-α、il-6等多种炎性因子的水平；（4）镇痛作用：可激活κ阿片受体和激活μ阿片受体发挥镇痛作用。此外，苦参还可以为4份、5份、6份、7份、8份、9份。
12.赤芍主要有效成分为芍药苷，具有抗炎及免疫调节作用，可作为肥大细胞上mrgprx2拮抗剂，减少钙内流，抑制mc脱颗粒和趋化因子的释放，从而预防ige非依赖性过敏反应，达到止痒作用。此外，赤芍还可以为2份、3份、4份。
13.生地黄的主要有效成分为梓醇和地黄苷，具有抗炎和抗氧化特性，从而起到保护神经的作用。此外，生地黄可以为2份、3份、4份。
14.车前草的主要有效成分为大车前苷，具有抗炎、抑菌、组织再生、抗氧化和免疫促进作用。其提取物具有抑制炎症的作用，其效果可与氢化可的松、苯丁氮酮和双氯芬酸相当，可抑制5-脂氧合酶，抑制5-hete的产生。此外，车前草还可以为4份、5份、6份、7份、8份、9份。
15.白鲜皮的主要有效成分包括白鲜碱、黄柏酮和梣酮。白鲜碱具有抗炎作用和抑菌作用；梣酮可通过负调节ikkb激酶（ikk）和细胞外调节蛋白激酶（erk1/2）的磷酸化从而抑制nf-κb通路，同时抑制多种炎症细胞因子得表达，达到抗炎作用；黄柏酮可通过靶向抑制细胞内mif来调节mkp-1/p38/ap-1途径发挥其抗炎作用。此外，白鲜皮还可以为4份、5份、6份、7份、8份、9份。
16.地肤子的主要有效成分为地肤子皂苷，其可有效地抑制ｉ型超敏反应的发生，它能通过稳定肥大细胞膜，减少组胺等炎性介质的释放而有效抑制变态反应的发生，发挥抗炎作用，同时具有止痒作用。此外，地肤子还可以为4份、5份、6份、7份、8份、9份。
17.蛇床子的主要有效成分为蛇床子素，可通过抑制肥大细胞释放组胺，具有抗炎症作用，间接抑制皮炎造成的瘙痒以及作用于trpv1达到止痒的目的。此外，蛇床子还可以为4份、5份、6份、7份、8份、9份。
18.黄芩的主要有效成分为黄芩苷，其对肥大细胞依赖的i型过敏反应具有抑制作用。此外，黄芩还可以为4份、5份、6份、7份、8份、9份。
19.另外，地骨皮也具有止痒的功效，还可以是2份、3份、4份。
20.上述中药在特定比例范围内搭配，从不同的止痒机理上进行搭配和互补，对于皮肤瘙痒，尤其是慢性瘙痒，具有止痒的功效，并且无明显的毒副反应。在本发明一些优选的实施例中，可以对所述的抗炎止痒的中药组合物的组分进行进一步地优选，主要由按重量份计的以下原料制成：苦参4-6份、赤芍2-4份、黄芩4-6份、生地黄2-4份、地骨2-4份、车前草4-6份、白鲜皮4-6份、蛇床子4-6份和地肤子4-6份。
21.在本发明一些优选的实施例中，可以对所述的抗炎止痒的中药组合物的组分进行进一步地优选，主要由按重量份计的以下原料制成：苦参5份、赤芍3份、黄芩5份、生地黄3份、地骨皮3份、车前草5份、白鲜皮5份、蛇床子5份和地肤子5份。
22.在本发明一些优选的实施例中，所述中药组合物为外用药，所述外用药的剂型包括散剂、膏剂、丹剂、酒剂、锭剂、水剂、气雾剂和巴布剂。
23.其中，散剂是一种或多种药材混合制成的粉末状制剂，分内服散剂和外用散剂。散剂治疗范围广，服用后分散快，奏效迅速，且具有制作方便、携带方便、节省药材等优点。本发明可采用外用散剂。
24.膏剂是药物剂型之一。膏剂是将药物用水或植物油煎熬浓缩而成的剂型。有内服和外用两种。外用膏有软膏、硬膏两种。外用的软膏称油膏，一般油膏，是把蜂蜡加入棉子油或花生油中，加热熔化，乘热加入应用的药物细粉，不断搅拌，待冷凝即成。冰片、樟脑等容易挥发的药，可在油膏冷后加入搅匀。本发明优选为外用软膏。
25.丹剂有内服和外用两种，没有固定剂型。有的将药物研成细末即成，有的再加糊或黏性药汁制成各种形状，有的丹剂也是丸剂的一种。因多用精炼药品或贵重药品制成，所以不称丸而称丹。外用丹剂，仅供外科用。
26.酒剂古称“酒醴”，后世称为“药酒”。是以酒为溶媒，一般以白酒或黄酒浸制药物，或加温同煮，去渣取液供内服或外用，也可用于本技术的组合物。
27.锭剂是指将药物研成细末，单独或加适当的糊粉、蜂蜜与赋型剂混合后制成不同形状的一种固体制剂。本发明采用外用，磨汁涂敷患处。若制成饼状则称为饼剂。
28.气雾剂是指药物与适宜抛射剂封装于具有特制阀门系统的耐压容器中制成的的制剂，使用时，借助抛射剂的压力将内容物以定量或非定量喷出，药物喷出多为雾状气溶胶，其雾滴一般小于50μm。
29.巴布剂(cataplasma)是一种新型的外用制剂，系指将药物溶解或混合于水溶性高分子材料基质中，摊涂于裱背材料上，供皮肤贴敷的外用剂型。
30.在本发明一些优选的实施例中，所述中药组合物还包括药学上可接受的辅料，辅料可以起到增加药物保湿性能或粘稠度的作用，抑制药物提取液快速挥发，起到长效保持药效的作用。例如所述辅料可以为丙三醇或凡士林。
31.本发明提供的所述的抗炎止痒的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：将各原料用水浸泡或煎煮得到水提液；或者；将各原料用乙醇浸泡提取得到醇提液。
32.该方法方便简单，制备提取液即可涂抹使用。
33.在本发明一些优选的实施例中，添加所需辅料，将所述水提液和/或所述醇提液制备成所需剂型，适用于不同部位或情况下的用药。
34.在本发明一些优选的实施例中，为进一步提高提前的效率，所述水提液的制备方法，具体包括以下步骤：（a）、将原料中加水进行浸泡，浸泡后进行第一次煎煮，固液分离后，得到第一水提液和药渣；（b）、在所述药渣中加入水进行第二次煎煮，固液分离得到第二水提液；（c）、合并所述第一水提液和所述第二水提液，并进行浓缩。
35.优选地，在步骤（a）中，所述水为所述原料质量的10-12倍，例如10倍、11倍和12倍，所述第一次煎煮的时间为25-30min，例如25、26、28、30min。
36.优选地，在步骤（a）中，所述浸泡的时间为30-60min，例如30、35、40、45、50、60min。
37.优选地，在步骤（b）中，所述水为所述原料质量的3-5倍，例如3倍、4倍和5倍，所述第二次煎煮的时间为20-25min，例如20、23、25min。
38.在所述第一次煎煮和/或所述第二次煎煮的过程中，煎煮温度对中药有效成分的析出有很大的影响，大火火势急，火力猛，温度上升快，水分蒸发多。先大火煮沸，使各药材药性尽快释放，再使用文火平稳熬煮，进行有效提取。
39.优选地，在步骤（c）中，所述浓缩后水提液的浓度为0.2g-0.4g/ml，还可以为0.3 g/ml。
40.所述的抗炎止痒的中药组合物在制备治疗皮肤炎症和/或皮肤瘙痒的药物中的用途，尤其是慢性瘙痒。
41.与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明所提供的中药组合物，与现有止痒类型的中药相比，可从多靶点、多方面起到抗炎止痒疗效，尤其可对多种慢性的皮肤瘙痒起到止痒的功效，并且无明显的毒副反应。通过sadbe诱导过敏性皮炎慢性瘙痒小鼠模型，并在小鼠模型上验证了该中药组合物的止痒效果。
附图说明
42.为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
43.图1为本发明实施例所提供的中药组合物的水提物治疗7天后小鼠1h搔抓行为学评估结果。
44.图2本发明实施例所提供的中药组合物的水提物物治疗期间acd小鼠模型皮损评分变化影响。
45.图3本发明实施例所提供的中药组合物的水提物治疗7天后各组小鼠颈背部皮褶厚度结果。
46.图4本发明实施例所提供的中药组合物的水提物治疗7天后各组小鼠脾脏指数结果。
47.图5本发明实施例所提供的中药组合物的水提物治疗7日后小鼠皮肤h.e.染色组织切片图及皮肤表皮厚度测量结果(20倍)。
48.图6本发明实施例所提供的中药组合物的水提物治疗7日后各组小鼠皮肤甲苯胺蓝染色组织切片及肥大细胞计数结果。
49.图7为治疗7天后acd小鼠模型皮肤组织中相关因子mrna表达情况汇总结果。
50.图8为治疗7天后acd小鼠模型背根神经及脊髓组织中相关因子mrna表达情况结果。
具体实施方式
51.下面将结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保
护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
52.实施例1本实施例所提供的抗炎止痒的中药组合物，包括以下组分：苦参5份、赤芍3份、黄芩5份、生地黄3份、地骨皮3份、车前草5份、白鲜皮5份、蛇床子5份和地肤子5份。
53.该抗炎止痒的中药组合物的制备方法，具体包括以下步骤：（1）、将上述药物按照上述比例进行混合后，放入药物总质量10倍的水中浸泡60min。
54.（2）、将整个浸泡液和浸泡物置于圆底烧瓶中，采用加热垫和回流冷凝管，武火煎煮至沸腾后，改为文火微沸煎煮共30min，然后用纱布滤掉药渣，取第一水提液。
55.（3）、再向药渣中加入药物总质量3倍的水，武火煎煮至沸腾后，改为文火继续微沸煎煮共20min，然后用纱布滤掉药渣，取第二水提液。
56.（4）、合并第一水提液和第二水提液次滤液得到生药浓度为0.1g/ml的水提液，加热浓缩成生药浓度为0.2g/ml的水提液。
57.实施例2本实施例所提供的抗炎止痒的中药组合物，包括以下组分：苦参3份、赤芍1份、黄芩3份、生地黄1份、地骨皮1份、车前草3份、白鲜皮3份、蛇床子3份和地肤子3份。
58.该抗炎止痒的中药组合物的制备方法，具体包括以下步骤：（1）、将上述药物按照上述比例进行混合后，放入药物总质量12倍的水中浸泡30min。
59.（2）、将整个浸泡液和浸泡物置于圆底烧瓶中，采用加热垫和回流冷凝管，武火煎煮至沸腾后，改为文火微沸煎煮共25min，然后用纱布滤掉药渣，取第一水提液。
60.（3）、再向药渣中加入药物总质量5倍的水，武火煎煮至沸腾后，改为文火继续微沸煎煮共25min，然后用纱布滤掉药渣，取第二水提液。
61.（4）、合并第一水提液和第二水提液次滤液，加热浓缩成生药浓度分别为0.3g/ml的水提液。
62.（5）、加入适当的辅料，制备成膏剂。
63.实施例3本实施例所提供的抗炎止痒的中药组合物，包括以下组分：苦参10份、赤芍5份、黄芩5份、生地黄5份、地骨皮5份、车前草10份、白鲜皮10份、蛇床子10份和地肤子10份。
64.该抗炎止痒的中药组合物的制备方法，具体包括以下步骤：（1）-（4）同实施例1的步骤（1）-（4）。
65.（5）、加入适当的辅料，制备成气雾剂。
66.实施例4本实施例所提供的抗炎止痒的中药组合物，包括以下组分：苦参4份、赤芍2份、黄芩4份、生地黄2份、地骨皮2份、车前草4份、白鲜皮4份、蛇床
子4份和地肤子4份。
67.该抗炎止痒的中药组合物的制备方法，具体包括以下步骤：（1）-（4）同实施例1的步骤（1）-（4）。
68.实施例5本实施例所提供的抗炎止痒的中药组合物，包括以下组分：苦参6份、赤芍4份、黄芩6份、生地黄4份、地骨皮4份、车前草6份、白鲜皮6份、蛇床子6份和地肤子6份。
69.该抗炎止痒的中药组合物的制备方法，具体包括以下步骤：（1）-（4）同实施例1的步骤（1）-（4）。
70.应用例将实施例1制备得到的水提液涂抹于患处即可，每日2-3次，忌皮肤溃破处使用。
[0071] 试验例（一）sadbe诱导过敏性皮炎慢性瘙痒模型的建立1）所有雄性c57bl小鼠适应性饲养1周，致敏前两天（第-1天）小鼠腹部剃毛（2cm
×
3cm）。第1天开始每天早上固定时间致敏，model组腹部应用25μl的1%sadbe丙酮溶液（现用现配），control组腹部应用25μl的丙酮，连用3天，5天后做过敏激发。激发前2天（第6天）小鼠颈背部剃毛（2cm
×
2cm），第8天开始model组小鼠颈背部外用25μl的1%sadbe丙酮溶液（现用现配），control组小鼠颈背部外用25μl的丙酮，连用3天。在第11天上午对实验动物进行行为学评估、皮损评估及皮褶厚度的测量，评估造模是否成功。
[0072]
2）小鼠搔抓行为学评估。观察过程在无人、安静环境中进行，将小鼠置于透明观察盒中，各组观察盒之间用白纸遮挡，从正上方进行摄像，对1h的搔抓情况进行计数。小鼠搔抓计数标准为：从小鼠后爪抬起到要抓挠的身体区域（颈背部造模区域）开始，到后爪放回地面记作一轮抓挠，一轮抓挠可能持续几秒，由于单次抓挠过快，所以只记录抓挠的回合数（轮）。
[0073]
3）皮损评分。对小鼠颈背部造模部位进行皮损评分，皮损评分的标准参考2018年中华中医药学会中药实验药理专业委员会出版的《瘙痒动物模型制备规范（草案）》标准及本课题组早前相关研究皮损评估方法，结合本模型自身特点，建立评估标准。评估内容包括：小鼠皮肤干燥/皮屑、红斑、水肿/苔藓样变、抓痕/血痂等情况，可分四级指标：无、轻度、中度、重度，分别积0、1、2、3分。
[0074]
4）皮褶厚度。末次sadbe激发24h后，第11日上午，用游标卡尺对小鼠颈背部皮褶厚度进行测量，每只小鼠测量3次，取平均值。
[0075]
（二）中药提取液的抗炎功效的验证1）将（一）造模成功的小鼠分为：sadbe组（去离子水）、hac组（氢化可的松醋丙酯）、1ch组（生药浓度：0.1g/ml）、2ch组（生药浓度：0.2g/ml）、3ch组（生药浓度：0.3g/ml）、4ch组（生药浓度：0.4g/ml）；在加上空白对照组（未造模小鼠）。共7组，每组5-10只。将实施例1得到的中药水提液分别浓缩至0.2g/ml、0.3g/ml、0.4g/ml用于治疗，对照药物为氢化可的松醋丙酯外用药。
[0076]
2）给药方式：每次用药前，提前取出存储于4℃的中药提取液，水浴锅复温（水浴锅温度：37℃，3min）。
[0077]
sadbe组：局部外用去离子水，每次200μl，用一次性手套将去离子水涂抹均匀，30min后用灭菌酒精棉球沾温水拭去，每天3次，每次间隔4h。
[0078]
hac组：局部外用氢化可的松醋丙酯，每只小鼠每天一次局部外用，每次100μl。无需擦拭。
[0079]
ch组（各浓中药水提液，0.2g/ml、0.3g/ml、0.4g/ml）：局部外用中药水提液，每次200μl，用一次性手套将药液涂抹均匀，30min后用灭菌酒精棉球沾温水将药液拭去，每天3次，每次间隔4h。连续用药7天。
[0080]
3）体重变化评估。每日记录小鼠体重，每只小鼠体重称量3次，结果表明该抗炎止痒中药水提物对体重影响小，全身安全性较传统外用激素的治疗方法高。
[0081]
4）小鼠搔抓行为学评估。每天对1h的搔抓情况进行计数。结果如图1，hac组和1倍、2倍抗炎止痒中药水提物可显著的降低抓挠次数（p《0.05），3、4倍抗炎止痒中药水提物也可缓解sadbe诱导模型的瘙痒（图1a）。计算抓挠增长倍数，统计后的结果显示各浓度抗炎止痒中药水提物和hac均可有效的缓解sadbe诱导的小鼠模型的瘙痒行为（p《0.05）（图1b）。
[0082]
5）皮损评分变化评估。每日记录每只小鼠的皮损评分。记录小鼠皮肤干燥/皮屑、红斑、水肿/苔藓样变、抓痕/血痂等情况。结果如图2，各浓度抗炎止痒中药水提物较sadbe组均可降低皮肤红斑、干燥/皮屑和抓痕/血痂的评分。
[0083]
6）皮褶厚度变化。治疗7天后，测量颈背部皮褶厚度用游标卡尺测量颈背部皮褶厚度3次。结果如图3，hac组和sadbe组存在显著性差异，外用hac可以显著的缓解sadbe诱导的皮肤增厚（p《0.0001）。1、2、3、4倍浓度抗炎止痒中药水提物均可缓解sadbe诱导的皮肤增厚。
[0084]
7）各检测样本的采集。待行为学评估结束，收集样本：取颈背部病变皮肤，一分为二，一部分固定于4%甲醛溶液中，待做组织病理学；另一半皮肤置于ep管中，用液氮速冻后保存于-80℃冰箱中。摘取小鼠脾脏，称重后置于ep管中，用液氮速冻后保存于-80℃冰箱中。取小鼠背根神经：分离小鼠颈背部脊柱旁的皮肤及肌肉，取出颈段（c2-c7）的脊髓及背根神经，置于ep管中，用液氮速冻后保存于-80℃冰箱中。
[0085]
8）脾脏指数的计算。脾脏指数=脾脏重量（mg）/体重(g)
×
10，每10g小鼠体重含有的胸腺或脾mg重量，mg/10g，来粗略的估计机体用药后免疫功能的强弱，免疫抑制的药物会使得脾脏指数降低。结果如图4，sadbe脾脏指数与control组相比没有显著性差异，但hac组与sadbe组之间存在显著性差异（p《0.05），外用激素会导致全身的免疫抑制；2、3、4倍浓度抗炎止痒中药水提物可缓解sadbe模型导致的脾指数增大，但不会导致机体免疫抑制。
[0086]
9）皮肤组织苏木素和伊红染色（h.e.染色）。皮肤组织固定于4%甲醛溶液中，石蜡包埋后切片再进行常规h.e.染色。中性树脂封片，避免产生气泡。室温晾干后光学显微镜观察。结果如图5，sadbe诱导的acd小鼠模型皮肤h&e染色后可见表皮增厚、表皮增生、表皮和真皮之间有大量的淋巴细胞、单核细胞等炎性浸润，而抗炎止痒中药水提物可缓解这种炎性浸润变化。hac治疗组小鼠皮肤表皮厚度较sadbe组显著下降，差异显著（p《0.01）。与sadbe组相比，各浓度抗炎止痒中药水提物组小鼠表皮厚度均显著性下降（p《0.05）。
[0087]
10）皮肤组织甲苯胺蓝染色。采集的皮肤组织固定于4%甲醛溶液中，石蜡包埋后切片。切片用甲苯胺蓝染色后，置于光学显微镜下观察并对肥大细胞计数。结果如图6，sadbe诱导小鼠acd慢性瘙痒小鼠模型皮肤切片甲苯胺蓝染色可见，真皮中肥大细胞浸润增加且
肥大细胞数目增多，差异显著具有统计学意义（p《0.01）。hac可显著的下调acd模型小鼠皮肤的肥大细胞数量，差异显著（p《0.005）。各浓度抗炎止痒中药水提物可缓解acd模型小鼠皮肤中肥大细胞浸润情况，其中2倍浓度抗炎止痒中药水提物真皮中肥大细胞计数，与sadbe组相比，下调显著（p《0.005）。
[0088]
11）实时荧光定量pcr（rt-pcr）分析皮肤中相关目的基因的mrna水平。用trizol法提取皮肤组织的rna。第7）步中采集的样本组织，在研磨后用transzol up plus rna kit试剂盒提取总rna；用反转录试剂盒为easyscript
® one-step gdna removal and cdna synthesis supermix，进行反转录。得到的cdna进行real-time pcr，设计相关目的基因的引物（表1）。选择gapdh为内参基因，测定皮肤中il-1β、tnf-α、il-4、il-33、cxcl10、cxcr3、il-31、il-17a等目的基因mrna的表达情况。参照说明书建立10μl荧光定量pcr反应体系。荧光定量pcr做溶解曲线，检测扩增基因的特异性，试验所得数据采用2-δδct的方法进行分析和统计。
[0089]
结果如图7，sadbe诱导的acd小鼠慢性瘙痒模型中，小鼠患部皮肤中炎性细胞因子il-1β、tnf-α、il-4、il-33及il-17a的mrna表达情况均显著性增加（p 《 0.05），趋化因子cxcr10及其受体cxcr3的mrna表达增加，但差异不显著（p 》 0.05）。治疗7天后，hac可显著降低tnf-ɑ
、il-33、il-4、cxcl10、cxcr3及il-17a等炎性因子mrna的表达（p 《 0.05）。各浓度抗炎止痒中药水提物可不同程度的降低il-1β、tnf-α、il-4、il-33、cxcl10、cxcr3及il-17a等炎性因子mrna的表达。
[0090]
12）实时荧光定量pcr（rt-pcr）分析背根神经中相关目的基因的mrna水平。trizol法提取背根神经及脊髓组织的rna。第7）步采集的背根神经和脊髓组织样本，参考第11）步的方法提取总rna。反转录后得到cdna后实行real-time pcr。设计相关目的基因的引物（表1）。选择gapdh为内参基因，测定背根神经中grp、trpv1及trpa1等目的基因mrna的表达情况。荧光定量pcr做溶解曲线，检测扩增基因的特异性，试验所得数据采用2-δδct的方法进行分析和统计。
[0091]
结果如图8，通过散点图可看出，sadbe造模后，小鼠背根神经中grp、trpa1及trpv1等瘙痒相关介质及受体mrna表达呈增加趋势。用药治疗7日后，4倍浓度的抗炎止痒中药水提物可显著降低sadbe诱导小鼠的脊髓中grpr受体mrna的表达（p《0.05），各浓度抗炎止痒中药水提物治疗组小鼠脊髓组织中trpv1和trpa1的mrna表达下降，与sadbe组相比统计没有显著性差异（图1），与control组相比，1、2、3倍浓度抗炎止痒中药水提物可显著下调trpa1的mrna表达（p《0.05），1、2、4倍浓度抗炎止痒中药水提物可显著下调trpv1的mrna表达（p《0.05）。
[0092]
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；本领域的普通技术人员应当理解：在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围；因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些替换和修改。