1.本发明涉及包括脂肪组织源细胞外基质的医疗用组合物及其制造方法。更详细地，涉及包括同种及异种脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的医疗用组合物及其制造方法。
背景技术：
：：2.再生医学的目的在于代替或再生人的细胞和组织、脏器。导致组织损伤及功能丧失的外伤性创伤、社会高度化所带来的新疾病等，为再生医学的更快发展提供了必然的动机。3.用于再生医学领域的医疗用物质应当根据所要适用的组织及脏器的种类、疾病或者外伤的种类及患者的病例等进行慎重地选择。通常，选择最为频繁的研究用物质包括：异种源提取胶原蛋白和明胶、微生物源透明质酸、壳聚糖、植物纤维素聚合物、植物藻酸盐等。此外，从人的尸体获得的同种源物质也作为可安全使用的有效生物材料，在再生医学领域中备受瞩目。4.在生物材料中，尤其脂肪组织作为生物材料，其安全性、有效性，以及经济/工业上的关注度也正在提高。脂肪组织是由脂肪细胞、前脂肪细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞和各种免疫细胞组成的疏松结缔组织之一。脂肪组织包含细胞外基质，例如胶原蛋白、弹性蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白和氨基葡聚糖等。在活体内组织中细胞外基质不仅有助于细胞的支撑及增殖，而且通过与细胞结合来维持组织的组合物，从而有助于生物的损伤部位的恢复。5.作为一示例，据报告，作为人体脂肪组织源细胞外基质产品的(mtfbiologics)适用于如足部溃疡的缺损部位，从而对组织修复具有效果。作为另一个实例，据报告，作为人体脂肪组织源细胞外基质产品的(biologicatechnologies)对于改善皱纹具有效果。但是，如所述或的医疗用产品是，微粒化的人体脂肪组织源细胞外基质粉末水合在灭菌生理盐水的简单性状，因此，具有使用后难以在体内维持体积的缺点。6.[现有技术文献][0007][专利文献][0008]1.韩国授权专利10-0771058[0009]2.韩国授权专利10-1628821[0010][非专利文献][0011]1.结合脱细胞人脂肪组织细胞外基质和脂肪源性干细胞进行脂肪组织工程，actabiomateria2013，8921-31(combiningdecellularizedhumanadiposetissueextracellularmatrixandadipose-derivedstemcellsforadiposetissueengineering,actabiomaterialia2013,8921-31)[0012]2.脱细胞人脂肪组织注射水凝胶的体内外生物相容性，生物医学材料研究杂志b部分，2018，1684-1694(biocompatibilityofinjectablehydrogelfromdecellularizedhumanadiposetissueinvitroandinvivo,journalofbiomedicalmaterialsresearchpartb,2018,1684-1694)[0013]3.利用脱细胞脂肪组织为人脂肪源性干细胞的成脂分化提供诱导性微环境，生物材料，2010，4715-24(theuseofdecellularizedadiposetissuetoprovideaninductivemicroenvironmentfortheadipogenicdifferentiationofhumanadipose-derivedstemcells,biomaterials,2010,4715-24)[0014]4.货架就绪、注射、人源性、脱细胞同种异体脂肪基质的临床前优化，组织工程a部分2019，第25卷，第3-4期(preclinicaloptimizationofashelf-ready,injectable,human-derived,decellularizedallograftadiposematrix,tissueengineeringparta2019,vol.25,no.3-4)技术实现要素：[0015]技术问题[0016]对此，本发明人的目的在于，提供一种即使在体内移植之后组合物仍以良好凝集的状态存在，并且可维持一定时间体积的医疗用组合物及其制造方法。[0017]更详细地，本发明的目的在于，提供一种医疗用组合物及其制备方法，通过使用同种或者异种脂肪组织源细胞外基质粉末及化学交联的生物相容性聚合物来促进体内移植后的自体脂肪的生成，并可诱导自体组织化，另外提高了粘弹性特性，从而具有优异的体内体积维持力。[0018]技术方案[0019]本发明提供一种医疗用组合物，其包括：脂肪组织源细胞外基质粉末；以及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物。[0020]另外，本发明提供一种医疗用组合物的制造方法，其包括以下步骤：混合脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的步骤。[0021]发明效果[0022]本发明提供一种包括脂肪组织源细胞外基质粉末；以及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的医疗用组合物及其制造方法。[0023]根据本发明的医疗用组合物，在移植到体内之后，组合物仍以优异的凝集状态存在，并且能够维持一定时间的体积。具体地，在本发明中，通过使用同种或异种脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或化学交联的生物相容性聚合物来促进体内移植后的自体脂肪的生成，并可诱导自体组织化，另外提高了粘弹性特性，从而具有优异的体内体积维持力。附图说明[0024]图1是示出在制造根据本发明的一示例的医疗用组合物的过程中，在伽马灭菌时对根据细胞外基质粉末及生物相容性聚合物的交联物的混合比率的物性进行确认的图。[0025]图2是示出测量根据本发明的一示例测量医疗用组合物的粘性模量、弹性模量及复数粘度的图表。[0026]图3是示出在注入根据本发明的一示例的医疗用组合物6周后，从裸鼠中提取的组合物的图以及所述组合物的体积的图表。[0027]图4是在注入根据本发明的一示例的医疗用组合物6周后，为了进行组织学分析而对从裸鼠中提取的组合物进行h&e(haematoxylinandeosin)染色的图以及对细胞流入进行定量的图表。[0028]图5是在注入根据本发明的一示例的医疗用组合物6周后，为了分析从裸鼠中提取的组合物内的脂肪生成而进行的油红o(oilredo)染色及定量的图表。具体实施方式[0029]本发明涉及一种医疗用组合物，其包括：脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物。[0030]在本发明的实施例中，通过制造包括脂肪组织源细胞外基质粉末及生物相容性聚合物的交联物的医疗用组合物来确认了所述医疗用组合物在放射线灭菌时能够维持其剂型，并具有优异的粘弹性特性。另外，通过对所述医疗用组合物进行体内(invivo)实验，确认了其体内体积维持能力、自体组织化能力及自体脂肪生成能力优于使用ha-cmc载体的情况。[0031]以下，对根据本发明的医疗用组合物进行更详细地说明。[0032]本发明的医疗用组合物包括脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物。[0033]在本发明中，脂肪组织源细胞外基质粉末(以下，称为细胞外基质粉末)用作医疗用材料，从而在体内移植后可促进自体脂肪的生成，并且可诱导自体组织化。[0034]在一具体例中，细胞外基质(extracellularmatrix,ecm)是指填充组织内或者细胞外空间的生物聚合物的复杂的集合体。所述细胞外基质的成分可根据细胞的类型或细胞的分化程度而有所不同，并且可由胶原蛋白、弹性蛋白等纤维蛋白；蛋白聚糖、糖胺聚糖等复合蛋白以及纤连蛋白、层粘连蛋白等细胞粘附糖蛋白构成。[0035]在一具体例中，脂肪组织可以是同种或者异种源脂肪组织。所述同种是指人类，所述异种不仅可以指人类以外的猪、牛、马等哺乳类动物而且还可以指鱼类。[0036]在一具体例中，脂肪组织源细胞外基质粉末的平均粒径可以是100至800μm。在所述粒径范围内适合用于生物注入，并且可以通过注射器注入。[0037]在一具体例中，脂肪组织源新胞外基质粉末的含量相对于组合物整体重量可以是1至30重量份、5至15重量份或3至8重量份。在所述范围内可通过注射器注入。[0038]在本发明中，生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物可提高医疗用组合物的粘弹性特性，并且可提高体内体积维持力。此时，生物相容性聚合物的交联物是指一种以上的化学交联的生物相容性聚合物。[0039]在一具体例中，生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的分子量可以是10kda至2mda。[0040]在一具体例中，作为生物相容性聚合物可使用选自由胶原蛋白、透明质酸、壳聚糖、羧甲基纤维素、藻酸盐及明胶构成的组中的一种以上。[0041]在一具体例中，生物相容性聚合物的交联物可以是选自由胶原蛋白、透明质酸、壳聚糖、羧甲基纤维素、藻酸盐及明胶组成的组中的一种以上的生物相容性聚合物的交联物。[0042]在一具体例中，生物相容性聚合物由交联剂交联，所述交联剂可以是选自由丁二醇二缩水甘油醚(1,4-butandioldiglycidylether,bdde)、乙二醇二缩水甘油醚(ethyleneglycoldiglycidylether,egdge)、己二醇二缩水甘油醚(1,6-hexanedioldiglycidylether)、丙二醇二缩水甘油醚(propyleneglycoldiglycidylether)、聚丙二醇二缩水甘油醚(polypropyleneglycoldiglycidylether)、聚丁二醇二缩水甘油醚(polytetramethyleneglycoldiglycidylether)、新戊二醇二缩水甘油醚(neopentylglycoldiglycidylether)、聚甘油聚缩水甘油醚(polyglycerolpolyglycidylether)、双甘油聚缩水甘油醚(diglycerolpolyglycidylether)、甘油聚缩水甘油醚(glycerolpolyglycidylether)、三甲基丙烷聚缩水甘油醚(tri-methylpropanepolyglycidylether)、双环氧丙氧基乙烯(1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene)、季戊四醇聚缩水甘油醚(pentaerythritolpolyglycidylether)及山梨糖醇聚缩水甘油醚(sorbitolpolyglycidylether)组成的组中的一种以上。[0043]在一具体例中，生物相容性聚合物的含量相对于组合物总重量可以为0.1至20重量份、1至15重量份、1至11重量份或9至11重量份。在所述范围内可提高生物相容性聚合物的物性，另外可提高体内体积维持力。[0044]在本发明中，医疗用组合物的粘性模量可以是3000至20000pa，弹性模量可以是1000至10000pa，复数粘度可以是1000至10000pa·s，所述粘性模量、弹性模量及复数粘度是指由旋转型流变仪分析仪(频率：0.1～10hz，温度：25℃，变形率：1％)测量的结果值。[0045]粘弹性(viscoelasticity)是指对物体施加力时，同时显示液体和固体的性质的现象。在本发明中，可以通过测量对施加到组合物的力进行阻抗的力和消失的力来测量粘性模量、弹性模量及复数粘度。[0046]粘性模量(损失弹性模量，viscousmodulus，g”)作为损失的能量尺度，是指物质的粘性组分。在本发明中，所述医疗用组合物的粘性模量可以是5000至10000pa或6000至8000pa。弹性模量(存储弹性模量，elasticmodulus，g’)是指弹性体在弹性极限内所具有的应力和变形之比。所述弹性模量越大，组合物越坚固，并且抵抗变形的能力越高。在本发明中，所述医疗用组合物的弹性模量可以是1000至5000pa或1000至3000pa。复数粘度(complexviscosity)作为在振动测量法计算的频率依赖性粘度，所述数值是g”、g’及进行测量的频率值所反映的数值。在本发明中，所述医疗用组合物的复数粘度可以是1000至3000pa·s或1500至2500pa·s。[0047]另外，医疗用组合物的挤压力，即注入压力可以是110n以下。在本发明中，挤压力作为使用万能材料试验机测量的值，具体地，代表将套管固定在装有内容物的注射器(20g)，并通过以12mm/min的试验速度按压注射器使注射器内的内容物排出到套管外部时的最大荷载值n。[0048]所述挤压力是指在给予患者舒适的注射速度下的挤压力。“给予患者舒适的”用于定义在皮肤上进行注射时，给患者不造成伤害或者过度疼痛的注射速度。本发明所使用的“舒适”不仅包括患者的舒适，还包括医生或医疗专家注射组合物过程中的舒适或能力。通常，具有低挤压力的方式在注入组合物时没有压痛并且便于控制。在本发明中所述医疗用组合物的挤压力可以是100n以下、70n以下、60n以下、40n以下、35以下或30n以下。[0049]在一具体例中，本发明的医疗用组合物可通过注射器的注入等方式注入或插入到生物体内。这些医疗用组合物可用作一般的医疗用材料，并且可用作组织修复剂、填充剂、抗粘连剂、整容助剂、关节炎治疗剂、创伤敷剂、止血剂或脂肪代谢障碍治疗剂。此时，脂肪代谢障碍具有脂肪组织消失的症状，并且可以通过本发明的医疗用组合物促进自体脂肪的生成。[0050]另外，本发明涉及上述的医疗用组合物的制造方法。[0051]所述医疗用组合物的制造方法可以包括：混合脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的步骤。[0052]在本发明中，可使用市面上销售的产品作为脂肪组织源细胞外基质粉末，或者可在实验室等处制造并使用。[0053]所述脂肪组织源细胞外基质粉末可通过以下方法制造：在脂肪组织中去除脂质成分的脱脂步骤；在去除所述脂质成分的脂肪组织中去除细胞的脱细胞步骤；将去除所述细胞的脂肪组织进行冷冻干燥的冷冻干燥步骤；以及将所述冷冻干燥的冷冻干燥物进行粉末化的粉末化步骤。[0054]本发明在进行脱脂步骤之前可以进行清洗步骤。在所述清洗步骤可用灭菌蒸馏水清洗脂肪组织。通过所述步骤可去除脂肪组织内的不纯物。[0055]在本发明中，脱脂步骤是在脂肪组织中去除脂质成分的步骤。[0056]在一具体例中，脱脂(delipidation)是指从组织去除脂质成分。[0057]在一具体例中，脂质成分的去除可通过物理处理或化学处理来进行，并且可一起进行所述物理处理及化学处理。一起进行所述物理处理及化学处理时，进行顺序不受限制。[0058]在一具体例中，对于物理处理的种类，没有特别的限定，并且可使用粉碎法进行。所述粉碎可使用本领域公知的粉碎工具来进行，例如，搅拌机、均质机、冷冻粉碎机、超声波粉碎机、手动搅拌机、柱塞研磨机(plungermill)等。[0059]在进行所述粉碎时，粉碎物，即粉碎的脂肪组织的粒径可以是0.01至1mm。[0060]在一具体例中，对于化学处理的种类，没有特别限定，并且可使用脱脂质溶液来进行。所述脱脂质溶液可包括极性溶剂、非极性溶剂或其混合溶剂。作为所述极性溶剂可使用水、醇或者其混合溶液，作为所述醇可使用甲醇、乙醇或者异丙醇。作为非极性溶剂可使用己烷、庚烷、辛烷或其混合溶液。具体地，在本发明中作为脱脂质溶液可使用异丙醇和己烷的混合溶液。此时，异丙醇和己烷的混合比例可以是40:60至60:40。[0061]所述脱脂质溶液的处理时间可以是4至30小时，或10至20小时。[0062]在一具体例中，脱脂步骤可依次使用物理处理及化学处理来进行。通过物理处理在脂肪组织中首次去除脂质成分，通过所述物理处理未被去除的脂质成分可通过化学处理来进行去除。[0063]在本发明中，脱细胞步骤是在通过所述脱脂步骤去除脂质成分的脂肪组织中去除细胞的步骤。[0064]在一具体例中，脱细胞(decellularization)是指从组织去除除细胞外基质以外的其他细胞成分，例如，核、细胞膜、核酸等。[0065]在一具体例中，脱细胞可使用碱性溶液来进行，并且作为所述碱性溶液可使用选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钙、氢氧化镁、氢氧化钙和氨组成的组中的一个以上。在本发明中，作为碱性溶液可使用氢氧化钠(naoh)。在本发明中，在进行脱细胞时使用碱性溶液，从而具有无细胞毒性的优点。[0066]在一具体例中，碱性溶液的浓度可以是0.01至1n、0.06至0.45n、0.06至0.2n，或者0.08至1.02n。在所述浓度范围内便于去除细胞。[0067]另外，在一具体例中，脱细胞步骤可实施60至480分钟、70至200分钟或90至150分钟。在所述时间范围内便于去除细胞。[0068]在本发明中进行脱细胞步骤之后，在进行冷冻干燥步骤之前可以进一步进行离心步骤。通过所述离心步骤可去除脱脂步骤及脱细胞步骤中的不纯物，并且可获得高纯度的细胞外基质物质(沉淀物)。[0069]在一具体例中，离心可在4000至10000rpm，或在8000rpm的条件下进行5至30分钟、5至20分钟或10分钟。[0070]另外，离心前和/或后，可进一步进行清洗步骤，并且在清洗时可使用灭菌蒸馏水。[0071]在本发明中，冷冻干燥步骤是将前述的步骤，即脱细胞步骤或者离心步骤之后将获取物进行冷冻干燥的步骤。所述冷冻干燥作为在组织冻结的状态下将其急速冷却之后通过真空来吸收水分的方法，通过进行所述冷冻干燥可调整细胞外基质物质内的水分，并且可以容易地进行粉末化。[0072]在一具体例中，冷冻干燥在-50至-80℃下可以进行24至96小时。[0073]在本发明中，粉末化步骤是将冷冻干燥的冷冻干燥物，即细胞外基质进行粉末化的步骤。[0074]所述粉末化的细胞外基质粉末的粒径可以是100至800μm。[0075]另外，本发明的脂肪组织源细胞外基质粉末可通过以下方法制造：清洗脂肪组织的清洗步骤；从所述清洗的脂肪组织去除脂质成分的脱脂步骤；从去除所述脂质成分的脂肪组织中去除细胞的脱细胞步骤；将所述脱细胞的脂肪组织进行离心分离的离心分离步骤；将所述离心分离后的沉淀物进行冷冻干燥的冷冻干燥步骤；以及将所述冷冻干燥的冷冻干燥物进行粉末化的粉末化步骤。[0076]在本发明中，可使用市面上销售的产品作为生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物。另外，可在实验室等处利用生物相容性聚合物来制造所述交联物并使用。[0077]所述生物相容性聚合物的交联物可通过以下方法来制造：利用交联剂交联生物相容性聚合物的交联步骤；以及将交联的所述交联物进行冷冻干燥的冷冻干燥步骤。[0078]在本发明中，交联步骤是利用交联物对生物相容性聚合物进行交联的步骤。在所述步骤中，作为生物相容性聚合物及交联物可使用所述种类。[0079]在一具体例中，生物相容性聚合物可通过酰胺键(amidebond)结合。[0080]在一具体例中，交联物的含量相对于生物相容性聚合物可以为0.5至10重量份。[0081]在本发明中，冷冻干燥步骤是将所述步骤中交联的生物相容性聚合物进行冷冻干燥的步骤。[0082]在一具体例中，冷冻干燥在-50至-80℃下可以进行24至96小时。[0083]在本发明中，通过物理混合的方式可以使脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物进行混合。[0084]在一具体例中，在混合物内脂肪组织源细胞外基质粉末的含量可以是1至30重量份、5至15重量份或者3至8重量份。[0085]另外，在混合物内生物相容性聚合物的交联物的含量可以是0.1至20重量份、1至15重量份、1至11重量份或9至11重量份。[0086]在一具体例中，所述混合物可以通过将冷冻干燥的生物相容性聚合物的交联物溶解于溶剂中，随后与细胞外基质粉末进行混合来制造。此时，作为溶剂可使用生理盐水。[0087]本发明可进一步包括将所述混合物进行灭菌的步骤。[0088]通过所述灭菌步骤可去除医疗用组合物内的免疫性，并且可有效地破坏细菌等。[0089]在一具体例中，所述灭菌步骤可通过照射放射线来进行，放射线的照射范围可以是10至30kgy。[0090]另外，本发明涉及所述的医疗用组合物的使用。[0091]根据本发明的医疗用组合物具有如下效果：将其移植到体内之后，可促进自体脂肪生成及诱导自体组织化，另外，提高粘弹性特性从而具有优异的体内体积维持力。[0092]因此，在一具体例中，本发明的医疗用组合物通过注射器的注入等方式可以注入或插入到体内，并且可用作组织修复剂、填充剂、抗粘连剂、美容助剂、关节炎治疗剂、创伤敷剂、止血剂或脂肪代谢障碍治疗剂。[0093]本发明的实施方式[0094]以下，通过实施例更具体地说明本发明。但是，本发明的范围不限定于以下实施例，本领域的技术人员应该理解通过记载于权利要求的思想而导出的不脱离技术思想的范围内，可进行多种变形、修改或者应用。[0095]实施例[0096]实施例1.将人体脂肪组织源细胞外基质颗粒及通过化学方式交联的生物相容性聚合物进行物理混合的医疗用组合物[0097](1)制造人体脂肪组织源细胞外基质[0098]通过用粉碎机粉碎人体脂肪组织来脱离了脂肪。为了去除未脱离的脂肪，利用40％至60％异丙醇和40％至60％己烷进行16小时的脱脂过程。通过对去除脂肪的组织用0.1n氢氧化钠(naoh)进行处理来去除细胞。[0099]为了清洗完成去除脂肪及细胞的细胞外基质，在8000rpm下离心分离10分钟以去除上清液，并反复5至10回清洗过程。将支架进行冷冻干燥以便人体脂肪组织源细胞外基质的水分含量为10％以下，优选为1％至8％。[0100]利用微型粉碎机将所述完成冷冻干燥的人体脂肪组织源细胞外基质进行微粒化。[0101](2)制造通过化学方式交联的生物相容性聚合物[0102]通过将透明质酸(ha)和羧甲基纤维素(cmc)与1,4-丁二醇二缩水甘油醚(1,4-butandioldiglycidylether,bdde)进行混合来制造ha-cmc载体。[0103]具体地，通过在每0.1至1n的氢氧化钠水溶液100ml中添加1至10ml的bdde来准备反应溶剂。在所述反应溶剂中添加1至10g的cmc及1至20g的ha之后，均匀地混合以制造混合溶液。通过将所述混合溶液在50℃下进行加热反应3小时来进行交联。[0104]将完成交联的反应物放入透析膜，并在常温下用5l的磷酸缓冲盐水(phosphate-bufferedsaline)来进行透析。2小时后，用5l的50％etoh来进行替换并在常温下透析1小时。之后，用灭菌蒸馏水在常温下透析72小时之后，最终通过对反应物进行冷冻干燥来获得ha-cmc载体。[0105](3)制造医疗用组合物[0106]将在(1)中制造的人体脂肪组织源细胞外基质(5重量％至15重量％)和在(2)中制造的ha-cmc载体(1重量％至10重量％)与灭菌生理盐水进行混合。[0107]通过将混合的最终产物用25kgy伽马射线进行灭菌来制造医疗用组合物。[0108]实验例1.验证对医疗用组合物进行放射线灭菌时的剂型维持能力[0109](1)方法[0110]验证了在实施例1中制造的医疗用组合物的剂型维持能力。[0111]用下述表1的含量(剩余：灭菌生理盐水)准备试料之后，用25kgy伽马射线进行灭菌。在伽马灭菌时确认根据各成分的含量比率的物性。[0112]【表1】[0113][0114][0115]一方面，测量了对各试料的挤压力。关于所述挤压力，通过使用万能材料试验机来测量最大荷载值n，即，将套管(cannula)固定在装有内容物的注射器，并且以12mm/min的试验速度按压注射器，使注射器内的内容物排出到套管外部时的最大荷载值n。[0116](2)结果[0117]在图1中示出伽马灭菌时根据试料的各成分含量比率的物性测量结果。[0118]另外，在图2中示出试料的挤压力测量结果。[0119]【表2】[0120][0121][0122]如图1及表2所示，可以确认，包括人体脂肪组织源细胞外基质(ecm)5重量％及ha-cmc载体10重量％的医疗用组合物具有最优异的物性，并且在20g下具有40n以下的挤压力，因此，可轻松地通过注射器进行体内注入。[0123]实验例2.分析医疗用组合物的粘弹性特性[0124](1)方法[0125]在实验例1中将以最佳混合比率进行选择的包括人体脂肪组织源细胞外基质(ecm)5重量％及ha-cmc载体10重量％的医疗用组合物(试料13)作为实验组(医疗用组合物)，将不包括细胞外基质并且包括ha-cmc10重量％的组合物作为对照组(ha-cmc)，并且比较了所述实验组和对照组的粘弹性特性。[0126]具体地，通过将旋转型流变仪分析仪设置成频率：0.1～10hz，温度：25℃，变形率：1％的方式测量了弹性模量、粘性模量及复数粘度。[0127](2)结果[0128]在图2中显示了弹性模量、粘性模量及复数粘度的测量结果。[0129]如所述图2所示，根据本发明的医疗用组合物相比于对照组的ha-cmc在弹性模量及粘性模量上显示出高出约7倍以上的值，在复数粘度上也显示出高出6倍以上的值。[0130]实验例3.验证人体脂肪组织源医疗用组合物的体内(invivo)性能[0131](1)方法[0132]为了验证医疗用组合物的性能，进行了动物实验。[0133]将在实施例1的(1)中制造的细胞外基质粉末(细胞外基质)及在实施例1的(2)中制造的ha-cmc载体(ha-cmc)分别作为对照组，将在实验例1中以最佳混合比率进行选择的包括人体脂肪组织源细胞外基质(ecm)粉末5重量％及ha-cmc载体10重量％的医疗用组合物(试料13)作为实验组。[0134]将对照组及实验组的组合物0.2cc分别移植到balb/c裸鼠的腹部皮下，并在移植6周后牺牲实验动物并分析了结果。[0135](2)结果[0136](a)验证体内皮肤维持能力[0137]向对照组及实验组注入组合物6周之后，拍摄从裸鼠提取的试料，并且通过数字卡尺测量了体积。[0138]图3是显示从裸鼠中提取的组合物的图及显示体积(residualvol.)的图表。[0139]如所述图3所示，可确认作为实验组的医疗用组合物相对于对照组的ha-cmc及细胞外基质，体内体积维持力优异。[0140]通过图表也可确认6周之后，医疗用组合物相比细胞外基质，体积维持4倍以上。[0141](b)验证自体组织化[0142]对于在(a)中提取的试料，通过组织染色确认了是否自体组织化。通过进行苏木精-伊红(haematoxylinandeosin，h&e)染色来进行组织分析，并且对细胞流入进行了定量化。[0143]图4是为了组织学分析对从裸鼠提取的组合物进行行苏木精-伊红(haematoxylinandeosin，h&e)染色的图及对细胞流入进行定量化的图表。[0144]如图4所示，通过组织染色结果可以确认，相对于作为对照组的ha-cmc及细胞外基质，细胞流入到作为实验组的医疗用组合物内，并且形成血管。[0145]另外，通过图表可确认6周后医疗用组合物相比ha-cmc增加了8倍以上的细胞流入。[0146](c)验证自体脂肪生成效果[0147]对(a)中提取的试料验证了脂肪生成。[0148]为了分析提取的试料内的脂肪生成，进行了油红o染色，并且对脂肪生成进行了定量化。[0149]图5是为了分析从裸鼠提取的组合物内的脂肪生成而进行油红o染色的图及定量化的图表。[0150]如所述图5所示，通过油红o染色的结果，可以确认作为实验组的医疗用组合物内相比作为对照组的ha-cmc及细胞外基质可以诱导更多的脂肪生成。[0151]另外，通过图表可以确认，到6周后医疗用组合物相比细胞外基质增加了8％以上的脂肪生成。[0152]工业上的利用可能性[0153]根据本发明的医疗用组合物移植到体内之后，具有促进自体脂肪生成及可诱导自体组织化，另外，粘弹性特性得以提高，从而具有优异的体内体积维持力的效果。[0154]因此，本发明的医疗用组合物可通过注射器的注入等方式注入或者插入到生物体内，并且可用作组织修复剂、填充剂、抗粘连剂、美容助剂、关节炎治疗剂、创伤敷剂、止血剂或脂肪代谢异常治疗剂。当前第1页12当前第1页12
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：：2.再生医学的目的在于代替或再生人的细胞和组织、脏器。导致组织损伤及功能丧失的外伤性创伤、社会高度化所带来的新疾病等，为再生医学的更快发展提供了必然的动机。3.用于再生医学领域的医疗用物质应当根据所要适用的组织及脏器的种类、疾病或者外伤的种类及患者的病例等进行慎重地选择。通常，选择最为频繁的研究用物质包括：异种源提取胶原蛋白和明胶、微生物源透明质酸、壳聚糖、植物纤维素聚合物、植物藻酸盐等。此外，从人的尸体获得的同种源物质也作为可安全使用的有效生物材料，在再生医学领域中备受瞩目。4.在生物材料中，尤其脂肪组织作为生物材料，其安全性、有效性，以及经济/工业上的关注度也正在提高。脂肪组织是由脂肪细胞、前脂肪细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞和各种免疫细胞组成的疏松结缔组织之一。脂肪组织包含细胞外基质，例如胶原蛋白、弹性蛋白、层粘连蛋白、纤连蛋白和氨基葡聚糖等。在活体内组织中细胞外基质不仅有助于细胞的支撑及增殖，而且通过与细胞结合来维持组织的组合物，从而有助于生物的损伤部位的恢复。5.作为一示例，据报告，作为人体脂肪组织源细胞外基质产品的(mtfbiologics)适用于如足部溃疡的缺损部位，从而对组织修复具有效果。作为另一个实例，据报告，作为人体脂肪组织源细胞外基质产品的(biologicatechnologies)对于改善皱纹具有效果。但是，如所述或的医疗用产品是，微粒化的人体脂肪组织源细胞外基质粉末水合在灭菌生理盐水的简单性状，因此，具有使用后难以在体内维持体积的缺点。6.[现有技术文献][0007][专利文献][0008]1.韩国授权专利10-0771058[0009]2.韩国授权专利10-1628821[0010][非专利文献][0011]1.结合脱细胞人脂肪组织细胞外基质和脂肪源性干细胞进行脂肪组织工程，actabiomateria2013，8921-31(combiningdecellularizedhumanadiposetissueextracellularmatrixandadipose-derivedstemcellsforadiposetissueengineering,actabiomaterialia2013,8921-31)[0012]2.脱细胞人脂肪组织注射水凝胶的体内外生物相容性，生物医学材料研究杂志b部分，2018，1684-1694(biocompatibilityofinjectablehydrogelfromdecellularizedhumanadiposetissueinvitroandinvivo,journalofbiomedicalmaterialsresearchpartb,2018,1684-1694)[0013]3.利用脱细胞脂肪组织为人脂肪源性干细胞的成脂分化提供诱导性微环境，生物材料，2010，4715-24(theuseofdecellularizedadiposetissuetoprovideaninductivemicroenvironmentfortheadipogenicdifferentiationofhumanadipose-derivedstemcells,biomaterials,2010,4715-24)[0014]4.货架就绪、注射、人源性、脱细胞同种异体脂肪基质的临床前优化，组织工程a部分2019，第25卷，第3-4期(preclinicaloptimizationofashelf-ready,injectable,human-derived,decellularizedallograftadiposematrix,tissueengineeringparta2019,vol.25,no.3-4)技术实现要素：[0015]技术问题[0016]对此，本发明人的目的在于，提供一种即使在体内移植之后组合物仍以良好凝集的状态存在，并且可维持一定时间体积的医疗用组合物及其制造方法。[0017]更详细地，本发明的目的在于，提供一种医疗用组合物及其制备方法，通过使用同种或者异种脂肪组织源细胞外基质粉末及化学交联的生物相容性聚合物来促进体内移植后的自体脂肪的生成，并可诱导自体组织化，另外提高了粘弹性特性，从而具有优异的体内体积维持力。[0018]技术方案[0019]本发明提供一种医疗用组合物，其包括：脂肪组织源细胞外基质粉末；以及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物。[0020]另外，本发明提供一种医疗用组合物的制造方法，其包括以下步骤：混合脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的步骤。[0021]发明效果[0022]本发明提供一种包括脂肪组织源细胞外基质粉末；以及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的医疗用组合物及其制造方法。[0023]根据本发明的医疗用组合物，在移植到体内之后，组合物仍以优异的凝集状态存在，并且能够维持一定时间的体积。具体地，在本发明中，通过使用同种或异种脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或化学交联的生物相容性聚合物来促进体内移植后的自体脂肪的生成，并可诱导自体组织化，另外提高了粘弹性特性，从而具有优异的体内体积维持力。附图说明[0024]图1是示出在制造根据本发明的一示例的医疗用组合物的过程中，在伽马灭菌时对根据细胞外基质粉末及生物相容性聚合物的交联物的混合比率的物性进行确认的图。[0025]图2是示出测量根据本发明的一示例测量医疗用组合物的粘性模量、弹性模量及复数粘度的图表。[0026]图3是示出在注入根据本发明的一示例的医疗用组合物6周后，从裸鼠中提取的组合物的图以及所述组合物的体积的图表。[0027]图4是在注入根据本发明的一示例的医疗用组合物6周后，为了进行组织学分析而对从裸鼠中提取的组合物进行h&e(haematoxylinandeosin)染色的图以及对细胞流入进行定量的图表。[0028]图5是在注入根据本发明的一示例的医疗用组合物6周后，为了分析从裸鼠中提取的组合物内的脂肪生成而进行的油红o(oilredo)染色及定量的图表。具体实施方式[0029]本发明涉及一种医疗用组合物，其包括：脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物。[0030]在本发明的实施例中，通过制造包括脂肪组织源细胞外基质粉末及生物相容性聚合物的交联物的医疗用组合物来确认了所述医疗用组合物在放射线灭菌时能够维持其剂型，并具有优异的粘弹性特性。另外，通过对所述医疗用组合物进行体内(invivo)实验，确认了其体内体积维持能力、自体组织化能力及自体脂肪生成能力优于使用ha-cmc载体的情况。[0031]以下，对根据本发明的医疗用组合物进行更详细地说明。[0032]本发明的医疗用组合物包括脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物。[0033]在本发明中，脂肪组织源细胞外基质粉末(以下，称为细胞外基质粉末)用作医疗用材料，从而在体内移植后可促进自体脂肪的生成，并且可诱导自体组织化。[0034]在一具体例中，细胞外基质(extracellularmatrix,ecm)是指填充组织内或者细胞外空间的生物聚合物的复杂的集合体。所述细胞外基质的成分可根据细胞的类型或细胞的分化程度而有所不同，并且可由胶原蛋白、弹性蛋白等纤维蛋白；蛋白聚糖、糖胺聚糖等复合蛋白以及纤连蛋白、层粘连蛋白等细胞粘附糖蛋白构成。[0035]在一具体例中，脂肪组织可以是同种或者异种源脂肪组织。所述同种是指人类，所述异种不仅可以指人类以外的猪、牛、马等哺乳类动物而且还可以指鱼类。[0036]在一具体例中，脂肪组织源细胞外基质粉末的平均粒径可以是100至800μm。在所述粒径范围内适合用于生物注入，并且可以通过注射器注入。[0037]在一具体例中，脂肪组织源新胞外基质粉末的含量相对于组合物整体重量可以是1至30重量份、5至15重量份或3至8重量份。在所述范围内可通过注射器注入。[0038]在本发明中，生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物可提高医疗用组合物的粘弹性特性，并且可提高体内体积维持力。此时，生物相容性聚合物的交联物是指一种以上的化学交联的生物相容性聚合物。[0039]在一具体例中，生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的分子量可以是10kda至2mda。[0040]在一具体例中，作为生物相容性聚合物可使用选自由胶原蛋白、透明质酸、壳聚糖、羧甲基纤维素、藻酸盐及明胶构成的组中的一种以上。[0041]在一具体例中，生物相容性聚合物的交联物可以是选自由胶原蛋白、透明质酸、壳聚糖、羧甲基纤维素、藻酸盐及明胶组成的组中的一种以上的生物相容性聚合物的交联物。[0042]在一具体例中，生物相容性聚合物由交联剂交联，所述交联剂可以是选自由丁二醇二缩水甘油醚(1,4-butandioldiglycidylether,bdde)、乙二醇二缩水甘油醚(ethyleneglycoldiglycidylether,egdge)、己二醇二缩水甘油醚(1,6-hexanedioldiglycidylether)、丙二醇二缩水甘油醚(propyleneglycoldiglycidylether)、聚丙二醇二缩水甘油醚(polypropyleneglycoldiglycidylether)、聚丁二醇二缩水甘油醚(polytetramethyleneglycoldiglycidylether)、新戊二醇二缩水甘油醚(neopentylglycoldiglycidylether)、聚甘油聚缩水甘油醚(polyglycerolpolyglycidylether)、双甘油聚缩水甘油醚(diglycerolpolyglycidylether)、甘油聚缩水甘油醚(glycerolpolyglycidylether)、三甲基丙烷聚缩水甘油醚(tri-methylpropanepolyglycidylether)、双环氧丙氧基乙烯(1,2-(bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene)、季戊四醇聚缩水甘油醚(pentaerythritolpolyglycidylether)及山梨糖醇聚缩水甘油醚(sorbitolpolyglycidylether)组成的组中的一种以上。[0043]在一具体例中，生物相容性聚合物的含量相对于组合物总重量可以为0.1至20重量份、1至15重量份、1至11重量份或9至11重量份。在所述范围内可提高生物相容性聚合物的物性，另外可提高体内体积维持力。[0044]在本发明中，医疗用组合物的粘性模量可以是3000至20000pa，弹性模量可以是1000至10000pa，复数粘度可以是1000至10000pa·s，所述粘性模量、弹性模量及复数粘度是指由旋转型流变仪分析仪(频率：0.1～10hz，温度：25℃，变形率：1％)测量的结果值。[0045]粘弹性(viscoelasticity)是指对物体施加力时，同时显示液体和固体的性质的现象。在本发明中，可以通过测量对施加到组合物的力进行阻抗的力和消失的力来测量粘性模量、弹性模量及复数粘度。[0046]粘性模量(损失弹性模量，viscousmodulus，g”)作为损失的能量尺度，是指物质的粘性组分。在本发明中，所述医疗用组合物的粘性模量可以是5000至10000pa或6000至8000pa。弹性模量(存储弹性模量，elasticmodulus，g’)是指弹性体在弹性极限内所具有的应力和变形之比。所述弹性模量越大，组合物越坚固，并且抵抗变形的能力越高。在本发明中，所述医疗用组合物的弹性模量可以是1000至5000pa或1000至3000pa。复数粘度(complexviscosity)作为在振动测量法计算的频率依赖性粘度，所述数值是g”、g’及进行测量的频率值所反映的数值。在本发明中，所述医疗用组合物的复数粘度可以是1000至3000pa·s或1500至2500pa·s。[0047]另外，医疗用组合物的挤压力，即注入压力可以是110n以下。在本发明中，挤压力作为使用万能材料试验机测量的值，具体地，代表将套管固定在装有内容物的注射器(20g)，并通过以12mm/min的试验速度按压注射器使注射器内的内容物排出到套管外部时的最大荷载值n。[0048]所述挤压力是指在给予患者舒适的注射速度下的挤压力。“给予患者舒适的”用于定义在皮肤上进行注射时，给患者不造成伤害或者过度疼痛的注射速度。本发明所使用的“舒适”不仅包括患者的舒适，还包括医生或医疗专家注射组合物过程中的舒适或能力。通常，具有低挤压力的方式在注入组合物时没有压痛并且便于控制。在本发明中所述医疗用组合物的挤压力可以是100n以下、70n以下、60n以下、40n以下、35以下或30n以下。[0049]在一具体例中，本发明的医疗用组合物可通过注射器的注入等方式注入或插入到生物体内。这些医疗用组合物可用作一般的医疗用材料，并且可用作组织修复剂、填充剂、抗粘连剂、整容助剂、关节炎治疗剂、创伤敷剂、止血剂或脂肪代谢障碍治疗剂。此时，脂肪代谢障碍具有脂肪组织消失的症状，并且可以通过本发明的医疗用组合物促进自体脂肪的生成。[0050]另外，本发明涉及上述的医疗用组合物的制造方法。[0051]所述医疗用组合物的制造方法可以包括：混合脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物的步骤。[0052]在本发明中，可使用市面上销售的产品作为脂肪组织源细胞外基质粉末，或者可在实验室等处制造并使用。[0053]所述脂肪组织源细胞外基质粉末可通过以下方法制造：在脂肪组织中去除脂质成分的脱脂步骤；在去除所述脂质成分的脂肪组织中去除细胞的脱细胞步骤；将去除所述细胞的脂肪组织进行冷冻干燥的冷冻干燥步骤；以及将所述冷冻干燥的冷冻干燥物进行粉末化的粉末化步骤。[0054]本发明在进行脱脂步骤之前可以进行清洗步骤。在所述清洗步骤可用灭菌蒸馏水清洗脂肪组织。通过所述步骤可去除脂肪组织内的不纯物。[0055]在本发明中，脱脂步骤是在脂肪组织中去除脂质成分的步骤。[0056]在一具体例中，脱脂(delipidation)是指从组织去除脂质成分。[0057]在一具体例中，脂质成分的去除可通过物理处理或化学处理来进行，并且可一起进行所述物理处理及化学处理。一起进行所述物理处理及化学处理时，进行顺序不受限制。[0058]在一具体例中，对于物理处理的种类，没有特别的限定，并且可使用粉碎法进行。所述粉碎可使用本领域公知的粉碎工具来进行，例如，搅拌机、均质机、冷冻粉碎机、超声波粉碎机、手动搅拌机、柱塞研磨机(plungermill)等。[0059]在进行所述粉碎时，粉碎物，即粉碎的脂肪组织的粒径可以是0.01至1mm。[0060]在一具体例中，对于化学处理的种类，没有特别限定，并且可使用脱脂质溶液来进行。所述脱脂质溶液可包括极性溶剂、非极性溶剂或其混合溶剂。作为所述极性溶剂可使用水、醇或者其混合溶液，作为所述醇可使用甲醇、乙醇或者异丙醇。作为非极性溶剂可使用己烷、庚烷、辛烷或其混合溶液。具体地，在本发明中作为脱脂质溶液可使用异丙醇和己烷的混合溶液。此时，异丙醇和己烷的混合比例可以是40:60至60:40。[0061]所述脱脂质溶液的处理时间可以是4至30小时，或10至20小时。[0062]在一具体例中，脱脂步骤可依次使用物理处理及化学处理来进行。通过物理处理在脂肪组织中首次去除脂质成分，通过所述物理处理未被去除的脂质成分可通过化学处理来进行去除。[0063]在本发明中，脱细胞步骤是在通过所述脱脂步骤去除脂质成分的脂肪组织中去除细胞的步骤。[0064]在一具体例中，脱细胞(decellularization)是指从组织去除除细胞外基质以外的其他细胞成分，例如，核、细胞膜、核酸等。[0065]在一具体例中，脱细胞可使用碱性溶液来进行，并且作为所述碱性溶液可使用选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钙、氢氧化镁、氢氧化钙和氨组成的组中的一个以上。在本发明中，作为碱性溶液可使用氢氧化钠(naoh)。在本发明中，在进行脱细胞时使用碱性溶液，从而具有无细胞毒性的优点。[0066]在一具体例中，碱性溶液的浓度可以是0.01至1n、0.06至0.45n、0.06至0.2n，或者0.08至1.02n。在所述浓度范围内便于去除细胞。[0067]另外，在一具体例中，脱细胞步骤可实施60至480分钟、70至200分钟或90至150分钟。在所述时间范围内便于去除细胞。[0068]在本发明中进行脱细胞步骤之后，在进行冷冻干燥步骤之前可以进一步进行离心步骤。通过所述离心步骤可去除脱脂步骤及脱细胞步骤中的不纯物，并且可获得高纯度的细胞外基质物质(沉淀物)。[0069]在一具体例中，离心可在4000至10000rpm，或在8000rpm的条件下进行5至30分钟、5至20分钟或10分钟。[0070]另外，离心前和/或后，可进一步进行清洗步骤，并且在清洗时可使用灭菌蒸馏水。[0071]在本发明中，冷冻干燥步骤是将前述的步骤，即脱细胞步骤或者离心步骤之后将获取物进行冷冻干燥的步骤。所述冷冻干燥作为在组织冻结的状态下将其急速冷却之后通过真空来吸收水分的方法，通过进行所述冷冻干燥可调整细胞外基质物质内的水分，并且可以容易地进行粉末化。[0072]在一具体例中，冷冻干燥在-50至-80℃下可以进行24至96小时。[0073]在本发明中，粉末化步骤是将冷冻干燥的冷冻干燥物，即细胞外基质进行粉末化的步骤。[0074]所述粉末化的细胞外基质粉末的粒径可以是100至800μm。[0075]另外，本发明的脂肪组织源细胞外基质粉末可通过以下方法制造：清洗脂肪组织的清洗步骤；从所述清洗的脂肪组织去除脂质成分的脱脂步骤；从去除所述脂质成分的脂肪组织中去除细胞的脱细胞步骤；将所述脱细胞的脂肪组织进行离心分离的离心分离步骤；将所述离心分离后的沉淀物进行冷冻干燥的冷冻干燥步骤；以及将所述冷冻干燥的冷冻干燥物进行粉末化的粉末化步骤。[0076]在本发明中，可使用市面上销售的产品作为生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物。另外，可在实验室等处利用生物相容性聚合物来制造所述交联物并使用。[0077]所述生物相容性聚合物的交联物可通过以下方法来制造：利用交联剂交联生物相容性聚合物的交联步骤；以及将交联的所述交联物进行冷冻干燥的冷冻干燥步骤。[0078]在本发明中，交联步骤是利用交联物对生物相容性聚合物进行交联的步骤。在所述步骤中，作为生物相容性聚合物及交联物可使用所述种类。[0079]在一具体例中，生物相容性聚合物可通过酰胺键(amidebond)结合。[0080]在一具体例中，交联物的含量相对于生物相容性聚合物可以为0.5至10重量份。[0081]在本发明中，冷冻干燥步骤是将所述步骤中交联的生物相容性聚合物进行冷冻干燥的步骤。[0082]在一具体例中，冷冻干燥在-50至-80℃下可以进行24至96小时。[0083]在本发明中，通过物理混合的方式可以使脂肪组织源细胞外基质粉末；及生物相容性聚合物或生物相容性聚合物的交联物进行混合。[0084]在一具体例中，在混合物内脂肪组织源细胞外基质粉末的含量可以是1至30重量份、5至15重量份或者3至8重量份。[0085]另外，在混合物内生物相容性聚合物的交联物的含量可以是0.1至20重量份、1至15重量份、1至11重量份或9至11重量份。[0086]在一具体例中，所述混合物可以通过将冷冻干燥的生物相容性聚合物的交联物溶解于溶剂中，随后与细胞外基质粉末进行混合来制造。此时，作为溶剂可使用生理盐水。[0087]本发明可进一步包括将所述混合物进行灭菌的步骤。[0088]通过所述灭菌步骤可去除医疗用组合物内的免疫性，并且可有效地破坏细菌等。[0089]在一具体例中，所述灭菌步骤可通过照射放射线来进行，放射线的照射范围可以是10至30kgy。[0090]另外，本发明涉及所述的医疗用组合物的使用。[0091]根据本发明的医疗用组合物具有如下效果：将其移植到体内之后，可促进自体脂肪生成及诱导自体组织化，另外，提高粘弹性特性从而具有优异的体内体积维持力。[0092]因此，在一具体例中，本发明的医疗用组合物通过注射器的注入等方式可以注入或插入到体内，并且可用作组织修复剂、填充剂、抗粘连剂、美容助剂、关节炎治疗剂、创伤敷剂、止血剂或脂肪代谢障碍治疗剂。[0093]本发明的实施方式[0094]以下，通过实施例更具体地说明本发明。但是，本发明的范围不限定于以下实施例，本领域的技术人员应该理解通过记载于权利要求的思想而导出的不脱离技术思想的范围内，可进行多种变形、修改或者应用。[0095]实施例[0096]实施例1.将人体脂肪组织源细胞外基质颗粒及通过化学方式交联的生物相容性聚合物进行物理混合的医疗用组合物[0097](1)制造人体脂肪组织源细胞外基质[0098]通过用粉碎机粉碎人体脂肪组织来脱离了脂肪。为了去除未脱离的脂肪，利用40％至60％异丙醇和40％至60％己烷进行16小时的脱脂过程。通过对去除脂肪的组织用0.1n氢氧化钠(naoh)进行处理来去除细胞。[0099]为了清洗完成去除脂肪及细胞的细胞外基质，在8000rpm下离心分离10分钟以去除上清液，并反复5至10回清洗过程。将支架进行冷冻干燥以便人体脂肪组织源细胞外基质的水分含量为10％以下，优选为1％至8％。[0100]利用微型粉碎机将所述完成冷冻干燥的人体脂肪组织源细胞外基质进行微粒化。[0101](2)制造通过化学方式交联的生物相容性聚合物[0102]通过将透明质酸(ha)和羧甲基纤维素(cmc)与1,4-丁二醇二缩水甘油醚(1,4-butandioldiglycidylether,bdde)进行混合来制造ha-cmc载体。[0103]具体地，通过在每0.1至1n的氢氧化钠水溶液100ml中添加1至10ml的bdde来准备反应溶剂。在所述反应溶剂中添加1至10g的cmc及1至20g的ha之后，均匀地混合以制造混合溶液。通过将所述混合溶液在50℃下进行加热反应3小时来进行交联。[0104]将完成交联的反应物放入透析膜，并在常温下用5l的磷酸缓冲盐水(phosphate-bufferedsaline)来进行透析。2小时后，用5l的50％etoh来进行替换并在常温下透析1小时。之后，用灭菌蒸馏水在常温下透析72小时之后，最终通过对反应物进行冷冻干燥来获得ha-cmc载体。[0105](3)制造医疗用组合物[0106]将在(1)中制造的人体脂肪组织源细胞外基质(5重量％至15重量％)和在(2)中制造的ha-cmc载体(1重量％至10重量％)与灭菌生理盐水进行混合。[0107]通过将混合的最终产物用25kgy伽马射线进行灭菌来制造医疗用组合物。[0108]实验例1.验证对医疗用组合物进行放射线灭菌时的剂型维持能力[0109](1)方法[0110]验证了在实施例1中制造的医疗用组合物的剂型维持能力。[0111]用下述表1的含量(剩余：灭菌生理盐水)准备试料之后，用25kgy伽马射线进行灭菌。在伽马灭菌时确认根据各成分的含量比率的物性。[0112]【表1】[0113][0114][0115]一方面，测量了对各试料的挤压力。关于所述挤压力，通过使用万能材料试验机来测量最大荷载值n，即，将套管(cannula)固定在装有内容物的注射器，并且以12mm/min的试验速度按压注射器，使注射器内的内容物排出到套管外部时的最大荷载值n。[0116](2)结果[0117]在图1中示出伽马灭菌时根据试料的各成分含量比率的物性测量结果。[0118]另外，在图2中示出试料的挤压力测量结果。[0119]【表2】[0120][0121][0122]如图1及表2所示，可以确认，包括人体脂肪组织源细胞外基质(ecm)5重量％及ha-cmc载体10重量％的医疗用组合物具有最优异的物性，并且在20g下具有40n以下的挤压力，因此，可轻松地通过注射器进行体内注入。[0123]实验例2.分析医疗用组合物的粘弹性特性[0124](1)方法[0125]在实验例1中将以最佳混合比率进行选择的包括人体脂肪组织源细胞外基质(ecm)5重量％及ha-cmc载体10重量％的医疗用组合物(试料13)作为实验组(医疗用组合物)，将不包括细胞外基质并且包括ha-cmc10重量％的组合物作为对照组(ha-cmc)，并且比较了所述实验组和对照组的粘弹性特性。[0126]具体地，通过将旋转型流变仪分析仪设置成频率：0.1～10hz，温度：25℃，变形率：1％的方式测量了弹性模量、粘性模量及复数粘度。[0127](2)结果[0128]在图2中显示了弹性模量、粘性模量及复数粘度的测量结果。[0129]如所述图2所示，根据本发明的医疗用组合物相比于对照组的ha-cmc在弹性模量及粘性模量上显示出高出约7倍以上的值，在复数粘度上也显示出高出6倍以上的值。[0130]实验例3.验证人体脂肪组织源医疗用组合物的体内(invivo)性能[0131](1)方法[0132]为了验证医疗用组合物的性能，进行了动物实验。[0133]将在实施例1的(1)中制造的细胞外基质粉末(细胞外基质)及在实施例1的(2)中制造的ha-cmc载体(ha-cmc)分别作为对照组，将在实验例1中以最佳混合比率进行选择的包括人体脂肪组织源细胞外基质(ecm)粉末5重量％及ha-cmc载体10重量％的医疗用组合物(试料13)作为实验组。[0134]将对照组及实验组的组合物0.2cc分别移植到balb/c裸鼠的腹部皮下，并在移植6周后牺牲实验动物并分析了结果。[0135](2)结果[0136](a)验证体内皮肤维持能力[0137]向对照组及实验组注入组合物6周之后，拍摄从裸鼠提取的试料，并且通过数字卡尺测量了体积。[0138]图3是显示从裸鼠中提取的组合物的图及显示体积(residualvol.)的图表。[0139]如所述图3所示，可确认作为实验组的医疗用组合物相对于对照组的ha-cmc及细胞外基质，体内体积维持力优异。[0140]通过图表也可确认6周之后，医疗用组合物相比细胞外基质，体积维持4倍以上。[0141](b)验证自体组织化[0142]对于在(a)中提取的试料，通过组织染色确认了是否自体组织化。通过进行苏木精-伊红(haematoxylinandeosin，h&e)染色来进行组织分析，并且对细胞流入进行了定量化。[0143]图4是为了组织学分析对从裸鼠提取的组合物进行行苏木精-伊红(haematoxylinandeosin，h&e)染色的图及对细胞流入进行定量化的图表。[0144]如图4所示，通过组织染色结果可以确认，相对于作为对照组的ha-cmc及细胞外基质，细胞流入到作为实验组的医疗用组合物内，并且形成血管。[0145]另外，通过图表可确认6周后医疗用组合物相比ha-cmc增加了8倍以上的细胞流入。[0146](c)验证自体脂肪生成效果[0147]对(a)中提取的试料验证了脂肪生成。[0148]为了分析提取的试料内的脂肪生成，进行了油红o染色，并且对脂肪生成进行了定量化。[0149]图5是为了分析从裸鼠提取的组合物内的脂肪生成而进行油红o染色的图及定量化的图表。[0150]如所述图5所示，通过油红o染色的结果，可以确认作为实验组的医疗用组合物内相比作为对照组的ha-cmc及细胞外基质可以诱导更多的脂肪生成。[0151]另外，通过图表可以确认，到6周后医疗用组合物相比细胞外基质增加了8％以上的脂肪生成。[0152]工业上的利用可能性[0153]根据本发明的医疗用组合物移植到体内之后，具有促进自体脂肪生成及可诱导自体组织化，另外，粘弹性特性得以提高，从而具有优异的体内体积维持力的效果。[0154]因此，本发明的医疗用组合物可通过注射器的注入等方式注入或者插入到生物体内，并且可用作组织修复剂、填充剂、抗粘连剂、美容助剂、关节炎治疗剂、创伤敷剂、止血剂或脂肪代谢异常治疗剂。当前第1页12当前第1页12
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