一种中药对照品厚朴酚的高效液相分析方法与流程

1.本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种中药对照品厚朴酚的高效液相分析方法。


背景技术：

2.厚朴作为一种传统中药的应用历史久远，其具有祛除风寒，缓解头痛，抑制焦虑、腹泻以及中风等作用。厚朴酚是厚朴提取物中重要的单体成分，由于厚朴在传统中医中药中具有广泛且重要的用途，国内外学者对厚朴及其亲缘植物进行有关研究，特别是厚朴酚类，并逐渐把动物实验研究结果应用到临床相关疾病的治疗中，且取得了较好的疗效。
3.厚朴酚是一种联苯类化合物，具有抗菌抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、抗哮喘等多种药理学作用。近年来，因其良好的药理学作用，厚朴酚被广泛的应用在多个领域，以其为主方的中药制剂，如藿香正气水、半夏厚朴汤等，均有很好的降暑解表、化湿中和、疏肝解郁等临床效用，又因其具有抑制皮肤光老化的作用，故在防晒霜中也添加此种药物成分，且取得较好的市场回报；同时也被应用于治疗急性胰腺炎的中药中。
4.厚朴酚作为厚朴的主要组成成分之一，虽然目前对其研究越来越多，但是应用于临床的仍然是多种中药成分的混合而非其单体。虽然在某些领域确实表现出良好的临床疗效，但是若要推广或者要得到国内外学者们更高程度的承认，还需要对其单体做更深层次的基础及临床试验，才能使厚朴酚具有更广阔的应用前景。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种中药对照品厚朴酚的高效液相分析方法，以解决上述技术问题。
6.为实现上述目的，本发明所述的一种中药对照品厚朴酚的高效液相分析方法，包括：
7.步骤1.将厚朴酚样品用甲醇配制成400～600μg/ml的厚朴酚样品溶液；优选的，厚朴酚样品溶液的浓度为500μg/ml。
8.步骤2.使用高效液相色谱仪对厚朴酚样品溶液进行检测；高效液相色谱仪为agilent 1260ii型(dad检测器)；
9.高效液相色谱仪的检测条件如下，
10.色谱柱为c18色谱柱；包括：安捷伦zorbax sb-c18(4.6*250mm,5μm)、安捷伦extend-c18(4.6*250mm,5μm)、安捷伦eclipse plus c18(4.6*250mm,5μm)；优选的为安捷伦extend-c18(4.6*250mm,5μm)。
11.流动相a为三氟乙酸水溶液，体积分数为0.005％～0.02％；优选的体积分数为0.01％。
12.流动相b为色谱级乙腈；
13.流动相a和流动相b的体积比例为35:65～45:55；优选的体积比例为40:60。
14.检测波长为290nm；
15.色谱柱的柱温为25～40摄氏度，柱温在25～40摄氏度对厚朴酚的检测影响很小；优选的为25摄氏度。
16.流动相的流速为0.8～1.5ml/min，优选的为1ml/min。
17.厚朴酚样品溶液的进样量为5～20μl；进样量太小，不确定因素对检测结果的影响越大，进样量太多，会导致峰型差等问题。优选的为10μl。
18.有益效果：
19.本发明提供了一种中药对照品厚朴酚的高效液相分析方法，可以提高厚朴酚提高检测效率、减小检测数据的不确定度。
附图说明
20.图1为本发明实施例1检测条件下的液相图谱。
21.图2为本发明实施例2检测条件下的液相图谱。
22.图3为本发明实施例3检测条件下的液相图谱。
23.图4为本发明厚朴酚的紫外吸收光谱。
24.图5为本发明实施例5检测条件下的液相图谱。
25.图6为本发明实施例6检测条件下的液相图谱。
26.图7为本发明实施例7检测条件下的液相图谱。
27.图8为本发明实施例8检测条件下的液相图谱。
具体实施方式
28.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另外定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本文中使用的“包括”等类似的词语意指出现该词前面的元件或者物件涵盖出现在该词后面列举的元件或者物件及其等同，而不排除其他元件或者物件。
29.针对现有技术存在的问题，本发明的实施例提供了一种中药对照品厚朴酚的高效液相分析方法。
30.实施例1
31.1、试剂
32.厚朴酚样品：来源于中药厚朴。
33.甲醇，色谱纯
34.水，蒸馏水。
35.三氟乙酸，色谱纯。
36.乙腈，色谱纯。
37.2、仪器
38.高效液相色谱仪：agilent 1260ii型(dad检测器，agilent control panel工作
站)；
39.3、高效液相色谱仪的检测条件
40.色谱柱：安捷伦extend-c18(4.6*250mm，5μm)；
41.流动相：0.01％三氟乙酸水溶液：乙腈(v/v＝40:60)。
42.检测波长：290nm
43.柱温：25℃
44.流速：1ml/min
45.进样量：10μl；
46.4、操作步骤和检测结果
47.称取厚朴酚样品25mg，加入蒸馏水稀释后置于50毫升的容量瓶中，定容至刻度，摇匀，配制成浓度为500μg/ml的厚朴酚样品溶液。用上述的检测条件对厚朴酚样品溶液进行检测。
48.如图1所示，厚朴酚的出峰保留时间为9.954分钟，杂质峰保留时间为4.956分钟和6.916分钟；出峰时间合适，杂质峰明显分开；峰型尖锐，信号强度1500mau以上。
49.实施例2
50.将实施例1中的色谱柱替换为安捷伦zorbax sb-c18(4.6*250mm,5μm)，高效液相色谱仪的检测条件不变，对500μg/ml的厚朴酚样品溶液进行检测，如图2所示；厚朴酚的出峰保留时间为10.507分钟，杂质峰保留时间为5.071分钟和7.403分钟；出峰时间合适，杂质峰明显分开；峰型尖锐，信号强度1200mau以上。
51.实施例3
52.将实施例1的色谱柱替换为安捷伦eclipse plus c18(4.6*250mm,5μm)，高效液相色谱仪的检测条件不变，对500μg/ml的厚朴酚样品溶液进行检测，如图3所示；厚朴酚的出峰保留时间为10.906分钟，杂质峰保留时间为5.230分钟和7.726分钟；出峰时间合适，杂质峰明显分开；峰型尖锐，信号强度2000mau以上。
53.实施例4
54.测试厚朴酚的紫外吸收光谱，如图4所示，厚朴酚最大吸收波长为290nm，除此外，在216nm、232nm均有吸收，比较216nm、232nm、290nm波长下主成分和杂质的响应差异，发现在290nm波长下主峰和杂质峰响应强度基本一致，图谱基线平稳，且无溶剂的影响，所以选择290nm作为厚朴酚检测波长。
55.实施例5
56.流动相比例选择：以0.01％三氟乙酸水-乙腈作为流动相设置三种流动相比例，分别为40:60、45:55、35:65，从出峰保留时间及分离情况考虑，最终选择了40:60的比例为本发明的最优选择。
57.和实施例1相同，仅将流动相比例替换为45:55，对500μg/ml的厚朴酚样品溶液进行检测，结果如图5所示，厚朴酚的出峰保留时间为15.743分钟，杂质峰保留时间为6.647分钟和9.934分钟；出峰时间靠后，杂质峰虽然分开；但峰型较宽，信号强度600mau以上，吸收信号弱。
58.实施例6
59.和实施例1相同，仅将流动相比例替换为35:65，对500μg/ml的厚朴酚样品溶液进
行检测，结果如图6所示，厚朴酚的出峰保留时间为7.526分钟，杂质峰保留时间为4.792分钟和5.688分钟；出峰时间靠前，杂质峰未明显分开，信号强度1400mau以上。
60.实施例7
61.流动相体系筛选：设置了三种流动相体系，分别为纯水与甲醇、纯水与乙腈、0.01％三氟乙酸水与乙腈，从峰型情况考虑，最终选择0.01％三氟乙酸水为流动相a，乙腈为流动相b作为最优流动相选择。
62.和实施例1相同，仅将流动相换为纯水与甲醇，对500μg/ml的厚朴酚样品溶液进行检测，结果如图7所示，厚朴酚的出峰保留时间为7.048分钟，杂质峰保留时间为5.048分钟；另一个杂质未清楚显示；出峰时间靠前，杂质峰未明显分开，信号强度600mau以上，吸收信号弱。
63.实施例8
64.和实施例1相同，仅将流动相换为纯水与乙腈，对500μg/ml的厚朴酚样品溶液进行检测，结果如图8所示，厚朴酚的出峰保留时间为10.111分钟，杂质峰保留时间为4.678和6.988分钟；出峰时间靠前，杂质峰未明显分开，信号强度300mau以上，吸收信号弱。
65.虽然在上文中详细说明了本发明的实施方式，但是对于本领域的技术人员来说显而易见的是，能够对这些实施方式进行各种修改和变化。但是，应理解，这种修改和变化都属于权利要求书中所述的本发明的范围和精神之内。而且，在此说明的本发明可有其它的实施方式，并且可通过多种方式实施或实现。