白花败酱蒽醇i的制备方法及其应用
技术领域：
：1.本发明属于医药
技术领域：
：，具体为白花败酱蒽醇i的制备方法及其应用。
背景技术：
：：2.白花败酱草，又名萌菜、胭脂麻、苦斋等，为败酱属植物白花败酱patriniavillosa(thunb.)juss.的干燥全草，广泛分布于亚洲东部和北美洲。白花败酱是一种多年生草本植物，最早记载于《神农本草经》。其味苦，性寒，无毒。在民间，白花败酱草也被作为一种野菜食用，属于历史悠久的药食同源植物。白花败酱草作为草药有着悠久的药用历史，具有散瘀消肿、活血排脓的作用，主要用于治疗阑尾炎、痢疾、肝炎、扁桃体炎、结肠炎等。现代研究表明，白花败酱草富含苯丙酸类、黄酮类、萜类、皂苷类等多种生物活性成分，具有多种药理活性。3.我们从白花败酱草patriniavillosa(thunb.)juss.70％乙醇提取物中采用各种色谱方法分离得到了白花败酱蒽醇i，前期药效研究发现白花败酱蒽醇i能够抑制α-葡萄糖苷酶、降低血糖浓度，对于防治2型糖尿病具有较好效果。技术实现要素：4.本发明的目的在于提供白花败酱蒽醇i的制备方法及其应用。5.本发明的技术方案概述如下：6.白花败酱蒽醇i在制备防治2型糖尿病药物中的应用，白花败酱蒽醇i的结构式如式(i)所示：[0007][0008]白花败酱蒽醇i的制备方法如下：[0009](1)提取：干燥的白花败酱草全草粉碎后以6倍体积的70％乙醇回流提取3次，每次提取2h。合并提取液后干燥并减压浓缩得到浸膏。[0010](2)分离：适量蒸馏水充分溶解浸膏后，用等体积的石油醚、二氯甲烷和正丁醇依次萃取。将二氯甲烷层经硅胶柱层析色谱分离，用二氯甲烷-甲醇(100：1→1：1)梯度洗脱得到fr.1～fr.10共10个组分。其中fr.5经ods柱层析色谱进一步分离，用甲醇-水(10％～100％)梯度洗脱得到fr.5-1～fr.5-5共5个组分。其中fr.5-4经sephadexlh-20柱层析色谱分离，用70％甲醇等度洗脱并经半制备高效液相色谱法纯化后得到白花败酱蒽醇i。[0011]本发明还提供了白花败酱蒽醇i在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。[0012]本发明还提供了白花败酱蒽醇i在制备降低血糖的保健食品或药物中的应用。[0013]白花败酱蒽醇i为黄色固体(甲醇)。高分辨电喷雾电离质谱hr-esi-ms(图6)显示在m/z451.2854[m-h]-处有一个准分子离子峰(计算值c29h39o4，m/z451.2852[m-h]-)，提示化合物1的分子式为c29h40o4。[0014]1h-nmr和13c-nmr数据见表1。[0015]表1化合物1的13c-nmr和1h-nmr谱数据(dmso-d6，δinppm)[0016]table113c-nmrand1h-nmrdataofcompound1indmso-d6(δinppm)[0017][0018]白花败酱蒽醇i结构解析：[0019]如图1-6所示，白花败酱蒽醇i的1hnmr、13cnmr、2d-nmr(hsqc、hmbc)谱，以及hr-esi-ms谱得知化合物结构。具体地说：[0020]化合物1为黄色固体(甲醇)。高分辨电喷雾电离质谱(hr-esi-ms)显示在m/z451.2854[m-h]-处有一个准分子离子峰(计算值c29h39o4，m/z451.2852[m-h]-)，提示化合物1的分子式为c29h40o4。化合物1的1h-nmr、13c-nmr和hsqc光谱数据显示存在29个碳信号，包括1个甲基(δc13.8)、1个甲氧基(δc49.6)、13个亚甲基(δc35.0、25.0、29.0、28.9、28.8、28.7、28.7、28.6、28.5、28.5、28.4、31.2和22.0)、5个芳香甲基(δc116.5、127.9、119.3、128.8和128.6)，9个芳香族季碳(δc152.9,121.8,166.5,131.3,130.5,154.7,133.1,161.0和134.6)。化合物1的1h-nmr谱表明，δh7.61(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-2)、7.40(1h,dd,j＝7.8,7.8hz,h-3)和7.30(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-4)提示在结构中存在abc耦合系统；δh7.78(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-8)和7.58(1h,d,j＝7.8hz,h-9)提示在苯环上的存在邻位耦合系统。化合物1的13c-nmr谱中，碳信号主要集中在两个区域中，即高场区的脂肪碳信号特征区和低场区的芳香碳信号特征区，其中高场区的碳信号表明化合物中可能存在链状脂肪烃结构。在13c-nmr的高场区，有9个碳信号δc29.0(c-3’)、28.9(c-4’)、28.8(c-5’)、28.7(c-6’)、28.7(c-7’)、28.6(c-8’)、28.5(c-9’)、28.5(c-10’)、28.4(c-11’)，与上述碳信号相关的氢信号均出现在相近的化学位移处，相互重叠形成高响应值的氢信号峰，表明与这9个碳原子相连的氢原子都处于非常相似的化学环境中，提示该化合物中存在-(ch2)9-的链状结构。在13c-nmr谱的低场区有14个芳香碳信号，表明化合物中存在蒽结构，较大的化学位移表明碳原子与氧原子相连。化学位移值在δc49.6(-ome)处的碳原子信号为甲氧基上的碳原子信号。结合1h-nmr谱提供的氢信号信息，可以确定母核结构中有5个碳原子与取代基相连。进一步分析hsqc谱中的相关信息，可以将一个含有14个碳原子的脂肪烃链连接起来，即-ch2-ch2-(ch2)9-ch2-ch2-ch3。[0021]在hmbc谱中，δh7.78(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-8)与δc130.5(c-10)、133.1(c-12)、166.6(c-6)相关、δh7.61(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-2)和δc128.8(c-8)、133.1(c-12)相关、δh7.58(1h,d,j＝7.8hz,h-9)和δc131.3(c-7)相关、δh7.40(1h,dd,j＝7.8,7.8hz,h-3)和δc121.8(c-5)、152.9(c-1)相关、δh7.30(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-4)和δc116.5(c-2)，134.6(c-14)，152.9(c-1)相关，以上数据有助于确定蒽环母核上取代基的位置和碳信号的归属。δh4.29(3h,s,-ome)和δc154.7(c-11)的相关性表明甲氧基取代基的位置。综合以上信息，化合物的分子结构可以得到确定，命名为8-甲氧基-7-n-十四烷基-1,9,10-蒽三醇。经文献检索未发现报道，鉴定为新化合物。该化合物重要的1h-1hcosy和hmbc关联如图4、5所示，13c-nmr和1h-nmr的信号归属如表1所示。[0022]本发明的有益效果：[0023]本研究证明白花败酱蒽醇i的提取方法简单，适合大规模生产，白花败酱蒽醇i能够抑制α-葡萄糖苷酶、可作为制备降血糖药物药物的应用。附图说明[0024]图1白花败酱蒽醇i的1hnmr谱；[0025]图2白花败酱蒽醇i的13cnmr谱；[0026]图3白花败酱蒽醇i的hsqc谱；[0027]图4白花败酱蒽醇i的hmbc谱；[0028]图5白花败酱蒽醇i的cosy谱；[0029]图6白花败酱蒽醇i的hr-esi-ms谱。具体实施方式[0030]下面通过实施例进一步描述本发明，使本专业技术更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。[0031]实施例1[0032]白花败酱蒽醇i的制备方法[0033](1)提取：干燥的白花败酱草全草(15kg)粉碎后以6倍体积的70％乙醇回流提取3次，每次提取2h。合并提取液后干燥并减压浓缩得到约2.8kg浸膏。[0034](2)分离：适量蒸馏水充分溶解浸膏后，用等体积的石油醚、二氯甲烷和正丁醇依次萃取。将二氯甲烷层(110g)经硅胶柱层析色谱分离，用二氯甲烷-甲醇(100：1→1：1)梯度洗脱得到fr.1～fr.10共10个组分。其中fr.5经ods柱层析色谱进一步分离，用甲醇-水(10％～100％)梯度洗脱得到fr.5-1～fr.5-5共5个组分。其中fr.5-4经sephadexlh-20柱层析色谱分离，用70％甲醇等度洗脱并经半制备高效液相色谱法纯化后得到白花败酱蒽醇i(19.9mg)。[0035]实施例2[0036]白花败酱蒽醇i对α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究[0037]α-葡萄糖苷酶在食物吸收过程中起着重要的作用，必须与之结合后，食物才能消化和吸收。α-葡萄糖苷酶抑制剂的降糖机制是，通过抑制肠黏膜上的α-葡萄糖苷酶，使淀粉分解为葡萄糖的速度减缓，减少和延缓小肠对葡萄糖的吸收，以降低血糖，对餐后高血糖的作用比较明显。葡萄糖苷酶抑制剂不刺激胰岛素的分泌，单独使用本类药物通常不会引发低血糖，因此可帮助减少血糖的波动。可以明显降低糖尿病患者发生心血管病变的概率，对心肌梗死的改善作用最为显著。[0038]1.1仪器与试药[0039]紫外-可见分光光度计购于上海尤尼柯仪器有限公司；α－葡萄糖苷酶，4-硝基酚α-d-吡喃葡萄糖苷(pnpg)购于sigma公司；阿卡波糖购于拜尔医药保健有限公司；还原型谷胱苷肽购于北京欣经科生物技术有限公司。[0040]1.2实验方法[0041]1.2.1试剂配制[0042]白花败酱蒽醇i以含有0.05％二甲基亚砜的磷酸钾缓冲液为溶剂溶解，制成标准品溶液；α-葡萄糖苷酶冻干粉用纯净水稀释溶解(0.8u/ml)；pnpg干粉溶于纯净水中(50mmol/l)；还原型谷胱甘肽(2mg/ml)；na2co3(0.1mol/l)。[0043]1.2.2阳性对照品溶液的配制[0044]取阿卡波糖(100mg)研碎，加蒸馏水10ml，37℃溶解、过滤、取上清液20μl(浓度为0.5μm、1μm、2μm、4μm、8μm)。[0045]1.2.3α-葡萄糖苷酶抑制活性评价：[0046]试管中分别加入850μl磷酸钾缓冲液(67mmol/l)，20μl不同浓度待测样品(2.5μm、5μm、10μm、15μm、20μm)，35μlα-葡萄糖苷酶(0.8u/ml)，25μl还原型谷胱苷肽，试管于37℃恒温孵育10min，加入70μlpnpg(50mmol/l)，37℃恒温孵育20min，以na2co3(5ml)终止反应，于400nm下测吸光度值，计算ic50值：[0047]抑制率(％)＝(空白对照组od值—给药组od值)/空白对照组od值×100％。[0048]结果显示白花败酱蒽醇i对α-葡萄糖苷酶有显著抑制作用，呈一定量效关系，ic50值为13.2μm，阳性对照组阿卡波糖ic50值为1.48μm。[0049]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。当前第1页12当前第1页12
技术领域：
：1.本发明属于医药
技术领域：
：，具体为白花败酱蒽醇i的制备方法及其应用。
背景技术：
：：2.白花败酱草，又名萌菜、胭脂麻、苦斋等，为败酱属植物白花败酱patriniavillosa(thunb.)juss.的干燥全草，广泛分布于亚洲东部和北美洲。白花败酱是一种多年生草本植物，最早记载于《神农本草经》。其味苦，性寒，无毒。在民间，白花败酱草也被作为一种野菜食用，属于历史悠久的药食同源植物。白花败酱草作为草药有着悠久的药用历史，具有散瘀消肿、活血排脓的作用，主要用于治疗阑尾炎、痢疾、肝炎、扁桃体炎、结肠炎等。现代研究表明，白花败酱草富含苯丙酸类、黄酮类、萜类、皂苷类等多种生物活性成分，具有多种药理活性。3.我们从白花败酱草patriniavillosa(thunb.)juss.70％乙醇提取物中采用各种色谱方法分离得到了白花败酱蒽醇i，前期药效研究发现白花败酱蒽醇i能够抑制α-葡萄糖苷酶、降低血糖浓度，对于防治2型糖尿病具有较好效果。技术实现要素：4.本发明的目的在于提供白花败酱蒽醇i的制备方法及其应用。5.本发明的技术方案概述如下：6.白花败酱蒽醇i在制备防治2型糖尿病药物中的应用，白花败酱蒽醇i的结构式如式(i)所示：[0007][0008]白花败酱蒽醇i的制备方法如下：[0009](1)提取：干燥的白花败酱草全草粉碎后以6倍体积的70％乙醇回流提取3次，每次提取2h。合并提取液后干燥并减压浓缩得到浸膏。[0010](2)分离：适量蒸馏水充分溶解浸膏后，用等体积的石油醚、二氯甲烷和正丁醇依次萃取。将二氯甲烷层经硅胶柱层析色谱分离，用二氯甲烷-甲醇(100：1→1：1)梯度洗脱得到fr.1～fr.10共10个组分。其中fr.5经ods柱层析色谱进一步分离，用甲醇-水(10％～100％)梯度洗脱得到fr.5-1～fr.5-5共5个组分。其中fr.5-4经sephadexlh-20柱层析色谱分离，用70％甲醇等度洗脱并经半制备高效液相色谱法纯化后得到白花败酱蒽醇i。[0011]本发明还提供了白花败酱蒽醇i在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。[0012]本发明还提供了白花败酱蒽醇i在制备降低血糖的保健食品或药物中的应用。[0013]白花败酱蒽醇i为黄色固体(甲醇)。高分辨电喷雾电离质谱hr-esi-ms(图6)显示在m/z451.2854[m-h]-处有一个准分子离子峰(计算值c29h39o4，m/z451.2852[m-h]-)，提示化合物1的分子式为c29h40o4。[0014]1h-nmr和13c-nmr数据见表1。[0015]表1化合物1的13c-nmr和1h-nmr谱数据(dmso-d6，δinppm)[0016]table113c-nmrand1h-nmrdataofcompound1indmso-d6(δinppm)[0017][0018]白花败酱蒽醇i结构解析：[0019]如图1-6所示，白花败酱蒽醇i的1hnmr、13cnmr、2d-nmr(hsqc、hmbc)谱，以及hr-esi-ms谱得知化合物结构。具体地说：[0020]化合物1为黄色固体(甲醇)。高分辨电喷雾电离质谱(hr-esi-ms)显示在m/z451.2854[m-h]-处有一个准分子离子峰(计算值c29h39o4，m/z451.2852[m-h]-)，提示化合物1的分子式为c29h40o4。化合物1的1h-nmr、13c-nmr和hsqc光谱数据显示存在29个碳信号，包括1个甲基(δc13.8)、1个甲氧基(δc49.6)、13个亚甲基(δc35.0、25.0、29.0、28.9、28.8、28.7、28.7、28.6、28.5、28.5、28.4、31.2和22.0)、5个芳香甲基(δc116.5、127.9、119.3、128.8和128.6)，9个芳香族季碳(δc152.9,121.8,166.5,131.3,130.5,154.7,133.1,161.0和134.6)。化合物1的1h-nmr谱表明，δh7.61(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-2)、7.40(1h,dd,j＝7.8,7.8hz,h-3)和7.30(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-4)提示在结构中存在abc耦合系统；δh7.78(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-8)和7.58(1h,d,j＝7.8hz,h-9)提示在苯环上的存在邻位耦合系统。化合物1的13c-nmr谱中，碳信号主要集中在两个区域中，即高场区的脂肪碳信号特征区和低场区的芳香碳信号特征区，其中高场区的碳信号表明化合物中可能存在链状脂肪烃结构。在13c-nmr的高场区，有9个碳信号δc29.0(c-3’)、28.9(c-4’)、28.8(c-5’)、28.7(c-6’)、28.7(c-7’)、28.6(c-8’)、28.5(c-9’)、28.5(c-10’)、28.4(c-11’)，与上述碳信号相关的氢信号均出现在相近的化学位移处，相互重叠形成高响应值的氢信号峰，表明与这9个碳原子相连的氢原子都处于非常相似的化学环境中，提示该化合物中存在-(ch2)9-的链状结构。在13c-nmr谱的低场区有14个芳香碳信号，表明化合物中存在蒽结构，较大的化学位移表明碳原子与氧原子相连。化学位移值在δc49.6(-ome)处的碳原子信号为甲氧基上的碳原子信号。结合1h-nmr谱提供的氢信号信息，可以确定母核结构中有5个碳原子与取代基相连。进一步分析hsqc谱中的相关信息，可以将一个含有14个碳原子的脂肪烃链连接起来，即-ch2-ch2-(ch2)9-ch2-ch2-ch3。[0021]在hmbc谱中，δh7.78(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-8)与δc130.5(c-10)、133.1(c-12)、166.6(c-6)相关、δh7.61(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-2)和δc128.8(c-8)、133.1(c-12)相关、δh7.58(1h,d,j＝7.8hz,h-9)和δc131.3(c-7)相关、δh7.40(1h,dd,j＝7.8,7.8hz,h-3)和δc121.8(c-5)、152.9(c-1)相关、δh7.30(1h,dd,j＝1.2,7.8hz,h-4)和δc116.5(c-2)，134.6(c-14)，152.9(c-1)相关，以上数据有助于确定蒽环母核上取代基的位置和碳信号的归属。δh4.29(3h,s,-ome)和δc154.7(c-11)的相关性表明甲氧基取代基的位置。综合以上信息，化合物的分子结构可以得到确定，命名为8-甲氧基-7-n-十四烷基-1,9,10-蒽三醇。经文献检索未发现报道，鉴定为新化合物。该化合物重要的1h-1hcosy和hmbc关联如图4、5所示，13c-nmr和1h-nmr的信号归属如表1所示。[0022]本发明的有益效果：[0023]本研究证明白花败酱蒽醇i的提取方法简单，适合大规模生产，白花败酱蒽醇i能够抑制α-葡萄糖苷酶、可作为制备降血糖药物药物的应用。附图说明[0024]图1白花败酱蒽醇i的1hnmr谱；[0025]图2白花败酱蒽醇i的13cnmr谱；[0026]图3白花败酱蒽醇i的hsqc谱；[0027]图4白花败酱蒽醇i的hmbc谱；[0028]图5白花败酱蒽醇i的cosy谱；[0029]图6白花败酱蒽醇i的hr-esi-ms谱。具体实施方式[0030]下面通过实施例进一步描述本发明，使本专业技术更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。[0031]实施例1[0032]白花败酱蒽醇i的制备方法[0033](1)提取：干燥的白花败酱草全草(15kg)粉碎后以6倍体积的70％乙醇回流提取3次，每次提取2h。合并提取液后干燥并减压浓缩得到约2.8kg浸膏。[0034](2)分离：适量蒸馏水充分溶解浸膏后，用等体积的石油醚、二氯甲烷和正丁醇依次萃取。将二氯甲烷层(110g)经硅胶柱层析色谱分离，用二氯甲烷-甲醇(100：1→1：1)梯度洗脱得到fr.1～fr.10共10个组分。其中fr.5经ods柱层析色谱进一步分离，用甲醇-水(10％～100％)梯度洗脱得到fr.5-1～fr.5-5共5个组分。其中fr.5-4经sephadexlh-20柱层析色谱分离，用70％甲醇等度洗脱并经半制备高效液相色谱法纯化后得到白花败酱蒽醇i(19.9mg)。[0035]实施例2[0036]白花败酱蒽醇i对α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究[0037]α-葡萄糖苷酶在食物吸收过程中起着重要的作用，必须与之结合后，食物才能消化和吸收。α-葡萄糖苷酶抑制剂的降糖机制是，通过抑制肠黏膜上的α-葡萄糖苷酶，使淀粉分解为葡萄糖的速度减缓，减少和延缓小肠对葡萄糖的吸收，以降低血糖，对餐后高血糖的作用比较明显。葡萄糖苷酶抑制剂不刺激胰岛素的分泌，单独使用本类药物通常不会引发低血糖，因此可帮助减少血糖的波动。可以明显降低糖尿病患者发生心血管病变的概率，对心肌梗死的改善作用最为显著。[0038]1.1仪器与试药[0039]紫外-可见分光光度计购于上海尤尼柯仪器有限公司；α－葡萄糖苷酶，4-硝基酚α-d-吡喃葡萄糖苷(pnpg)购于sigma公司；阿卡波糖购于拜尔医药保健有限公司；还原型谷胱苷肽购于北京欣经科生物技术有限公司。[0040]1.2实验方法[0041]1.2.1试剂配制[0042]白花败酱蒽醇i以含有0.05％二甲基亚砜的磷酸钾缓冲液为溶剂溶解，制成标准品溶液；α-葡萄糖苷酶冻干粉用纯净水稀释溶解(0.8u/ml)；pnpg干粉溶于纯净水中(50mmol/l)；还原型谷胱甘肽(2mg/ml)；na2co3(0.1mol/l)。[0043]1.2.2阳性对照品溶液的配制[0044]取阿卡波糖(100mg)研碎，加蒸馏水10ml，37℃溶解、过滤、取上清液20μl(浓度为0.5μm、1μm、2μm、4μm、8μm)。[0045]1.2.3α-葡萄糖苷酶抑制活性评价：[0046]试管中分别加入850μl磷酸钾缓冲液(67mmol/l)，20μl不同浓度待测样品(2.5μm、5μm、10μm、15μm、20μm)，35μlα-葡萄糖苷酶(0.8u/ml)，25μl还原型谷胱苷肽，试管于37℃恒温孵育10min，加入70μlpnpg(50mmol/l)，37℃恒温孵育20min，以na2co3(5ml)终止反应，于400nm下测吸光度值，计算ic50值：[0047]抑制率(％)＝(空白对照组od值—给药组od值)/空白对照组od值×100％。[0048]结果显示白花败酱蒽醇i对α-葡萄糖苷酶有显著抑制作用，呈一定量效关系，ic50值为13.2μm，阳性对照组阿卡波糖ic50值为1.48μm。[0049]尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。当前第1页12当前第1页12
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