一种用于定向抑制有害菌增殖的组合物及其应用的制作方法

1.本发明涉及中药技术领域，具体而言，涉及一种用于定向抑制有害菌增殖的组合物及其应用。


背景技术：

2.山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶都是著名的中草药材，具有广泛的有益作用，具体如下：
3.山楂是中国特有的药果兼用树种，具有降血脂、血压、强心、抗心律不齐等作用，同时也是健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药。
4.姜黄为姜科植物姜黄的干燥根茎，能行气破瘀，通经止痛，其中姜黄素具有保肝、利胆、抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗艾滋病、抗生育、降血脂、抗病原微生物及抗病原虫、加快创伤愈合、抗突变等作用，对消化系统有保护作用。
5.当归有降低血小板聚集及抗血栓的功效与作用，能促进造血系统功能，降血脂及抗动脉硬化，抗氧化和清除自由基，增强免疫系统功能，并能促进消化，抑制胃肠的推动运动，具有抑制神经系统、松弛气管平滑肌、利尿、抑菌等作用。
6.大枣也是一种药果兼用树种，富含蛋白质、脂肪、糖类、胡萝卜素、b族维生素、维生素c、维生素p以及钙、磷、铁和环磷酸腺苷等营养成分。具有抗肿瘤、抗氧化、降血压、降胆固醇、保肝护肝、提高免疫力、防治骨质疏松和贫血等多种功效。
7.玫瑰花具有抗病毒作用，其提取物对人免疫缺陷病病毒(艾滋病病毒)、白血病病毒和t细胞白血病病毒均有抗病毒作用。在中药中具有理气解郁；和血调经，脘胁胀痛，跌打损伤痈肿等功效。
8.西红花具有活血化瘀，凉血解毒，解郁安神的功效。用于经闭症瘕，产后瘀阻，温毒发斑，忧郁痞闷，惊悸发狂。
9.阿胶为马科驴属动物驴的皮，经漂泡去毛后熬制而成的胶块，具有补血，滋阴，润肺，止血的功效。山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶对身体具有广泛康复和保荐作用，但其对肠道微生物的作用，暂未见报道。
10.人体肠道中存在的数量庞大的微生物，这群微生物依靠人体的肠道生活，同时帮助人体完成多种生理生化功能。肠道微生物不仅在膳食和宿主之间起到了重要的桥梁作用，其本身以及代谢产物也能调节人体健康，因此肠道微生物与人体健康密切相关。肠道微生物通过与宿主之间的动态性生理作用，达到微生态平衡，有效防止肠道内细菌及内毒素易位。当正常的微生物群落受到宿主及外环境影响时，原有的平衡遭到破坏，肠道菌群失调，肠道正常菌群的种类、数量和比例发生异常变化，转变为病理性组合状态，进而导致宿主致病。
11.目前研究表明，人体的多种疾病都与肠道微生物具有密切关联，若能够有效抑制有害菌的繁殖，则对于保证人体肠道菌群平衡，甚至可以治疗由于有害菌增多引起的疾病。
12.鉴于此，特提出本发明。


技术实现要素：

13.本发明的目的在于提供一种用于定向抑制有害菌增殖的组合物及其应用，旨在有效抑制有害菌的增殖。
14.本发明是这样实现的：
15.第一方面，本发明提供一种用于定向抑制有害菌增殖的组合物，按质量份数计，包括：山楂提取物20-40份、姜黄提取物10-20份、当归提取物2-10份、大枣提取物10-20份、玫瑰花提取物5-15份、西红花提取物0.5-3份和阿胶提取物2-10份。
16.在可选的实施方式中，按质量份数计，包括：山楂提取物25-35份、姜黄提取物12-18份、当归提取物4-8份、大枣提取物12-18份、玫瑰花提取物8-12份、西红花提取物0.6-2份和阿胶提取物4-8份。
17.在可选的实施方式中，按质量份数计，包括：山楂提取物28-32份、姜黄提取物13-17份、当归提取物5-7份、大枣提取物13-17份、玫瑰花提取物9-11份、西红花提取物0.8-1.2份和阿胶提取物5-7份。
18.在可选的实施方式中，组合物中的各组分均为水提物。
19.第二方面，本发明提供前述实施方式中任一项的组合物在制备定向抑制有害菌增殖的产品中的应用。
20.在可选的实施方式中，有害菌包括：fusobacterium、colidextribacter、eubacterium、veillonella和desulfovibrio。
21.在可选的实施方式中，有害菌选自fusobacterium、colidextribacter、eubacterium和veillonella中的至少一种。
22.在可选的实施方式中，有害菌选自fusobacterium、colidextribacter和eubacterium中的至少一种。
23.在可选的实施方式中，有害菌为fusobacterium。
24.第三方面，本发明提供一种定向抑制有害菌增殖的产品，包括前述实施方式中任一项的组合物。
25.本发明具有以下有益效果：发明人利用山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶形成组合物，该组合物能够有效抑制有害菌的增殖，可以制备形成定向抑制有害菌增殖的产品，用于改善肠道有害菌含量升高所导致的一些疾病，具备非常好的市场应用价值。
附图说明
26.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
27.图1为经组合物干预前后的丰度变化示意图。
具体实施方式
28.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建
议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
29.本发明实施例提供一种用于定向抑制有害菌增殖的组合物，按质量份数计，包括：山楂提取物20-40份、姜黄提取物10-20份、当归提取物2-10份、大枣提取物10-20份、玫瑰花提取物5-15份、西红花提取物0.5-3份和阿胶提取物2-10份。
30.发明人发现，以山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶的提取物形成的组合物对抑制有害菌增殖效果显著，且具有特定性。若少去其中任意一种，均会一定程度上降低抑制效果；以上几种组分的用量也需要精确控制在上述范围内，才能保证对有害菌有显著的抑制效果。
31.具体地，山楂的用量可以为20份、25份、30份、35份、40份等；姜黄的用量可以为10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份、20份等；当归的用量可以为2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份等；大枣的用量可以为10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份、20份等；玫瑰花的用量可以为5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份等；西红花的用量可以为0.5份、0.6份、0.8份、1.0份、1.2份、1.5份、2.0份、2.5份、3.0份等；阿胶的用量可以为2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份等。
32.为进一步提升对有害菌抑制的效果，发明人对各组分的用量进行了优化：
33.在优选的实施例中，按质量份数计，包括：山楂提取物25-35份、姜黄提取物12-18份、当归提取物4-8份、大枣提取物12-18份、玫瑰花提取物8-12份、西红花提取物0.6-2份和阿胶提取物4-8份。
34.在更优选的实施例中，按质量份数计，包括：山楂提取物28-32份、姜黄提取物13-17份、当归提取物5-7份、大枣提取物13-17份、玫瑰花提取物9-11份、西红花提取物0.8-1.2份和阿胶提取物5-7份。
35.需要说明的是，组合物中的各组分均为水提物。
36.本发明实施例提供前述实施方式中的组合物在制备定向抑制有害菌增殖的产品中的应用，可以为一般的食品、保健品、药品，在此不做具体限定。
37.在一些实施例中，有害菌包括：fusobacterium(梭形杆菌属)、colidextribacter、eubacterium、veillonella(韦荣球菌属)和desulfovibrio(脱硫弧菌)。本发明实施例所提供的组合物可以针对以上几种有害菌形成的菌群有抑制作用。
38.在一些实施例中，有害菌选自fusobacterium、colidextribacter、eubacterium和veillonella中的至少一种。本发明实施例所提供的组合物对以上四种有害菌表现出明显的抑制其增殖的效果，抑制效果要优于desulfovibrio。
39.在一些实施例中，有害菌选自fusobacterium、colidextribacter和eubacterium中的至少一种。本发明实施例所提供的组合物对以上三种有害菌表现出明显的抑制其增值的效果，抑制效果要优于veillonella、desulfovibrio。
40.在可选的实施方式中，有害菌为fusobacterium。本发明实施例所提供的组合物对fusobacterium抑制效果非常明显，明显优于colidextribacter、eubacterium、veillonella、desulfovibrio。
41.以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
42.实施例1
43.本实施例提供一种组合物，按质量份数计，包括：山楂提取物30份、姜黄提取物15份、当归提取物6份、大枣提取物15份、玫瑰花提取物10份、西红花提取物1份和阿胶提取物6份。
44.其中，以上组分均是市购的提取物(均购于西安奥赛生物)，浓缩比为30:1(即利用30公斤的原料提取、浓缩成1公斤的提取物)。
45.实施例2
46.本实施例提供一种组合物，与实施例1的区别仅在于各组分的用量，具体如下：
47.按质量份数计，包括：山楂提取物20份、姜黄提取物10份、当归提取物2份、大枣提取物10份、玫瑰花提取物5份、西红花提取物0.5份和阿胶提取物2份。
48.实施例3
49.本实施例提供一种组合物，与实施例1的区别仅在于各组分的用量，具体如下：
50.按质量份数计，包括：山楂提取物40份、姜黄提取物20份、当归提取物10份、大枣提取物20份、玫瑰花提取物15份、西红花提取物3份和阿胶提取物10份。
51.实施例4
52.本实施例提供一种组合物，与实施例1的区别仅在于各组分的用量，具体如下：
53.按质量份数计，包括：山楂提取物25份、姜黄提取物12份、当归提取物4份、大枣提取物12份、玫瑰花提取物8份、西红花提取物0.6份和阿胶提取物4份。
54.实施例5
55.本实施例提供一种组合物，与实施例1的区别仅在于各组分的用量，具体如下：
56.按质量份数计，包括：山楂提取物35份、姜黄提取物18份、当归提取物8份、大枣提取物18份、玫瑰花提取物12份、西红花提取物2份和阿胶提取物8份。
57.试验例1
58.在体外进行体内模拟实验，替代传统的小鼠类动物实验，使菌群丰度的测试值更加准确。取人体粪便进行处理以获得肠道菌群样品，观察组合物干预对于肠道菌群的作用，具体操作过程如下：
59.s1、粪便样品处理
60.(1)pbs缓冲液配制
61.分别称取以下原料倒入1000ml烧杯中，原料包括：kh2po
4 0.24g，na2hpo4·
12h2o 2.90g，nacl 8.00g，kcl 0.20g。
62.量取800ml超纯水倒入烧杯中，放入搅拌转子，并放到磁力加热搅拌器上搅拌至完全溶解，然后用校准后的ph计测量上述溶液的ph，用0.1m的hcl或naoh调整ph＝7.4
±
0.05。
63.将上述完全溶解并调节ph后的溶液引流至1000ml容量瓶中，用少量超纯水冲洗烧杯后倒入容量瓶，将容量瓶中的液体用超纯水定容。
64.将定容后的溶液倒入玻璃瓶，每1000ml的瓶子内放500ml溶液，防止高压灭菌时喷出。将黄色玻璃瓶盖子拧松后，放入高压灭菌锅，121℃，15分钟。取出后迅速拧紧盖子。待降至室温后，将溶液需存于4℃冰箱中，可保存6个月。
65.(2)粪便样品处理
66.取10g粪便，最终浓度为5％。
67.称量出10g粪便样品，取适量上述pbs缓冲液加至离心管中，在振荡器上充分混匀。然后将完全混匀的样品平均分装至新50ml离心管中，每管再加适量pbs缓冲液。
68.混匀后在生物安全柜内进行过滤，把稀释好的样品依次通过20目、50目、100目、200目的滤网。收集滤液至离心管中，将离心管放入离心机，配平，6000g，4℃离心15min，弃上清。将沉淀称量之后，以终浓度为5％用pbs溶液定容，得到肠道微生物样品。
69.s2、山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶干预实验
70.(1)基础培养基配制
71.配制用于培养肠道微生物的基础培养基：gam培养基，以1000ml为例。用电子分析天平称取60g改良gam肉汤药品，倒入1000ml烧杯中。用量筒量取800ml超纯水倒入烧杯中，放入搅拌转子，并放到磁力加热搅拌器上搅拌至完全溶解。将上述完全溶解的溶液引流至1000ml容量瓶，并用少量超纯水冲洗烧杯后倒入容量瓶，重复3次，将容量瓶中的液体用超纯水定容。
72.将定容后的溶液倒入玻璃瓶，每1000ml的瓶子内放500ml培养基，防止高压灭菌时喷出。将装有培养基的黄色盖子的玻璃瓶，瓶盖拧松，放入脉冲高压灭菌锅，使用液体程序，121℃，15分钟。灭菌完后，立即把瓶盖拧紧，冷却至室温。
73.(2)山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶-gam培养基配制
74.在无菌操作台上，用1ml的移液枪取上述gam培养基分装至玻璃管中，每管2ml。将黑色盖子放在瓶口上微掩。接着用1ml移液器取山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶混合溶液(实施例1中的组合物)，作为试验组。同时还设置有空白对照组，每组3个重复，分组具体如下：
75.试验组：2ml gam培养基 2ml组合物 1ml pbs缓冲液；
76.对照组：2ml gam培养基 3ml pbs缓冲液；
77.确认好每个玻璃管盖拧紧后，转移至厌氧箱传递箱中，放置之前需用84消毒液消毒处理。放入厌氧箱后，拧松瓶盖，置换氧气，需置换12个小时。
78.将上述处理后得到的肠道微生物样品分别接种至试验组(山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶-gam培养基-pbs缓冲液)以及空白对照组(gam培养基-pbs缓冲液)中，每管1ml。
79.在厌氧箱中培养72小时后，观察菌群的生长状况，拍照留存。
80.接着分别将试验组样品和对照组样品，10000rpm，3min离心，弃上清，将沉淀用液氮处理，并送至武汉艾康健生物科技有限公司，分别测定试验组和对照组中的肠道菌群丰度，即不同肠道微生物在检测到的所有菌种中所占的百分比，其中部分肠道菌群的丰度测定结果如表1所示。
81.表1肠道菌群的丰度测定结果
[0082][0083]
对部分肠道菌群经山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶干预前后的丰度变化进行显著性分析。分析结果如图1所示，fusobacterium；colidextribacter；eubacterium；veillonella这几种在组方的作用下，水平有所降低，desulfovibrio不明显。
[0084]
综上所述，本发明提供一种用于定向抑制有害菌增殖的组合物及其应用，通过体外模拟肠道环境，并以健康人体粪便中收集的肠道菌群作为样本，将山楂、姜黄、当归、大枣、玫瑰花、西红花和阿胶混合物应用到抑制fusobacterium、colidextribacter、eubacterium、veillonella等有害菌增殖发酵，为临床应用提供科学依据。
[0085]
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。