水蜈蚣草和β-石竹烯的组合物在防治病毒感染中的应用的制作方法

水蜈蚣草和
β-石竹烯的组合物在防治病毒感染中的应用
技术领域
1.本发明属于药学和抗病毒技术领域，具体涉及水蜈蚣草和β-石竹烯的组合物在预防和/或治疗病毒感染中的应用。


背景技术：

2.病毒是一种个体微小、结构简单、必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒核酸化学成分是dna或者rna，据此病毒分为dna病毒和rna病毒两大类。核酸可以为线型或环型，可分为单链或双链。
3.dna病毒广泛存在于人、脊椎动物、昆虫体内以及多种传代细胞系中，每种病毒只能感染一种动物(个别例外)，仅少数致病。
4.rna病毒有自我复制和逆转录两种复制方式，病毒rna的复制过程中，其错误修复机制的酶的活性很低，几乎是没有的，所以其变异很快。与dna病毒相比，rna病毒更加容易导致疾病，对宿主更加致命，更容易突变，因此种类更多，更难研制有效疫苗，难以预防。
5.hiv，全称human immunodeficiency virus，即人类免疫缺陷病毒，是造成人类免疫系统的缺陷的一种病毒。该病毒破坏人体的免疫力，导致免疫系统失去抵抗力，从而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，最后导致艾滋病(aids)——获得性免疫缺陷综合征。
6.hiv病毒是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒(lentivirus)，属逆转录病毒的一种。艾滋病病毒主要侵犯人体的免疫系统，包括cd4 t淋巴细胞、单核巨噬细胞和dc等，主要表现为cd4 t淋巴细胞数量不断减少，最终导致人体细胞免疫功能缺陷，引起各种机会性感染和肿瘤的发生。艾滋病病毒感染会增加患感冒、流感和肺炎的风险，也会增加肺动脉高压的风险。此外，艾滋病病毒也会让感染者更容易感染肺结核。
7.目前，现代医学治疗艾滋病主要包括四种方法：抗病毒治疗、免疫缺陷治疗、对合并条件性感染症的治疗、肿瘤治疗，但是西医常用的药物可能存在较大的副作用，例如肝肾损伤、皮疹、粒细胞减少等。
8.传统医药治疗在预防发病，改善临床症状，防止轻型转重症，重症转危重症方面都有明显的优势。
9.水蜈蚣草，为莎草科植物水蜈蚣，根状茎长而匍匐，具多数节间，节间长约1.5厘米，每一节上长一秆。水蜈蚣草的化学成分中含有挥发油，可治感冒风寒，寒热头痛，筋骨疼痛，咳嗽，疟疾，黄疸，痢疾，疮疡肿毒，跌打刀伤。目前，并没有太多关于水蜈蚣草在抗病毒方面的应用。
10.β-石竹烯是一种双环倍半萜类化合物，它存在于许多植物挥发油中，如丁香挥发油、干姜挥发油、胡椒挥发油或肉桂挥发油等，因为低毒性，美国fda将其定义为gras(generally recognized as safe)类食品化合物，并批准其应用于化妆品和食品添加剂中；目前并没有太多有关于β-石竹烯在医学上的应用。


技术实现要素：

11.本发明的目的在于提供一种预防和/或治疗病毒感染的组合物及其在抗病毒中的应用。
12.为达到此目的，本发明采用以下技术方案：
13.第一方面，本发明提供了水蜈蚣草或其提取物和β-石竹烯的组合物在制备用于预防和/或治疗病毒感染或由病毒感染引起的疾病的药物和/或食品中的应用。
14.其中，本发明所述的水蜈蚣草是指莎草科植物水蜈蚣。
15.在所述组合物中，水蜈蚣草可以以干草、粉末或提取物的形式存在，所述水蜈蚣草提取物指水蜈蚣的水提物或有机溶剂提取物，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、石油醚、乙醚和乙酸乙酯中的一种或多种，优选的溶剂选自水、乙醇、乙醚和乙酸乙酯中的一种或多种。
16.所述病毒包括rna病毒和dna病毒，所述rna病毒为引起发热性传染病的rna病毒，选自hiv病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒、狂犬病毒、甲型肝炎病毒、手足口病毒中的一种或多种，条件是不包括流感病毒和疱疹病毒；所述dna病毒选自乙型肝炎病毒和hpv病毒中的一种或多种。
17.优选地，所述病毒选自hiv病毒、埃博拉病毒、狂犬病毒、hpv病毒和乙型肝炎病毒中的一种或多种。
18.所述疾病包括艾滋病、出血热、狂犬病、甲肝、手足口、呼吸道感染、咽喉炎、皮疹、淋巴结肿大、乙肝和/或宫颈感染。优选地，所述疾病为hiv感染引起的获得性免疫缺陷综合征及其并发症。
19.第二方面，本发明提供了水蜈蚣草或其提取物和β-石竹烯的组合物在预防和/或治疗治疗病毒感染或由病毒感染引起的疾病中的应用。
20.其中，本发明所述的水蜈蚣草是指莎草科植物水蜈蚣。
21.在所述组合物中，水蜈蚣草可以以干草、粉末或提取物的形式存在，所述水蜈蚣草提取物指水蜈蚣的水提物或有机溶剂提取物，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、石油醚、乙醚和乙酸乙酯中的一种或多种，优选的溶剂选自水、乙醇、乙醚和乙酸乙酯中的一种或多种。
22.所述病毒包括rna病毒和dna病毒，所述rna病毒为引起发热性传染病的rna病毒，选自hiv病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒、狂犬病毒、甲型肝炎病毒、手足口病毒中的一种或多种，条件是不包括流感病毒和疱疹病毒；所述dna病毒选自乙型肝炎病毒和hpv病毒中的一种或多种。
23.优选地，所述病毒选自hiv病毒、埃博拉病毒、狂犬病毒、hpv病毒和乙型肝炎病毒中的一种或多种。
24.所述疾病包括艾滋病、出血热、狂犬病、甲肝、手足口、呼吸道感染、咽喉炎、皮疹、淋巴结肿大、乙肝和/或宫颈感染。优选地，所述疾病为hiv感染引起的获得性免疫缺陷综合征及其并发症。
25.第三方面，本发明提供了一种预防和/或治疗病毒感染的组合物，包括水蜈蚣草或其提取物和β-石竹烯。
26.其中，本发明所述的水蜈蚣草是指莎草科植物水蜈蚣。
27.在所述组合物中，水蜈蚣草可以以干草、粉末或提取物的形式存在，所述水蜈蚣草提取物指水蜈蚣的水提物或有机溶剂提取物，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、石油醚、乙醚和乙酸乙酯中的一种或多种，优选的溶剂选自水、乙醇、乙醚和乙酸乙酯中的一种或多种。
28.所述病毒包括rna病毒和dna病毒，所述rna病毒为引起发热性传染病的rna病毒，选自hiv病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒、狂犬病毒、甲型肝炎病毒、手足口病毒中的一种或多种，条件是不包括流感病毒和疱疹病毒；所述dna病毒选自乙型肝炎病毒和hpv病毒中的一种或多种。
29.在一些实施方案中，所述病毒为hiv病毒。
30.在一些实施方案中，所述病毒为埃博拉病毒。
31.在一些实施方案中，所述病毒为狂犬病毒。
32.在一些实施方案中，所述病毒为hbv病毒。
33.在一些实施方案中，所述病毒为hpv病毒。
34.优选地，所述组合物为药物组合物，其中还包括药学上可接受的辅料和/或载体。
35.优选地，所述药物组合物为经胃肠道给药剂型、注射给药剂型或呼吸道给药剂型。
36.优选地，所述药物组合物的剂型选自散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂或粉雾剂。
37.优选地，所述组合物为食品组合物，其中还包括食品学上可接受的辅料和/或载体。
38.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
39.(1)本发明发现水蜈蚣草或其提取物与β-石竹烯的组合物能够有效抑制hiv假病毒引起的细胞感染，而且抑制效果高于水蜈蚣草、β-石竹烯单独应用的效果。在水蜈蚣草和β-石竹烯的组合物中，水蜈蚣草和β-石竹烯单体的浓度与单独应用相比都相对减少了，虽然用量减少了，但对病毒的抑制作用却显著提高了，由此表明水蜈蚣草与β-石竹烯组合应用具有协同增效的作用。因此，可以用于预防和/或治疗hiv病毒感染引起的疾病。当本发明的水蜈蚣草与β-石竹烯组合物在药物和/或食品中应用时，可以大大减少用量，由于用量少，效果好，因此会减少人体可能出现的副作用或不良反应。
40.(2)本发明提供的水蜈蚣草或其提取物和β-石竹烯的组合物可以有效地预防和/或治疗由病毒感染引发的疾病(包括艾滋病、出血热、狂犬病、甲肝、手足口、呼吸道感染、咽喉炎、皮疹、淋巴结肿大、乙肝和/或宫颈感染等)，可以作为抗病毒药物进行应用。
具体实施方式
41.下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
42.实施例1
43.本实施例提供一种水蜈蚣草的水提取物和β-石竹烯的组合物。
44.8.9克水蜈蚣干草，洗净后加入500毫升水，加热20分钟，取上清过滤，稀释至2187倍。加入β-石竹烯，使β-石竹烯在溶液中的终浓度为5mg/ml。
45.对比例1
46.本对比例提供浓度为5mg/ml的β-石竹烯水溶液。
47.对比例2
48.本对比例提供一种水蜈蚣草的水提取物。
49.8.9克水蜈蚣干草，洗净后加入500毫升水，加热20分钟，取上清过滤，稀释至2187倍。
50.实验例1.性能测试
51.对实施例1和对比例1-2提供的物质进行性能测试，采用如下测试方法判断样品是否对hiv假病毒具有抑制作用：
52.实验
53.hiv中和试验包括假病毒制备和假病毒感染后检测两部分，假病毒制备是通过两质粒共转染真核表达细胞(293ft)实现的：其中一个质粒为psg3δenv，其表达除env以外的hiv其它所有基因(即骨架质粒)；另一个质粒为pcdna3.1-env，其表达全长的env基因。在假病毒产生过程中，仅骨架质粒被转录成病毒基因组rna，并包装入假病毒中，因此产生的假病毒不具有产生子代病毒的复制能力，而仅有单轮感染能力。tzm-bl细胞是经过改造的cxcr4 的hela细胞，改造后的细胞稳定表达表面分子cd4和ccr5，进一步的改造使得细胞基因组中整合入萤火虫荧光素酶报告基因，其表达受hiv长末端重复序列控制。在假病毒感染过程中，hiv假病毒株通过细胞表面受体和辅助受体感染tzm-bl细胞，其细胞内tat基因表达，表达的tat蛋白又顺式激活报告基因的表达，加入相应的荧光素酶底物后，产生的发光信号(相对发光单位，rlu)与感染细胞的病毒数成正比。
54.孵育和加样
55.铺板：tzm-bl细胞接种于96孔板，培养24h。
56.样品组：稀释后的样品与hiv假病毒(200tcid50)各取50μl等体积混合，37℃培养箱中孵育1h，加入到提前铺板的tzm-bl细胞上。
57.阳性对照组：hiv假病毒(200tcid50)和完全培养基各取50μl等体积混合，37℃培养箱中孵育1h，加入到提前铺板的tzm-bl细胞上。
58.阴性对照组：取完全培养基100μl，37℃培养箱中孵育1h，加入到提前铺板的tzm-bl细胞上。
59.在样品组、阳性对照组和阴性对照组中，在加入到提前铺板的tzm-bl细胞上1h后，加入终浓度为15μg/ml的deae促感染剂，37℃、5％co2培养箱中继续培养48h。化学发光仪对96孔板中的样品进行发光值检测。
60.抑制率(％)＝1-(样品rlu平均值-阴性对照rlu平均值)/(阳性对照rlu平均值-阴性对照rlu平均值)。
61.当抑制率低于50％时表明样品基本无中和抑制作用。
62.表1为实施例1和对比例1-2提供的物质的测试结果：
63.表1
64.样品rlu抑制率/％实施例11.18e 0593.56对比例11.56e 0614.29对比例21.50e 0617.50
阳性对照1.83e 06-65.注：阴性对照的rlu值为270。
66.由实施例1和对比例1-2的对比可知，当单独应用水蜈蚣草和单独应用β-石竹烯时，抑制率均低于20％，表明对hiv感染基本无中和抑制作用。令人惊喜的是，当将β-石竹烯与水蜈蚣草以与对比例1-2中同样的量组合应用时，对hiv感染的抑制率达到90％以上，获得了出乎意料的技术效果。
67.实验例2.
68.为了进一步验证水蜈蚣草提取物与β-石竹烯的组合物的效果，将实施例1的组合物稀释至1/0.75倍、1/0.5倍、1/0.4倍和1/0.25倍。按实验例1同法操作，检测样品对hiv假病毒的抑制程度。
69.表2为实施例1的组合物经稀释后的测试结果：
70.表2
[0071][0072][0073]
由表2的实验结果可以看出，将水蜈蚣草和β-石竹烯的组合物稀释至2.5倍时，仍有80％以上的抑制效果。这表明在水蜈蚣草和β-石竹烯的组合物中，水蜈蚣草和β-石竹烯的浓度与二者单独应用相比虽然用量进一步减少了，但对病毒的抑制作用却依然显著。当本发明的水蜈蚣草与β-石竹烯组合物在药物和/或食品中应用时，可以大大减少每种组分的用量，由于用量少，效果好，因此会减少人体可能出现的副作用或不良反应，进而降低了药物或食品可能的不耐受或致敏性，大大提高了安全性，这对于实际应用具有非常重要的意义。
[0074]
由以上实施例和性能测试可知，本发明提供的水蜈蚣草或其提取物和β-石竹烯的组合物对hiv假病毒具有很好的抑制作用，可以用于预防和/或治疗hiv病毒感染引起的疾病或病症。
[0075]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的预防和/或治疗病毒感染的组合物，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。