修饰的抗PD-L1抗体及用于治疗神经退行性疾病的方法和用途与流程

修饰的抗pd-l1抗体及用于治疗神经退行性疾病的方法和用途
1.本技术依据35u.s.c.119(e)要求于2019年4月19日提交的美国临时专利申请序列号62/836,247的优先权和申请日，并且本技术依据35u.s.c.119(a)要求于2019年4月19日提交的欧洲专利申请序列号19170438.6的优先权和申请日，所述专利申请的每一个的内容通过引用以其整体并入。
2.神经退行是神经元结构或功能的进行性损失，包括神经元的死亡。许多神经退行性疾病的发生是神经退行性过程的结果，导致行为、社会、认知或运动能力的进行性下降。目前，没有有效的治疗来治愈、改变或阻止神经退行性疾病的进展，并且已批准的药物疗法仅提供微弱和瞬时的症状缓解。
3.大多数神经退行性疾病共有共同的神经炎性组分，这些神经炎性组分是疾病进展的一部分，并且对疾病恶化有贡献。这些疾病中有阿尔茨海默病(ad)和与年龄相关的痴呆、肌萎缩侧索硬化、帕金森病和亨廷顿病、以进行性认知和/或功能下降为特征的衰弱性神经退行性状况。然而，尽管神经退行性疾病病理中存在慢性神经炎性组分，但在过去十年中，使用抗炎剂的临床疗法迄今都已被证明是不成功的或甚至是有害的。
4.本说明书提供了关于为何使用全身性抗炎药物靶向神经退行性疾病的炎性组分失败的独特见解。本说明书提供了基于这种理解的克服了神经退行性疾病的现有疗法的缺点的治疗剂、方法和用途。
5.概述
6.本说明书公开了一种修饰的抗程序性死亡配体1(抗pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(抗pd-l1)抗体相对于未改变的抗体表现出对人类pd-l1的高亲和力和特异性、增强的从血液中的清除率、消除的fc相关效应子功能以及改进的安全性谱，同时保持对神经退行性疾病改变的治疗功效。公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链恒定结构域，所述重链恒定结构域包含氨基酸序列变体，所述氨基酸序列变体缺乏fc相关效应子功能，并且促进本文公开的修饰的抗pd-l1抗体比不包含相同氨基酸序列变体的抗pd-l1抗体更快地清除。例如，公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链恒定结构域，所述重链恒定结构域在下铰链区和/或ch2结构域的n末端半部分中包含消除fc相关效应子功能的氨基酸序列变体，并且在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体，该氨基酸序列变体促进抗pd-l1抗体比不包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体更快地清除。公开的缺乏fc相关效应子功能的修饰的人类抗pd-l1抗体缺乏抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)、补体依赖性细胞毒性活性(cdc)和/或抗体依赖性细胞吞噬(adcp)。
7.本说明书还公开了包含本文公开的修饰的人类抗pd-l1抗体的药物组合物，以及包含本文公开的修饰的人类抗pd-l1抗体的药物。
8.本说明书还公开了药物试剂盒，所述药物试剂盒包含本文公开的修饰的人类抗pd-l1抗体、本文公开的药物组合物或本文公开的药物。
9.本说明书还公开了采用使用所公开的修饰的抗pd-l1抗体的施用方案的治疗方法和用途，所述施用方案确保抗体仅在特定的时间段内存在，并且然后从体内充分清除，以确
保维持治疗功效。
10.附图简述
11.图1a-图1e示出了阻断ccr2消除了抗pd-l1抗体在dm-htau中的有益作用，其中图1a说明了实验设计；图1b示出了dm-htau和野生型动物的认知行为的预测试结果；图1c示出了处理后使用t-迷宫测试的认知行为的结果；图1d示出了处理后使用y-迷宫测试的认知行为测试结果；并且图1e示出了处理后使用新物品识别(novel object recognition，nor)测试的认知行为的测试结果。
12.图2a-图2d示出了阻断ccr2选择性地影响了循环中的仅单核细胞水平，而不影响t细胞水平，其中图2a示出了血液中髓系细胞的水平；图2b示出了脾中的髓系细胞；图2c示出了血液中cd4

记忆性t细胞的水平；并且图2d示出了脾中的cd4

记忆性t细胞。
13.图3a-图3b示出了用于分析cd45
低
/cd11b
高
和cd45
高
/cd11b
高
髓系细胞的用抗pd-l1抗体或igg抗体处理的dm-htau小鼠的脑的流式细胞术，其中图3a示出了门控cd45
低
/cd11b
高
和cd45
高
/cd11b
高
髓系细胞的脑细胞的流式细胞术；并且图3b示出了抗pd-l1处理的小鼠和igg处理的小鼠中cd45
高
/cd11b
高
髓系细胞的定量分布。
14.图4a-图4b示出了用于分析cd45
低
/cd11b
高
和cd45
高
/cd11b
高
髓系细胞的用抗pd-l1抗体或igg抗体处理的gfp-bm-嵌合dm-htau小鼠的脑的流式细胞术，其中图4a示出了门控表达ly6c的cd45
低
/cd11b
高
和cd45
高
/cd11b
高
髓系细胞的gfp标记的脑细胞的流式细胞术；并且图4b示出了抗pd-l1处理的小鼠和igg处理的小鼠中cd45
高
/cd11b
高
髓系细胞的定量分布。
15.图5a-图5b示出了通过免疫组织化学法分析的来自用抗pd-l1抗体或igg抗体处理的gfp-bm-嵌合dm-htau小鼠的脑的共聚焦图像，其中图5a示出了代表性的共聚焦z轴堆叠(z-axis stacks)投射，指示用抗pd-l1处理的dm-htau
gfp/
小鼠的皮层中检测到的gfp

细胞(呈绿色)与髓系标志物iba-1(呈蓝色)的共定位(参见箭头，比例尺：100μm)；并且图5b示出了代表性的共聚焦z轴堆叠投射，指示在抗pd-l1处理的dm-htau
gfp/
小鼠的脑中gfp

细胞(绿色)、iba-1(蓝色)和il-10(红色)的共定位(比例尺：50μm)。
16.图6a-图6c示出了抗pd-l1对5xfad小鼠的空间学习和记忆的剂量响应依赖性作用，其中图6a说明了实验设计，其中黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示使用放射臂水迷宫(radial arm water maze，rawm)测定进行认知评分的时间点；图6b示出了处理之后一个月的5xfad小鼠(每组用不同剂量的抗pd-l1抗体处理)以及用作对照的野生型同窝小鼠的rawm表现(*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)；并且图6c示出了处理之后两个月的三组5xfad小鼠(每组用不同剂量的抗pd-l1抗体处理)以及用作对照的野生型同窝小鼠的rawm表现(*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
17.图7a-图7c示出了抗pd-l1对5xfad小鼠中海马星形胶质细胞增生(hippocampal astrogliosis)的剂量依赖性作用，其中图7a示出了所有检测到的gfap

细胞的面积除以齿状回的总选择面积(*p《0.05，**p《0.01)；图7b示出了针对整个齿状回的平均萦光进行校正的检测到的gfap

细胞的平均萦光(ctcf)(**p《0.01)；并且图7c示出了表现出萦光大于1000像素的检测到的gfap

细胞的数目(**p《0.01)。
18.图8a-图8b示出了抗pd-l1对dm-htau小鼠的空间学习和记忆的剂量响应依赖性作用，其中图8a说明了实验设计，其中黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示使用t-迷宫测定进行认知评分的时间点；并且图8b示出了处理之后一个月的dm-htau小鼠(每组用不同
剂量的抗pd-l1抗体处理)以及均用作对照的野生型同窝小鼠和抗igg2处理的小鼠的t-迷宫表现(*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
19.图9a-图9b示出了抗pd-l1对dm-htau小鼠的空间学习和记忆的剂量响应依赖性和时间依赖性作用，其中图9a示出了处理之后一个月的三组dm-htau小鼠(每组用不同剂量的抗pd-l1抗体处理)以及均用作对照的野生型同窝小鼠和抗igg2处理的小鼠的t-迷宫表现(*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)；并且图9b示出了处理之后两个月的三组dm-htau小鼠(每组用不同剂量的抗pd-l1抗体处理)以及均用作对照的野生型同窝小鼠和抗igg2处理的小鼠的t-迷宫表现(*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
20.图10示出了野生型小鼠和用大鼠抗pd-l1抗体或作为对照的大鼠抗klh抗体(两者都具有igg2b fc)处理的dm-htau小鼠的脑中的at-180免疫反应性(磷酸化tau(thr231))的定量分布(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05)。
21.图11a-图11i示出了抗pd-l1对dm-htau小鼠中炎性细胞因子谱的剂量依赖性作用，其中图11a示出了用抗igg抗体对照处理的小鼠中il-1β免疫反应性的代表性图像；图11b示出了用抗pd-l1抗体处理的小鼠中il-1β免疫反应性的代表性图像；图11c示出了代表性的共聚焦z轴堆叠正交投射，指示在齿状回中il-1β(绿色)与gfap 星形胶质细胞(红色)共定位，但不与iba-1

小胶质细胞/巨噬细胞(白色)共定位；细胞核用dapi染色(蓝色)(比例尺，100μm)；图11d示出了在用抗pd-l1抗体处理的小鼠中，与未处理的和抗igg抗体处理的野生型同窝小鼠相比，通过基于fret的elisa测量的海马il-1β蛋白水平的定量测量(数据表示为平均值
±
s.e.m；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)；图11e示出了线性回归分析，揭示了在t-迷宫测定中dm-htau小鼠的认知表现与其脑中il-1β蛋白水平之间的相关性；图11f示出了通过rt-qpcr测试的基因tnf-a的mrna表达水平的定量测量；图11g示出了通过rt-qpcr测试的基因il-6的mrna表达水平的定量测量；图11h示出了通过rt-qpcr测试的基因il-12p40的mrna表达水平的定量测定；并且图11i示出了通过rt-qpcr测量的基因il-1β的mrna表达水平的定量测量。
22.图12示出了取自c57bl/6j小鼠并使用酶联免疫吸附测定(elisa)定量的血清中抗pd-l1抗体的pk谱。
23.图13示出了来自单次注射不同剂量的大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)后的5xfad和c57bl/6j野生型小鼠与大鼠igg2b抗klh抗体处理的对照的血液中的t细胞上的pd-l1受体占有率的动力学(kinetics)(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
24.图14示出了相对于大鼠抗klh抗体处理的小鼠，在单次注射多剂量大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)后的5xfad和c57bl/6j野生型(wt)小鼠中表达pd-1

的效应记忆性t细胞(cd4

cd44

细胞群体)的水平，其中图上的每个点表示不同小鼠的血液样品(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
25.图15示出了使用elisa定量的大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)在小鼠中的pk谱。
26.图16示出了在第一次注射之后1个月和2个月测试的5xfad小鼠中，单次注射抗pd-l1相对于重复注射抗pd-l1(分别代表瞬时暴露于处理相对于连续暴露于处理)对认知表现的治疗作用的比较。5xfad小鼠的认知表现使用放射臂水迷宫来测试，并且在不同处理组中
处理后的作用被表示为显示出积极学习行为的小鼠的百分比(积极学习被定义为在认知任务的最后2次试验中少于3次平均错误)。
27.图17示出了用大鼠抗pd-l1抗体、人源化抗pd-l1抗体阿特珠单抗(atz；具有人类igg1 fc)或变体1-atz(fc效应子无效)抗体进行抗pd-l1抗体处理之后一个月的dm-htau小鼠以及均用作对照的野生型小鼠、未处理的dm-htau小鼠和用人类抗-b12抗体(作为igg1同种型对照)处理的小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
28.图18示出了基于针对整个齿状回的平均萦光进行校正的检测到的gfap

细胞的平均萦光(ctcf)，抗pd-l1抗体(大鼠抗小鼠pd-l1与大鼠igg2b抗klh抗体、具有人类igg1骨架的抗pd-l1阿特珠单抗、和变体1-atz(fc效应子无效))对dm-htau小鼠中海马星形胶质细胞增生的作用的比较(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
29.图19示出了取自野生型c57bl/6j小鼠并使用反向elisa定量的血清中抗人类pd-l1阿特珠单抗(atz)和四种atz变体的pk谱(误差线表示平均值
±
s.e.m.)。
30.图20a-图20d示出了修饰的抗pd-l1抗体变体对dm-htau小鼠的空间学习和记忆的作用，其中图20a说明了实验设计，其中黑色箭头指示处理的时间点，并且图示指示使用t-迷宫或y-迷宫测定进行认知评分的时间点；图20b示出了处理之后四周的dm-htau小鼠(每组用不同的抗pd-l1抗体变体处理)以及均用作对照的野生型同窝小鼠和变体1-b12处理的小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)；图20c示出了处理之后六周的dm-htau小鼠(每组用不同的抗pd-l1抗体变体处理)以及均用作对照的野生型同窝小鼠和变体1-b12处理的小鼠的y-迷宫表现，(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)；并且图20d示出了处理之后八周的dm-htau小鼠(每组用不同的抗pd-l1抗体变体处理)以及均都用作对照的野生型同窝小鼠和变体1-b12处理的小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
31.图21示出了处理之后一个月使用rawm认知任务评估的修饰的抗pd-l1抗体变体对5xfad小鼠的空间学习和记忆的作用，每组用不同的修饰的抗pd-l1抗体变体或大鼠抗小鼠pd-l1抗体处理，并且野生型同窝小鼠和抗b12处理的小鼠两者均用作对照(误差线表示平均值
±
s.e.m.)。
32.图22a-图22b示出了在取自c57bl/6j小鼠的血清中使用多剂量的两种不同的修饰的抗pd-l1抗体变体并使用elisa定量的pk谱，其中图22a示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体获得的结果(误差线表示平均值
±
s.e.m.)；并且图22b示出了由变体3-atz(fc效应子无效-h436q)抗体获得的结果(误差线表示平均值
±
s.e.m.)。
33.图23a-图23b示出了来自单次注射两种不同的修饰的抗pd-l1抗体变体后的c57bl/6j野生型小鼠的血液中的t细胞上的pd-l1受体占有率的动力学，其中图23a示出了由变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体获得的结果(误差线表示平均值
±
s.e.m.)；并且图23b示出了由变体3-atz(fc效应子无效-h436q)抗体获得的结果(误差线表示平均值
±
s.e.m.)。
34.图24a-图24b示出了单次注射两种不同的修饰的抗pd-l1抗体变体后的c57bl/6j野生型小鼠中的pd-1

cd4

cd44

t细胞的血液水平的动力学，其中图24a示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体获得的结果(误差线表示平均值
±
s.e.m.)；并且图24b示出了
用变体3-atz(fc效应子无效-h436q)抗体获得的结果(误差线表示平均值
±
s.e.m.)。
35.图25示出了处理之后四周两种不同的修饰的抗pd-l1抗体变体对dm-htau小鼠的空间学习和记忆的剂量依赖性作用(数据表示为平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
36.图26a-图26c示出了施用1.5mg/小鼠的抗pd-l1变体2-atz(fc效应子无效-h311a)或同种型对照变体2-b12(在fc部分包含人类igg1 fc效应子无效和h311a取代(对应于变体2-atz的相同取代)的抗-b12抗体)后2周和4周时认知表现的纵向测量，其中图26a示出了处理后2周和4周时测量的每只个体小鼠在t-迷宫的新臂中花费的时间，所述时间被呈现并以实线连接；图26b示出了与图26a相同的数据，但是比较了处理后2周时不同处理组之间在t-迷宫中的表现；图26c示出了与图26a相同的数据，但是比较了处理后4周时不同处理组之间在t-迷宫中的表现。单因素anova和fisher精确检验事后分析。数据表示为平均值
±
s.e.m.。
37.图27示出了从单次注射变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照变体2-b12(包含人类igg1 fc效应子无效和h311a取代的抗b12抗体)后3天的c57bl/6j野生型小鼠的血液、颈淋巴结、腹股沟淋巴结和脉络丛(cp)中分离的cd3

t细胞上pd-l1受体占有率的动力学(误差线表示平均值
±
s.e.m.)。
38.图28a-图28h示出了变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照变体2-b12(包含人类igg1 fc效应子无效和h311a取代的抗-b12抗体)对dm-htau小鼠的空间学习和记忆的作用，其中图28a说明了实验设计，其中黑色箭头指示处理的时间点，红色箭头指示血液抽取和组织收集的时间点，并且图示指示使用t-迷宫进行认知评分的时间点；图28b示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照抗体第一次处理之后两周的dm-htau小鼠以及野生型同窝小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；n.s.：不显著，***p《0.001)；图28c示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照抗体第一次处理之后四周的dm-htau小鼠以及野生型同窝小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；***p《0.001)；图28d示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照抗体第二次处理之后四周的dm-htau小鼠以及野生型同窝小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；***p《0.001)；图28e示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照抗体第三次处理之后两周的dm-htau小鼠以及野生型同窝小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；***p《0.001)；图28f示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照抗体第三次处理之后四周的dm-htau小鼠以及野生型同窝小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；***p《0.001)；图28g示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照抗体第三次处理之后六周的dm-htau小鼠以及野生型同窝小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；**p《0.01，***p《0.001)；并且图28h示出了用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或同种型对照抗体第三次处理之后八周的dm-htau小鼠以及野生型同窝小鼠的t-迷宫表现(误差线表示平均值
±
s.e.m.；**p《0.01，***p《0.001)。
39.图29示出了从来自用不同剂量的变体2-atz(fc效应子无效-h311a)或同种型对照变体2-b12(在fc部分中包含人类igg1 fc效应子无效和h311a取代(对应于变体2-atz的相同取代)的抗-b12抗体)处理后的不同时间点的dm-htau小鼠的血液、颈淋巴结、腹股沟淋巴
结和脉络丛(cp)组织中分离的cd3

t细胞上pd-l1受体占有率的动力学。
40.图30示出了表达pd-1的cd4

记忆性t淋巴细胞的水平(总cd4

/cd44

群体中pd-1

细胞的百分比)(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
41.图31a-图31b示出了dm-htau小鼠中相对的海马聚集的tau(针对制造商的阴性对照归一化；任意单位)，其中图31a示出了在单次注射后第3天和第48天切下的海马中通过基于fret的elisa测量的聚集的定量测量(误差线表示平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)；并且图31b示出了在测试认知表现之后2周(研究的第4周)切下的海马的海马tau聚集之间的相关性。
42.图32示出了取自食蟹猴血清中基于84g09并使用反向elisa定量的修饰的抗pd-l1抗体变体的pk谱。
43.图33a-图33d示出了食蟹猴中基于84g09的修饰的抗pd-l1抗体变体的pd-l1受体占有率与血清浓度之间的相关性，其中图33a示出了变体1-g09(fc效应子无效)抗体的pd-l1受体占有率与血清浓度之间的相关性；图33b示出了变体2-g09(fc效应子无效-h315a)抗体的pd-l1受体占有率与血清浓度之间的相关性；图33c示出了变体3-g09(fc效应子无效-h440q)抗体的pd-l1受体占有率与血清浓度之间的相关性；并且图33d示出了变体4-g09(fc效应子无效-h315a h440q)抗体的pd-l1受体占有率与血清浓度之间的相关性。
44.图34示出了用基于84g09的不同修饰的抗pd-l1抗体变体处理的食蟹猴中高表达pd-1的效应记忆性cd4 t细胞频率的药效学改变。这些值表示高表达pd-1的效应记忆性cd4 t细胞针对基线归一化的百分比改变(数据表示为平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001)。
45.图35a-图35b示出了用变体2-g09(fc效应子无效-h315a)抗体处理后不同t细胞亚群的药效学改变，其中图35a示出了中枢记忆性t细胞；并且图35b示出了效应记忆性(em)t细胞、中枢记忆性(cm)t细胞和幼稚cd4-t细胞。数据表示为平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。
46.图36a-图36e示出了adcc剂量-响应测定，其中图36a示出了阳性对照抗体rituxan与raji/cd-20细胞的剂量-响应adcc测定；图36b示出了阴性对照抗体人类igg1与cho-k1/pd-l1细胞的剂量响应adcc测定；图36c示出了本文公开的修饰的抗pd-l1抗体变体，变体2-g09(fc效应子无效-h315a)与cho-k1/pd-l1细胞的剂量响应adcc测定；图36d示出了阳性对照抗体rituxan与raji/cd-20细胞的剂量响应adcc测定；并且图36e示出了阿特珠单抗的生物仿制药与cho-k1/pd-l1细胞的剂量响应曲线，阿特珠单抗是已知被剥夺了adcc fc活性的商业上可获得的人源化抗pd-l1单克隆抗体。
47.图37a-图37d示出了cdc剂量-响应测定，其中图37a示出了阳性对照抗体rituxan与raji/cd-20细胞的剂量响应cdc测定；图37b示出了阴性对照抗体人类igg1与cho-k1/pd-l1细胞的剂量响应cdc测定；图37c示出了本文公开的修饰的抗pd-l1抗体变体，变体2-g09(fc效应子无效-h315a)与cho-k1/pd-l1细胞的剂量响应cdc测定；并且图37d示出了阿特珠单抗的生物仿制药与cho-k1/pd-l1细胞的剂量响应测定，阿特珠单抗是已知被剥夺了adcc fc活性的商业上可获得的人源化抗pd-l1单克隆抗体。
48.图38示出了两种修饰的抗pd-l1抗体变体(变体1-atz(fc效应子无效)和变体2-atz(fc效应子无效-h311a))以及同种型对照变体2-b12(在fc部分包含人类igg1 fc效应子
无效和h311a取代(对应于变体2-atz的相同取代)的抗b12抗体)在向9周龄雌性nod小鼠单次注射1.5mg/小鼠剂量后无糖尿病存活率的比较(p＝0.0030)。
49.图39示出了两种修饰的抗pd-l1抗体变体(变体1-atz(fc效应子无效)和变体2-atz(fc效应子无效-h311a))以及同种型对照变体2-b12(在fc部分包含人类igg1 fc效应子无效和h311a取代(对应于变体2-atz的相同取代)的抗b12抗体)在向9周龄雌性nod小鼠单次注射1.5mg/小鼠剂量后体重改变的比较。
50.详细描述
51.免疫细胞向cns的生理进入由脑的脉络丛(cp)上皮协调。通过cp的运输依赖于源自驻留在外周(包括cp基质内)的t细胞的干扰素-γ(ifn-γ)信号传导。在病理状况下，通过cp的白细胞运输不足或甚至受损。增强运输的一种方法是通过加强cp处的ifn-γ信号传导水平。
52.免疫检查点是用于维持全身性免疫稳态和耐受性的调节途径。不希望受任何理论的限制，免疫检查点的选择性阻断重新激活由于病理状况而被抑制的全身性ifn-γ依赖性免疫应答级联。增加的ifn-γ信号传导导致由cp表达的白细胞运输分子水平增加，并且继而导致白细胞穿过脉络丛上皮迁移到cns区域中，并且将单核细胞来源的巨噬细胞和其他免疫调节细胞(t细胞)募集至脑内的病变部位。重要的是，这种募集导致对脑功能的综合作用，包括降低的淀粉样斑块负担、恢复的脑实质内的免疫平衡、降低的神经炎症、降低的胶质增生、降低的突触损失、增加的海马神经发生，增加的神经元保护和增强的神经元存活，从而共同导致神经保护和/或认知衰退缓和。因此，免疫检查点的阻断经由增加的ifn-γ信号传导来恢复健康的脑免疫对话，从而实现脑维持和修复病理状况。
53.全身性免疫应答通过使用针对免疫检查点的中和抗体引发，所述免疫检查点诸如，例如，程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)、pd-l1和t细胞免疫球蛋白和含黏蛋白结构域蛋白-3(tim-3)。当在具有建立的神经退行性疾病病理的动物中诱导时，用这些中和抗体治疗导致清除大脑淀粉样β蛋白(aβ)斑块并改善认知表现的免疫应答。因此，使用针对免疫检查点成员的中和抗体导致逆转疾病状态的ifn-γ依赖性免疫应答。
54.此外，需要这种免疫应答以便以显示为ifn-γ依赖性的方式将免疫细胞动员至cns。本说明书公开的实验展示，在慢性神经退行性疾病的状况下，免疫检查点的阻断剂(例如，抗体)的全身性单次施用改善了的认知表现，其依赖于外周单核细胞来源的巨噬细胞进入病变的脑(参见实施例1)。这些实验进一步表明，病变的脑实质中的单核细胞来源的巨噬细胞是使局部炎症消退所需要的，并且促进去除细胞碎片和清除错误折叠和聚集蛋白的病理构象所需要的局部吞噬活性(参见实施例1)。
55.此外，本说明书公开的实验揭示了连续暴露于针对免疫检查点成员的中和抗体不仅对于维持有益作用是不必要的，而且对这样的抗体的延长的暴露时间在治疗上有效性更低(参见实施例3)。这些结果表明，当免疫检查点途径仅被瞬时阻断时，对神经退行性疾病的治疗功效更大。这一发现与要求连续暴露于针对免疫检查点的中和抗体以获得最佳治疗功效的癌症治疗相反。
56.免疫检查点途径的瞬时阻断不仅在治疗神经退行性疾病方面显示出更大的功效，而且这样的瞬时暴露还应有助于降低发展免疫相关不良作用(如自身免疫性疾病)的风险。本说明书揭示，在高龄时自发发展为糖尿病的非肥胖糖尿病(nod)小鼠中，在幼年时暴露于
针对免疫检查点成员的中和抗体加速了糖尿病的出现。糖尿病出现的加速与抗体暴露相关，抗体暴露时间越短，幼年时糖尿病出现率越低。(参见实施例9)。
57.发现外周免疫细胞穿过血-脑脊液屏障(bcsfb)募集到脑中和瞬时暴露于中和抗体是逆转脑疾病状态的必要且基本的组成部分，该发现揭示了实现神经退行性疾病最安全且最有效结果所要求的免疫检查点抗体需要与治疗癌症所需的免疫检查点抗体特征不同且甚至相反的一组特定的特征。
58.例如，对神经退行性疾病具有最佳治疗功效的免疫检查点抗体应该是缺乏细胞毒性活性的抗体。典型的全长抗体包括片段可结晶(fc)区。除其他外，fc区介导抗体与适当的fc受体的正确结合，这启动了几种生理作用，包括膜表面抗原被抗体结合的靶细胞的裂解。被称为抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)、补体依赖性细胞毒性活性(cdc)或抗体依赖性细胞吞噬(adcp)，这种裂解机制是限制和遏制感染所需的体液免疫应答的一部分。然而，由于募集外周免疫细胞是启动全身性ifn-γ依赖性免疫应答级联的再激活所需的，因此具有fc效应子活性的免疫检查点抗体是不期望的，因为这样的裂解活性将破坏外周免疫细胞，消耗脉络丛激活所需的细胞群体以及向脑募集所需的细胞。因此，当在用于治疗神经退行性疾病的疗法中使用时，缺乏fc效应子功能的免疫检查点成员抗体将是有利的特征。然而，在癌症治疗的背景下，细胞毒性活性可能是有益的，因为癌症免疫疗法的目标是消除肿瘤细胞，并且因此，靶癌细胞的裂解是高度期望的。
59.作为另一种实例，对神经退行性疾病具有最佳治疗功效的免疫检查点抗体应该是能够快速从体内清除(即增强的清除率)的抗体。如以上讨论的，本说明书显示，与抗体的连续暴露相比，免疫检查点途径的瞬时阻断在治疗神经退行性疾病方面显示出更大的功效。此外，抗体的连续暴露增加引发自身免疫应答的风险。因此，当在用于治疗神经退行性疾病的疗法中使用时，能够介导有效应答但然后以避免连续暴露于该抗体的有害作用的方式从体内去除的免疫检查点成员抗体将是有利的特征。
60.本说明书公开了一种修饰的抗pd-l1单克隆抗体，所述修饰的抗pd-l1单克隆抗体消除了fc相关效应子功能并增强修饰的抗pd-l1抗体的清除率，同时维持对神经退行性疾病改变的治疗功效(实施例4-8)。此外，本说明书公开了采用所公开的抗pd-l1抗体的施用方案的治疗方法和用途，所述施用方案确保抗体仅在特定的时间段内存在，并且然后从体内充分清除，以确保维持治疗功效(实施例1-9)。
61.本公开内容的方面部分地包括修饰的抗pd-l1抗体。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以是包含两个免疫球蛋白(ig)重链和两个ig轻链的典型全长免疫球蛋白分子。这样的抗体包含抗原结合片段(fab)和片段可结晶(fc)区。本文公开的优选的修饰的抗pd-l1抗体是人源化抗pd-l1抗体或人类抗pd-l1抗体；本文公开的更优选的修饰的抗pd-l1抗体是人源化igg抗pd-l1抗体或人类igg抗pd-l1抗体；本文公开的甚至更优选的修饰的抗pd-l1抗体是人源化igg1抗pd-l1抗体或人类igg1抗pd-l1抗体。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体具有拮抗或失活(inactivating)活性，优选地中和活性。
62.本文公开的抗pd-l1抗体也可以是全长抗体的变体，条件是该变体表现出本文公开的所期望的生物活性，即，消除fc相关效应子功能并增强修饰的抗pd-l1抗体的清除率，同时维持对神经退行性疾病改变的治疗功效。例如，本文公开的抗pd-l1抗体片段可以包含含有轻链可变区和轻链恒定区的轻链和仅含有ch2结构域和ch3结构域的重链。本文公开的
合适的抗pd-l1抗体片段描述于以下中：例如，holliger,p.和hudson,p.j.,engineered antibody fragments and the rise of single domains.nat.biotechnol.23:1126
–
1136(2005)；cuesta,a.m.,sainz-pastor,n.,bonet,j.,oliva,b.和alvarez-vallina,l.,multivalent antibodies:when design surpasses evolution.trends biotechnol.28:355
–
362(2010)；nelson,a.l.,antibody fragments:hope and hype.mabs 2,77
–
83(2010)，所述文献的每一个在此通过引用以其整体并入本文。关于抗体及其抗原化合物结合片段的结构的一般公开内容，参见，例如，pluckthun in the pharmacology of monoclonal antibodies,第113卷，rosenburg和moore编著，springer-verlag,new york，第269-315页(1994)；borrabeck,antibody engineering，第2版(oxford university press 1995)，所述文献的每一个在此通过引用以其整体并入本文。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的变体的实例包括但不限于，修饰的抗pd-l1抗体的片段、修饰的抗pd-l1抗体的单链变体。本文公开的抗pd-l1抗体还包括分子工程化抗体，诸如，例如，二聚体、多聚体、多特异性抗体、人源化抗体、人类抗体、嵌合抗体、双功能抗体或三功能抗体。
63.全长抗pd-l1抗体是约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，包含两条相同的免疫球蛋白重(h)链和两条相同的免疫球蛋白轻(l)链。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而不同免疫球蛋白同种型的重链之间的二硫键(disulfide linkage)数目不同。每条重和轻链还具有规则间隔的链内二硫桥。而每条轻链在氨基末端处具有可变结构域，随后是单个恒定结构域。
64.哺乳动物免疫球蛋白重链有五种类型：gamma(γ)、delta(δ)、alpha(α)、mu(μ)和epsilon(ε)，每一种定义了一种类别的免疫球蛋白：分别为igg、igd、iga、igm和ige。重链igg和iga具有约450个氨基酸。重链igm和ige具有约550个氨基酸。每条重链包含恒定区和可变区。同一类别的所有免疫球蛋白的恒定区是相同的，但不同类别之间是不同的。每条重链具有在氨基末端处包含可变结构域(vh)的可变区，随后是包含一定数目的恒定结构域的恒定区。重链igg、igd和iga具有包含三个串联免疫球蛋白结构域(ch1、ch2和ch3)的恒定区，并且具有增加灵活性的铰链区。重链igm和ige具有包含四个串联免疫球蛋白结构域(ch1、ch2、ch3和ch4)的恒定区。不同b细胞之间的重链的可变区是不同的，但由相同b细胞或b细胞克隆产生的所有免疫球蛋白是相同的。可变结构域包含单个免疫球蛋白结构域。
65.哺乳动物免疫球蛋白轻链有两种类型：kappa(κ)链和lambda(λ)链。λ类别具有四种子类型：λ1、λ2、λ3和λ4。典型抗体中仅存在一种类型的轻链，因此个体抗体的两条轻链是相同的。轻链的近似长度是211个至217个氨基酸。每条轻链包含两个串联的免疫球蛋白结构域：氨基末端处的可变结构域(vl)，随后是恒定结构域。可变结构域对于结合抗原是重要的，并且恒定结构域决定轻链类型(即，κ或λ)。轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐(align)，并且轻链可变结构域与重链可变结构域对齐。特定的氨基酸残基被认为在轻链可变结构域与重链可变结构域之间形成界面。
66.完整的抗原识别和抗原结合位点被包含在抗体的可变结构域内。该位点包含以紧密非共价缔合的一个重链可变结构域(vh)和一个轻链可变结构域(vl)的二聚体。每个结构域包含四个框架区(fr)，所述框架区(fr)主要采用由三个高变区连接的β-折叠构型，所述三个高变区形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每个高变区包含对应于互补决定区(cdr)的氨基酸序列。总的来说，是六个cdr区的三维构型限
id no:1的至少1个、至少2个、至少3个或至少4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代；或者相对于seq id no:1的pd-l1的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含与具有以下的表位选择性地结合的重链可变结构域(vh)和/或轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:1的pd-l1的约1个至约2个、约1个至约3个、约1个至约4个、约2个至约3个、约2个至约4个或约3个至约4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代。
70.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变结构域(vh)。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含相对于seq id no:2具有以下氨基酸同一性的序列的重链可变结构域(vh)：例如，至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含与相对于seq id no:2具有以下范围内的氨基酸同一性的序列的重链可变结构域(vh)：例如，约90％至约100％、约95％至约100％、约90％至约99％、约95％至约99％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。
71.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：例如，相对于seq id no:2的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个或至少12个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体；或者包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：相对于seq id no:2的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个、至多10个、至多11个或至多12个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：例如，相对于seq id no:2的1个至2个、1个至3个、1个至4个、1个至5个、1个至6个、1个至7个、1个至8个、1个至9个、1个至10个、1个至11个、1个至12个、2个至3个、2个至4个、2个至5个、2个至6个、2个至7个、2个至8个、2个至9个、2个至10个、2个至11个、2个至12个、3个至4个、3个至5个、3个至6个、3个至7个、3个至8个、3个至9个、3个至10个、3个至11个、3个至12个、4个至5个、4个至6个、4个至7个、4个至8个、4个至9个、4个至10个、4个至11个、4个至12个、5个至6个、5个至7个、5个至8个、5个至9个、5个至10个、5个至11个、5个至12个、6个至7个、6个至8个、6个至9个、6个至10个、6个至11个、6个至12个、7个至8个、7个至9个、7个至10个、7个至11个、7个至12个、8个至9个、8个至10个、8个至11个、8个至12个、9个至10个、9个至11个、9个至12个、10个至11个、10个至12个或11个至12个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。
72.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：例如，相对于seq id no:2的至少1个、至少2个、至少3个、至
少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个或至少12个非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体；或者包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：相对于seq id no:2的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个、至多10个、至多11个或至多12个非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：例如，相对于seq id no:2的1个至2个、1个至3个、1个至4个、1个至5个、1个至6个、1个至7个、1个至8个、1个至9个、1个至10个、1个至11个、1个至12个、2个至3个、2个至4个、2个至5个、2个至6个、2个至7个、2个至8个、2个至9个、2个至10个、2个至11个、2个至12个、3个至4个、3个至5个、3个至6个、3个至7个、3个至8个、3个至9个、3个至10个、3个至11个、3个至12个、4个至5个、4个至6个、4个至7个、4个至8个、4个至9个、4个至10个、4个至11个、4个至12个、5个至6个、5个至7个、5个至8个、5个至9个、5个至10个、5个至11个、5个至12个、6个至7个、6个至8个、6个至9个、6个至10个、6个至11个、6个至12个、7个至8个、7个至9个、7个至10个、7个至11个、7个至12个、8个至9个、8个至10个、8个至11个、8个至12个、9个至10个、9个至11个、9个至12个、10个至11个、10个至12个或11个至12个非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。
73.在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)与存在于pd-l1中的表位选择性地结合。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)与存在于seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)可以与存在于相对于seq id no:1的pd-l1具有以下氨基酸同一性的序列中的表位选择性地结合：例如，至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)可以与存在于相对于seq id no:1的pd-l1具有以下范围内的氨基酸同一性的序列中的表位选择性地结合：例如，约90％至约100％、约95％至约100％、约90％至约99％、约95％至约99％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)可以与存在于具有以下的序列中的表位选择性地结合：例如，相对于seq id no:1的pd-l1的至少1个、至少2个、至少3个或至少4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代；或者相对于seq id no:1的pd-l1的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)可以与存在于具有以下的序列中的表位选
择性地结合：例如，相对于seq id no:1的pd-l1的约1个至约2个、约1个至约3个、约1个至约4个、约2个至约3个、约2个至约4个或约3个至约4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代。
74.在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)包含含有seq id no:3(imgt)或seq id no:4(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr1区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)可以包含相对于seq id no:3(imgt)或seq id no:4(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的重链可变结构域(vh)cdr1区。
75.在该实施方案的另一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)包含含有seq id no:5(imgt)或seq id no:6(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr2区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)可以包含相对于seq id no:5(imgt)或seq id no:6(kabat)具有1个或2个氨基酸缺失、添加和/或取代的本文公开的重链可变结构域(vh)cdr2区。
76.在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)包含含有seq id no:7(imgt)或seq id no:8(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr3区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)可以包含相对于seq id no:7(imgt)或seq id no:8(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的重链可变结构域(vh)cdr3区。
77.在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)包含含有seq id no:3(imgt)或seq id no:4(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr1区、含有seq id no:5(imgt)或seq id no:6(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr2区、和含有seq id no:7(imgt)或seq id no:8(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr3区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)，该重链可变结构域(vh)可以包含相对于seq id no:3(imgt)或seq id no:4(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的重链可变结构域(vh)cdr1区、相对于seq id no:5(imgt)或seq id no:6(kabat)具有1个或2个氨基酸缺失、添加和/或取代的重链可变结构域(vh)cdr2区、和相对于seq id no:7(imgt)或seq id no:8(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的重链可变结构域(vh)cdr3区。
78.在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含选择性地结合本文公开的表位的轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含选择性地结合存在于seq id no:1的pd-l1中的表位的轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区。
79.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:9的轻链可变结构域(v
l
)。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有相对于seq id no:9具有以下氨基酸同一性的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗
体包含含有与相对于seq id no:9具有以下范围内的氨基酸同一性的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，约90％至约100％、约95％至约100％、约90％至约99％、约95％至约99％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。
80.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:9的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体；或者包含可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：相对于seq id no:9的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个或至多10个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:9的1个至2个、1个至3个、1个至4个、1个至5个、1个至6个、1个至7个、1个至8个、1个至9个、1个至10个、2个至3个、2个至4个、2个至5个、2个至6个、2个至7个、2个至8个、2个至9个、2个至10个、3个至4个、3个至5个、3个至6个、3个至7个、3个至8个、3个至9个、3个至10个、4个至5个、4个至6个、4个至7个、4个至8个、4个至9个、4个至10个、5个至6个、5个至7个、5个至8个、5个至9个、5个至10个、6个至7个、6个至8个、6个至9个、6个至10个、7个至8个、7个至9个、7个至10个、8个至9个、8个至10个或9个至10个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。
81.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:9的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体；或者包含可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：相对于seq id no:9的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个或至多10个非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:9的1个至2个、1个至3个、1个至4个、1个至5个、1个至6个、1个至7个、1个至8个、1个至9个、1个至10个、2个至3个、2个至4个、2个至5个、2个至6个、2个至7个、2个至8个、2个至9个、2个至10个、3个至4个、3个至5个、3个至6个、3个至7个、3个至8个、3个至9个、3个至10个、4个至5个、4个至6个、4个至7个、4个至8个、4个至9个、4个至10个、5个至6个、5个至7个、5个至8个、5个至9个、5个至10个、6个至7个、6个至8个、6个至9个、6个至10个、7个至8个、7个至9个、7个至10个、8个至9个、8个至10个或9个至10个非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，并且是与存在于pd-l1诸如seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合的功能性抗体。
82.在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)与存在于pd-l1中的表位选择性地结合。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含
有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)与存在于seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)与存在于相对于seq id no:1的pd-l1具有以下氨基酸同一性的序列中的表位选择性地结合：例如，至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)与存在于相对于seq id no:1的pd-l1具有以下范围内的氨基酸同一性的序列中的表位选择性地结合：例如，约90％至约100％、约95％至约100％、约90％至约99％、约95％至约99％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)与存在于具有以下的序列中的表位选择性地结合：例如，相对于seq id no:1的pd-l1的至少1个、至少2个、至少3个或至少4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代；或者相对于seq id no:1的pd-l1的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)与存在于具有以下的序列中的表位选择性地结合：例如，相对于seq id no:1的pd-l1的约1个至约2个、约1个至约3个、约1个至约4个、约2个至约3个、约2个至约4个或约3个至约4个连续和/或非连续氨基酸的缺失、添加和/或取代。
83.在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)包含含有seq id no:10(imgt)或seq id no:11(kabat)的轻链可变结构域(v
l
)cdr1区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)可以包含相对于seq id no:10(imgt)或seq id no:11(kabat)具有一个氨基酸的缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr1区。
84.在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)包含含有seq id no:12(imgt)或seq id no:13(kabat)的轻链可变结构域(v
l
)cdr2区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)可以包含相对于seq id no:12(imgt)或seq id no:13(kabat)具有一个氨基酸的缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr2区。
85.在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)包含含有seq id no:14(imgt)或seq id no:15(kabat)的轻链可变结构域(v
l
)cdr3区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)可以包含相对于seq id no:14(imgt)或seq id no:15(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr3区。
86.在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)包含含有seq id no:10(imgt)或seq id no:11(kabat)的轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、含有seq id no:12(imgt)或seq id no:13(kabat)的轻链可变结构域(v
l
)cdr2区、和包含seq id no:14(imgt)或seq id no:15(kabat)的轻链可变结构域
(v
l
)cdr3区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链可变结构域(v
l
)，该轻链可变结构域(v
l
)可以包含相对于seq id no:10(imgt)或seq id no:11(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr1区，相对于seq id no:12(imgt)或seq id no:13(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr2区、和相对于seq id no:14(imgt)或seq id no:15(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr3区。
87.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变结构域(vh)和包含seq id no:9的轻链可变结构域(v
l
)。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含相对于seq id no:2具有以下氨基酸同一性的序列的重链可变结构域(vh)：例如，至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％，和可以包含相对于seq id no:9具有以下氨基酸同一性的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含相对于seq id no:2具有以下范围内的氨基酸同一性的序列的重链可变结构域(vh)：例如，约90％至约100％、约95％至约100％、约90％至约99％、约95％至约99％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％，和可以包含相对于seq id no:9具有以下范围内的氨基酸同一性的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，约90％至约100％、约95％至约100％、约90％至约99％、约95％至约99％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％。
88.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：例如，相对于seq id no:2的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个或至少12个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，或者相对于seq id no:2的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个、至多10个、至多11个或至多12个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代；和可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:9的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，或者相对于seq id no:9的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个或至多10个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：例如，相对于seq id no:2的1个至2个、1个至3个、1个至4个、1个至5个、1个至6个、1个至7个、1个至8个、1个至9个、1个至10个、1个至11个、1个至12个、2个至3个、2个至4个、2个至5个、2个至6个、2个至7个、2个至8个、2个至9个、2个至10个、2个至11个、2个至12个、3个至4个、3个至5个、3个至6个、3个至7个、3个至8个、3个至9个、3个至10个、3个至11个、3个至12个、4个至5个、4个至6个、4个至7个、4个至8个、4个至9个、4个至10个、4个至11个、4个至12个、5个至6个、5个至7个、5个至8个、5个至9个、5个至10个、5个至11个、5个至12个、6个至7个、6个至8个、6个至9个、6个至10个、6个至11个、6个至12个、7个至8个、7个至9个、7个至10个、7个至11个、7个至12个、8个至9个、8个至10个、8个至11个、8个至12个、9个至10个、9个至11个、9个至12个、10个至11个、10
个至12个或11个至12个连续氨基酸的缺失、添加和/或取代，和可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:9的1个至2个、1个至3个、1个至4个、1个至5个、1个至6个、1个至7个、1个至8个、1个至9个、1个至10个、2个至3个、2个至4个、2个至5个、2个至6个、2个至7个、2个至8个、2个至9个、2个至10个、3个至4个、3个至5个、3个至6个、3个至7个、3个至8个、3个至9个、3个至10个、4个至5个、4个至6个、4个至7个、4个至8个、4个至9个、4个至10个、5个至6个、5个至7个、5个至8个、5个至9个、5个至10个、6个至7个、6个至8个、6个至9个、6个至10个、7个至8个、7个至9个、7个至10个、8个至9个、8个至10个或9个至10个连续氨基酸缺失、添加和/或取代。
89.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：例如，相对于seq id no:2的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个或至少12个非连续氨基酸缺失、添加和/或取代，或者相对于seq id no:2的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个、至多10个、至多11个或至多12个非连续氨基酸缺失、添加和/或取代；和可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:9的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个非连续氨基酸缺失、添加和/或取代，或者相对于seq id no:9的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个、至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个或至多10个非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含可以包含具有以下的序列的重链可变结构域(vh)：例如，相对于seq id no:2的1个至2个、1个至3个、1个至4个、1个至5个、1个至6个、1个至7个、1个至8个、1个至9个、1个至10个、1个至11个、1个至12个、2个至3个、2个至4个、2个至5个、2个至6个、2个至7个、2个至8个、2个至9个、2个至10个、2个至11个、2个至12个、3个至4个、3个至5个、3个至6个、3个至7个、3个至8个、3个至9个、3个至10个、3个至11个、3个至12个、4个至5个、4个至6个、4个至7个、4个至8个、4个至9个、4个至10个、4个至11个、4个至12个、5个至6个、5个至7个、5个至8个、5个至9个、5个至10个、5个至11个、5个至12个、6个至7个、6个至8个、6个至9个、6个至10个、6个至11个、6个至12个、7个至8个、7个至9个、7个至10个、7个至11个、7个至12个、8个至9个、8个至10个、8个至11个、8个至12个、9个至10个、9个至11个、9个至12个、10个至11个、10个至12个或11个至12个非连续氨基酸缺失、添加和/或取代，和可以包含具有以下的序列的轻链可变结构域(v
l
)：例如，相对于seq id no:9的1个至2个、1个至3个、1个至4个、1个至5个、1个至6个、1个至7个、1个至8个、1个至9个、1个至10个、2个至3个、2个至4个、2个至5个、2个至6个、2个至7个、2个至8个、2个至9个、2个至10个、3个至4个、3个至5个、3个至6个、3个至7个、3个至8个、3个至9个、3个至10个、4个至5个、4个至6个、4个至7个、4个至8个、4个至9个、4个至10个、5个至6个、5个至7个、5个至8个、5个至9个、5个至10个、6个至7个、6个至8个、6个至9个、6个至10个、7个至8个、7个至9个、7个至10个、8个至9个、8个至10个或9个至10个非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。
90.在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)和含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(v
l
)与存在于pd-l1中的表位选择性地结合。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1
抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)和含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(v
l
)与存在于seq id no:1的pd-l1中的表位选择性地结合。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)和含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(v
l
)可以与存在于相对于seq id no:1的pd-l1具有以下氨基酸同一性的序列中的表位选择性地结合：例如，至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)和含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(v
l
)可以与存在于相对于seq id no:1的pd-l1具有以下范围内的氨基酸同一性的序列中的表位选择性地结合：例如，约90％至约100％、约95％至约100％、约90％至约99％、约95％至约99％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)和含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(v
l
)可以与存在于具有以下的序列中的表位选择性地结合：例如，相对于seq id no:1的pd-l1的至少1个、至少2个、至少3个或至少4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代；或者相对于seq id no:1的pd-l1的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有重链可变结构域(vh)cdr1区、cdr2区和cdr3区的重链可变结构域(vh)和含有轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、cdr2区和cdr3区的轻链可变结构域(v
l
)，该重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(v
l
)可以与存在于具有以下的序列中的表位选择性地结合：例如，相对于seq id no:1的pd-l1的约1个至约2个、约1个至约3个、约1个至约4个、约2个至约3个、约2个至约4个或约3个至约4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。
91.在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(v
l
)，该重链可变结构域(vh)包含含有seq id no:3(imgt)或seq id no:4(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr1区、含有seq id no:5(imgt)或seq id no:6(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr2区、和含有seq id no:7(imgt)或seq id no:8(kabat)的重链可变结构域(vh)cdr3区，该轻链可变结构域(v
l
)包含含有seq id no:10(imgt)或seq id no:11(kabat)的轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、含有seq id no:12(imgt)或seq id no:13(kabat)的轻链可变结构域(v
l
)cdr2区、和含有seq id no:14(imgt)或seq id no:15(kabat)的轻链可变结构域(v
l
)cdr3区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(v
l
)，该重链可变结构域(vh)可以包含相对于seq id no:3(imgt)或seq id no:4(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的重链可变结构域(vh)cdr1区、相对于seq id no:5(imgt)或seq id no:6(kabat)具有1个或2个氨基酸缺失、添加和/或取代的重链可变结构域(vh)cdr2区、和相对于seq id no:7(imgt)或seq id no:8(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的重链可变结构域
(vh)cdr3区，该轻链可变结构域(v
l
)可以包含相对于seq id no:10(imgt)或seq id no:11(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr1区、相对于seq id no:12(imgt)或seq id no:13(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr2区、和相对于seq id no:14(imgt)或seq id no:15(kabat)具有一个氨基酸缺失、添加和/或取代的轻链可变结构域(v
l
)cdr3区。
92.在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含轻链，该轻链包含本文公开的轻链可变区和轻链恒定区。在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含κ轻链，该κ轻链包含本文公开的轻链可变区和轻链恒定区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含κ轻链，该κ轻链包含本文公开的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的轻链恒定区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24或seq id no:25的κ轻链。
93.在该实施方案的另一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含λ轻链，该λ轻链包含本文公开的轻链可变区和轻链恒定区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含λ轻链，该λ轻链包含本文公开的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37的λ轻链。
94.在一种实施方案中，本文公开的抗pd-l1抗体包含缺乏fc效应子功能的重链恒定结构域(ch)。在另一种实施方案中，本文公开的抗pd-l1抗体包含缺乏细胞毒性的重链恒定结构域(ch)。在该实施方案的各方面，本文公开的抗pd-l1抗体包含缺乏抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)、补体依赖性细胞毒性活性(cdc)和/或抗体依赖性细胞吞噬(adcp)的重链恒定结构域(ch)。在该实施方案的各方面，缺乏fc效应子功能的重链恒定结构域(ch)是igg免疫球蛋白。在该实施方案的其他方面，是igg免疫球蛋白的缺乏fc效应子功能的重链恒定结构域(ch)是igg1免疫球蛋白、igg2免疫球蛋白、igg3免疫球蛋白或igg4免疫球蛋白。
95.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含缺乏细胞毒性的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含位于下铰链区和/或ch2结构域的n末端半部分的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位于下铰链区和/或ch2结构域的n末端半部分的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置l239、l240、k327或其任何组合处的氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置l239处的a、c、d、e、g、h、k、n、p、q、r、s、t、w或y的氨基酸取代，位置l240处的a、c、d、e、g、h、k、n、p、q、r、s、t、w或y的氨基酸取代，位置k327处的a、c、d、f、g、h、i、l、m、
n、p、s、t、v、w或y的氨基酸取代或其任何组合。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置l239处的a、c、w或y的氨基酸取代，位置l240处的a、c、w或y的氨基酸取代，位置k327处的a、d、g、h、m、n、p、s或t的氨基酸取代或其任何组合。在该实施方案的另外的方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含降低或消除细胞毒性的位置l239处的a的氨基酸取代(l239a)，位置l240处的a的氨基酸取代(l240a)，位置k327处的a的氨基酸取代(k327a)或其任何组合。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含缺乏或具有降低的细胞毒性的是seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)。
96.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含缺乏细胞毒性的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于下铰链区和/或ch2结构域的n末端半部分的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位于下铰链区和/或ch2结构域的n末端半部分的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置v236、a237、k323或其任何组合处的氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置v236处的a、c、d、e、f、g、h、k、n、p、q、r、s、t、w或y的氨基酸取代，位置a237处的c、d、e、f、h、i、k、m、n、l、p、q、r、v、y或w的氨基酸取代，位置k323处的a、c、d、f、g、h、i、l、m、n、p、s、t、v、w或y的氨基酸取代或其任何组合。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置v236处的a、c、f、t或y的氨基酸取代，位置a237处的c、e、i、k、m、l、p、q、r或v的氨基酸取代，位置k323处的a、d、g、h、m、n、p、s或t的氨基酸取代或其任何组合。在该实施方案的另外的方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置v236处的a的氨基酸取代(v236a)，位置a237处的l的氨基酸取代(a237l)，位置k323处的a的氨基酸取代(k323a)或其任何组合。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置v236处的a的氨基酸取代(v236a)，位置k323处的a的氨基酸取代(k323a)或其任何组合。
97.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含缺乏细胞毒性的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于下铰链区和/或ch2结构域的n末端半部分的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位于下铰链区和/或ch2结构域的n末端半部分的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置f/v236、l/a/e237、k324或其任何组合处的氨基酸缺失、添加或取代。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置v236处的a、c、d、e、f、g、h、k、n、p、q、r、s、t、w或y的氨基酸取代，位置f236处的a、c、d、e、g、h、i、k、n、p、q、r、s、t或v的氨基酸取代，位置l237处的a、c、d、e、g、h、k、n、p、q、r、s、t、w或y的氨基酸取代，位置a237处的c、d、e、f、h、i、k、m、n、l、p、q、r、v、y或w的氨基酸取代，位置e237处的a、c、f、g、h、i、l、m、n、p、r、s、t、v、w或y的氨基酸取代，位置k324处的a、c、d、f、g、h、i、l、m、n、p、s、t、v、w或y的氨基酸取代或其任何组合。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置v236处的a、c、f、t或y的氨基酸取代，位置f236处的c、i或v的氨基酸取代，位置l237处的a、c、w或y的氨基酸取代，位置a237处的c、e、i、k、m、l、p、q、r或v的氨基酸取代，位置e237处的a、h、n、p、r、s或t的氨基酸取代，位置k324处的a、d、g、h、m、n、p、s或t的氨基酸取代或其任何组合。在该实施方案的另外的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含降低或消除细胞毒性的位置v236处的a的氨基酸取代(v236a)、位置f236处的i的氨基酸取代(f236i)、位置l237处的a的氨基酸取代(l237a)、位置a237处的l的氨基酸取代(a237l)、位置e237处的a的氨基酸取代(e237a)、位置k324处的a的氨基酸取代(k324a)或其任何组合。
98.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有氨基酸序列变体的重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体促进修饰的抗pd-l1抗体比不含相同氨基酸序列变体的抗pd-l1抗体(未修饰的抗pd-l1参考抗体)更快的清除。关于全部实施方案，更快的清除是指以下之一或两者：(i)相对于未修饰的抗pd-l1参考抗体，在相同的给定时间段内清除本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的量增加；和(ii)在降低的时间段内大体上清除全部量的相对于未修饰的抗pd-l1参考抗体的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体。适当地，对于给定时间段，清除率(在给定时间段内清除的抗体的量)相对于未修饰的抗pd-l1参考抗体增加至少25％、至少50％、至少75％、至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。更适当地，给
no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含位置h315处的a的氨基酸取代(h315a)、位置h440处的q的氨基酸取代(h440q)或其任何组合，修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体更快的清除。
101.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快至少25％、至少50％、至少75％、至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快至多10％、至多25％、至多50％、至多75％、至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快约25％至约50％、约25％至约100％、约25％至约150％、约25％至约200％、约25％至约250％、约25％至约300％、约25％至约350％、约25％至约400％、约25％至约450％、约25％至约500％、约50％至约100％、约50％至约150％、约50％至约200％、约50％至约250％、约50％至约300％、约50％至约350％、约50％至约400％、约50％至约450％、约50％至约500％、约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
102.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在例如约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天内清除。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在例如至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天内清除。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重
链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在例如至多1天、至多2天、至多3天、至多4天、至多5天、至多6天或至多7天内清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在例如约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天内清除。
103.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含含有位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸缺失、添加或取代促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体更快的清除。
104.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315、h440或这两个位置处的氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h315和h440氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，位置h440处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，位置h440处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免
疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315处的a的氨基酸取代(h315a)、位置h440处的q的氨基酸取代(h440q)或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体更快的清除。
105.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快至少25％、至少50％、至少75％、至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快至多25％、至多50％、至多75％、至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快约25％至约50％、约25％至约100％、约25％至约150％、约25％至约200％、约25％至约250％、约25％至约300％、约25％至约350％、约25％至约400％、约25％至约450％、约25％至约500％、约50％至约100％、约50％至约150％、约50％至约200％、约50％至约250％、约50％至约300％、约50％至约350％、约50％至约400％、约50％至约450％、约50％至约500％、约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
106.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在例如约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天内清除。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在例如至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天内清
除。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在例如至多1天、至多2天、至多3天、至多4天、至多5天、至多6天或至多7天内清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在例如约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天内清除。
107.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含含有位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸缺失、添加或取代促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体更快的清除。
108.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312、h437或这两个位置处的氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h312和h437氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，位置h437处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h312和h437氨基酸取代的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，位置h437处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，或其任何组合，促进修
饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h312和h437氨基酸取代的抗pd-l1抗体更快的清除。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的a的氨基酸取代(h312a)、位置h437处的q的氨基酸取代(h437q)或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体更快的清除。
109.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快至少25％、至少50％、至少75％、至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快至多25％、至多50％、至多75％、至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体在相同时间段内相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体更快的清除，例如，快约25％至约50％、约25％至约100％、约25％至约150％、约25％至约200％、约25％至约250％、约25％至约300％、约25％至约350％、约25％至约400％、约25％至约450％、约25％至约500％、约50％至约100％、约50％至约150％、约50％至约200％、约50％至约250％、约50％至约300％、约50％至约350％、约50％至约400％、约50％至约450％、约50％至约500％、约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
110.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体到例如约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天时清除。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重
链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体到例如至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天时清除。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体到例如至多1天、至多2天、至多3天、至多4天、至多5天、至多6天或至多7天时清除。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，促进修饰的抗pd-l1抗体到例如约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天时清除。
111.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有氨基酸序列变体的重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同氨基酸序列变体的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的各方面，包含氨基酸序列变体(所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同氨基酸序列变体的抗pd-l1抗体降低)的重链恒定结构域(ch)是igg免疫球蛋白。在该实施方案的其他方面，包含氨基酸序列变体(所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同氨基酸序列变体的抗pd-l1抗体降低)的igg免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)是igg1免疫球蛋白、igg2免疫球蛋白、igg3免疫球蛋白或igg4免疫球蛋白。
112.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。
113.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315、h440或这两个位置处的氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同的h315和h440氨基酸缺失、添加
或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，位置h440处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，位置h440处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含位置h315处的a的氨基酸取代(h315a)、位置h440处的q的氨基酸取代(h440q)或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。
114.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少25％、至少50％、至少75％、至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多25％、至多50％、至多75％、至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，约25％至约50％、约25％至约100％、约25％至约150％、约25％至约200％、约25％至约250％、约25％至约300％、约25％至约350％、约25％至约400％、约25％至约450％、约25％至约500％、约50％至约100％、约50％至约150％、约50％至约200％、约50％至约250％、约50％至约300％、约50％至约350％、约50％至约400％、约50％至约450％、约50％至约500％、约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约
400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
115.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，具有例如约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天的半衰期。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，具有例如至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天的半衰期。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，具有例如至多1天、至多2天、至多3天、至多4天、至多5天、至多6天或至多7天的半衰期。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，具有例如约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天的半衰期。
116.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，具有例如约30小时、约32小时、约34小时、约36小时、约38小时、约40小时、约42小时、约44小时、约46小时或约48小时的半衰期。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，具有例如至少30小时、至少32小时、至少34小时、至少36小时、至少38小时、至少40小时、至少42小时、至少44小时、至少46小时或至少48小时的半衰期。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，具有例如至多30小时、至多32小时、至多34小时、至多36小时、至多38小时、至多40小时、至多42小时、至多44小时、至多46小时或至多48小时的半衰期。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，具有例如约30小时至约36小时、约30小时至约42小时、约30小时至约48小时、约32小时至约36小时、约32小时至约42小时、约32小时至约48小时、约34小时至约36小时、约34小时至约42小时、约34小时至约48小时、约36小时至约42小时、约36小时至约48小时或约42小时至约48小时的半衰期。
117.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基
酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。
118.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h311、h436或这两个位置处的氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同h311和h436氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h311处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，位置h436处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同h311和h436氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h311处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，位置h436处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同h311和h436氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h311处的a的氨基酸取代(h311a)、位置h436处的q的氨基酸取代(h436q)或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同h311和h436氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。
119.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h311a变体和h436q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少25％、至少50％、至少75％、至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白
重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h311a变体和h436q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多25％、至多50％、至多75％、至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h311a变体和h436q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，约25％至约50％、约25％至约100％、约25％至约150％、约25％至约200％、约25％至约250％、约25％至约300％、约25％至约350％、约25％至约400％、约25％至约450％、约25％至约500％、约50％至约100％、约50％至约150％、约50％至约200％、约50％至约250％、约50％至约300％、约50％至约350％、约50％至约400％、约50％至约450％、约50％至约500％、约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
120.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，具有例如约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天的半衰期。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，具有例如至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天的半衰期。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，具有例如至多1天、至多2天、至多3天、至多4天、至多5天、至多6天或至多7天的半衰期。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，具有例如约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天的半衰期。
121.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，
该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，具有例如约30小时、约32小时、约34小时、约36小时、约38小时、约40小时、约42小时、约44小时、约46小时或约48小时的半衰期。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，具有例如至少30小时、至少32小时、至少34小时、至少36小时、至少38小时、至少40小时、至少42小时、至少44小时、至少46小时或至少48小时的半衰期。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，具有例如至多30小时、至多32小时、至多34小时、至多36小时、至多38小时、至多40小时、至多42小时、至多44小时、至多46小时或至多48小时的半衰期。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，具有例如约30小时至约36小时、约30小时至约42小时、约30小时至约48小时、约32小时至约36小时、约32小时至约42小时、约32小时至约48小时、约34小时至约36小时、约34小时至约42小时、约34小时至约48小时、约36小时至约42小时、约36小时至约48小时或约42小时至约48小时的半衰期。
122.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。
123.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代将本文公开的抗pd-l1抗体的半衰期比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312、h437或这两个位置处的氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同h312和h437氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的a、c、d、e、f、
g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，位置h437处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同h312和h437氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，位置h437处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同h312和h437氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的a的氨基酸取代(h312a)、位置h437处的q的氨基酸取代(h437q)或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期比不含相同h312和h437氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。
124.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少25％、至少50％、至少75％、至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多25％、至多50％、至多75％、至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体的半衰期相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，约25％至约50％、约25％至约100％、约25％至约150％、约25％至约200％、约25％至约250％、约25％至约300％、约25％至约350％、约25％至约400％、约25％至约450％、约25％至约500％、约50％至约100％、约50％至约150％、约50％至约200％、约50％至约250％、约50％至约300％、约50％至约350％、约50％至约400％、约50％至约450％、约50％至约500％、约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
125.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:
49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，具有例如约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天的半衰期。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，具有例如至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天的半衰期。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，具有例如至多1天、至多2天、至多3天、至多4天、至多5天、至多6天或至多7天的半衰期。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，具有例如约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天的半衰期。
126.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，具有例如约30小时、约32小时、约34小时、约36小时、约38小时、约40小时、约42小时、约44小时、约46小时或约48小时的半衰期。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，具有例如至少30小时、至少32小时、至少34小时、至少36小时、至少38小时、至少40小时、至少42小时、至少44小时、至少46小时或至少48小时的半衰期。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，具有例如至多30小时、至多32小时、至多34小时、至多36小时、至多38小时、至多40小时、至多42小时、至多44小时、至多46小时或至多48小时的半衰期。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，具有例如约30小时至约36小时、约30小时至约42小时、约30小时至约48小时、约32小时至约36小时、约32小时至约42小时、约32小时至约48小时、约34小时至约36小时、约34小时至约42小时、约34小时至约48小时、约36小时至约42小时、约36小时至约48小时或约42小时至约48小时的半衰期。
127.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含含有氨基酸序列变体的重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同氨基酸序列变体的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的各方面，包含氨基酸序列变体(所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同氨基酸序列变体的抗pd-l1抗体降低)的重链恒定结构域(ch)是igg免疫球蛋白。在该实施方案的其他方面，包含氨基酸序列变体(所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同氨基酸序列变体的抗pd-l1抗体降低)的igg免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)是igg1免疫球蛋白、igg2免疫球蛋白、igg3免疫球蛋白或igg4免疫球蛋白。
128.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。
129.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315、h440或这两个位置处的氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同的h315和h440氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，位置h440处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h315处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，位置h440处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒
定结构域(ch)包含位置h315处的a的氨基酸取代(h315a)、位置h440处的q的氨基酸取代(h440q)或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同的h315和h440氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。
130.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％或至多90％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，约10％至约20％、约10％至约30％、约10％至约40％、约10％至约50％、约10％至约60％、约10％至约70％、约10％至约80％、约10％至约90％、约20％至约30％、约20％至约40％、约20％至约50％、约20％至约60％、约20％至约70％、约20％至约80％、约20％至约90％、约30％至约40％、约30％至约50％、约30％至约60％、约30％至约70％、约30％至约80％、约30％至约90％、约40％至约50％、约40％至约60％、约40％至约70％、约40％至约80％、约40％至约90％、约50％至约60％、约50％至约70％、约50％至约80％、约50％至约90％、约60％至约70％、约60％至约80％、约60％至约90％、约70％至约80％、约70％至约90％或约80％至约90％。
131.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:38、seq id no:39或seq id no:40的igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg1免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)包含h315a变体、h440q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于
不含h315a变体和h440q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
132.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。
133.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h311、h436或这两个位置处的氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同的h311和h436氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h311处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，位置h436处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，或其任何组合，所述h311和h436氨基酸取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同h311和h436氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h311处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，位置h436处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同h311和h436氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h311处的a的氨基酸取代(h311a)、位置h436处的q
的氨基酸取代(h436q)或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同的h311和h436氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。
134.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h311a变体和h436q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h311a变体和h436q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％或至多90％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h311a变体和h436q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，约10％至约20％、约10％至约30％、约10％至约40％、约10％至约50％、约10％至约60％、约10％至约70％、约10％至约80％、约10％至约90％、约20％至约30％、约20％至约40％、约20％至约50％、约20％至约60％、约20％至约70％、约20％至约80％、约20％至约90％、约30％至约40％、约30％至约50％、约30％至约60％、约30％至约70％、约30％至约80％、约30％至约90％、约40％至约50％、约40％至约60％、约40％至约70％、约40％至约80％、约40％至约90％、约50％至约60％、约50％至约70％、约50％至约80％、约50％至约90％、约60％至约70％、约60％至约80％、约60％至约90％、约70％至约80％、约70％至约90％或约80％至约90％。
135.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h311a变体和h436q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h311a变体和h436q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47或seq id no:48的igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg2免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h311a变体、h436q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h311a变体和h436q变体的抗
pd-l1抗体降低，例如，约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
136.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含在ch2结构域和/或ch3结构域中包含氨基酸序列变体的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述氨基酸序列变体使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸变体的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，所述igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。
137.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的1个、2个、3个、4个或5个氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含位于ch2结构域和/或ch3结构域中的相同氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312、h437或这两个位置处的氨基酸缺失、添加或取代，所述氨基酸缺失、添加或取代使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同的h312和h437氨基酸缺失、添加或取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，位置h437处的a、c、d、e、f、g、i、k、l、m、p、q、r、s、t、v或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同h312和h437氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，位置h437处的c、d、e、k、q、r、s、t或w的氨基酸取代，或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同h312和h437氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4
免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含位置h312处的a的氨基酸取代(h312a)、位置h437处的q的氨基酸取代(h437q)或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与其同源fcrn受体的相互作用比不含相同的h312和h437氨基酸取代的抗pd-l1抗体降低。
138.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％或至多90％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，约10％至约20％、约10％至约30％、约10％至约40％、约10％至约50％、约10％至约60％、约10％至约70％、约10％至约80％、约10％至约90％、约20％至约30％、约20％至约40％、约20％至约50％、约20％至约60％、约20％至约70％、约20％至约80％、约20％至约90％、约30％至约40％、约30％至约50％、约30％至约60％、约30％至约70％、约30％至约80％、约30％至约90％、约40％至约50％、约40％至约60％、约40％至约70％、约40％至约80％、约40％至约90％、约50％至约60％、约50％至约70％、约50％至约80％、约50％至约90％、约60％至约70％、约60％至约80％、约60％至约90％、约70％至约80％、约70％至约90％或约80％至约90％。
139.在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至少100％、至少125％、至少150％、至少175％、至少200％、至少250％、至少300％、至少350％、至少400％、至少450％、至少500％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，至多100％、至多125％、至多150％、至多175％、至多200％、至多250％、至多300％、至多350％、至多400％、至多450％、至多500％。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的
抗pd-l1抗体可以包含seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52或seq id no:53的igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)，该igg4免疫球蛋白重链恒定结构域(ch)可以包含h312a变体、h437q变体或其任何组合，使修饰的抗pd-l1抗体与fcrn受体的相互作用相对于不含h312a变体和h437q变体的抗pd-l1抗体降低，例如，约100％至约150％、约100％至约200％、约100％至约250％、约100％至约300％、约100％至约350％、约100％至约400％、约100％至约450％、约100％至约500％、约150％至约200％、约150％至约250％、约150％至约300％、约150％至约350％、约150％至约400％、约150％至约450％、约150％至约500％、约200％至约250％、约200％至约300％、约200％至约350％、约200％至约400％、约200％至约450％、约200％至约500％、约250％至约300％、约250％至约350％、约250％至约400％、约250％至约450％或约250％至约500％。
140.在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体具有例如约1天、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天的半衰期。在该实施方案的其他方面，本文公开的抗pd-l1抗体具有例如至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天或至少7天的半衰期。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体具有例如至多1天、至多2天、至多3天、至多4天、至多5天、至多6天或至多7天的半衰期。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的抗pd-l1抗体具有例如约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天的半衰期。
141.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，和seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，和seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24或seq id no:25的κ轻链。在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链和seq id no:21的κ轻链。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链和seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37的λ轻链。
142.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，和包含seq id no:9的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，
以及包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的λ轻链恒定区的轻链。
143.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链和包含seq id no:9的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的λ轻链恒定区的轻链。
144.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no15的cdr3的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:
30或seq id no:31的λ轻链恒定区的轻链。
145.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:44的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的λ轻链恒定区的轻链。
146.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，和seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链和seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24或seq id no:25的κ轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链和seq id no:21的κ轻链。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链和seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37的λ轻链。
147.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链和包含seq id no:9的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:
id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no15的cdr3的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的λ轻链恒定区的轻链。
150.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:2的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的λ轻链恒定区的轻链。
151.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，和seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，和seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24或seq id no:25的κ轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗
pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，和seq id no:21的κ轻链。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链和seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37的λ轻链。
152.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链和包含seq id no:9的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的λ轻链恒定区的轻链。
153.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链和包含seq id no:9的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:
no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16的κ轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2或seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的λ轻链恒定区的轻链。
156.在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，以及包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球蛋白重链，包含含有seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19、seq id no:20、seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31的轻链恒定区的轻链。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体包含含有seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区的igg1免疫球
alignment,6(1)bmc bioinformatics 66(2005)。
162.本说明书描述了多种多肽变体，其中一个氨基酸被另一个氨基酸取代，诸如，例如，pd-l1抗原、重链可变结构域(vh)、轻链可变结构域(v
l
)、以及cdr 1区、cdr2区和cdr3区。取代可以通过各种因素来评估，诸如，例如，被取代的氨基酸的物理特性(表1)或原始氨基酸将如何耐受取代(表2)。对于本领域普通技术人员来说，多肽中哪一个氨基酸可以被另一个氨基酸取代的选择是已知的。
163.[0164][0165]
在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的疏水性氨基酸可以被另一个疏水性氨基酸取代。疏水性氨基酸的实例包括，例如，c、f、i、l、m、v和w。在该实施方案的另一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的脂肪族氨基酸可以被另一个脂肪族氨基酸取代。脂肪族氨基酸的实例包括，例如，a、i、l、p和v。在该实施方案的又另一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的芳族氨基酸可以被另一个芳族氨基酸取代。芳族氨基酸的实例包括，例如，f、h、w和y。在该实施方案的仍另一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的堆叠性氨基酸(stacking amino acid)可以被另一个堆叠性氨基酸取代。堆叠性氨基酸的实例包括，例如，f、h、w和y。在该实施方案的另外的方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的极性氨基酸可以被另一个极性氨基酸取代。极性氨基酸的实例包括，例如，d、e、k、n、q和r。在该实施方案的另外的方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的极性较低或无差异的氨基酸(less polar or indifferent amino acid)可以被另一个极性较低或无差异的氨基酸取代。极性较低或无差异的氨基酸的实例包括，例如，a、h、g、p、s、t和y。在该实施方案的又另外的方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的带正电荷的氨基酸可以被另一个带正电荷的氨基酸取代。带正电荷的氨基酸的实例包括，例如，k、r和h。在该实施方案的仍另外的方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的带负电荷的氨基酸可以被另一个带负电荷的氨基酸取代。带负电荷的氨基酸的实例包括，例如，d和e。在该实施方案的另一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定
位置处的小氨基酸可以被另一个小氨基酸取代。小氨基酸的实例包括，例如，a、d、g、n、p、s和t。在该实施方案的又另一方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体中一个特定位置处的c-β支链氨基酸可以被另一个c-β支链氨基酸取代。c-β支链氨基酸的实例包括，例如，i、t和v。
[0166]
在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体特异性结合本文公开的表位。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体特异性结合存在于seq id no:1的pd-l1中的表位。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体特异性结合相对于seq id no:1的pd-l1具有以下氨基酸同一性的表位：例如，至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体特异性结合相对于seq id no:1的pd-l1具有以下范围内的氨基酸同一性的表位：例如，约75％至约100％、约80％至约100％、约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％、约75％至约99％、约80％至约99％、约85％至约99％、约90％至约99％、约95％至约99％、约75％至约97％、约80％至约97％、约85％至约97％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体特异性结合相对于seq id no:1的pd-l1具有以下的表位：例如，至少1个、至少2个、至少3个或至少4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代；或者相对于seq id no:1的pd-l1的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体特异性结合相对于seq id no:1的pd-l1具有以下的表位：例如，约1个至约2个、约1个至约3个、约1个至约4个、约2个至约3个、约2个至约4个或约3个至约4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。
[0167]
如本文使用的，当述及抗体时，术语“选择性地结合”或“选择性结合”是指抗体与指示的靶表位的区别性的结合，使得抗体基本上不与非靶表位交叉反应。如本文定义的，肽表位的最小尺寸是约5个氨基酸，并且肽表位通常包含至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个或至少20个氨基酸。肽表位可以是不连续的，即它包含在肽的一级结构中不相邻但通过肽的二级、三级或四级结构聚集在一起成为表位的氨基酸残基。此外，还应注意，表位可以包含除氨基酸序列之外的分子部分，诸如，例如，糖类部分、脂质部分如脂蛋白或糖脂、或化学修饰的氨基酸部分如磷酸化氨基酸。
[0168]
在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以选择性地结合存在于pd-l1上的表位。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体选择性地结合存在于seq id no:1的pd-l1中的表位。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体选择性地结合相对于seq id no:1的pd-l1具有以下氨基酸同一性的表位：例如，至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体选择性地结合相对于seq id no:1的pd-l1具有以下范围内的氨基酸同一性的表位：例如，约75％至约100％、约80％至约100％、约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％、约75％至约99％、约80％至约99％、约85％至约99％、约90％至约99％、约
95％至约99％、约75％至约97％、约80％至约97％、约85％至约97％、约90％至约97％、约95％至约97％或约97％至约99％。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体选择性地结合相对于seq id no:1的pd-l1具有以下的表位：例如至少1个、至少2个、至少3个或至少4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代；或者相对于seq id no:1的pd-l1的至多1个、至多2个、至多3个、至多4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。在该实施方案的仍其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体选择性地结合相对于seq id no:1的pd-l1具有以下的表位：例如，约1个至约2个、约1个至约3个、约1个至约4个、约2个至约3个、约2个至约4个或约3个至约4个连续和/或非连续氨基酸缺失、添加和/或取代。
[0169]
在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体与存在于pd-l1中的包含以下氨基酸的表位结合：例如，至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个或至少20个氨基酸。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体与包含以下氨基酸的表位结合：例如，至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个、至多10个、至多11个、至多12个、至多13个、至多14个、至多15个或至多20个氨基酸。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体与存在于pd-l1中的包含以下的表位结合：例如，约5个至约7个、约5个至约8个、约7个至约9个、约5个至约10个、约5个至约12个、约5个至约15个、约5个至约18个、约5个至约20个、约6个至约7个、约6个至约8个、约6个至约9个、约6个至约10个、约6个至约12个、约6个至约15个、约6个至约18个、约6个至约20个、约7个至约8个、约7个至约9个、约7个至约10个、约7个至约12个、约7个至约15个、约7个至约18个、约7个至约20个、约8个至约9个、约8个至约10个、约8个至约12个、约8个至约15个、约8个至约18个、约8个至约20个、约9个至约10个、约9个至约12个、约9个至约15个、约9个至约18个、约9个至约20个、约10个至约12个、约10个至约15个、约10个至约18个或约10个至约20个氨基酸。
[0170]
在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体与包含以下氨基酸的表位结合：例如，来自seq id no:1的pd-l1的至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个或至少20个氨基酸。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体与包含以下氨基酸的表位结合：例如，来自seq id no:1的pd-l1的至多5个、至多6个、至多7个、至多8个、至多9个、至多10个、至多11个、至多12个、至多13个、至多14个、至多15个或至多20个氨基酸。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体与包含以下氨基酸的表位结合：例如，来自seq id no:1的pd-l1的约5个至约7个、约5个至约8个、约7个至约9个、约5个至约10个、约5个至约12个、约5个至约15个、约5个至约18个、约5个至约20个、约6个至约7个、约6个至约8个、约6个至约9个、约6个至约10个、约6个至约12个、约6个至约15个、约6个至约18个、约6个至约20个、约7个至约8个、约7个至约9个、约7个至约10个、约7个至约12个、约7个至约15个、约7个至约18个、约7个至约20个、约8个至约9个、约8个至约10个、约8个至约12个、约8个至约15个、约8个至约18个、约8个至约20个、约9个至约10个、约9个至约12个、约9个至约15个、约9个至约18个、约9个至约20个、约10个至约12个、约10个至约15个、约10个至约18个或约10个至约20个氨基酸。
[0171]
选择性结合包括结合特性，诸如，例如，结合亲和力(affinity)、结合特异性和结合亲合性(avidity)。结合亲和力是指抗体在其表位结合位点处驻留的时间长度，并且可以
视为抗体与其表位结合的强度。结合亲和力可以描述为抗体的平衡解离常数(kd)，它被定义为平衡时的kd/ka之比。其中ka是抗体的结合速率常数，并且kd是抗体的解离速率常数。结合亲和力由结合和解离两者决定，并且无论是单独的高结合还是单独的低解离都不能够确保高亲和力。结合速率常数(ka)或结合速率常数(on-rate constant，kon)测量每单位时间内结合事件的数目，或者抗体和抗原可逆地结合为其抗体-抗原复合物的倾向。结合速率常数以m-1
s-1
表示，并且符号如下：[ab]
×
[ag]
×
kon。结合速率常数越大，抗体与其抗原结合越快，或者抗体与抗原之间的结合亲和力越高。解离速率常数(kd)或解离速率常数(off-rate constant，koff)测量抗体-抗原复合物可逆地分离(解离)成其组成分子(即抗体和抗原)的倾向，每单位时间解离事件的数目。离解速率常数以s-1
表示，并且符号如下：[ab ag]
×
koff。解离速率常数越小，抗体与其抗原结合越紧密，或者抗体与抗原之间的结合亲和力越高。平衡解离常数(kd)测量在平衡时新抗体-抗原复合物形成的速率等于抗体-抗原复合物解离的速率。平衡解离常数以m表示，并且定义为koff/kon＝[ab]
×
[ag]/[ab ag]，其中[ab]是抗体的摩尔浓度，[ag]是抗原的摩尔浓度，并且[ab ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，其中当系统处于平衡时，所有组分都是这样的浓度。平衡解离常数越小，抗体与其抗原结合越紧密，或者抗体与抗原之间的结合亲和力越高。
[0172]
因此，在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下的结合速率常数：例如，少于1
×
105m-1
s-1
、少于1
×
106m-1
s-1
、少于1
×
107m-1
s-1
或少于1
×
108m-1
s-1
。在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下的结合速率常数：例如，多于1
×
105m-1
s-1
、多于1
×
106m-1
s-1
、多于1
×
107m-1
s-1
或多于1
×
108m-1
s-1
。在其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下之间的结合速率常数：1
×
105m-1
s-1
至1
×
108m-1
s-1
、1
×
106m-1
s-1
至1
×
108m-1
s-1
、1
×
105m-1
s-1
至1
×
107m-1
s-1
或1
×
106m-1
s-1
至1
×
107m-1
s-1
。
[0173]
在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于除存在于pd-l1上的表位之外的表位可以具有以下的结合速率常数：例如，少于1
×
100m-1
s-1
、少于1
×
101m-1
s-1
、少于1
×
102m-1
s-1
、少于1
×
103m-1
s-1
或少于1
×
104m-1
s-1
。在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于除存在于pd-l1上的表位之外的表位可以具有以下的结合速率常数：例如，至多1
×
100m-1
s-1
、至多1
×
101m-1
s-1
、至多1
×
102m-1
s-1
、至多1
×
103m-1
s-1
或至多1
×
104m-1
s-1
。
[0174]
在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下的解离速率常数：例如，少于1
×
10-3
s-1
、少于1
×
10-4
s-1
或少于1
×
10-5
s-1
。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下的解离速率常数：例如，少于1.0
×
10-4
s-1
、少于2.0
×
10-4
s-1
、少于3.0
×
10-4
s-1
、少于4.0
×
10-4
s-1
、少于5.0
×
10-4
s-1
、少于6.0
×
10-4
s-1
、少于7.0
×
10-4
s-1
、少于8.0
×
10-4
s-1
或少于9.0
×
10-4
s-1
。在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下的解离速率常数：例如，多于1
×
10-3
s-1
、多于1
×
10-4
s-1
或多于1
×
10-5
s-1
。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下的解离速率常数：例如，多于1.0
×
10-4
s-1
、多于2.0
×
10-4
s-1
、多于3.0
×
10-4
s-1
、多于4.0
×
10-4
s-1
、多于
5.0
×
10-4
s-1
、多于6.0
×
10-4
s-1
、多于7.0
×
10-4
s-1
、多于8.0
×
10-4
s-1
或多于9.0
×
10-4
s-1
。在其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下之间的解离速率常数：例如，1
×
10-3
s-1
至1
×
10-5
s-1
、1
×
10-3
s-1
至1
×
10-4
s-1
或1
×
10-4
s-1
至1
×
10-5
s-1
。
[0175]
在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有少于0.500nm的平衡解离常数。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下的平衡解离常数：例如，少于0.500nm、少于0.450nm、少于0.400nm、少于0.350nm、少于0.300nm、少于0.250nm、少于0.200nm、少于0.150nm、少于0.100nm或少于0.050nm。在另一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有多于0.500nm的平衡解离常数。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合亲和力对于存在于pd-l1中的表位可以具有以下的平衡解离常数：例如，多于0.500nm、多于0.450nm、多于0.400nm、多于0.350nm、多于0.300nm、多于0.250nm、多于0.200nm、多于0.150nm、多于0.100nm或多于0.050nm。
[0176]
结合特异性是抗体区分含其表位的分子与不含该表位的分子的能力。一种测量结合特异性的方法是将抗体对含其表位的分子的kon结合速率与抗体对不含该表位的分子的kon结合速率进行比较。例如，将本文公开的修饰的抗pd-l1抗体选择性地结合存在于pd-l1中的表位与不存在于pd-l1中的表位的结合速率常数(ka)进行比较。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体对于不存在于pd-l1中的表位可以具有以下的结合速率常数(ka)：例如，少于1
×
100m-1
s-1
、少于1
×
101m-1
s-1
、少于1
×
102m-1
s-1
、少于1
×
103m-1
s-1
或少于1
×
104m-1
s-1
。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体对于不存在于pd-l1中的表位可以具有以下的结合速率常数(ka)：例如，至多1
×
100m-1
s-1
、至多1
×
101m-1
s-1
、至多1
×
102m-1
s-1
、至多1
×
103m-1
s-1
或至多1
×
104m-1
s-1
。
[0177]
在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体相对于不存在于pd-l1中的表位对于其表位可以具有例如至少多2倍、至少多3倍、至少多4倍、至少多5倍、至少多6倍、至少多7倍、至少多8倍或至少多9倍的结合速率常数(ka)。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体相对于不存在于pd-l1中的表位对于其表位可以具有例如至少多10倍、至少多100倍、至少多1,000倍或至少多10,000倍的结合速率常数(ka)。
[0178]
在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体相对于不存在于pd-l1中的表位对于其表位可以具有例如至多多1倍、至多多2倍、至多多3倍、至多多4倍、至多多5倍、至多多6倍、至多多7倍、至多多8倍或至多多9倍的结合速率常数(ka)。在该实施方案的又其他方面，本文公开的抗pd-l1抗体相对于不存在于pd-l1中的表位对于其表位可以具有例如至多多10倍、至多多100倍、至多多1,000倍多或至多多10,000倍的结合速率常数(ka)。
[0179]
本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的结合特异性也可以表征为这样的比例，即，本文公开的这样的修饰的抗pd-l1抗体可以相对于不存在于pd-l1中的表位来区分其表位的比例。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体相对于不存在于pd-l1中的表位对于其表位可以具有以下的结合特异性比例：例如，至少2:1、至少3:1、至少4:1、至少5:1、至少6:1、至少7:1、至少8:1、至少9:1、至少10:1、至少15:1、至少20:1、至少25:1、至少30:1、至少35:1或至少40:1。
pharmacological basis of therapeutics(joel g.hardman等人，编著，mcgraw-hill professional，第10版2001)；以及handbook of pharmaceutical excipients(raymond c.rowe等人，apha publications，第4版2003)。这些方案是常规程序并且任何修改都完全在本领域技术人员以及来自本文的教导的范围之内。
[0184]
本文公开的治疗性组合物可以任选地包括但不限于其他药学上可接受的组分(或药物组分)，包括但不限于缓冲剂、防腐剂、张力调节剂、盐、抗氧化剂、重量渗透摩尔浓度调节剂(osmolality adjusting agents)、生理物质、药理学物质、填充剂(bulking agents)、乳化剂、润湿剂、甜味剂或调味剂等。调节ph的各种缓冲剂和手段可以用于制备本文公开的治疗性组合物，条件是所得制剂是药学上可接受的。这样的缓冲剂包括但不限于乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水和硼酸盐缓冲剂。应当理解，可根据需要使用酸或碱来调节组合物的ph。药学上可接受的抗氧化剂包括但不限于焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁羟茴醚和丁羟甲苯。有用的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、氯丁醇、硫柳汞、乙酸苯汞、硝酸苯汞、稳定的氯氧组合物(stabilized oxy chloro composition)和螯合剂(诸如，例如，dtpa或dtpa-双酰胺、钙dtpa和canadtpa-双酰胺)。可用于药物组合物中的张力调节剂包括但不限于，盐(诸如，例如氯化钠、氯化钾)、甘露醇或甘油和其他药学上可接受的张力调节剂。活性成分，诸如，例如，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体可以以盐而提供并可以用许多种酸来形成，所述许多种酸包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐比相应的游离碱形式更易溶于水或其他质子溶剂中。应当理解的是，药理学领域中已知的这些物质和其他物质可以包括在治疗性组合物中。
[0185]
本说明书的各方面部分地公开了药物试剂盒。本文公开的试剂盒可以包含一个或更多个容器，所述容器包含本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或治疗性组合物。本文公开的试剂盒还可以包含提供有用信息的标签或说明书，所述有用信息包括但不限于，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或治疗性组合物的详细内容，关于如何制备和使用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或治疗性组合物来治疗和/或预防本文公开的神经退行性疾病的描述，在施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或治疗性组合物之后，如何检测个体中本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清水平的描述，和/或营销授权号(例如，fda或ema授权号)。本文公开的试剂盒还可以包含可用于施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或治疗性组合物的递送系统，诸如，例如，注射装置。本文公开的试剂盒还可以包含一个或更多个容器，所述容器包含另一种药物组合物，所述另一种药物组合物用作本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或治疗性组合物的辅助疗法。试剂盒中的内容物可以包封于外壳(outer casing)中。外壳可以是盒子、密封袋、箔袋(foil pouch)等。在某些实施方案中，本文公开的试剂盒的内容物被包封在盒子中。
[0186]
本说明书的各方面部分地公开了治疗神经退行性疾病的方法。在另一方面，本说明书部分地公开了用于降低被诊断为患有阿尔茨海默病的个体中的aβ斑块负荷的方法。在另一方面，本说明书部分地公开了用于降低被诊断为患有阿尔茨海默病的患者中海马胶质增生的方法。
[0187]
这样的方法包括治疗性的(疾病发作后)和预防性的(疾病发作或病理前)。例如，治疗个体神经退行性疾病的治疗性和预防性方法包括治疗具有神经退行性疾病或病理或
者处于患神经退行性疾病或病理风险的个体，治疗患有神经退行性疾病的个体，以及保护个体免于神经退行性疾病以减少或降低个体中神经退行性疾病的概率、减少或降低个体对神经退行性疾病的易感性或者抑制或预防个体中神经退行性疾病的方法。这样的方法包括施用本文公开的免疫原性组合物，以治疗性或预防性治疗具有神经退行性疾病或病理或者处于患神经退行性疾病或病理风险的个体。因此，方法可以治疗神经退行性疾病或病理，或者为个体提供免于神经退行性疾病的保护(例如，预防性保护)。
[0188]
在一种实施方案中，治疗神经退行性疾病的方法包括向有相应需要的个体施用足以降低与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状从而治疗神经退行性疾病的量的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或本文公开的治疗性组合物。在该实施方案的各方面，治疗性组合物包含本文公开的一种或更多种抗pd-l1抗体。
[0189]
在一种实施方案中，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或本文公开的治疗性组合物用于治疗神经退行性疾病。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或本文公开的治疗性组合物的用途通过降低与治疗神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状来治疗神经退行性疾病。在该实施方案的各方面，本文公开的抗pd-l1或治疗性组合物施用的量足以降低与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状从而治疗神经退行性疾病。
[0190]
神经退行性疾病是指由于神经元的结构或功能的逐渐丧失(包括神经元死亡)而导致病理生理学效应的任何状况、疾病或紊乱。神经退行性疾病包括但不限于，年龄相关的痴呆、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化、痴呆、帕金森病、亨廷顿病、原发性进行性多发性硬化；继发性进行性多发性硬化、皮质基底节变性(corticobasal degeneration)、rett综合征、tau病变(tauopathy)、视网膜退化紊乱(retinal degeneration disorder)；前部缺血性视神经病变；青光眼；葡萄膜炎；抑郁症；创伤相关应激或创伤后应激紊乱、额颞叶痴呆、路易体痴呆、轻度认知障碍、后部皮层萎缩、原发性进行性失语、进行性核上性麻痹或cns损伤。
[0191]
tau病变是临床上、形态学上和生物化学上异质性的神经退行性疾病类别，特征是tau蛋白在人脑的神经原纤维或胶质原纤维缠结中的病理性聚集。tau是与微管结合并促进其聚合的微管相关蛋白(map)。它在维持轴突运输和神经元完整性方面发挥重要作用，但在树突中具有生理作用，并且它在胶质细胞细胞中以低水平表达。在tau病变中，由于tau过度磷酸化引起tau以不溶性形式聚集，从而形成缠结。tau病变的非限制性实例包括，阿尔茨海默病、嗜银颗粒病(argyrophilic grain disease)、慢性创伤性脑病、皮质基底节变性、拳击员痴呆(dementia pugilistica)、额颞叶痴呆、额颞叶退化、hallervorden-spatz病、亨廷顿病、神经节胶质瘤、神经节细胞瘤、球状胶质细胞tau病变、铅脑病、脂褐质贮积病、lytico-boding病(关岛帕金森痴呆综合征(parkinson-dementia complex of guam))、脑膜血管瘤病、与17号染色体连锁的帕金森病、皮克病、原发性年龄相关tau病变(part)、以前被称为仅有神经纤维缠结的痴呆(neurofibrillary tangle-only dementia，nft痴呆)、脑炎后帕金森病(postencephalitic parkinsonism)、进行性核上性麻痹(progressive supranuclear palsy)、亚急性硬化性全脑炎(subacute sclerosing panencephalitis)和结节性硬化。
[0192]
视网膜退化紊乱是由于感光细胞死亡引起视网膜退化而导致的疾病。视网膜退化
存在数种原因，包括动脉或静脉闭塞、糖尿病性视网膜病变、晶状体后纤维增生/早产儿视网膜病变或疾病(通常为遗传性的)。症状包括但不限于，受损的视觉、夜盲症、视网膜脱离、光敏感度、眩光敏感度、隧道视觉、深度知觉丧失、对比度丧失、夜盲症、中心视觉丧失、周边视觉丧失和完全视觉丧失。视网膜退化紊乱包括但不限于，年龄相关性黄斑退化(湿性和干性)、色素性视网膜炎、无脉络膜症、视锥-杆状视网膜营养不良、回状萎缩(gyrate atrophy)、青少年视网膜劈裂症、卵黄状黄斑营养不良(best病)、无β脂蛋白血症(abetalipoproteinemia，bassen-kornzweig病)、bardet-biedl综合征、蓝锥细胞单色视病(blue cone monochromatism disease)、显性drusen、goldman-favre玻璃体视网膜营养不良(增强的s-锥综合征)、kearns-sayre综合征、laurence-moon综合征、leber先天性黑蒙病、leber’s refsum病、oguchi病、乳头周围(中心周围)脉络膜营养不良、色素型营养不良(pigment pattern dystrophy)、sorsby黄斑营养不良、stargardt病、stickler综合征、usher综合征和wagner玻璃体视网膜营养不良。
[0193]
cns损伤包括但不限于，脊髓损伤、闭合性头部损伤、钝性创伤、穿透性创伤、出血性中风、缺血性中风、脑缺血、视神经损伤、心肌梗塞、有机磷中毒和由肿瘤切除引起的损伤。
[0194]
本说明书的各方面部分地提供了个体。个体包括任何哺乳动物，包括人类，并且人类可以是患者。
[0195]
本文公开的方法包括神经退行性疾病的治疗。治疗包括任何治疗性作用或有益作用，包括提供给特定个体的任何客观或单独可测量或可检测的改进或益处。治疗性作用或有益作用可以但不需要是完全消除由神经退行性疾病或病理引起或与之相关的全部或任何特定的不良状况、症状、紊乱、疾患、疾病或并发症。因此，当由神经退行性疾病或病理引起的或与之相关的不良状况、症状、紊乱、疾患、疾病或并发症存在增量改善或部分降低，或者由神经退行性疾病或病理引起的或与之相关的一种或更多种状况、不良症状、紊乱、疾患、疾病或并发症的恶化或进展在短持续时间或长持续时间内存在抑制、减少、降低、遏制、预防、限制或控制时，就实现了令人满意的临床终点。
[0196]
在该实施方案的各方面，本文公开的治疗方法或用途可以降低、减少、抑制、限制、延迟或预防神经退行性疾病或病理。在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗方法或用途可以减少、降低、抑制、阻遏、预防、控制或限制由神经退行性疾病或病理引起或与之相关的一种或更多种不良状况、症状、紊乱、疾病、疾病或并发症。在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗方法或用途可以改善、加速、促进、增强、加强或加速个体从神经退行性疾病或病理，或由神经退行性疾病或病理引起或与之相关的一种或更多种不良症状、紊乱、疾患、疾病或并发症中恢复。
[0197]
在该实施方案的其他方面，本文公开的治疗方法或用途可以稳定神经退行性疾病、病理或由神经退行性疾病或病理引起或与之相关的不良状况、症状、紊乱、疾患、疾病或并发症。在该实施方案的又其他方面，本文公开的治疗或使用方法可以降低或消除同时或随后治疗(诸如用于治疗具有神经退行性疾病或病理或处于患神经退行性疾病或病理风险的个体的另一种药物或其他剂)的需要、剂量频率或量。例如，降低辅助疗法的量，例如，降低或减少对神经退行性疾病或病理的治疗。
[0198]
与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状将对本文公开的
治疗方法有响应。神经退行性疾病或病理的症状根据疾病阶段而异，但包括而不限于改善的cns功能、认知、学习、记忆和可塑性。
[0199]
如本文使用的术语“cns功能”是指，尤其是，接收和处理感觉信息、思考、学习、记忆、感知、产生和理解语言、控制运动功能以及听觉和视觉响应、维持平衡(balance)和平衡(equilibrium)、运动协调、感觉信息的传导以及控制诸如呼吸、心率和消化的自主神经功能。
[0200]
术语“认知”、“认知功能”和“认知表现”在本文中可互换使用，并且与涉及但不限于学习、记忆、意象创造、思考、意识、推理、空间能力、言语和语言技能、语言习得和判断注意力能力的任何心理过程或状态相关。认知在脑的多个区域，诸如海马、皮层和其他脑结构中形成。然而，假设长期记忆至少部分地存储于皮层中，并且已知感觉信息由特定皮层结构，即位于岛叶皮层内的味觉皮层获取、巩固和检索。
[0201]
在人类中，认知功能可以通过任何已知的方法来测量，例如但不限于，通过临床总体变化印象量表(cibic-plus量表)；简易智力状况检查(mini mental state exam，mmse)；神经精神症状问卷(neuropsychiatric inventory，npi)；临床痴呆评定量表(cdr)；剑桥自动化成套神经心理测试(cambridge neuropsychological test automated battery，cantab)或桑多兹老年临床评估(sandoz clinical assessment-geriatric，scag)。认知功能也可以使用成像技术间接测量，诸如正电子发射断层扫描(pet)、功能性磁共振成像(fmri)、单光子发射计算机断层扫描(spect)或允许人们测量脑功能的任何其他成像技术。
[0202]
影响患者的认知的一个或更多个过程的改善将意味着所述患者的认知功能的改善，因此在某些实施方案中，改善认知包括改善学习、可塑性和/或长期记忆。术语“改善”和“增强”可以可互换使用。术语“学习”涉及获取或获得新的、或者修改和强化现有的知识、行为、技能、价值观或偏好。术语“记忆”涉及信息被编码、存储和检索的过程。记忆具有三个可区分的类别：感觉记忆、短期记忆和长期记忆。
[0203]
术语“长期记忆”是指持续长时间段或无限时间段保存信息的能力。长期记忆包括两个主要部分：外显记忆(陈述性记忆)和内隐记忆(非陈述性记忆)。长期记忆通过记忆巩固来实现，记忆巩固是一类在最初获取记忆痕迹之后稳定记忆痕迹的过程。巩固分为两个特定过程，突触巩固和系统巩固，突触巩固发生在学习之后的最初几个小时内，在系统巩固中依赖于海马的记忆在几周到几年的时间段内变得独立于海马。
[0204]
术语“可塑性(plasticity)”涉及与脑随着学习而改变以及改变已经获取的记忆的能力相关的突触可塑性、脑可塑性或神经可塑性。反映可塑性的一个可测量的参数是记忆消失。
[0205]
本说明书的各方面部分地提供了施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体或本文公开的治疗性组合物。如本文使用的，术语“施用”是指向个体提供本文公开的免疫原性组合物或治疗性组合物的潜在地导致临床、治疗或实验上有益结果的任何递送机制。用于向个体施用本文公开的组合物的实际递送机制可以由本领域普通技术人员通过考虑多种因素来确定，所述因素包括但不限于，神经退行性疾病的类型、神经退行性疾病的位置、神经退行性疾病的原因、神经退行性疾病的严重程度、神经退行性疾病所期望的缓解程度、神经退行性疾病所期望的缓解持续时间、所使用的特定抗pd-l1抗体和/或治疗性组合物、所使用的特定抗pd-l1抗体和/或治疗性组合物的排泄率、所使用的特定抗pd-l1抗体和/或治疗性组
合物的药效学、治疗性组合物中所包含的其他化合物的性质、特定的施用途径、个体的特定特征、病史和风险因素，诸如，例如，年龄、体重、一般健康状况等或其任何组合。
[0206]
本文公开的组合物可以使用细胞摄取方法向个体施用。本文公开的组合物使用细胞摄取方法的施用包括，各种肠内或肠胃外方法，包括但不限于，任何可接受形式的口服施用，诸如，例如，片剂、液体、胶囊、粉末等；任何可接受形式的局部施用，诸如，例如，滴剂、喷雾剂、霜剂、凝胶或软膏；任何可接受形式的血管内施用，诸如，例如，静脉内注射、静脉内输注、动脉内注射、动脉内输注和导管滴注到脉管系统中；任何可接受形式的组织周围和组织内施用，诸如，例如，腹膜内注射、肌内注射、皮下注射、皮下输注、眼内注射、视网膜注射或视网膜下注射或硬膜外注射；任何可接受形式的囊内施用(intravesicular administration)，诸如，例如，导管滴注；以及通过放置装置，诸如，例如，植入物、贴剂、微丸、导管、渗透泵、栓剂、生物可溶蚀的递送系统、非生物可溶蚀的递送系统或其他植入的延长或缓慢释放系统。生物可降解聚合物和使用方法的示例性列表描述于例如handbook of biodegradable polymers(abraham j.domb等人，编著，overseas publishers association,1997)中。
[0207]
本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以足以治疗神经退行性疾病的量施用。在该实施方案的各方面，抗pd-l1抗体和/或治疗性组合物施用的量是足以降低与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状的量，或者是足以保护个体免受神经退行性疾病或病理影响的量。如本文使用的，术语“足够量”包括“有效量”、“有效剂量”、“治疗有效量”或“治疗有效剂量”，并且是指本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或治疗性组合物实现所期望治疗作用所必需的最小量，并且包括足以降低或抑制与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状的量。
[0208]
在该实施方案的各方面，有效量的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物使与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状降低或抑制，例如，至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在该实施方案的其他方面，有效量的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物使与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状降低或抑制，例如，至多10％、至多20％、至多30％、至多40％、至多50％、至多60％、至多70％、至多80％、至多90％或至多100％。在该实施方案的又其他方面，有效量的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物使与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状降低或抑制，例如，约10％至约100％、约10％至约90％、约10％至约80％、约10％至约70％、约10％至约60％、约10％至约50％、约10％至约40％、约20％至约100％、约20％至约90％、约20％至约80％、约20％至约70％、约20％至约60％、约20％至约50％、约20％至约40％、约30％至约100％、约30％至约90％、约30％至约80％、约30％至约70％、约30％至约60％或约30％至约50％。在该实施方案的仍其他方面，有效量的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物使与神经退行性疾病或病理相关的一种或更多种生理状况或症状降低或抑制持续例如至少一周、至少一个月、至少两个月、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少十个月、至少十一个月或至少十二个月。
[0209]
待向个体施用的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物
的实际有效量可以由本领域普通技术人员通过考虑多种因素来确定，所述因素包括但不限于，神经退行性疾病的类型、神经退行性疾病的位置、神经退行性疾病的原因、神经退行性疾病的严重程度、神经退行性疾病所期望的缓解程度、神经退行性疾病所期望的缓解持续时间、所使用的特定抗pd-l1抗体和/或治疗性组合物、所使用的特定抗pd-l1抗体和/或治疗性组合物的排泄率、所使用的特定抗pd-l1抗体和/或治疗性组合物的药效学、免疫原性或治疗性组合物中所包含的其他化合物的性质、所使用的特定的施用途径、个体的特定特征、病史和风险因素，诸如，例如，年龄、体重、一般健康状况等或其任何组合。此外，在使用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的重复施用的情况下，实际治疗有效量将还取决于多种因素，包括但不限于施用频率、本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的半衰期或其任何组合。本领域的普通技术人员已知的是，在向人类施用前，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性化合物的有效量可以从体外测定和使用动物模型的体内施用研究中推断出来。考虑到各种施用途径的不同效率，应预期所需有效量的广泛变化。例如，将预期口服施用通常比通过静脉内或玻璃体内注射施用要求更高的剂量水平。可以使用标准经验性优化途径调节这些剂量水平的变化，这是本领域的普通技术人员所熟知的。精确的有效剂量水平和模式优选地由主治医生考虑上述因素来确定。
[0210]
在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的有效量通常在约0.001mg/kg/天至约100mg/kg/天的范围内。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的有效量可以是，例如，至少0.001mg/kg/天、至少0.01mg/kg/天、至少0.1mg/kg/天、至少1.0mg/kg/天或至少5.0mg/kg/天。在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.001mg/kg/天至约0.01mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约0.1mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约1.0mg/kg/天、约0.001mg/kg/天至约5.0mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约0.1mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约1.0mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约5.0mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约1.0mg/kg/天、约0.1mg/kg/天至约5.0mg/kg/天或约1.0mg/kg/天至约5.0mg/kg/天。
[0211]
在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的有效量通常在约0.001mg/天至约100mg/天的范围内。在该实施方案的各方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的有效量可以是，例如，至少0.001mg/天、至少0.01mg/天、至少0.1mg/天、至少1.0mg/天、至少5.0mg/天、至少10mg/天、至少15mg/天、至少20mg/天、至少25mg/天、至少30mg/天、至少35mg/天、至少40mg/天、至少45mg/天或至少50mg/天。
[0212]
在该实施方案的其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.001mg/天至约10mg/天、约0.001mg/天至约15mg/天、约0.001mg/天至约20mg/天、约0.001mg/天至约25mg/天、约0.001mg/天至约30mg/天、约0.001mg/天至约35mg/天、约0.001mg/天至约40mg/天、约0.001mg/天至约45mg/天、约0.001mg/天至约50mg/天、约0.001mg/天至约75mg/天或约0.001mg/天至约100mg/天。在该实施方案的又其他方面，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的有效量可以在以下的范围内：例如，约0.01mg/天至约10mg/天、约0.01mg/天至约15mg/
period)”或“治疗时间段(period of treatment)”可互换使用，并且是指将本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物向被治疗个体施用期间的时期。治疗期不会导致治疗有效量的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物在整个治疗期内维持一致。如下文更详细讨论的，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗组合物的亚治疗水平在治疗期期间出现。治疗期可以是单次给药事件，或者可以是在一定时间段内发生的多次给药方案。
[0218]
术语“非治疗期(non-treatment session)”在本文中与术语“非治疗时间段(non-treatment period)”、“非治疗时间段(period of no treatment)”、“间隔期(interval session)”或“非治疗的间隔期(interval session of non-treatment)”可互换使用，并且是指本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗组合物不向被治疗的个体施用期间的时间段。在非治疗期期间，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的水平处于被治疗的个体中的亚治疗水平。如本文公开的，“非治疗期”与在治疗期期间的时间段内出现的构成多个给药方案的给药事件之间间隔的时间段是不同的事件。如果在治疗期期间施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物是重复施用，则非治疗期比治疗期期间这些重复施用之间的间隔时间段更长。
[0219]
剂量方案可以通过多种方式确定。例如，免疫抑制的水平可以通过以下被校准至针对治疗的每个患者的期望水平(个体化药物)：监测产生ifn-γ的白细胞的水平或活性或白细胞响应于单独刺激的增殖率，并且如根据监测结果确定经验地和个人地调整治疗期、施用频率和间隔期。
[0220]
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物，以实现半最大有效浓度(ec
50
)或更多，并且在治疗期期间将该ec
50
维持特定的时间段，然后在该时间点停止施用，以将本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的水平降低至低于亚治疗水平。将非治疗时间段维持特定的时间段和/或只要对认知的有益作用维持在高于治疗开始之前的水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平。在该实施方案的各方面，维持对认知的有益作用是以下：显示出高于治疗开始之前的认知水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平的例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％的改善。
[0221]
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物，以实现最小有效浓度(mec)或更多，并且在治疗期期间将该mec维持特定的时间段，然后在该时间点停止施用，以将本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的水平降低至低于亚治疗水平。将非治疗时间段维持特定的时间段和/或只要对认知的有益作用维持在高于治疗开始之前的水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平。在该实施方案的各方面，维持对认知的有益作用是以下：显示出高于治疗开始之前的认知水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平的例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％的改善。
[0222]
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物，以实现半最大抑制浓度(ic
50
)或更多，并且在治疗期期间将该ic
50
维持特定的时间段，然后在该时间点停止施用，以将本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的水平降低至低于亚治疗水平。将非治疗时间段维持特定
的时间段和/或只要对认知的有益作用维持在高于治疗开始之前的水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平。在该实施方案的各方面，维持对认知的有益作用是以下：显示出高于治疗开始之前的认知水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平的例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％的改善。
[0223]
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物，以实现50％或更多的靶占有率，并且在治疗期期间将该靶占有率维持特定的时间段，然后在该时间点停止施用，以将本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的靶占有率降低至低于亚治疗水平。将非治疗时间段维持特定的时间段和/或只要对认知的有益作用维持在高于治疗开始之前的水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平。在该实施方案的各方面，维持对认知的有益作用是以下：显示出高于治疗开始之前的认知水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平的例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％的改善。
[0224]
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物，以实现1
×
10-9
m或更多的血清浓度，并且在治疗期期间将该血清浓度维持特定的时间段，然后在该时间点停止施用，以将本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的血清浓度降低至低于亚治疗水平。将非治疗时间段维持特定的时间段和/或只要对认知的有益作用维持在高于治疗开始之前的水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平。在该实施方案的各方面，维持对认知的有益作用是以下：显示出高于治疗开始之前的认知水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平的例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％的改善。
[0225]
在某些实施方案中，治疗期包括向个体施用本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物，以实现0.15μg/ml或更多的血清浓度，并且在治疗期期间将该血清浓度维持特定的时间段，然后在该时间点停止施用，以将本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的血清浓度降低至低于亚治疗水平。将非治疗时间段维持特定的时间段和/或只要对认知的有益作用维持在高于治疗开始之前的水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平。在该实施方案的各方面，维持对认知的有益作用是以下：显示出高于治疗开始之前的认知水平或高于最后一次治疗期之前的认知水平的例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％的改善。
[0226]
在某些实施方案中，治疗期可以是单次施用，或者治疗期可以包括在规定的时间段期间给予的多次施用。在该实施方案的各方面，治疗期可以是在以下过程中给予的多次施用：例如，1天至1周之间、1天至2周之间、2天至2周之间、3天至2周之间、4天至2周之间、5天至2周之间、6天至2周之间、1周至2周之间、10天至2周之间。例如，治疗期可以包括在一周内给予的两次施用，诸如，例如，第二次施用在第一次施用之后1天、2天、3天、4天、5天或6天给予。作为另一种实例，治疗期可以包括全部在一周内给予的三次施用，诸如，例如，在前一次施用之后1天、2天或3天给予。作为另一种实例，治疗期可以包括全部在两周内给予的三次施用，诸如，例如，在前一次施用之后1天、2天、3天、4天或5天给予。作为另一种实例，治疗期可以包括全部在两周内给予的四次施用，诸如，例如，在前一次施用之后1天、2天、3天或4
天给予。
[0227]
在某些实施方案中，非治疗的间隔期可以在一周与六个月之间，例如，在以下之间：2周至4周、3周至4周、2周至5周、3周至5周、4周至5周、2周至6周、3周至6周、4周至6周、5周至6周、2周至2个月、3周至2个月、4周至2个月、5周至2个月、6周至2个月、7周至2个月、2个月至3个月、2个月至4个月、3个月至4个月、3个月至5个月、3个月至5个月、4个月至5个月、1周至6个月、2周至6个月、3周至6个月、4周至6个月、6周至6个月、2个月至6个月、3个月至6个月、4个月至6个月或5个月至6个月。在某些实施例中，非治疗的间隔期可以是1个月至2个月长、1个月至3个月长或2个月至3个月长。
[0228]
在治疗期期间，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗组合物的施用可以是单次施用或重复施用，例如，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物可以仅施用一次，并且然后紧接着随后是非治疗期，或者它可以每天一次、或每两天、三天、四天、五天或六天一次或每周一次施用，持续两周。这些频率可以基于本领域中常用的实践，并且最终可以由医生在临床试验中确定。可选地，在治疗期中重复施用的频率可以根据本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的性质进行调整。应当理解，当本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物在治疗期期间以相对低的频率施用时，例如每周一次持续两周，则该治疗期之后是非治疗间隔期，该非治疗间隔期长度长于治疗期期间重复施用之间的时间段(即，在该实例中长于一周)。在该实例中，在治疗期期间两次施用之间一周的暂停不被视为间隔期。
[0229]
如果治疗期由本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的单次施用组成，则剂量方案由非治疗间隔的长度决定，使得本文公开的修饰的抗-pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的单次施用之后是7天、8天、9天、10天、12天、14天、18天、21天、24天、28天或30天或更长的非治疗间隔，然后是下一个单次施用治疗期。特别地，剂量方案由单次施用组成，所述单次施用之间为非治疗的2周、3周或4周的非治疗间隔。此外，剂量方案可以由本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的单次施用组成，所述单次施用之间为非治疗的2周至4周、2周至3周或3周至4周的非治疗间隔。
[0230]
如果治疗期由多次施用组成，则剂量方案由非治疗间隔的长度决定，使得在一周内给予本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的多次施用之后是7天、10天、12天、14天、18天、21天、24天、28天或30天或更长的非治疗间隔，然后是下一个多次施用治疗期。特别地，剂量方案可以由一周内给予的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的多次施用组成，所述多次施用之间为非治疗的2周或3周或4周的非治疗间隔。此外，剂量方案可以由一周内给予的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的多次施用组成，所述多次施用之间为2周至4周、2周至3周或3周至4周的非治疗间隔。
[0231]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括在两周内给予的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的多次施用，随后是2周、3周或1个月、2个月、3个月或4个月或更长的非治疗间隔，然后是下一个多次施用治疗期。特别地，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括在两周内给予的本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的多次施用，所述多次施用之间为1个月、2个月、3个月或4个月的非治疗间隔。此外，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括在两周内给予的本文公
开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物的多次施用，所述多次施用之间为1个月至2个月、1个月至3个月、1个月至4个月、2个月至3个月、2个月至4个月或3个月至4个月的非治疗间隔。
[0232]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括单次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以实现1
×
10-9
m或更多的抗pd-l1抗体的血清浓度，并且在治疗期期间将该血清浓度维持约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，抗-pd-l1抗体的水平是亚治疗的。该治疗期之后是非治疗期，在非治疗期中本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清浓度处于亚治疗水平，并将非治疗时间段维持约10天至约30天，然后进行下一个治疗期。在治疗期期间，本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清浓度的降低可以主动或被动实现。
[0233]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括单次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以实现0.15μg/ml或更多的抗pd-l1抗体的血清浓度，并且在治疗期期间将该血清浓度维持约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，抗-pd-l1抗体的水平是亚治疗的。该治疗期之后是非治疗期，在非治疗期中本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清浓度处于亚治疗水平，并将非治疗时间段维持约10天至约30天，然后进行下一个治疗期。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清浓度的降低可以主动或被动实现。
[0234]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括单次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以在以下时间段内实现ec
50
、mec或ic
50
：约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，抗-pd-l1抗体的水平是亚治疗的。该治疗期之后是持续约10天至约30天的时间段的非治疗期，在非治疗期中本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的水平处于亚治疗水平，然后进行下一个治疗期。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的降低可以主动或被动实现。
[0235]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括单次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以在以下时间段内实现50％或更多的抗pd-l1抗体的靶占有率：约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，抗-pd-l1抗体的水平是亚治疗的。该治疗期之后是持续约10天至约30天的时间段的非治疗期，在非治疗期中本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的靶占有率处于亚治疗水平，然后进行下一个治疗期。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的靶占有率的降低可以主动或被动实现。
[0236]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括单次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以将ifn-γ的血清浓度增加至高于基础水平1倍或更多，并且在治疗期期间将该ifn-γ血清浓度维持约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，ifn-γ的血清浓度是亚治疗的。该治疗期之后是非治疗期，在非治疗期中ifn-γ的血清浓度处于亚治疗水平，并将非治疗时间段维持约10天至约30天，然后进行下一个治疗期。ifn-γ血清浓度的降低可以主动或被动实现。
[0237]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括单次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以将cxcl10的血清浓度增加至高于基
础水平1倍或更多，并且在治疗期期间将该cxcl10血清浓度维持约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，cxcl10的血清浓度是亚治疗的。该治疗期之后是非治疗期，在非治疗期中cxcl10的血清浓度处于亚治疗水平，并将非治疗时间段维持约10天至约30天，然后进行下一个治疗期。cxcl10血清浓度的降低可以主动或被动实现。
[0238]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括单次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以将记忆性t细胞群体增加高于基础水平50％或更多，并且在治疗期期间将该记忆性t细胞群体水平维持约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，记忆性t细胞群体水平是亚治疗的。该治疗期之后是非治疗期，在非治疗期中记忆性t细胞群体水平处于亚治疗水平，并将非治疗时间段维持约10天至约30天，然后进行下一个治疗期。记忆性t细胞群体水平的降低可以主动或被动实现。
[0239]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括多次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以实现1
×
10-9
m或更多的抗pd-l1抗体的血清浓度，并且在治疗期期间将该血清浓度维持约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，抗-pd-l1抗体的水平是亚治疗的。该治疗期之后是非治疗期，在非治疗期中本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清浓度处于亚治疗水平，并将非治疗时间段维持约10天至约30天，然后进行下一个治疗期。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清浓度的降低可以主动或被动实现。
[0240]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括多次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以实现0.15μg/ml或更多的抗pd-l1抗体的血清浓度，并且在治疗期期间将该血清浓度维持约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，抗-pd-l1抗体的水平是亚治疗的。该治疗期之后是非治疗期，在非治疗期中本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清浓度处于亚治疗水平，并将非治疗时间段维持约10天至约30天，然后进行下一个治疗期。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的血清浓度的降低可以主动或被动实现。
[0241]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括多次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以在以下时间段内实现ec
50
、mec或ic
50
：约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，抗-pd-l1抗体的水平是亚治疗的。该治疗期之后是持续约10天至约30天的时间段的非治疗期，在非治疗期中抗pd-l1抗体的水平处于亚治疗水平，然后进行下一个治疗期。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的降低可以主动或被动实现。
[0242]
作为另一种实例，剂量方案可以包括治疗期，该治疗期包括多次施用本文公开的修饰的抗pd-l1抗体和/或本文公开的治疗性组合物以在以下时间段内实现50％或更多的抗pd-l1抗体的靶占有率：约4天至约7天、约5天至约10天、约7天至约10天或约7天至约14天，在该时间点，抗-pd-l1抗体的水平是亚治疗的。该治疗期之后是持续约10天至约30天的时间段的非治疗期，在非治疗期中本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的靶占有率处于亚治疗水平，然后进行下一个治疗期。本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的靶占有率的降低可以主动或被动实现。
no:87。
[0248]
本说明书的各方面部分地公开了表达构建体。表达构建体包含本文公开的多核苷酸，该多核苷酸可操作地连接至表达载体，该表达载体可用于在细胞中或无细胞提取物中表达由本文公开的核酸序列编码的多肽。各种各样的表达载体可以用于表达编码修饰的抗pd-l1抗体的多核苷酸分子，包括但不限于，病毒表达载体；原核表达载体；真核表达载体，诸如，例如，酵母表达载体、昆虫表达载体和哺乳动物表达载体以及无细胞提取物表达载体。还应当理解，表达载体可以包含控制元件，诸如，例如，组成型、组织特异性、细胞特异性或诱导型启动子元件，增强子元件或两者。
[0249]
通常，本文公开的多核苷酸被亚克隆到表达载体中以创建表达构建体。在一些实施方案中，产生单独的表达构建体，其中一种表达构建体编码了编码本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的重链的多核苷酸，并且另一种表达构建体编码了编码本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的轻链的多核苷酸。在一些实施方案中，单个表达构建体编码本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的重链和本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的轻链两者。这样的单个表达构建体可以在编码本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的重链的核酸序列与编码本文公开的修饰的抗pd-l1抗体的轻链的核酸序列之间包含内部核糖体进入位点(ires)。在某些实施方案中，核苷酸序列本身或载体的核酸分子的核苷酸序列在编码重链的核苷酸序列与编码轻链的核苷酸序列之间编码病毒自我裂解2a肽。特别地，病毒自我裂解2a肽可以选自由以下组成的组：来自thosea asigna病毒(tav)的t2a、来自口蹄疫病毒(fmdv)的f2a、来自马鼻炎(equine rhinitis)a病毒(erav)的e2a和来自猪捷申病毒-1(ptv1)的p2a。
[0250]
本文公开的表达构建体可以通过例如转染或转导被瞬时地引入适当的宿主细胞中或稳定地引入适当的宿主细胞中并在其中维持，用于表达和正确组装本文公开的修饰的抗pd-l1抗体。稳定维持的表达构建体可以是染色体外的并自主复制，或者它们可以整合到细胞的染色体物质中且非自主地复制。然后，随后表达的修饰的抗pd-l1抗体可以被纯化、分离并检查其活性。用于重组产生抗体的程序和方法以及筛选活性的方法是本领域普通技术人员熟知的。
[0251]
本说明书的各方面还可以描述如下：
[0252]
1.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体与人类pd-l1特异性结合，其中所述修饰的抗pd-l1抗体具有一个或更多个氨基酸修饰，以相对于不具有所述一个或更多个氨基酸修饰的抗pd-l1抗体增强所述修饰的抗pd-l1抗体从血液中的清除率。
[0253]
2.根据实施方案1所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述修饰的抗pd-l1抗体还包含一个或更多个氨基酸修饰，以消除fc相关效应子功能。
[0254]
3.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体与人类pd-l1特异性结合，其中所述修饰的抗pd-l1抗体具有一个或更多个氨基酸修饰，以相对于不具有所述一个或更多个氨基酸修饰的抗pd-l1抗体增强所述修饰的抗pd-l1抗体从血液中的清除率，并且其中所述修饰的抗pd-l1抗体还包含一个或更多个氨基酸修饰，以消除fc相关效应子功能。
[0255]
4.根据实施方案1或3中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:38的重链，其中增强所述修饰的抗pd-l1抗体的清除率的所述一个或更
多个氨基酸修饰位于h315和h440处。
[0256]
5.根据实施方案2-4中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体还包含seq id no:38的重链，其中消除fc相关效应子功能的所述一个或更多个氨基酸修饰位于l239、l240和k327处。
[0257]
6.根据实施方案5所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44。
[0258]
7.根据实施方案1-6中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体还包含轻链，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3。
[0259]
8.根据实施方案7所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0260]
9.根据实施方案7或8所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链还包含轻链恒定区。
[0261]
10.根据实施方案1或3所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体包含seq id no:108的重链恒定结构域，其中增强所述修饰的抗pd-l1抗体的清除率的所述一个或更多个氨基酸修饰位于h315和h440处。
[0262]
11.根据实施方案2-4中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体还包含seq id no:108的重链恒定结构域，其中消除fc相关效应子功能的所述一个或更多个氨基酸修饰位于l239、l240和k327处。
[0263]
12.根据实施方案11所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链恒定结构域是seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57。
[0264]
13.根据实施方案10-12中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体还包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3；所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3。
[0265]
14.根据实施方案13所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链可变区是seq id no:2。
[0266]
15.根据实施方案13或14所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0267]
16.根据实施方案15所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链还包含轻链恒定区。
[0268]
17.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体与人类pd-l1特异性结合，所述修饰的抗pd-l1抗体包含重链和轻链，其中所述修饰的抗pd-l1抗体在所述重链中具有一个或更多个氨基酸修饰，以相对于不具有所述一个或更多个氨基酸修饰的抗pd-l1抗体增强所述修饰的抗pd-l1抗体从血液中的清除率。
[0269]
18.根据实施方案17所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述修饰的抗pd-l1抗体在所述重链中还包含一个或更多个氨基酸修饰，以消除fc相关效应子功能。
[0270]
19.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体与人类pd-l1特异性结合，所述修饰的抗pd-l1抗体包含重链和轻链，其中所述修饰的抗pd-l1抗体在所述重链中具有一个或更多个氨基酸修饰，以相对于不具有所述一个或更多个氨基酸修饰的抗pd-l1抗体增强所述修饰的抗pd-l1抗体从血液中的清除率，并且其中所述修饰的抗pd-l1抗体在所述重链中还包含一个或更多个氨基酸修饰，以消除fc相关效应子功能。
[0271]
20.根据实施方案17或19中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:38，并且其中增强所述修饰的抗pd-l1抗体的清除率的所述一个或更多个氨基酸修饰位于h315和h440处。
[0272]
21.根据实施方案18-20中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:38，并且其中消除fc相关效应子功能的所述一个或更多个氨基酸修饰位于l239、l240和k327处。
[0273]
22.根据实施方案21所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44。
[0274]
23.根据实施方案17-22中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3。
[0275]
24.根据实施方案23所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0276]
25.根据实施方案23或24所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链还包含轻链恒定区。
[0277]
26.根据实施方案17或19中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链包含seq id no:108的重链恒定结构域，并且其中增强所述修饰的抗pd-l1抗体的清除率的所述一个或更多个氨基酸修饰位于h315和h440处。
[0278]
27.根据实施方案18-20中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链包含seq id no:108的重链恒定结构域，并且其中消除fc相关效应子功能的所述一个或更多个氨基酸修饰位于l239、l240和k327处。
[0279]
28.根据实施方案27所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链恒定结构域是seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57。
[0280]
29.根据实施方案26-28中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体还包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3；所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3。
[0281]
30.根据实施方案29所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链可变区是seq id no:2。
[0282]
31.根据实施方案29或30所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0283]
32.根据实施方案31所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链还包含轻链恒定
no:7或seq id no:8的cdr3；并且所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3。
[0296]
45.根据实施方案44所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链可变区是seq id no:2。
[0297]
46.根据实施方案44或45所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0298]
47.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体与人类pd-l1特异性结合，所述修饰的抗pd-l1抗体包含重链和轻链，所述重链包含重链可变结构域和重链恒定结构域，所述重链恒定结构域包含下铰链区、ch2结构域和ch3结构域，所述轻链包含轻链可变结构域和轻链恒定结构域，其中所述修饰的抗pd-l1抗体在所述ch2结构域和/或所述ch3结构域中具有一个或更多个氨基酸修饰，以相对于不具有所述一个或更多个氨基酸修饰的抗pd-l1抗体增强所述修饰的抗pd-l1抗体从血液中的清除率。
[0299]
48.根据实施方案47所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述修饰的抗pd-l1抗体在所述下铰链区和/或所述ch2结构域中还包含一个或更多个氨基酸修饰，以消除fc相关效应子功能。
[0300]
49.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体与人类pd-l1特异性结合，所述修饰的抗pd-l1抗体包含重链和轻链，所述重链包含重链可变结构域和重链恒定结构域，所述重链恒定结构域包含下铰链区、ch2结构域和ch3结构域，所述轻链包含轻链可变结构域和轻链恒定结构域，其中所述修饰的抗pd-l1抗体在所述ch2结构域和/或所述ch3结构域中具有一个或更多个氨基酸修饰，以相对于不具有所述一个或更多个氨基酸修饰的抗pd-l1抗体增强所述修饰的抗pd-l1抗体从血液中的清除率，并且其中所述修饰的抗pd-l1抗体在所述下铰链区和/或所述ch2结构域中具有一个或更多个氨基酸修饰，以消除fc相关效应子功能。
[0301]
50.根据实施方案47或49中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:38，并且其中增强所述修饰的抗pd-l1抗体的清除率的所述一个或更多个氨基酸修饰位于h315和h440处。
[0302]
51.根据实施方案48-50中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:38，并且其中消除fc相关效应子功能的所述一个或更多个氨基酸修饰位于l239、l240和k327处。
[0303]
52.根据实施方案51所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44。
[0304]
53.根据实施方案47-52中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3。
[0305]
54.根据实施方案53所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0306]
55.根据实施方案47-49中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链包含seq id no:108的重链恒定结构域，并且其中增强所述修饰的抗pd-l1抗体的清除率的所述
一个或更多个氨基酸修饰位于h315和h440处。
[0307]
56.根据实施方案48-50中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链包含seq id no:108的重链恒定结构域，并且其中消除fc相关效应子功能的所述一个或更多个氨基酸修饰位于l239、l240和k327处。
[0308]
57.根据实施方案56所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链恒定结构域是seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57。
[0309]
58.根据实施方案55-57中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链可变区包含seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3；并且所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3。
[0310]
59.根据实施方案58所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链可变区是seq id no:2。
[0311]
60.根据实施方案58或59所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0312]
61.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体包含重链和轻链，所述重链包括包含seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区，和seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区；所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3，其中所述修饰的抗pd-l1抗体具有相对于未修饰的抗pd-l1抗体增强的从血液中的清除率；并且其中所述修饰的抗pd-l1抗体缺乏fc相关效应子功能。
[0313]
62.根据实施方案61所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链可变区是seq id no:2。
[0314]
63.根据实施方案61或62所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链恒定区是seq id no:54。
[0315]
64.根据实施方案63所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:41。
[0316]
65.根据实施方案61或62所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链恒定区是seq id no:55。
[0317]
66.根据实施方案65所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:42。
[0318]
67.根据实施方案61或62所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链恒定区是seq id no:56。
[0319]
68.根据实施方案67所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:43。
[0320]
69.根据实施方案61或62所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链恒定区是seq id no:57。
[0321]
70.根据实施方案69所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:44。
[0322]
71.根据实施方案61-70中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链还包含轻链恒定区。
[0323]
72.根据实施方案71所述的抗pd-l1抗体，其中所述轻链恒定区是κ轻链恒定区或λ
轻链恒定区。
[0324]
73.根据实施方案72所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述κ轻链恒定区是seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20。
[0325]
74.根据实施方案72所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述λ轻链恒定区是seq id no:26、seq id no:27、seq id no:28、seq id no:29、seq id no:30或seq id no:31。
[0326]
75.根据实施方案61-74中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0327]
76.根据实施方案61-75中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链是seq id no:21、seq id no:22、seq id no:23、seq id no:24、seq id no:25、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36或seq id no:37。
[0328]
77.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体包含seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44的重链和seq id no 21的轻链。
[0329]
78.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体包含seq id no:42的重链和seq id no 21的轻链。
[0330]
79.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体包含重链和轻链，所述重链包含seq id no:2的重链可变区和seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区；所述轻链包含seq id no 9的轻链可变区和seq id no:16、seq id no:17、seq id no:18、seq id no:19或seq id no:20的轻链恒定区。
[0331]
80.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体包含重链和轻链，所述重链包含seq id no:2的重链可变区和seq id no:55的重链恒定区；所述轻链包含seq id no9的轻链可变区和seq id no:16的轻链恒定区。
[0332]
81.根据实施方案1-80中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体具有以下的半衰期：约30小时至约36小时、约30小时至约42小时、约30小时至约48小时、约32小时至约36小时、约32小时至约42小时、约32小时至约48小时、约34小时至约36小时、约34小时至约42小时、约34小时至约48小时、约36小时至约42小时、约36小时至约48小时、约42小时至约48小时、约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天。
[0333]
82.根据实施方案1-81中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体在以下时间段内从血液中清除：约30小时至约36小时、约30小时至约42小时、约30小时至约48小时、约32小时至约36小时、约32小时至约42小时、约32小时至约48小时、约34小时至约36小时、约34小时至约42小时、约34小时至约48小时、约36小时至约42小时、约36小时至约48小时、约42小时至约48小时、约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天。
[0334]
83.根据实施方案1-82中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，所述修饰的抗pd-l1抗体占有其同源pd-1受体持续约30小时至约36小时、约30小时至约42小时、约30小时至约48小时、约32小时至约36小时、约32小时至约42小时、约32小时至约48小时、约34小时至约36小时、约34小时至约42小时、约34小时至约48小时、约36小时至约42小时、约36小时至约48小时、约42小时至约48小时、约1天至约2天、约1天至约3天、约1天至约4天、约1天至约5天、约1天至约6天、约1天至约7天、约2天至约3天、约2天至约4天、约2天至约5天、约2天至约6天、约2天至约7天、约3天至约4天、约3天至约5天、约3天至约6天、约3天至约7天、约4天至约5天、约4天至约6天、约4天至约7天、约5天至约6天、约5天至约7天或约6天至约7天。
[0335]
84.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体。
[0336]
85.根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体用于制备治疗神经退行性疾病的药物的用途。
[0337]
86.根据实施方案52-85所述的用途，其中所述神经退行性疾病包括与年龄相关的痴呆、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化、痴呆、帕金森病、亨廷顿病、原发性进行性多发性硬化；继发性进行性多发性硬化、皮质基底节变性、rett综合征、tau病变、视网膜退化紊乱；前部缺血性视神经病变；青光眼；葡萄膜炎；抑郁症；创伤相关应激或创伤后应激紊乱、额颞叶痴呆、路易体痴呆、轻度认知障碍、后部皮层萎缩、原发性进行性失语、进行性核上性麻痹或cns损伤。
[0338]
87.根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体用于制备治疗阿尔茨海默病的药物的用途。
[0339]
88.一种试剂盒，所述试剂盒包含根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体。
[0340]
89.一种药物试剂盒，所述药物试剂盒包含根据实施方案84中所定义的药物组合物。
[0341]
90.一种药物试剂盒，所述药物试剂盒包含根据实施方案85中所定义的药物。
[0342]
91.一种治疗神经退行性疾病的方法，所述方法包括向有相应需要的个体施用根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体。
[0343]
92.一种治疗神经退行性疾病的方法，所述方法包括向有相应需要的个体施用根据实施方案84中所述定义的药物组合物。
[0344]
93.一种治疗神经退行性疾病的方法，所述方法包括向有相应需要的个体施用根据实施方案85中所述定义的药物。
[0345]
94.根据实施方案91-93中任一项所述的方法，其中所述神经退行性疾病包括与年龄相关的痴呆、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化、痴呆、帕金森病、亨廷顿病、原发性进行性多发性硬化；继发性进行性多发性硬化、皮质基底节变性、rett综合征、tau病变、视网膜退化紊乱；前部缺血性视神经病变；青光眼；葡萄膜炎；抑郁症；创伤相关应激或创伤后应激紊乱、额颞叶痴呆、路易体痴呆、轻度认知障碍、后部皮层萎缩、原发性进行性失语、进行性核上性麻痹或cns损伤。
[0346]
95.根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体，用于在治疗神经退行性疾病中使用。
[0347]
96.根据实施方案95所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述神经退行性疾病包括与年龄相关的痴呆、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化、痴呆、帕金森病、亨廷顿病、原发性进行性多发性硬化；继发性进行性多发性硬化、皮质基底节变性、rett综合征、tau病变、视网膜退化紊乱；前部缺血性视神经病变；青光眼；葡萄膜炎；抑郁症；创伤相关应激或创伤后应激紊乱、额颞叶痴呆、路易体痴呆、轻度认知障碍、后部皮层萎缩、原发性进行性失语、进行性核上性麻痹或cns损伤。
[0348]
97.一种治疗阿尔茨海默病的方法，所述方法包括向有相应需要的个体施用根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体。
[0349]
98.一种治疗阿尔茨海默病的方法，所述方法包括向有相应需要的个体施用根据实施方案84中所述定义的药物组合物。
[0350]
99.一种治疗阿尔茨海默病的方法，所述方法包括向有相应需要的个体施用根据实施方案85中所述定义的药物。
[0351]
100.根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体，用于在治疗阿尔茨海默病中使用。
[0352]
101.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码来自实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体的重链的核酸序列或编码来自根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体的轻链的核酸序列。
[0353]
102.根据实施方案101所述的多核苷酸，其中编码所述重链的核酸序列是seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60、seq id no:61、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64或seq id no:65。
[0354]
103.根据实施方案101所述的多核苷酸，其中编码所述轻链的核酸序列是seq id no:82或seq id no:83。
[0355]
104.一种多核苷酸，所述多核苷酸为：seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60、seq id no:61、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64、seq id no:65、seq id no:74、seq id no:75、seq id no:76、seq id no:77、seq id no:78、seq id no:79、seq id no:80、seq id no:81、seq id no:82、seq id no:83、seq id no:86或seq id no:87。
[0356]
105.一种表达构建体，所述表达构建体包含编码来自根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体的重链的核酸序列。
[0357]
106.根据实施方案105所述的表达构建体，其中编码所述重链的核酸序列是seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60、seq id no:61、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64或seq id no:65。
[0358]
107.一种表达构建体，所述表达构建体包含编码来自根据实施方案1-83中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体的轻链的核酸序列。
[0359]
108.根据实施方案107所述的表达构建体，其中编码所述轻链的核酸序列是seq id no:82或seq id no:83。
[0360]
109.一种表达构建体，所述表达构建体包含seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60、seq id no:61、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64、seq id no:65、seq id no:74、seq id no:75、seq id no:76、seq id no:77、seq id no:78、seq id no:79、seq id no:80、seq id no:81、seq id no:82、seq id no:83、seq id no:86或seq id no:87。
[0361]
110.一种制备修饰的抗pd-l1抗体的方法，所述方法包括在宿主细胞中表达第一表达构建体和第二表达构建体，其中所述第一表达构建体由实施方案105或106定义，并且所述第二表达构建体由实施方案107或108定义。
[0362]
111.一种制备修饰的抗pd-l1抗体的方法，所述方法包括在宿主细胞中表达第一表达构建体和第二表达构建体，其中所述第一表达构建体包含seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60、seq id no:61、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64、seq id no:65、seq id no:74、seq id no:75、seq id no:76、seq id no:77、seq id no:78、seq id no:79、seq id no:80或seq id no:81，并且所述第二表达构建体包含seq id no:82、seq id no:83、seq id no:86或seq id no:87。
[0363]
112.根据实施方案110或111所述的方法，所述方法还包括纯化所述修饰的抗pd-l1抗体。
[0364]
113.根据实施方案110-112所述的方法，其中产生的所述修饰的抗pd-l1抗体由实施方案1-83中任一项定义。
[0365]
114.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体包含重链和轻链，所述重链包括包含seq id no:3或seq id no:4的cdr1、seq id no:5或seq id no:6的cdr2和seq id no:7或seq id no:8的cdr3的重链可变区，和seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区，所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区包含seq id no:10或seq id no:11的cdr1、seq id no:12或seq id no:13的cdr2和seq id no:14或seq id no 15的cdr3。
[0366]
115.根据实施方案114所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链可变区是seq id no:2。
[0367]
116.根据实施方案115所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述重链是seq id no:42、seq id no:43或seq id no:44。
[0368]
117.根据实施方案114-116中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链可变区是seq id no:9。
[0369]
118.根据实施方案114-117中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链还包含κ轻链恒定区。
[0370]
119.根据实施方案118所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述κ轻链恒定区是seq id no:16。
[0371]
120.根据实施方案114-119中任一项所述的修饰的抗pd-l1抗体，其中所述轻链是seq id no:21。
[0372]
121.一种修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体，所述修饰的抗程序性死亡配体1(pd-l1)抗体包含重链和轻链，所述重链包含seq id no:2的重链可变区和seq id no:55、seq id no:56或seq id no:57的重链恒定区；所述轻链包含seq id no:9的轻链可变区和seq id no:16的轻链恒定区。
[0373]
122.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据实施方案114-121中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体。
[0374]
123.一种药物试剂盒，所述药物试剂盒包含根据实施方案114-121中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体或根据实施方案122中所定义的药物组合物。
[0375]
124.根据实施方案114-121中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体、根据实施方案122中所定义的药物组合物或根据实施方案123中所定义的药物试剂盒，用于治疗阿尔茨海默病。
[0376]
125.根据实施方案114-121中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体或根据实施方案122中所定义的药物组合物在制备治疗阿尔茨海默病的药物中的用途。
[0377]
126.根据实施方案114-121中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体、根据实施方案122中所定义的药物组合物或根据实施方案123中所定义的药物试剂盒用于治疗阿尔茨海默病的用途。
[0378]
127.一种治疗阿尔茨海默病的方法，所述方法包括向有相应需要的个体施用根据实施方案114-121中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体、根据实施方案122中所定义的药物组合物、根据实施方案123中所定义的药物试剂盒或根据根据实施方案125中所定义的药物。
[0379]
128.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码来自根据实施方案114-121中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体的重链的核酸序列或编码来自根据实施方案114-121中任一项中所定义的修饰的抗pd-l1抗体的轻链的核酸序列。
[0380]
129.根据实施方案128所述的多核苷酸，其中编码所述重链的核酸序列包括seq id no:58、seq id no:59、seq id no:60、seq id no:61、seq id no:62、seq id no:63、seq id no:64或seq id no:65。
[0381]
130.根据实施方案128或129所述的多核苷酸，其中编码所述轻链的核酸序列包括seq id no:82或seq id no:83。
[0382]
131.一种表达构建体，所述表达构建体包含编码来自根据实施方案128或129中所定义的修饰的抗pd-l1抗体的重链的核酸序列。
[0383]
132.一种表达构建体，所述表达构建体包含编码来自根据实施方案128或130中所定义的修饰的抗pd-l1抗体的轻链的核酸序列。
[0384]
133.一种制备修饰的抗pd-l1抗体的方法，所述方法包括在宿主细胞中表达第一表达构建体和第二表达构建体，其中所述第一表达构建体由实施方案131定义，并且所述第二表达构建体由实施方案132定义。
[0385]
134.根据实施方案133所述的方法，其中产生的所述修饰的抗pd-l1抗体由实施方案114-121中任一项定义。
实施例
[0386]
以下非限制性实例被提供仅用于说明性目的，以便有助于更完整地理解现在设想的代表性实施方案。这些实施例不应解释为限制在本说明书中描述的任何实施方案，包括与本文公开的抗体、治疗性组合物或方法及用途相关的那些。
[0387]
在本文描述的所有研究中，采用了两种不同的动物模型，用于阿尔茨海默病的5xfad小鼠模型和用于痴呆的dm-htau小鼠模型。5xfad转基因小鼠表达具有swedish(k670n、m671l)、florida(i716v)和london(v717i)家族性阿尔茨海默病(fad)突变的突变体人类app(695)，以及携带两个fad突变m146l和l286v的人类ps1。5xfad小鼠重现阿尔茨海默病的主要特征，即，淀粉样疾病、脑部炎症和神经元损失(oakley等人，2006)。在5xfad小
鼠中，从5至6个月鼠龄开始使用放射臂水迷宫(rawm)可以检测到相对于年龄匹配的野生型(wt)小鼠降低的海马依赖性空间学习/记忆表现(puzzo等人，2014)。
[0388]
dm-htau模型是表达具有与人类中额颞叶痴呆的严重表型相关的两个突变k257t/p301s(双突变体，dm)的人类tau(htau)基因的转基因小鼠。这些小鼠发展神经元纤维缠结(nft)，nft是宽范围tau病变(包括阿尔茨海默病和其他神经退行性疾病)的特征。这些小鼠中的病理特征包括认知缺陷、神经炎症、神经胶质细胞激活、和tau蛋白磷酸化以及聚集的tau在大脑中的积累(rosenmann等人，2008)。在dm-htau小鼠中，降低的学习技能通过使用t-迷宫自发性改变测试(t-maze spontaneous alteration test)测试行为表现来测量。学习技能的下降通常从7个至8个月鼠龄开始检测到。测定包括动物在具有3个臂的t-迷宫中的适应，所述3个臂中一个臂是关闭的(新的)。健康的小鼠偏好访问不熟悉的空间，因此，在开放关闭的臂后，野生型(wt)动物偏好进入新臂中，并且因此在新臂中花费总时间的多于60％(120秒中平均有80秒)。相比之下，dm-htau小鼠没有显示出对新臂的偏好(每个臂约占总时间的约30％)。
[0389]
实施例1
[0390]
抗pd-l1抗体活性促进单核细胞来源的巨噬细胞进入病变脑实质以使神经源性疾病消退
[0391]
单核细胞在病理条件下被募集至组织，在那里它们分化为巨噬细胞或树突细胞(dc)。已经显示它们在针对病原体、肿瘤细胞的免疫防御中是不可或缺的，并且如过去十年中显示的，在使神经退行性疾病消退中也是不可或缺的。为了测试抗pd-l1治疗的有益作用是否依赖于单核细胞向脑中的归巢(homing)，我们利用了以下事实：即，单核细胞向组织(包括脑)的运输依赖于cc-趋化因子配体2(ccl2；也称为mcp1)，ccl2促进ly6chi单核细胞从骨髓向组织的迁移。已知，针对ccr2的中和抗体损害单核细胞来源的巨噬细胞向cns归巢以及脊髓损伤后的修复。
[0392]
为了评估单核细胞来源的巨噬细胞在由抗pd-l1诱导的修复过程中的作用，将dm-htau小鼠每3天一次注射抗ccr2抗体(克隆mc21)，从施用pd-l1抗体之前3天开始，直至pd-l1抗体处理后的第12天(图1a)。在抗pd-1处理后，单核细胞归巢至脑，并且其数目在处理后2周时相对于1周时更高。在该实验中，纳入5组动物：1)野生型小鼠；2)用1.5mg大鼠igg2b抗klh抗体对照处理的dm-htau；3)用1.5mg大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)处理的dm-htau；4)仅用抗ccr2抗体(mc21)重复处理的dm-htau；和5)用抗ccr2(mc21)和抗pd-l1抗体两者处理的dm-htau。处理后一个月，对所有小鼠在三种独立范式(t-迷宫(图1c)、y-迷宫(图1d)和新物品识别(nor)(图1e))中的认知表现进行评分。进行三个单因素anova来分析行为学数据。在第一次施用之前一周，使用t-迷宫对动物进行预测试，以便评估它们在任何治疗性干预之前的认知表现(图1b)。
[0393]
对于每项认知测试，都检测到了用抗pd-l1抗体处理的显著主要作用(y-迷宫：f(4,52)＝12.48，p》0.0001；t-迷宫：f(4,56)＝9.068，p《0.0001：nor：f(4,52)＝12.48，p《0.0001)。为了评估实验组之间的显著差异，对每个行为测试进行了tukey多重比较检验。显著差异表示为*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。数据显示，抗ccr2抗体消除了抗pd-l1疗法的作用。此外，抗ccr2抗体处理选择性地降低仅单核细胞水平，而不降低血液和脾中的其他t细胞/白细胞群体(图2a-图2d)。这些结果表明抗ccr2抗体通过选择性降低单核细胞水平
而消除了抗pd-l1疗法的作用。
[0394]
为了测试抗pd-l1处理后免疫细胞向脑的运输是否增强，通过流式细胞术分析来自dm-htau小鼠的脑实质组织中cd45
高
/cd11b
高
浸润性髓系细胞的存在。该群体主要包括浸润性细胞，与代表驻留小胶质细胞的cd45
低
cd11b
低
或中间群体不同。将用大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)(n＝10)或作为对照的大鼠igg2b抗klh抗体(n＝16)处理之后2周的相同小鼠的脑切下。从这些脑中收获细胞，并且使用萦光染料标记的单克隆抗体brilliant-violet 421缀合的抗cd45抗体、pe缀合的抗cd11b抗体、fitc缀合的抗cd11b抗体和apc缀合的抗ly6c抗体通过免疫组织化学染色。细胞在lsrii血细胞计数器(bd biosciences)上使用flowjo软件进行分析(图3a)。在每个实验中，使用每个组织的相关的阴性对照组、阳性对照组和单染色样品来鉴定感兴趣的群体并排除其他群体。汇集来自两个独立实验的结果。数据显示为平均值
±
s.e.m.；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001。对脑cd45
高
/cd11b
高
细胞的定量分析展示，相对于用大鼠igg2b抗klh抗体对照处理的dm-htau小鼠，用抗pd-l1抗体处理的dm-htau小鼠的脑中浸润性cd45
高
/cd11b
高
细胞显著增加(图3b)。结果表明，抗pd-l1处理促进单核细胞来源的巨噬细胞(cd45
高
/cd11b
高
)向脑实质的募集。
[0395]
为了确认基于细胞谱系以及cd45和cd11b的高表达进行的观察，将以上实验用骨髓(bm)嵌合小鼠进行重复，其中供体bm细胞取自具有gfp标记的造血细胞的小鼠。为了产生这样的嵌合，在bm移植之前，将受者dm-htau小鼠用致死剂量的辐射来调节，其中辐射束靶向身体下部而避开头部。在嵌合性建立后，用大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)(n＝4)或大鼠igg2b抗klh抗体对照(n＝6)处理动物。在施用抗体2周之后对脑进行分析。通过流式细胞术分析揭示，在cd45
高
cd11b
高
细胞中，约50％的细胞是gfp

，这与嵌合性的程度一致，并且确认它们的身份是浸润性单核细胞，而不是激活的驻留小胶质细胞(图4a)。在cd45
低
cd11b

细胞中没有观察到gfp

细胞。值得注意的是，仅gfp

cd45

cd11b

髓系细胞被门控；未分析为gfp

cd45

cd11b-的bm来源的细胞。相对于igg处理的对照，用抗pd-l1抗体处理导致动物中gfp

cd45
高
cd11b
高
细胞的频率增加约3倍(图4b)。值得注意的是，这个数目低估了归巢巨噬细胞的数目，因为嵌合性是不完整的，并且因此约50％的浸润性细胞没有被gfp标记。
[0396]
将来自同一实验的其他小鼠的脑切下并且处理用于免疫组织化学，这揭示了在抗pd-l1处理的脑的脑实质(主要在皮层)中存在gfp

iba-1

髓系细胞(图5a)。还对来自相同动物的脑切片进行抗炎细胞因子il-10染色，并且观察到其与浸润性单核细胞来源的巨噬细胞共定位，但不与iba-1

gfp-小胶质细胞共定位(图5b)。
[0397]
综上所述，这些结果表明，在慢性神经退行性疾病的条件下，全身性免疫激活促进外周单核细胞来源的巨噬细胞进入病变的脑。这些实验进一步表明，病变的脑实质中的单核细胞来源的巨噬细胞可以有助于局部炎症的消退，并且促进去除细胞碎片和清除错误折叠和聚集蛋白的病理构象所需要的局部吞噬活性。
[0398]
实施例2
[0399]
抗pd-l1抗体处理改善认知表现并减轻脑疾病
[0400]
本实施例描述了在ad的5xfad小鼠模型和痴呆的dm-h-tau小鼠模型中展示抗pd-l1处理在改善认知表现和脑疾病方面有效的实验。
[0401]
在一系列实验中，使用5xfad小鼠模型来评估抗pd-l1抗体处理是否改善认知表
现。在5xfad小鼠中，从5至6个月鼠龄开始可以使用放射臂水迷宫(rawm)检测到相对于年龄匹配的野生型(wt)小鼠降低的海马依赖性空间学习/记忆表现。将雄性和雌性5xfad小鼠(平均群组鼠龄为6个月)用0.1mg/小鼠(n＝8)、0.5mg/小鼠(n＝9)或1.5mg/小鼠(n＝9)单剂量注射大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)或者1.5mg/小鼠(n＝9)大鼠igg2b抗klh抗体对照(ltf-2克隆；bioxcell)来处理(图6a)。年龄匹配的野生型(wt)小鼠被用作另外的对照组(n＝10)。显著性如下计算：使用双因素重复测量anova，随后是dunnett事后多重比较检验。虽然与用同种型对照抗体处理(对照动物)相比，0.1mg的抗pd-l1抗体对认知表现没有任何作用，但相对于对照动物，0.5mg和1.5mg两个剂量的抗pd-l1抗体在5xfad小鼠中都显示出显著的有益作用(图6b)。治疗作用在抗体施用后一个月时是显著的，并且在处理后2个月时下降(图6c)。相对于用0.5mg/小鼠处理的小鼠，用1.5mg/小鼠处理的5xfad小鼠中显示出略微更好的表现(图6b-图6c)。
[0402]
为了检查抗pd-l1抗体处理对脑疾病的作用，将来自5xfad小鼠的脑在研究阶段结束时(处理后2个月)通过免疫组织化学进行分析。在灌注之后将脑取出，收集6μm冠状切片，并且将每只小鼠的遍及感兴趣区域(齿状回或大脑皮层)的4-5个不同预定深度处的5个切片进行胶质细胞原纤维酸性蛋白(gfap)免疫染色。对阳性染色像素的基于直方图的划分(histogram-based segmentation)使用image-pro plus软件(media cybernetics,bethesda,md,usa)来进行。将划分算法手动应用于每个图像，计算手动选择的齿状回区域的尺寸，并且在其中定位所有表达gfap萦光的细胞。然后，该算法测量检测到的细胞的总面积(图7a)、它们的萦光强度(图7b)和大于1000个像素的细胞的数目(图7c)。计算如下：“面积/面积”是所有检测到的gfap

细胞的面积除以齿状回的总选择面积；并且“ctcf”是针对整个齿状回的平均萦光进行校正的检测到的细胞的平均萦光。以对处理组身份不知情的方式进行定量。使用星形胶质细胞增生和神经炎症的标志物进行的gfap免疫染色分析显示出降低星形胶质细胞增生方面的明显的治疗作用，这种作用在迟至单次抗体施用后8周被观察到(图7a-图7c)。
[0403]
在另一系列实验中，使用dm-htau小鼠模型来评估抗pd-l1抗体处理是否改善认知表现。将雄性和雌性dm-htau小鼠(平均群组鼠龄为9个月)用0.1mg/小鼠(n＝7)、0.5mg/小鼠(n＝9)或1.5mg/小鼠(n＝9)单剂量注射大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)或者1.5mg/小鼠(n＝10)大鼠igg2b抗klh抗体(克隆ltf-2；bioxcell)来处理(图8a)。年龄匹配的野生型(wt)小鼠被用作另外的对照组(n＝10)。认知表现使用t-迷宫测定来评估。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher事后多重比较检验。如同在5xfad小鼠中一样，发现抗pd-l1处理在1.5mg/小鼠或0.5mg/小鼠的单次施用后对dm-htau小鼠是有效的，但在0.1mg/小鼠的施用后无效(图8b)。
[0404]
为了检查单次抗体施用后治疗对行为作用的持续时间，将dm-htau小鼠用两个有效剂量(0.5mg/小鼠或1.5mg/小鼠)或大鼠igg2b抗klh抗体对照来处理，并且在单次抗体施用之后1个月和2个月通过t-迷宫测定来评估。将dm-htau小鼠用0.5mg/小鼠(n＝6)或1.5mg/小鼠(n＝5)单剂量注射来处理，并且年龄匹配的野生型(wt)小鼠用作对照组(n＝10)。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher事后检验。治疗作用在注射0.5mg/小鼠或1.5mg/小鼠剂量后1个月时被观察到(图9a)。在处理之后1个月观察到的对行为的作用是瞬时性的，在注射后2个月时，在抗pd-l1与同种型对照处理的动物之间不能观察到行
为表现中的显著差异(图9b)。
[0405]
此外，抗pd-l1抗体处理对脑疾病的作用在实验阶段结束时(注射之后2个月)通过磷酸化tau的免疫组织化学染色在相同的dm-htau小鼠中进行检查。将用有效或无效剂量的抗pd-l1抗体(分别为0.1mg/小鼠、0.5mg/小鼠或1.5mg/小鼠)处理的dm-htau小鼠安乐死，并且对其大脑进行处理，并且通过免疫组织化学染色分析海马c1区和ca3区中的at-180(磷酸化tau thr231)免疫反应性。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher精确检验。对来自dm-htau小鼠的脑切片的免疫组织化学分析揭示，在抗pd-l1阻断后，海马ca1区和ca3区中的at-180表位染色的免疫反应性与igg同种型对照组相比降低(图10)。这些结果揭示了抗pd-l1对dm-htau小鼠中海马tau磷酸化的剂量响应依赖性作用。
[0406]
然后在dm-htau小鼠中检查促炎细胞因子il-1β的水平，因为先前将脑实质中il-1β水平的升高与痴呆鼠模型中的认知下降相联系。使用基于fret的免疫测定，在未处理的dm-htau小鼠(n＝3)、用1.5mg/小鼠的抗pd-l1抗体(n＝6)或用1.5mg/小鼠的大鼠igg2b抗klh抗体(n＝6)处理的dm-htau小鼠和野生型(wt)同窝小鼠(n＝6)(平均群组鼠龄为9个月)中测量海马il-1β蛋白平均水平的改变(针对在每个匀浆中测量到的mg蛋白归一化)。使用单因素anova和fisher精确检验计算显著性。
[0407]
来自用抗pd-l1抗体或大鼠igg2b抗klh抗体对照处理的dm-htau小鼠的脑切片的分析揭示，与大鼠igg2b抗klh抗体对照相比，用抗pd-l1抗体处理后，脑实质中的il-1β水平减少(图11a-图11b)。此外，发现il-1β免疫反应性主要与表达gfap的细胞(星形胶质细胞的标志物)共定位，但不与髓系细胞标志物iba-1(包括小胶质细胞和单核细胞来源的巨噬细胞)共定位(图11c)。
[0408]
为了定量抗pd-l1抗体处理减少dm-htau小鼠脑中il-1β水平的能力，使用四组小鼠重复实验，包括留置未处理的dm-htau和野生型(wt)同窝小鼠，与用igg对照抗体处理或用抗pd-l1抗体处理的dm-htau进行比较。在验证对行为的作用(在处理启动后1个月进行测试)后，对小鼠进行灌注并将其脑切下，其中每个脑的一半用于从海马和皮层制备单独的蛋白提取物，而来自每个脑的另一脑半球被处理用于组织化学。结果表明，相对于年龄匹配的野生型同窝小鼠，在dm-htau小鼠的海马中发现显著更高水平的il-1β，并且相对于未处理或iggb处理的dm-htau小鼠，抗pd-l1抗体处理后il-1β水平显著降低(图11d)。此外，线性回归分析揭示了在这些动物中行为结果与il-1β水平之间的相关性(图11e)。
[0409]
使用抗体阻断pd-1/pd-l1的有益作用还通过评估脑中炎性细胞因子谱的改变来评价。基因tnf-a；il-6、il-12p40和il-1β的mrna表达水平的定量确定，在从用igg对照(n＝6)、抗pd-1(n＝6)或抗pd-l1(n＝4)处理之后1个月的dm-htau小鼠分离的海马中通过rt-qpcr来测量。使用单因素anova和fisher精确检验计算显著性。定量rt-qpcr揭示，相对于igg处理的对照组，抗pd-1和抗pd-l1处理两者都导致炎性细胞因子基因tnf-a(图11f)、il-6(图11g)、il-12p40(图11h)和il-1β(图11i)的表达水平的降低。
[0410]
综上所述，这些结果展示，在ad和痴呆的小鼠模型中，以0.5mg/小鼠或1.5mg/小鼠而不是以0.1mg/小鼠的剂量单次施用抗pd-l1抗体后，显示出在认知结果和脑疾病方面的功效。
[0411]
实施例3
[0412]
抗pd-l1抗体的药代动力学和药效学
[0413]
为了了解抗pd-l1抗体的药代动力学，将野生型小鼠注射不同剂量的抗pd-l1抗体，以确定该抗体的半衰期。雄性c57bl/6j小鼠i.p.注射一次0.1mg/小鼠(n＝3)、0.5mg/小鼠(n＝3)或1.5mg/小鼠(n＝3)的大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)的单剂量注射剂。在注射后的不同时间点收集血清，并且使用elisa定量抗pd-l1抗体的血清水平。pk研究的结果展示，每个处理剂量的抗pd-l1抗体的半衰期为约24小时(表3；图12)。
[0414][0415][0416]
表达pd-l1的细胞上的抗pd-l1抗体的受体占有阻断了pd-1与其配体的相互作用，这中和了它们的抑制活性，从而导致pd-1 效应记忆性t细胞的更高水平。因此，响应于抗体施用，在单次注射0.1mg/小鼠、0.5mg/小鼠或1.5mg/小鼠的大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体后的不同时间点，检查血液cd3

t淋巴细胞上的受体占有率和pd-1

效应记忆性t细胞(pd-1

记忆性t细胞)的百分比。为了鉴定血清中抗体的最小有效浓度，将血清中抗pd-l1抗体的浓度与血液t淋巴细胞上的受体占有率相关联。还检查了处理对血液中pd-1

记忆性t细胞水平作用的药效学。将雄性和雌性5xfad小鼠及野生型(wt)小鼠(平均群组鼠龄为6个月)用不同剂量的大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2；bioxcell)或大鼠igg2b抗klh抗体对照(克隆ltf-2；bioxcell)进行处理。在注射后的不同时间点(第1天、第5天、第7天或第10天)从小鼠提取血液，并制备用于流式细胞术分析。将每个样品等分到两个管中，一个管用大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体在冰上体外饱和30min(由此用抗pd-l1抗体饱和所有pd-l1分子)并且另一个管用大鼠igg2b抗klh抗体对照在冰上体外饱和30min。然后将细胞染色用于流式细胞术，以检测cd3 细胞(t细胞)和与抗pd-l1结合的pd-l1受体(使用抗大鼠igg2b抗体)。受体占有率通过结合在cd3 t细胞上的大鼠igg2b抗klh抗体的平均萦光强度的差异比率来评价，由此将每个样品与其自身的抗pd-l1饱和样品的最大受体占用率的对照进行比较。图上的每个点表示不同小鼠的血液样品。第1天和第10天的数据包括野生型(wt)小鼠，并且第5天和第10天包括5xfad小鼠。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher多重比较检验。
[0417]
抗pd-l1抗体在cd3

t淋巴细胞上的完全靶占有率在24小时时被观察到，并且持续直到所有剂量的抗体给药后第5天，并且全都达到高于0.15μg/ml(10-9
m)的血清浓度。受体占有率水平逐渐降低，恢复至处理前水平，伴随地血清中抗体浓度降至约1nm。与此一致，0.1mg/小鼠和0.5mg/小鼠处理组的动物分别在处理后7天和10天时恢复至受体占有率的基线水平。给药1.5mg/小鼠的动物组在给药后第10天显示出高于60％的受体占有率和0.5μg/ml(约3
×
10-8
m)的血清抗体浓度(图13)。
[0418]
在另一系列实验中，将雄性和雌性5xfad小鼠及野生型(wt)小鼠(平均群组鼠龄为6个月)用不同剂量(在x轴上描述)的大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2；bioxcell)或大鼠igg2b抗klh抗体对照(克隆ltf-2；bioxcell)进行处理。在注射后的不同时间点(第1天、第5天、第7天或第10天)从小鼠提取血液，并且制备用于流式细胞术分析。将
细胞针对表面标志物cd3、cd4、cd44和pd-1染色，并且通过流式细胞术分析。第1天和第10天的数据包括野生型(wt)小鼠，并且第5天和第10天包括5xfad小鼠。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher多重比较检验。
[0419]
使用所有测试的处理剂量，观察到pd-1

记忆性t细胞的水平升高，但是具有不同的动力学：在注射后第1天(高抗体血清浓度和完全受体占有率的时间点)，与处理前水平相比，没有观察到这些细胞的百分比改变(图14)。使用所有剂量，在处理后第5天观察到pd-1 记忆性t细胞水平的显著升高。对pd-1 记忆性t细胞水平的影响遵循观察到的对受体占有率影响的动力学。这与对以下一系列事件所提出的作用机制一致：从外周中的受体占有率开始，持续释放最近激活的t细胞(其在淋巴结中处于抑制性调节)，并且继而激活脉络丛，作为单核细胞向脑归巢的通道。值得注意的是，虽然cns中对认知和脑疾病的有益作用持续了1至2个月之间(以上描述的体内研究)，但外周中的治疗作用对受体占有率和pd-1 记忆性t细胞水平的作用在抗体施用后分别持续了7至10天之间。
[0420]
这表明为了在ad中实现有益作用，需要瞬时阻断pd-1/pd-l1途径，这与癌症疗法相反，在癌症疗法中，要求连续的高受体占有率来获得最佳有益作用。
[0421]
为了解决对抗体的延长暴露将更有效还是将更持久的问题，通过重复施用抗体以便在延长的时间段内维持血清中高于1nm的抗体浓度并且从而维持高受体占有率延长来人工延长抗pd-l1抗体的暴露时间。基于抗体的pk谱，最初施用1.5mg/小鼠的浓度，随后每72小时注射1mg/小鼠，连续5次。使用野生型小鼠的卫星组(satellite group)以这种重复给药设置来确定pk谱。将雄性c57bl/6j小鼠i.p.注射0.1mg/小鼠(n＝3)、0.5mg/小鼠(n＝3)或1.5mg/小鼠(n＝3)的大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)的单剂量注射剂，或在时间零点注射1.5mg/小鼠，随后每72小时1mg/小鼠的注射剂(在图15中的图的上部通过黑色箭头指示)。在注射后的不同时间点收集血清，并且使用elisa定量抗pd-l1抗体的血清水平。该实验测量的抗pd-l1抗体的血清水平示于图15中。
[0422]
在抗pd-l1抗体处理开始后一个月和两个月，在放射臂水迷宫中评估处理对认知表现的作用揭示，通过重复给药将抗体在血清中的暴露时间延长至约17天与较短的暴露时间相比在对认知表现的作用方面没有显示出优势。相反，在处理启动后一个月时，延长暴露不如较短暴露有益(图16)。延长暴露时间不仅没有显示出优势，而且略为不如较短暴露有效。因此得出结论，需要瞬时暴露和相对长时间段的“无抗体”作为阿尔茨海默病中抗体作用机制的一部分。因此，抗体的物理特性，包括其对pd-l1的高亲和力和独占性(exclusivity)以及快速清除率对其有益活性至关重要，即缓慢的清除率可能会对治疗功效产生负面影响。
[0423]
许多因素可以影响抗体从血清中的清除，其中主要决定因素是fcrn介导的再循环。通过fc工程化，igg-fcrn相互作用可以用于产生多种具有显著增强的从循环中清除的治疗性抗体。除了功效上的优势外，预期暴露于抗体的持续时间相对于未暴露的时间段越短，引发免疫相关不良作用的概率越低。重要的是要注意，在用抗pd-l1抗体治疗并经历免疫相关不良事件的癌症患者中，大多数不良事件通过停止治疗而消退。因此，间隔治疗(包括短时间段暴露于抗体，随后是相对长时间段不暴露)预期比基于连续暴露的方案具有更好的安全性谱。
[0424]
实施例4
[0425]
修饰的抗人类pd-l1抗体阿特珠单抗的分析
[0426]
为了产生具有增强的从血液的清除率、消除fc相关效应子功能和改善安全性谱、同时保持对神经退行性疾病改变的治疗功效的抗pd-l1抗体，开发了抗pd-l1的氨基酸变体，其具有相同的可变区，但在fc重链上具有被设计为增加抗体清除率和消除fc相关效应子功能的氨基酸改变。在阿尔茨海默病和痴呆的小鼠模型中检查了这些变体的有益作用。
[0427]
产生了重组人类抗pd-l1抗体的四种变体，所述变体包含人源化抗pd-l1单克隆抗体阿特珠单抗(atz；genentech)的可变区和人类igg1骨架，所述人类igg1骨架在重链中包含以下氨基酸取代：1)变体1-atz，人类igg1 fc效应子无效(l235a、l236a和k323a取代；根据对所有抗体通用的kabat编号系统的l234a、l235a和k322a)；2)变体2-atz，人类igg1fc效应子无效取代加h311a取代(根据对所有抗体通用的kabat编号系统的h310a)；3)变体3-atz，人类igg1 fc效应子无效取代加h436q取代(根据对所有抗体通用的kabat编号系统的h335q)；和4)变体4-atz，人类igg1 fc效应子无效取代加h311a和h436q取代(根据对所有抗体通用的kabat编号系统的h310a和h435q)。
[0428]
这些抗pd-l1变体抗体被设计为包含人类抗pd-l1抗体阿特珠单抗的轻链可变区和重链可变区，以及包含氨基酸取代的来自人类igg1重链的重链恒定区的igg1骨架。进行包含l235a、l236a和k323a的第一组取代，以通过降低/消除fc效应子功能活性来降低/消除抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)。进行包含h311a和/或h436q的第二组取代，以通过降低抗体与fcrn受体的相互作用来加速抗体从循环中清除。重链和轻链表达构建体通过标准基因合成和克隆方法产生(表4)。未改变的阿特珠单抗抗体具有seq id no:98的重链氨基酸序列(包含重链可变区seq id no:94和重链恒定区seq id no:99)和seq id no:97的轻链氨基酸序列(包含轻链可变区seq id no:95和轻链恒定区seq id no:96)。变体1-atz(fc效应子无效)具有seq id no:100的重链氨基酸序列(包含重链可变区seq id no:104)，变体2-atz(fc效应子无效-h311a)具有seq id no:101的重链氨基酸序列(包含重链可变区seq id no:105)，变体3-atz(fc效应子无效-h436q)具有seq id no:102的重链氨基酸序列(包含重链可变区seq id no:106)，并且变体4-atz(fc效应子无效-h311a h436q)具有seq id no:103的重链氨基酸序列(包含重链可变区seq id no:107)。
[0429][0430][0431]
通过常规共转染hc和lc表达质粒在瞬时hek293系统中表达抗体。将抗体通过标准蛋白a捕获和尺寸排阻层析从表达培养上清液中纯化。抗体纯度通过分析型sec-hplc和sds-page确定，并且浓度通过uv280吸收使用计算的摩尔消光系数来测量。
[0432]
人类抗b12抗体用作人类igg1同种型对照。除了命名为人类igg1抗b12的未改变的形式，还构建了以下同种型变体：变体1-b12(包含人类igg1骨架的抗-b12抗体，其中fc部分
的fc效应子无效取代对应于变体1-atz的相同取代)、变体2-b12(包含人类igg1骨架的抗-b12抗体，其中fc部分的fc效应子无效取代和h311a取代对应于变体2-atz的相同取代)和变体3-b12(包含人类igg1骨架的抗-b12抗体，其中fc部分的fc效应子无效取代和h436q取代对应于变体3-atz的相同取代)。这些抗b12抗体变体使用如以上讨论的常规方法产生。
[0433]
在一系列实验中，使用dm-htau小鼠模型来评估使用变体1-atz(fc效应子无效)抗体的处理是否维持使用大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体观察到的改善的认知表现。将雄性和雌性8-9个月龄的dm-htau小鼠用1.5mg/小鼠的大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体(克隆10f.9g2，bioxcell)、阿特珠单抗、变体1-atz(fc效应子无效)或1.5mg/小鼠(n＝10)抗b12人类igg1同种型抗体对照来处理。年龄匹配的野生型小鼠和未处理的dm-htau小鼠被用作另外的对照组。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher事后检验。结果表明，在单次ip注射有效剂量后4周时测量的，在t-迷宫测定中在dm-htau小鼠模型表现中，变体1-atz(fc效应子无效)引发了与阿特珠单抗相同的统计学显著的有益作用(图17)。此外，变体1-atz(fc效应子无效)抗体和阿特珠单抗两者都比大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体更好地改善dm-htau的认知表现(图17)。
[0434]
为了检查抗pd-l1抗体处理对脑疾病的作用，在t-迷宫测定中的认知评估结束时，将来自dm-htau小鼠的脑通过免疫组织化学进行分析。在灌注之后将脑取出，收集6μm冠状切片，并且将每只小鼠的遍及感兴趣区域(齿状回或大脑皮层)的4-5个不同预定深度处的5个切片进行胶质细胞原纤维酸性蛋白(gfap)免疫染色。对阳性染色像素的基于直方图的划分使用image-pro plus软件(media cybernetics,bethesda,md,usa)来进行。将划分算法手动应用于每个图像，计算手动选择的齿状回区域的尺寸，并且在其中定位所有表达gfap萦光的细胞。然后，该算法测量细胞的萦光强度，并且将“ctcf”计算为针对整个齿状回的平均萦光进行校正的检测到的细胞的平均萦光。使用星形胶质细胞增生和神经炎症的标志物的gfap免疫染色分析显示，变体1-atz(fc效应子无效)抗体引发与阿特珠单抗和大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体相同的有益作用(图18)。这些实验表明，在神经退行性疾病模型中，fc效应子功能对用抗pd-l1抗体处理的治疗活性(表现为对认知表现和脑疾病的作用)没有贡献。
[0435]
为了了解fc部分中的氨基酸取代对抗pd-l1抗体从血清中的清除的影响，进行了药代动力学实验以确定抗体的半衰期和清除率。将雄性c57bl/6j小鼠i.p.注射1.5mg/小鼠(n＝3)单剂量施用的阿特珠单抗或以下修饰的抗pd-l1抗体之一：变体1-atz(fc效应子无效)、变体2-atz(fc效应子无效-h311a)、变体3-atz(fc效应子无效-h436q)或变体4-atz(fc效应子无效-h311a h436q)。在注射后的不同时间点收集血清，并且使用反向夹心elisa定量抗pd-l1抗体的血清水平。
[0436]
pk研究的结果表明，虽然变体1-atz(fc效应子无效)抗体显示出与阿特珠单抗相似的pk谱，但其他取代显著加速抗体的清除，如通过降低的半衰期(t
1/2
)值展示的(表5；图19)。在变体4-atz(fc效应子无效-h311a h436q)抗体中获得了最快的清除，其展示出约10小时的半衰期。这表示相对于阿特珠单抗，清除率降低超过4倍(10小时对比于44小时)。变体2-atz(fc效应子无效-h311a)与阿特珠单抗相比也表现出更快的清除率(11小时对比于44小时)，随后是变体3-atz(fc效应子无效-h436q)(19小时相比于44小时)。
[0437][0438][0439]
为了评估清除率对抗体减缓疾病进展方面的有益作用的影响，使用dm-htau小鼠模型来评估使用四种变体抗体的处理是否维持使用大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体或阿特珠单抗观察到的改善的认知表现。将雄性和雌性dm-htau小鼠用1.5mg/小鼠的1)人源化抗pd-l1单克隆抗体阿特珠单抗(genentech)或四种阿特珠单抗变体之一或者2)1.5mg/小鼠变体1-b12(fc效应子无效)人类igg1同种型抗体对照来处理。未处理的年龄匹配的野生型小鼠被用作另外的对照组。认知表现通过在抗体施用后4周和8周时使用t-迷宫并且在抗体施用后6周时使用y-迷宫认知任务测试小鼠来评估。在最后一次认知评分(处理启动后8周)后，将动物处死用于脑疾病评估(来自两个脑半球的皮层和海马)。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher事后检验。
[0440]
当在注射后1个月检查时，在用变体1-atz(fc效应子无效)、变体2-atz(fc效应子无效-h311a)或变体3-atz(fc效应子无效-h436q)抗体处理的dm-htau小鼠中观察到治疗作用，但是变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体的作用与变体3-atz(fc效应子无效-h436q)抗体相比显著更明显(图20b)。当在注射后2个月再次通过t-迷宫任务评估时，变体1-atz(fc效应子无效)和变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体两者都维持它们对认知表现的作用，而在用变体3-atz(fc效应子无效-h436q)抗体处理的小鼠中，在该时间点没有观察到疗效(图20d)。在注射后6周时，还将动物使用y-迷宫认知任务进行测试，并且抗体的所有变体在该测试中都是有效的，其中所测量的参数是由小鼠在测定时间段期间进行的臂间自发性改变的频率(图20c)。由小鼠进行的自发性改变越多(与t-迷宫不同，在y-迷宫中，迷宫的所有臂都是相同的)，正常探索行为就越多。
[0441]
值得注意的是，在处理后5天时，血清中变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体的浓度达到低于1nm，而在处理后12天左右，无效变体被清除至1nm以下(图19)。然而，这两种变体抗体都显著改善认知表现至相同程度，如在处理后4周时使用t-迷宫系统测量的那样。此外，在处理之后8周，与用同种型对照抗体处理的动物相比，具有较短和较长暴露时间的两种抗体仍然保持小但明显的有益作用。
[0442]
为了进一步评估清除率对抗体减缓疾病进展方面的有益作用的影响，使用5xfad小鼠模型来评估使用四种变体抗体的处理是否维持使用大鼠抗小鼠pd-l1单克隆抗体或阿特珠单抗观察到的改善的认知表现。将雄性和雌性5xfad小鼠用1.5mg/小鼠的1)人源化抗pd-l1单克隆抗体(genentech)或四种阿特珠单抗变体之一或者2)1.5mg/小鼠抗-b12人类igg1同种型抗体对照来处理。未处理的年龄匹配的野生型(wt)小鼠被用作另外的对照组。将动物使用放射臂水迷宫(rawm)对其在单次注射后一个月的认知表现进行评分。显著性如下计算：使用双因素重复测量anova，随后是dunnett事后多重比较检验。
[0443]
使用rawm认知任务，用5xfad小鼠在改善的对认知表现的作用方面获得了类似的结果(图21)。具有加速清除特性的修饰的抗pd-l1抗体变体没有损失其功效，并且显示出与阿特珠单抗相似的对认知表现的作用(表6)。
[0444][0445]
在另一系列实验中，多剂量研究使用两种抗体变体来进行，以确定功效与pk/pd谱之间的相关性。将雄性c57bl/6j小鼠i.p.注射(每组n＝3)变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或变体3-atz(fc效应子无效-h436q)抗体。在注射后的不同时间点收集血清，并且使用elisa定量血清抗体水平。在注射后的不同时间点收集血液，并且制备用于流式细胞术分析。将每个样品等分到两个管中，将一个管用注射的抗pd-l1抗体并且另一个管用igg对照在冰上体外饱和30分钟。然后将细胞针对表面标志物cd3、cd4、cd44和pd-1进行染色，并且通过流式细胞术进行分析，以检测cd3 细胞(t细胞)和与抗pd-l1结合的pd-l1受体(使用抗人类fc)。受体占有率通过cd3 t细胞上的平均萦光强度的差异比率来评价，其中将每个样品与其自身的抗pd-l1饱和样品的最大受体占用率的对照进行比较。功效研究使用如以上公开的dm-htau动物来进行，并且显著性使用单因素anova和fisher精确检验事后分析来计算。
[0446]
pk/pd研究的结果示于表7和图22、图23和图24中。变体2-atz(fc效应子无效-h311a)接近约7.5小时至11.6小时范围的剂量依赖性半衰期，而变体3-atz(fc效应子无效-h436q)表现出约13.6小时至23.5小时范围的剂量依赖性半衰期(表6；图22a-图22b)。血清中抗体变体的浓度与淋巴细胞上的受体占有率和血液中pd-1

记忆性t细胞的升高水平相关(比较图22a-图22b和图23a-图23b)。
[0447]
这些结果表明，在通过注射0.5mg/小鼠持续短暴露时间段获得的c
最大
范围的平均浓度足以触发减缓疾病进展的一系列事件。总之，具有加速清除特性的抗pd-l1抗体没有损失其功效，通过其对认知的作用评估，在dm-htau和5xfad神经退行性疾病小鼠模型中均得到展示。
[0448][0449]
为了评估使用具有更快清除率的修饰的抗pd-l1变体的处理是否维持使用未改变的抗pd-l1抗体观察到的改善的认知表现，检查了认知行为。将雄性和雌性8-9个月龄的dm-htau小鼠用1.5mg/小鼠的变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体、变体3-atz(fc效应子无效-h436q)抗体或变体1-b12(fc效应子无效)人类igg1同种型抗体对照来处理。年龄匹配的野生型小鼠被用作另外的对照组。认知表现通过在抗体施用后2周和4周时使用t-迷宫测试小鼠来评估。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher精确检验事后分析。结果表明，虽然在处理后2周时没有观察到认知表现的显著改善，但变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体和变体3-atz(fc效应子无效-h436q)两者在单次施用有效剂量后4周时在dm-htau小鼠中引发认知行为的统计学显著的改善(图25)。
[0450]
感兴趣的是，在对外周中受体占有率的作用与对认知行为的作用之间存在延迟。虽然血清中的抗体浓度(图22a-图22b)和血液t淋巴细胞上的受体占有率(图23a-图23b)两者在第一天达到峰值，并且在抗体施用后7天左右降低至检测不到的水平(图22a-图22b；图23a-图23b)，但是在处理后2周时没有发现对认知的作用，而在处理后4周时观察到相同动物的显著改善(图25)。
[0451]
在这项研究中，在注射后2周和4周时，在注射1.5mg/小鼠的变体2-atz(fc效应子无效-h311a)后，对相同小鼠的认知评分进行评价。虽然在注射后2周时不能观察到显著改变，但在注射后4周时，变体2-atz(fc效应子无效-h311a)处理的小鼠与对照处理的小鼠相比显示出显著更好的认知表现(图26)。
[0452]
在另一系列实验中，来自其他外周组织的免疫细胞的受体占有率通过流式细胞术来检查，以确定来自这些组织的细胞是否显示出与血液不同的药效学模式。将雄性c57bl/6j小鼠i.p注射1.5mg/小鼠的变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体。在注射后的不同时间点收集血清，并且使用elisa定量抗体的血清水平。将细胞从腹股沟淋巴结、颈淋巴结、脉络丛和血液中分离，并且通过染色制备用于流式细胞术分析，以检测cd3

细胞(t细胞)和与抗pd-l1结合的pd-l1受体(使用抗大鼠igg2b)。从来自n＝6只小鼠的脑的侧脑室分离cp，并汇集在一起用于流式细胞术分析，因为该组织中的免疫细胞数目低。受体占有率通过cd3

t细胞上igg2b表达的平均萦光强度的差异比率来评价，其中将每个样品与其自身的抗pd-l1饱和样品的最大受体占用率的对照进行比较。图上的每个点代表不同小鼠的血液样品。显著
性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher多重比较检验。结果表明，当与从血液获得的细胞相比时，在从腹股沟淋巴结、颈淋巴结和脉络丛中获得的细胞中观察到类似的药效学模式(图27)。
[0453]
实施例5
[0454]
使用多剂量施用的认知表现
[0455]
在小鼠中以1.5mg/小鼠的剂量单次施用抗pd-l1抗体被显示有效降低dm-htau小鼠的认知缺陷和脑中的聚集的tau水平。用短半衰期变体2-atz(fc效应子无效-h311a)处理后对认知表现的有益作用在处理后4周和6周时被观察到，但在8周时没有观察到。为了测试在单次注射后观察到的对认知表现和疾病的有益作用是否可以延长超过6周，进行其中小鼠接受修饰的抗pd-l1抗体变体的多次施用的实验。
[0456]
将在6-7月龄的雄性和雌性dm-htau小鼠通过用1.5g/小鼠的变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体或变体2-b12(fc效应子无效-h311a)人类igg1同种型抗体对照注射小鼠，每6周给予一次抗pd-l1处理，连续3次。未处理的年龄匹配的野生型(wt)小鼠被用作另外的对照组。对认知表现、脑疾病以及药代动力学和药效学参数的作用沿着研究的不同时间点进行(图28a)。在每次注射后的4周时，将小鼠使用t-迷宫认知测试进行测试。此外，在每次注射后3天时，将5只小鼠的群组从每个处理组中取出，安乐死，并且收集血液(用于分离pbmc和血清/血浆)、csf和脑组织(将皮层和海马单独切下)(图28a)。将血清/血浆和脑组织保持冷冻直至分析。评估新鲜pbmc的受体占有率和pd1 记忆性cd4 t细胞频率。基于单次施用后获得的pk/pd数据，在注射后3天时，我们预期在血液中观察到高受体占有率以及升高的pd1 cd4记忆性t细胞水平。此外，在第一次注射之后2周时，将每处理组5-6只动物使用t-迷宫测试进行评估，相同的动物也在研究启动后4周时进行评估，并且在研究启动后6周(第二次注射之后3天)时进行安乐死。因此，对于这组动物，单次施用对t-迷宫表现和聚集的tau水平的作用的纵向读取在6周时可获得。此外，在第三次注射后，每2周一次检查动物在t-迷宫中的认知表现，直至注射后8周，而一些动物在注射后4周时被安乐死用于pk/pd和病理测量。另外的第四次注射在第三次注射后8周时给予，用于测量最后一次抗体施用之后4小时和3天时的血清中的抗体暴露、外周免疫应答。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher事后检验。
[0457]
为了评估变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体对认知表现的作用，将小鼠在第一次抗体施用后2周和4周、第二次抗体施用后4周、第三次抗体施用后2周和4周以及第四次抗体施用后2周和4周时使用t-迷宫认知任务测定进行测试(图28a)。结果表明，虽然在第一次施用变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体后两周时没有观察到改善的认知表现(图28b)，但在所有其他处理后时间在dm-htau小鼠中测量到认知表现的统计学显著的改善(图28c-图28h)。
[0458]
为了评估变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体对药代动力学和药效学参数的影响，通过流式细胞术检查来自不同外周组织的免疫细胞的受体的占有率。沿着实验过程的以下五个不同时间点，从每个处理组中取出五只小鼠的群组：1)第一次注射后72小时；2)第二次注射后72小时；3)第3次注射后72小时；4)第4次注射后4小时；和5)第4次注射后72小时(图28a)。从这些小鼠抽取血清，并且然后将这些动物安乐死并收集组织。从腹股沟淋巴结、颈淋巴结、脉络丛和血液中分离细胞，并且通过染色制备用于流式细胞术分析，以检测cd3

细胞(t细胞)和与抗pd-l1结合的pd-l1受体(使用抗大鼠igg2b)。从来自n＝6只小鼠的脑的侧脑室分离cp，并汇集在一起用于流式细胞术分析，因为该组织中的免疫细胞数目低。显著性如下计算：使用单因素anova，随后是fisher事后检验。
[0459]
结果表明，在第一次和第二次注射变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体(6周间隔)之后72小时，在不同组织(包括血液、颈淋巴结(cln)、腹股沟淋巴结(iln)和脉络丛(cp))的t细胞上观察到pd-l1受体完全占有率(图29)。在第三次注射pd-l1(另外的6周间隔)之后72小时，在任何测试组织中都没有观察到pd-l1受体占有率，然而，注意到激活的t细胞的升高，表明重复注射之后清除更快，但明显足以引起免疫应答(图29)。因此，将小鼠进行第四次注射，以使用流式细胞术评估在抗体注射之后的较早时间点当血清中的抗体浓度预期处于其最大水平时的受体占用率。事实上，在注射之后4小时，在血液t细胞上观察到变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体的完全受体占有率，而在注射后72小时时没有检测到受体占有率，表明比第一次抗体施用之后清除更快(图29)。
[0460]
此外，在第一次、第二次和第三次剂量施用之后72小时，观察到pd1 记忆性t细胞的瞬时升高(参见群体#3，图30)。这些结果展示，在每次注射后，可以检测到以表达pd-1(在激活的免疫细胞上表达的表面分子)的较高频率的记忆性cd4 t细胞形式的免疫细胞激活。
[0461]
为了评估变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体对脑疾病的作用，在海马脑组织样品中测量聚集的tau蛋白水平。在研究的第3天和第48天时收获脑组织样品(图28a)，并且根据制造商的说明使用检测人类tau聚集物的基于fret的免疫测定(cysbio kit)来确定tau聚集物。相对于igg处理的对照，在第一次注射变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体之后48天观察到聚集的tau水平降低，但在处理后3天没有观察到(图31a)。在igg处理的对照中，在处理启动后3天与48天之间观察到聚集的tau水平的低但明显的升高，与在变体2-atz(fc效应子无效-h311a)抗体处理组中观察到的显著降低相反。在研究的第4周时小鼠的认知评分与2周后其脑tau聚集蛋白水平之间观察到朝向统计学显著的负相关的趋势(图31b)。
[0462]
实施例6
[0463]
修饰的抗人类pd-l1单克隆抗体84g09的分析
[0464]
修饰的人类抗pd-l1抗体使用84g09克隆来创建，以得到对pd-l1表现出高亲和力(kd《nm)的可变区，增强清除率，并消除fc相关效应子功能，同时保持对疾病改变的功效。产生具有人类igg1骨架的人类抗pd-l1抗体(84g09克隆)的四种重组变体，并且命名为1)变体1-g09，人类igg1 fc效应子无效(l239a、l240a和k327a取代；根据对所有抗体通用的kabat编号系统的l234a、l235a和k322a)；2)变体2-g09，人类igg1 fc效应子无效取代加h315a取代(根据对所有抗体通用的kabat编号系统的h310a)；3)变体3-g09，人类igg1 fc效应子无效取代加h440q取代(根据对所有抗体通用的kabat编号系统的h335q)；和4)变体4-g09，人类igg1 fc效应子无效取代加h315a和h440q取代(根据对所有抗体通用的kabat编号系统的h310a和h335q)。这些抗pd-l1变体抗体被设计为包含人类抗pd-l1抗体84g09的轻链可变区和重链可变区，以及包含氨基酸取代的来自人类igg1重链的重链恒定区的人类igg1骨架。人类抗pd-l1抗体84g09描述于例如美国专利9,617,338中，该专利在此通过引用以其整体并入。进行包含l239a、l240a和k327a的第一组取代，以通过降低/消除fc效应子功能活性来降低/消除抗体依赖性细胞细胞毒性(adcc)。进行包含h315a和/或h440q的第二组取代，以
通过降低抗体与fcrn受体的相互作用来加速抗体从循环中清除。选择信号肽并将其包含在氨基末端处，以确保抗体的正确分泌。
[0465]
这些抗pd-l1变体抗体通过合成编码每种变体的针对灰仓鼠(cricetulus griseus)密码子优化的dna序列来产生(表8)。轻链氨基酸序列的差异在于所使用的信号肽，其中seq id no:84具有信号肽seq id no:88，而seq id no:85具有信号肽seq id no:89。类似地，重链氨基酸序列的差异在于所使用的信号肽，其中seq id no:66-69具有信号肽seq id no:88，而seq id no:70-73具有信号肽seq id no:90。因此，dna序列seq id no:86包含编码轻链的seq id no:82和编码信号肽的seq id no:91；并且dna序列seq id no:87包含编码轻链的seq id no:83和编码信号肽的seq id no:92。类似地，dna序列seq id no:74包含编码重链的seq id no:58和编码信号肽的seq id no:91；dna序列seq id no:75包含编码重链的seq id no:59和编码信号肽的seq id no:91；dna序列seq id no:76包含编码重链的seq id no:60和编码信号肽的seq id no:91；dna序列seq id no:77包含编码重链的seq id no:61和编码信号肽的seq id no:91；dna序列seq id no:78包含编码重链的seq id no:62和编码信号肽的seq id no:93；dna序列seq id no:79包含编码重链的seq id no:63和编码信号肽的seq id no:93；dna序列seq id no:80包含编码重链的seq id no:64和编码信号肽的seq id no:93；并且dna序列seq id no:81包含编码重链的seq id no:65和编码信号肽的seq id no:93。
[0466]
将合成的dna序列亚克隆到表达构建体中，并且通过例如转染或转导引入cho或hek宿主细胞中，用于表达。将随后表达的修饰的抗pd-l1抗体分离并检查其活性。
[0467][0468]
离体检查抗体(包括四种抗体变体)的物理和生物活性，并且将其与商业上可获得的抗人类pd-l1抗体(阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维鲁单抗、bms-936559)以及抗人类pd-l1抗体(克隆84g09)进行比较(这些抗体用作基准)并进行测试，以确定对人类igg1 fc骨架的特定修饰是否会改变离体功效。抗体与其配体pd-l1的亲和力通过表面等离子体共振(spr)方法测量，并且其生物活性通过mlr的同种异体和自体设置两者、配置(configurations，免疫激活测试)以及pd-1/pd-l1相互作用中和测定来确定。在人类原代细胞测定中，抗体之间在pd-l1结合亲和力、中和pd-1与pd-l1的结合以及加强t细胞应答方面没有显著差异。
[0469][0470]
人类抗pd-l1单克隆抗体84g09对人类pd-l1(kd＝0.43nm)和食蟹猴pd-l1(kd＝0.52nm)显示出高亲和力(表9)。在神经退行性疾病小鼠模型中，具有不同清除特性的抗pd-l1抗体在其对认知和脑疾病有益作用的强度和持续时间方面显示出相似的结果。有益作用显示为c
最大
依赖性，并且持续约6周，无论抗体的清除率如何。因此，具有快速清除特性的抗体在耐受性方面是有利的。为了检查这些fc突变对pk谱的作用，在非人类灵长类动物(nhp)中使用84g09的可变区与包含4种fc突变的人类igg1恒定区测试了四种g09变体的pk。
[0471]
将幼稚食蟹猴通过单次iv输注施用少于30分钟的13mg/kg的四种g09变体抗体之一。由于技术限制，本研究分为两个阶段(表10)。将使用转染的cho细胞的表达系统中产生的三种变体，变体1、变体2和变体4在第一项研究中进行测试。在给药之前至少一天和注射后5天、14天、21天和30天时收集血液(8ml)用于pbmc分离。在注射后0.5小时、8小时、24小时、48小时、96小时和168小时、14天、21天、28天、35天、42天、49天和56天时收集血清分离物(1ml)。将所有收集的血液和血清样品冷冻，用于随后分析。第二项研究包括测试两种变体(第一个实验中缺失的变体3和作为参考的变体1)的pk。这些抗体来自使用转染的hek细胞的不同表达系统。在给药之前至少一天和注射后5天、14天、21天、30天和45天时收集血液(8ml)用于pbmc分离。在注射后0.5小时、8小时、24小时、48小时、96小时和168小时、14天、21天、28天、35天、42天、49天和56天时收集血清分离物(1ml)。将所有收集的血液和血清样品冷冻，用于随后分析。使用反向elisa测定分析血清等分试样的血清中的抗体浓度。
[0472][0473]
pk研究的结果展示，无论抗体是由cho细胞还是hek细胞表达，变体1-g09(fc效应子无效)抗体都显示出相似的pk谱(图32)。变体4-g09(fc效应子无效-h315a h440q)抗体显示出最快的清除率，而变体2-g09(fc效应子无效-h315a)与变体3-g09(fc效应子无效-h440q)抗体之间的差异不如在小鼠中的差异显著(表11)。
[0474][0475]
给药之前一天(基线)，以及处理后5天、14天、21天和30天，收集8ml全血用于外周血单个核细胞(pbmc)分离和冷冻保存。在第二项研究中，还在处理后45天时收集全血。分析样品的血液t淋巴细胞上的pd-l1受体占有率和不同免疫细胞亚群的免疫表型。使用与以上描述的用于小鼠中受体占有率的相同的方法评估抗体对血液t淋巴细胞上的pd-l1受体占有率的百分比。在抗体的血清浓度与受体占有率之间发现了紧密的相关性(图33a-图33d)。当抗体浓度降至低于10-8
m时，所有测试的变体的受体占有率均显著下降。对于除了双突变体之外的所有变体，直至施用后第12天，检测到超过80％的受体占有率。对于除了无效突变体之外的所有变体，在施用后第20天，检测到少于20％的占用率。变体2-g09(fc效应子无效-h315a)和变体3-g09(fc效应子无效-h440q)显示出相似的pd-l1受体占有率谱(比较图33b与图33c)。
[0476]
进行血液免疫表型分型以检查不同抗体对特定免疫亚群分布的体内作用。将细胞用识别幼稚t细胞、记忆性t细胞、treg、髓系(mdc)细胞/浆细胞样(pdc)细胞、单核细胞和表达pd-l1的记忆性t细胞的8组不同的萦光标记的抗体染色(表12)，并且通过流式细胞术进行检查。将每只动物的免疫群体水平针对基线(抗体施用之前的水平)进行归一化，并且表示为相对于基线的改变百分比。显著性使用配对student's t检验计算。
[0477][0478][0479]
对所得结果的分析鉴定出血液中几个免疫细胞亚群的显著的药效学改变。特别地，在用基于84g09的修饰的抗pd-l1抗体处理后，检测到表达pd-1的cd4记忆性t细胞的上调(图34)。在注射基于阿特珠单抗的抗pd-l1抗体变体后的小鼠中观察到类似的改变(图30)，表明在小鼠和灵长类动物两者中都涉及类似的免疫相关机制。
[0480]
在用84g09的抗pd-l1变体处理后，血液中免疫细胞亚群分布的药效学改变的另外
的实例示于图35中。这些改变包括表达pd-1和ki-67的中枢记忆性(cm)t细胞(cd3

cd95

cd28

；图35a)的丰度升高，其代表增殖的记忆性t细胞的亚群。先前显示，pd-1和ki-67在cd8 t细胞上的表达与癌症患者中对抗pd-1治疗的响应相关(kamphorst等人，2017)。此外，在处理后检测到cd4-效应记忆性(em)t细胞的增加的频率以及cd4-幼稚t细胞的减少的水平(图35b)。
[0481]
综上所述，这些结果与从小鼠的pk研究中获得的数据一致。抗pd-l1抗体变体2-g09(fc效应子无效-h315a)、变体3-g09(fc效应子无效-h440q)和变体4-g09(fc效应子无效-h315a h440q)与变体1-g09(fc效应子无效)相比具有显著增加的清除率。此外，还展示了抗体血清浓度与受体占有率之间的紧密相关性。此外，外周免疫细胞的免疫表型分型结果鉴定到，注射所有抗体变体后，几个免疫亚群的频率和激活状态显著改变。特别地，检测到表达pd-1的记忆性t细胞和经典单核细胞的频率升高，类似于使用替代抗体在小鼠pd数据中检测到的频率升高。
[0482]
实施例7
[0483]
使用抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)测定进行抗体表征
[0484]
这些实验使用体外抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)测定，在功能上表征变体2-g09(fc效应子无效-h315a)抗体的抗体依赖性细胞杀伤能力。adcc是细胞介导的免疫应答，导致抗体包被(调理)的靶细胞被免疫效应细胞裂解。adcc由抗体的fc部分与免疫细胞上表达的fc-γ受体之间的相互作用触发，最终导致裂解靶细胞的细胞毒性颗粒的释放。
[0485]
在该测定中使用两种靶细胞系：1)具有稳定cd-20表达的raji淋巴母细胞样来源的靶细胞；和2)具有稳定pd-l1表达的cho-k1来源的靶细胞。将这些靶细胞维持在对应的完全培养基中，在37℃与5％co2条件下孵育，并且用合适的培养基定期传代培养。免疫效应细胞通过以下来制备：汇集来自多于20名健康人类志愿者的血液，通过密度梯度离心从血液中分离外周血单个核细胞(pbmc)，并且在rpmi 1640完全培养基中培养pbmc。
[0486]
adcc测定通过以下进行：通过离心收获靶细胞，将细胞重悬于缓冲溶液中，调节细胞密度，并且然后将细胞悬浮液的等分试样转移至测定微孔板的孔中。在adcc剂量响应实验中，阳性对照组使用raji作为靶细胞，pbmc作为效应细胞，并且以rituxan作为阳性对照抗体，其中e/t比例为25:1。实验组使用cho-k1/pd-l1作为靶细胞，pbmc作为效应细胞，以评价抗体样品的adcc作用，其中根据e/t优化测定结果，e/t比例为25:1。将包含测试抗体、阳性对照抗体或阴性对照抗体的抗体样品添加至包含细胞悬浮液等分试样的孔中，并且在室温(约20℃)孵育30分钟。细胞裂解通过以下来诱导：通过将pbmc添加至包含靶细胞/抗体混合物的每个孔中，并且将测定微孔板在细胞培养箱中于37℃与5％co2条件下孵育约6小时。在孵育之后，将测定微孔板离心，并且将来自每个孔的上清液转移至另一个测定微孔板的孔中。细胞死亡使用基于从受损细胞的胞质溶胶中释放的乳酸脱氢酶(ldh)活性的分光光度测量的商业上可获得的比色测定(cytotoxicity detection kit plus；roche,mannheim,germany)来定量。
[0487]
简言之，测试样品通过将等量的ldh底物测定溶液添加至包含来自处理的靶细胞的上清液的孔中并且在室温孵育15分钟来制备。对照样品包括1)包含ldh底物测定溶液和来自与pmbc效应细胞一起孵育的未处理的靶细胞的上清液的自发裂解对照；2)包含ldh底物测定溶液和来自未处理的靶细胞的上清液的最小裂解对照；和3)包含ldh底物测定溶液、
2％x-100(聚氧乙烯辛基苯基醚)和来自未处理的靶细胞的上清液的最大裂解对照。所得的颜色反应通过分光光度法在od
492 nm和od
650
nm处读取。所有程序以一式两份进行。特定细胞裂解的百分比根据制造商的说明使用以下公式来计算：100
×
[(a-b)/(c-d)]，其中a表示用测试样品(实验裂解)获得的吸光度值，b表示通过用效应细胞裂解所有未处理的靶细胞(自发裂解)获得的吸光度，c表示通过用2％x-100裂解所有未处理的靶细胞(最大裂解)获得的吸光度，并且d表示用孵育于测定溶液中的未处理的靶细胞(最小裂解)获得的吸光度。当该计算提供负值时，0.0％被指定为结果。
[0488]
在第一系列实验中，效应细胞/靶细胞(e/t)比例针对adcc测定进行优化。将嵌合抗cd20单克隆抗体(利妥昔单抗)用作阳性对照，并且用raji淋巴母细胞样来源的靶细胞进行测试。该抗体在25:1的e/t比例时实现48.8％的最高靶细胞裂解百分比。人类igg以10mg/ml的浓度用作阴性对照，并且用cho-k1来源的靶细胞进行测试。该抗体在10:1的e/t比例时实现18.1％的最高靶细胞裂解百分比，而在25:1或50:1的e/t比例时没有检测到明显的细胞裂解。为此，选择25:1的e/t比例用于进一步的实验。
[0489]
在第二系列实验中，使用25:1的e/t比例来确定adcc测定的抗体剂量响应。将变体2-g09以7种(fold)稀释系列的以下浓度进行测定：80μg/ml、8μg/ml、0.8μg/ml、0.08μg/ml、0.008μg/ml、0.0008μg/ml和0.00008μg/ml。将阿特珠单抗的生物仿制药(biosimilar)(阿特珠单抗是已知被剥夺了adcc fc活性的商业上可获得的人源化抗pd-l1单克隆抗体(genentech))以7种稀释系列的以下浓度进行测定：40μg/ml、4μg/ml、0.4μg/ml、0.04μg/ml、0.004μg/ml、0.0004μg/ml和0.00004μg/ml。将阳性对照抗体利妥昔单抗以7种稀释系列的以下浓度进行测定：40μg/ml、4μg/ml、0.4μg/ml、0.04μg/ml、0.004μg/ml、0.0004μg/ml和0.00004μg/ml。将阴性对照抗体人类igg以7种稀释系列的以下浓度进行测定：40μg/ml、4μg/ml、0.4μg/ml、0.04μg/ml、0.004μg/ml、0.0004μg/ml和0.00004μg/ml。检查变体2-g09、阿特珠单抗生物仿制药和人类igg的剂量响应实验利用了cho-k1来源的靶细胞，而测试利妥昔单抗的实验利用了raji淋巴母细胞样来源的靶细胞。
[0490]
结果显示，变体2-g09没有显著的细胞介导的细胞毒性活性。例如，在25:1的e/t比例时，变体2-g09没有展示出随测试的全部7种稀释系列变化的剂量响应曲线，表明该抗体以任何浓度都不会介导针对cho-k1/pd-l1靶细胞的adcc作用(图36c)。变体2-g09显示出约7μg/ml的ec
50
，并且没有观察到明显的靶细胞裂解(表13)。在另一方面，阳性对照抗体展示出随测试的全部7种稀释系列强烈变化的剂量响应曲线，表明该抗体介导针对raji淋巴母细胞样来源的靶细胞的显著adcc作用(图36a)。阳性对照抗体表现出约2.1
×
10-3
μg/ml的ec
50
，并且对于该抗体观察到的最高靶细胞裂解百分比为53.5％(表13)。如预期的，阴性对照没有展示出随全部7种稀释系列变化的剂量响应曲线(图36b)，没有可检测到的细胞裂解，并且具有超过2.2
×
105μg/ml的ec
50
(表13)。综上所述，这些结果展示变体2-g09没有显著的细胞介导的细胞毒性活性。
[0491][0492]
类似的结果显示，如预期的，阿特珠单抗生物仿制药也没有显著的adcc活性。例如，在25:1的e/t比例时，阿特珠单抗生物仿制药没有表现出随测试的全部7种稀释系列变化的剂量响应曲线，表明该抗体以任何浓度都不会介导针对cho-k1/pd-l1靶细胞的adcc作用(图36e)，并且观察到的最高靶细胞裂解百分比为约1.4％(表14)。相比之下，阳性对照抗体展示出随测试的全部7种稀释系列强烈变化的剂量响应曲线(图36a和图36d)，并且对于该抗体观察到的最高靶细胞裂解百分比为43.6％(表14)。
[0493][0494][0495]
实施例8
[0496]
使用补体依赖性细胞毒性(cdc)测定进行抗体表征
[0497]
实验使用体外补体依赖性细胞毒性(cdc)测定在功能上表征变体2-g09(fc效应子无效-h315a)抗体的抗体依赖性细胞杀伤能力。cdc是细胞介导的免疫应答，导致抗体包被(调理)的靶细胞被攻膜复合物(mac)裂解。cdc由抗体的fc部分与血清补体组分(特别是c1q)之间的相互作用触发，启动补体级联，这最终通过将mac插入细胞膜引起细胞完整性的损伤和丧失而导致表达抗原的靶细胞的细胞裂解。
[0498]
在该测定中使用两种靶细胞系：1)具有稳定cd20表达的raji淋巴母细胞样来源的靶细胞；和2)具有稳定pd-l1表达的cho-k1来源的靶细胞。将这些靶细胞维持在对应的完全培养基中，在37℃与5％co2条件下孵育，并且用合适的培养基定期传代培养。补体组分通过汇集来自多于20名健康人类志愿者的血液并且分离血清(称为汇集的正常人类血清(pnhs))来制备。
[0499]
cdc测定通过以下进行：通过离心收获靶细胞，将细胞重悬于缓冲溶液中，调节细胞密度，并且然后将细胞悬浮液的等分试样转移至测定微孔板的孔中。将包含测试抗体、阳性对照抗体或阴性对照抗体的抗体样品添加至包含细胞悬浮液等分试样的孔中，并且在室温(约20℃)孵育30分钟。细胞裂解通过以下来诱导：通过将pnhs添加至包含靶细胞/抗体混合物的每个孔中，并且将测定微孔板在细胞培养箱中于37℃与5％co2条件下孵育约4小时。在孵育之后，将测定微孔板离心，并且将来自每个孔的上清液转移至另一个测定微孔板的孔中。细胞死亡使用基于从受损细胞的胞质溶胶中释放的atp的分光光度测量的商业上可获得的发光测定(celltiter-glo luminescent cell viability assay；promega,wisconsin,united states)来定量。
[0500]
简言之，测试样品通过将等量的萤光素酶/萤光素测定溶液添加至包含来自处理的靶细胞的上清液的孔中并且在室温孵育10-30分钟来制备。对照样品包括1)包含萤光素酶/萤光素测定溶液和来自与pmbc效应细胞一起孵育的未处理的靶细胞的上清液的自发裂解对照；2)包含萤光素酶/萤光素测定溶液和来自未处理的靶细胞的上清液的最小裂解对照；和3)包含萤光素酶/萤光素测定溶液、2％x-100(聚氧乙烯辛基苯基醚)和来自未处理的靶细胞的上清液和pnhs的最大裂解对照。所得发光由发光计读取。所有程序以一式两份进行。特定细胞裂解的百分比根据制造商的说明使用以下公式来计算：100
×
[(a-c)/(b-c)]，其中a表示用测试样品(实验裂解)获得的发光值，b表示用2％x-100裂解所有未处理的靶细胞(最大裂解)获得的发光值，并且c表示用孵育于测定溶液中的未处理的靶细胞(最小裂解)获得的发光值。当该计算提供负值时，0.0％被指定为结果。
[0501]
在第一系列实验中，pnhs的量针对cdc测定进行优化。将嵌合抗cd20单克隆抗体(利妥昔单抗)用作阳性对照，并且用raji淋巴母细胞样来源的靶细胞进行测试。使用10％的pnhs浓度，该抗体实现98.5％的最高靶细胞裂解百分比。人类igg用作阴性对照，并且用cho-k1来源的靶细胞进行测试。使用50％的pnhs浓度，该抗体实现了19.1％的最高靶细胞裂解百分比，而在10％和20％的pnhs浓度没有检测到明显的细胞裂解。为此，10％的pnhs浓度被用于进一步的实验。
[0502]
在第二系列实验中，使用10％的pnhs浓度来确定cdc测定的抗体剂量响应。将变体2-g09以8种稀释系列的以下浓度进行测定：20μg/ml、2μg/ml、0.2μg/ml、0.02μg/ml、0.002μg/ml、0.0002μg/ml、0.00002μg/ml和0.000002μg/ml。将阿特珠单抗的生物仿制药(阿特珠单抗是已知被剥夺了adcc fc活性的商业上可获得的人源化抗pd-l1单克隆抗体(genentech))，以8种稀释系列的以下浓度进行测定：10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml、0.0001μg/ml、0.00001μg/ml和0.000001μg/ml。将阳性对照抗体利妥昔单抗以8种稀释系列的以下浓度进行测定：10μg/ml、2μg/ml、0.4μg/ml、0.08μg/ml、0.016μg/ml、0.0032μg/ml、0.00064μg/ml和0.000128μg/ml。将阴性对照抗体人类igg以8种稀释系列的以下浓度进行测定：10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml、0.0001μg/ml、0.00001μg/ml和0.000001μg/ml。检查变体2-g09、阿特珠单抗生物仿制药和人类igg的剂量响应实验利用了cho-k1来源的靶细胞，而测试利妥昔单抗的实验利用了raji淋巴母细胞样来源的靶细胞。
[0503]
结果显示，变体2-g09没有显著的细胞介导的细胞毒性活性。例如，在10％的pnhs浓度时，变体2-g09没有展示出随测试的全部8种稀释系列变化的剂量响应曲线，表明该抗体以任何浓度都不会介导针对cho-k1/pd-l1靶细胞的cdc作用(图37c)。变体2-g09显示出约2.8
×
10-2
μg/ml的ec
50
，并且没有观察到明显的靶细胞裂解(表15)。类似的结果显示，如预期的，阿特珠单抗生物仿制药也没有显著的细胞介导的细胞毒性活性。例如，在10％的pnhs浓度时，阿特珠单抗生物仿制药没有表现出随测试的全部8种稀释系列变化的剂量响应曲线，表明该抗体以任何浓度都不会介导针对cho-k1/pd-l1靶细胞的cdc作用(图37d)，并且观察到的最高靶细胞裂解百分比为约4.7％(表15)。在另一方面，阳性对照抗体展示出随测试的全部8种稀释系列强烈变化的剂量响应曲线，表明该抗体介导针对raji淋巴母细胞样来源的靶细胞的显著cdc作用(图37a)。阳性对照抗体表现出约0.2μg/ml的ec
50
，并且对
于该抗体观察到的最高靶细胞裂解百分比为104.7％(表15)。如预期的，阴性对照没有展示出随全部8种稀释系列变化的剂量响应曲线(图37b)，没有可检测到的细胞裂解，并且具有8.4
×
10-4
μg/ml的ec
50
(表15)。综上所述，这些结果展示变体2-g09没有显著的细胞介导的细胞毒性活性。
[0504][0505]
实施例9
[0506]
修饰的人类抗pd-l1 84g09抗体表现出降低的免疫相关不良副作用率
[0507]
用于治疗癌症适应症的商业上可获得的免疫检查点抑制剂与免疫相关不良事件(irae)的显著风险相关(tocut等人，2018)。在这些之中，0.2％
–
1.0％的患者中出现新发作的胰岛素依赖性糖尿病(dm)(stamatouli等人，2018；barroso-sousa等人，2018)。虽然确切的机制尚未完全了解，但它涉及针对胰腺β细胞的自身免疫应答，导致胰岛素产生不足。这种并发症对于pd-1/pd-l1检查点阻断疗法是常见的，并且通常在维持对抗体高暴露所必需的重复施用周期的相对延长的治疗后发展(orlov等人，2015；de filette等人，2016)。
[0508]
非肥胖糖尿病(nod)小鼠是1型糖尿病的常见动物模型，1型糖尿病由于白细胞浸润到胰岛中而发展胰岛炎。向前驱糖尿病雌性nod小鼠施用抗pd-1或抗pd-l1抗体导致糖尿病的快速发作(ansari等人，2003)和耐受性疗法(诸如抗cd3和耐受性肽输注)的逆转(fife等人，2006)。据显示，对相对宽泛范围的鼠龄(4周和10周)的nod小鼠单次注射抗pd-l1可诱导糖尿病。在该模型中，当连续三天检测到》250mg/dl的随机血糖读取时，定义为糖尿病。当在10周龄注射抗pd-l1时，已预期在处理之后5天时在80％-100％的小鼠中疾病发作。重要的是，据显示，在第0天以500μg，随后每2天一次另外的250μg直至第10天的延长的暴露于抗pd-l1的方案是糖尿病诱导所需要的(ansari等人，2003)。
[0509]
因此，可以通过使用同一抗pd-l1抗体的在清除率方面不同的变体在易感nod小鼠中诱导糖尿病，以用于研究抗体清除率与引发自身免疫性疾病的风险之间的关系。在9周龄时，雌性nod小鼠按照以下组接受单次i.p.注射的测试的抗pd-l1抗体变体或留置不处理：1)1.5mg/小鼠的抗b12人类igg1同种型抗体对照(n＝2)；2)1.5mg/小鼠的变体1-atz(fc效应子无效)抗体(n＝10)；和3)1.5mg/小鼠的变体2-atz(fc效应子无效-h315a)抗体(n＝10)。在单次注射之前，并且注射后每日一次，每天早上使用血糖仪(freestyle血糖监测系统)监测小鼠的血糖水平。显著性使用变体1对比于变体2的时序(mantel-cox)检验来计算。当连续三天血糖读取》250mg/dl时，小鼠被定义为糖尿病。
[0510]
在小鼠中，这两种变体的pk谱的差异显著，即，变异体1-atz的0.44ml/hr/kg的清除率对比变体2-atz(fc效应子无效-h315a)抗体的2.22ml/hr/kg的清除率。在动物ad和痴呆模型中，两种抗体变体在降低认知缺陷和脑疾病方面的有效剂量是相同的，范围在0.5mg/小鼠至1.5mg/小鼠之间。在该实验中，在单次施用1.5mg/小鼠的两种抗pd-l1抗体变体后测量nod小鼠中的糖尿病发作。
[0511]
每日葡萄糖读取在8am至11am之间进行。每日葡萄糖读取的结果以kaplan
–
meier存活曲线呈现。如表16和图38中示出的，在实验期间，在用变体2-atz(fc效应子无效-h315a)处理的nod小鼠中，没有观察到葡萄糖重量水平的显著改变。这与用变体1-atz(fc效应子无效)处理的nod小鼠形成对比；该组中的动物表现出血糖水平显著增加至指示糖尿病发作的水平。
[0512][0513]
在nod小鼠中还监测了体重损失。如表17和图39中示出的，在实验期间，在用变体2-atz(fc效应子无效-h315a)处理的nod小鼠中，没有观察到体重的显著改变。这与用变体1-atz(fc效应子无效)处理的nod小鼠形成对比；该组中的动物表现出显著程度的体重损失。
[0514][0515]
这项研究中测试的两种抗pd-l1抗体变体之间的唯一差异是抗体fc部分上的h315a单点突变，这加速了抗体从循环中的清除。这两种抗体变体在ad和痴呆小鼠模型中显示出相同的有效剂量范围，以及对外周免疫活性相似的作用，如通过血液中表达pd-1的记忆性t细胞的升高的频率反映的。因此表明，变体2-atz(fc效应子无效-h315a)抗体的短暴露时间足以在ad和痴呆小鼠模型中产生有益作用，而不足以在易感nod小鼠中诱导自身免疫性糖尿病，而在用表现出慢得多的清除率的仅无效变体处理后80％的nod小鼠发展为糖尿病。虽然对于治疗癌症，目的是在整个治疗时间段维持对抗体的恒定暴露，但对于ad和痴呆，单次施用在外周和脑中引发一系列的自我延续性(self-perpetuating)事件，这些事件在启动之后不依赖于外周中的抗体水平。因此，在ad中的给药方案由下游事件的动力学决定，而与抗体的暴露时间无关。抗pd-l1抗体在降低ad和痴呆疾病中的作用机制使得能够使用具有快速清除特性的抗体，这使得其在免疫相关不良事件方面更安全，且不妨碍其功效。
[0516]
最后，应当理解，尽管本说明书的各方面通过参考特定的实施方案被强调，但本领域的技术人员将容易理解这些公开的实施方案对本文公开的主题的原理仅是说明性的。特定实施方案并不意图详尽或将本发明限制于所公开的精确形式。因此，应当理解，否则本文描述所公开的主题决不限于特定的化合物、组合物、物品、装置、方法、方案和/或试剂等，除非明确说明如此。此外，本领域普通技术人员将认识到，可以根据本文的教导进行某些变化、修改、排列、改变、添加、减少及其子组合，而不偏离本说明书的精神。因此意图本发明的范围不受该详细描述的限制。此外，意图所附权利要求和今后引入的权利要求被解释为包括在其真正的精神和范围内的所有这样的变化、修改、排列、改变、添加、减少和子组合。
[0517]
本文描述了本发明的某些实施方案，包括本发明人已知用于进行本发明的最佳的
模式。当然，在阅读了前述描述后，对这些描述的实施方案的变化对于本领域的普通技术人员将变得明显。本发明人预期了技术人员酌情采用这样的变化，并且本发明人设想了本发明另外以不同于本文明确描述的方式被实施。因此，本发明包括被适用法律许可的在此所附权利要求书中阐述的主题的所有修改形式和等同物。此外，上述实施方案以其所有可能的变化形式的任何组合被本发明所涵盖，除非本文另有说明或以其他方式与上下文明显矛盾。
[0518]
本发明的替代性实施方案、要素或步骤的分组不应被解释为限制。本文公开的每个组成员可以单独或与其他组成员组合来提及和要求保护。预期，为了方便和/或专利性的原因，组的一个或更多个成员可被包括于组中或从组中删除。当任何这样的包括或删除发生时，本说明书被认为包含所修改的组，从而满足所附权利要求书中使用的所有马库什组(markush group)的书面描述。
[0519]
如本领域普通技术人员所见，现在已知或以后设计的对所要求保护的主题的非实质性改变被明确地设想为等同于在本权利要求书的范围内。因此，本领域普通技术人员现在或以后已知的明显的替换被限定为在所限定要素的范围内。
[0520]
除非另外指明，否则在本说明书和权利要求书中使用的表示特征、项目、数量、参数、性质、术语等的所有数字应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。如本文所用，术语“约”意指如此合格的特征、项目、数量、参数、性质、或术语包括陈述的特征、项目、数量、参数、性质或术语的值的以上和以下加或减10％的范围。因此，除非有相反指示，否则本说明书和所附权利要求书中列出的数字参数为可变化的近似值。例如，在确定给定分析物的质量时，质谱术设备可以略有不同，在离子的质量或离子的质荷比的上下文中，术语“约”指 /-0.50原子质量单位。至少，而非试图限制对权利要求书的范围的等同原则的应用，每个数字指示应至少根据所报告的有效数字的数字和通过应用通常的约数技术来解释。
[0521]
尽管列出本发明的广泛范围的数值范围和值为近似值，但在特定实施例中列出的数值范围和值被尽可能精确地报告。然而，任何数值范围或值固有地包含一定的误差，该误差是由存在于其各自的测试测量值中的标准差必然产生的。本文中对值的数值范围的列举仅意图用作单独地提及落入所述范围的每个单独数值的速记方法。除非本文另外指明，否则将数值范围的每个单独值并入到本说明书中，如同其在本文被单独阐述。
[0522]
关于实施方案或实施方案的方面使用的术语“可以(may)”或“可以/能够(can)”也伴随其携带“可以不(may not)”或“不能/不会(cannot)”的代替含义。这样，如果本说明书公开了实施方案或实施方案的方面可以(may)或可以/能够(can)作为本发明的主题的部分被包括在内，那么也明确地表示了负面限制或排除条件，意味着实施方案或实施方案的方面可以不或不能/不会作为本发明的主题的部分被包括在内。以类似的方式，关于实施方案或实施方案的方面使用的术语“任选地”意指这样的实施方案或实施方案的方面可以作为本发明的主题的部分被包括在内，或可以不作为本发明的主题的部分被包括在内。是否应用这样的负面限制或排除条件将基于该负面限制或排除条件是否被阐述于所请求保护的主题中。
[0523]
术语“一(a)”、“一(an)”、“该/所述(the)”和描述本发明的上下文中使用的类似指代物(尤其在所附权利要求书的上下文中)应被解释为既覆盖单数形式又覆盖复数形式，除非本文另外指明或上下文明显矛盾。此外，除非另外明确说明，否则用于鉴定的要素的序数
指标(诸如，例如，“第一”、“第二”、“第三”等)被用于区分要素，并且不指示或暗示要求或限制数目的这样的要素，并且也不指示这样的要素的特定位置或顺序。本文描述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另外指示或以其他方式与上下文明显矛盾。本文提供的任何和全部实例或示例性语言(例如，“诸如”)的使用仅意图更好地说明本发明，而不是另外对要求保护的本发明的范围施加限制。本说明书中的语言不应解释为表明任何未要求保护的要素对实施本发明必不可少。
[0524]
当在权利要求中使用时，无论是提交的还是根据修改添加的，开放式过渡术语“包含/包括(comprising)”、其变化形式诸如，例如，“包含/包括(comprise)”和“包含/包括(comprises)”以及其等同的开放式过渡短语如“包括/包含(including)”、“包含/含有(containing)”和“具有(having)”，涵盖单独的或与未陈述的主题组合的所有明确陈述的要素、限制、步骤、整数和/或特征；所陈述的要素、限制、步骤、整数和/或特征是必要的，但是可以添加其他未陈述的要素、限制、步骤、整数和/或特征，并且仍然形成本发明权利要求书范围内的构造。本文公开的特定实施方案可以在权利要求中使用封闭式过渡短语“由...组成(consisting of)”或“主要由...组成(consisting essentially of)”(或其变化形式，诸如，例如，“由...组成(consist of)”、“由...组成(consists of)”、“主要由...组成(consist essentially of)”和“主要由...组成(consists essentially of)”)来代替“包含/包括”或作为“包含/包括”的修改来进一步限制。当在权利要求中使用时，无论是提交的还是根据修改添加的，封闭式过渡短语“由...组成”排除在权利要求中没有明确陈述的任何要素、限制、步骤、整数或特征。封闭式过渡短语“主要由...组成”将权利要求的范围限制为明确陈述的要素、限制、步骤、整数和/或特征，以及实质上不影响要求保护的主题的基本和新颖特征的任何其他要素、限制、步骤、整数和/或特征。因此，开放式过渡短语“包含/包括”的含义被定义为涵盖所有明确陈述的要素、限制、步骤和/或特征以及任何任选的、另外的未指定的要素、限制、步骤和/或特征。封闭式过渡短语“由...组成”的含义被定义为仅包括在权利要求中明确陈述的那些要素、限制、步骤、整数和/或特征，而封闭式过渡短语“主要由...组成”的含义被定义为仅包括在权利要求中明确陈述的那些要素、限制、步骤、整数和/或特征，以及本质上不影响要求保护的主题的基本和新颖特征的那些要素、限制、步骤、整数和/或特征。因此，开放式过渡短语“包含/包括”(及其等同的开放式过渡短语)在其含义内包括作为限制性情况的由封闭式过渡短语“由...组成”或“主要由...组成”指定的要求保护的主题。因此，本文以短语“包含/包括”描述的或要求保护的实施方案明确无误地提供了对短语“主要由...组成”和“由...组成”的描述、实现和支持。
[0525]
为了描述和公开的目的，本说明书中引用和标识的所有专利、专利出版物、和其他参考文献通过引用以其整体单独和明确地并入本文，例如，与本发明有关的可以使用的在这样的出版物中描述的组合物和方法。这些出版物仅为了其先于本技术的申请日期的公开内容被提供。就这一点而言，任何内容不能或不应该被解释为承认本发明人没有资格借助在先发明或出于任何其他原因先于这样的公开内容。关于这些文件的日期或内容的表述的所有陈述都基于本技术人可获得的信息，而不构成关于这些文件的日期或内容的正确性的任何承认。
[0526]
最后，本文使用的术语仅为了描述特定实施方案的目的，并不意图限制本发明的范围，本发明的范围仅由本发明的权利要求书限定。因此，本发明不限于如所示出和描述的
精确内容。