兼容双测序平台的建库元件、试剂盒及建库方法与流程

技术特征：
1.一种兼容双测序平台的建库方法，其特征在于，所述建库方法包括：采用带有5’磷酸化修饰的引物或5’磷酸化修饰的接头对目标样本进行文库构建，获得带有5’磷酸化修饰的线性的扩增文库，所述5’磷酸化修饰的线性的扩增文库即为适用于illumin测序平台的线性文库；或者进一步将所述带有5’磷酸化修饰的线性的扩增文库进行环化，获得适用于mgi测序平台的环化文库；其中，所述5’磷酸化修饰的引物包括p5截断型扩增引物seq id no：1和p7截断型扩增引物seq id no：2；所述5’磷酸化修饰的接头包括p5全长型接头seq id no：3和p7全长型接头seq id no：4；其中，seq id no：1：/5phos/aatgatacggcgaccaccgagatctacacnnnnnnnnnnacactctttccctacacgac，10个n代表p5端index序列；seq id no：2：caagcagaagacggcatacgagatnnnnnnnnnngtgactggagttcagacgtgt，10个n代表p7端index序列；seq id no：3：/5phos/aatgatacggcgaccaccgagatctacacnnnnnnnnnnacactctttccctacacgacgctcttccgatc*t，10个n代表p5端index序列，*代表硫代修饰；seq id no：4：/5phos/gatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacnnnnnnnnnnatctcgtatgccgtcttctgcttg，10个n代表p7端index序列；其中，包括所述p5端index序列或所述p7端index序列在内的index序列上下游各1bp的序列至少含有三个编辑距离。2.根据权利要求1所述的建库方法，其特征在于，所述p5端index序列选自表1-1中任意一种，所述p7端index序列选自表1-2中任意一种。3.根据权利要求2所述的建库方法，其特征在于，所述目标样本为多个，多个所述目标样本对应的所述p5端index序列选自表1-1中任意一组4碱基平衡的标签序列，多个所述目标样本对应的所述p7端index序列选自表1-2中任意一组4碱基平衡的标签序列，所述4碱基平衡的标签序列是指4个一组的标签序列平衡，即在标签序列的第1位到第10位的每个位置上，碱基a、t、g和c各有一个。4.根据权利要求3所述的建库方法，其特征在于，采用带有5’磷酸化修饰的引物对目标样本进行文库构建，获得带有5’磷酸化修饰的线性的扩增文库包括：采用seq id no：7和seq id no：8所示的截断型接头对来源于所述目标样本的片段进行接头连接，得到带接头片段；采用seq id no：1和seq id no：2所示的所述5’磷酸化修饰的引物对所述带接头片段进行扩增，得到所述带有5’磷酸化修饰的线性的扩增文库；其中，seq id no：7：acactctttccctacacgacgctcttccgatc*t，*代表硫代修饰；seq id no：8：/5phos/gatcggaagagcacacgtctgaactccagtcac。5.根据权利要求3所述的建库方法，其特征在于，采用5’磷酸化修饰的接头对目标样本
进行文库构建，获得带有5’磷酸化修饰的线性的扩增文库包括：采用seq id no：3和seq id no：4所示的全长型接头对来源于所述目标样本的片段进行接头连接，得到带接头文库；采用seq id no：5及seq id no：6所示的文库扩增引物对所述带接头文库进行扩增，得到所述5’磷酸化修饰的线性的扩增文库；其中，seq id no：5：/5phos/aatgatacggcgaccaccgagat；seq id no：6：caagcagaagacggcatacga。6.根据权利要求1至5中任一项所述的建库方法，其特征在于，在进行环化之前，所述建库方法还包括对所述线性的扩增文库进行靶向捕获的步骤；优选地，采用5’磷酸化修饰的文库扩增引物对靶向捕获后的捕获文库进行扩增，得到线性扩增捕获文库，对所述线性扩增捕获文库进行所述环化，得到所述适用于mgi测序平台的环化文库；优选地，所述5’磷酸化修饰的文库扩增引物包括seq id no：5所示的p5磷酸化引物，以及seq id no：6所示的p7引物。7.一种兼容双测序平台的建库试剂盒，其特征在于，所述建库试剂盒包括如下组合中的任意一种：1)组合1：p5截断型扩增引物seq id no：1和p7截断型扩增引物seq id no：2，其中，seq id no：1：/5phos/aatgatacggcgaccaccgagatctacacnnnnnnnnnnacactctttccctacacgac，10个n代表p5端index序列；seq id no：2caagcagaagacggcatacgagatnnnnnnnnnngtgactggagttcagacgtgt，10个n代表p7端index序列；2)组合2：p5全长型接头seq id no：3和p7全长型接头seq id no：4，其中，seq id no：3：/5phos/aatgatacggcgaccaccgagatctacacnnnnnnnnnnacactctttccctacacgacgctcttccgatc*t，10个n代表p5端index序列，*代表硫代修饰；seq id no：4：/5phos/gatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacnnnnnnnnnnatctcgtatgccgtcttctgcttg，10个n代表p7端index序列；其中，包括所述p5端index序列或所述p7端index序列在内的index序列上下游各1bp的序列至少含有三个编辑距离。8.根据权利要求7所述的建库试剂盒，其特征在于，所述p5端index序列选自表1-1中任意一种，所述p7端index序列选自表1-2中任意一种。9.根据权利要求7所述的建库试剂盒，其特征在于，所述建库试剂盒包括412条p5端index序列和432条p7端index序列，所述p5端index序列如表1-1所示，所述p7端index序列如表1-2所示，其中，所述p5端index序列和/或所述p7端index序列均按一组4碱基平衡的标签序列的方式配合使用。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的建库试剂盒，其特征在于，所述建库试剂盒还包括seq id no：5和seq id no：6所示的文库扩增引物，和/或者seq id no：7和8所示的截断型接头。11.一种兼容双测序平台的建库元件，其特征在于，所述建库元件选自如下组合中的任意一种：1)组合1：p5截断型扩增引物seq id no：1和p7截断型扩增引物seq id no：2，其中，seq id no：1：/5phos/aatgatacggcgaccaccgagatctacacnnnnnnnnnnacactctttccctacacgac，10个n代表p5端index序列；seq id no：2caagcagaagacggcatacgagatnnnnnnnnnngtgactggagttcagacgtgt，10个n代表p7端index序列；2)组合2：p5全长型接头seq id no：3和p7全长型接头seq id no：4，其中，seq id no：3：/5phos/aatgatacggcgaccaccgagatctacacnnnnnnnnnnacactctttccctacacgacgctcttccgatc*t，10个n代表p5端index序列，*代表硫代修饰，seq id no：4：/5phos/gatcggaagagcacacgtctgaactccagtcacnnnnnnnnnnatctcgtatgccgtcttctgcttg，10个n代表p7端index序列；其中，包括所述p5端index序列或所述p7端index序列在内的index序列上下游各1bp的序列至少含有三个编辑距离。12.根据权利要求11所述的建库元件，其特征在于，所述p5端index序列选自表1-1中任意一种，所述p7端index序列选自表1-2中任意一种。13.根据权利要求11所述的建库元件，其特征在于，所述建库元件为扩增引物组合物或者接头组合物，所述扩增引物组合物包括多组p5截断型扩增引物和/或多组p7截断型扩增引物的组合，每组所述p5截断型扩增引物包含选自表1-1中的任意一组4碱基平衡的标签序列，每组所述p7截断型扩增引物包含选自表1-2中的任意一组4碱基平衡的标签序列；所述接头组合物包括多组p5全长型接头和/或多种p7全长型接头，每组所述p5全长型接头包含选自表1-1中的任意一组4碱基平衡的标签序列，每组所述p7全长型接头包含选自表1-2中的任意一组4碱基平衡的标签序列；所述4碱基平衡的标签序列是指4个一组的标签序列平衡，即在标签序列的第1位到第10位的每个位置上，碱基a、t、g和c各有一个。

技术总结
本发明提供了一种兼容双测序平台的建库元件、试剂盒及建库方法。建库方法包括：采用带有5’磷酸化修饰的引物或接头对目标样本进行文库构建，获得带有5’磷酸化修饰的线性的扩增文库，即为适用于Illumin测序平台的线性文库；或进一步将带有5’磷酸化修饰的线性的扩增文库进行环化，获得适用于MGI测序平台的环化文库。通过在Illumina全长型接头的5’端，或者文库扩增引物的5’端带上磷酸化修饰，便于在获得适合Illumina测序平台的线性文库的同时，只需直接利用5’端的磷酸化修饰进行环化即可获得适用于MGI测序平台的环化文库。从而解决了现有建库方法在两个平台上兼容性低的问题。有建库方法在两个平台上兼容性低的问题。有建库方法在两个平台上兼容性低的问题。


技术研发人员：汪彪 胡玉刚 吴强
受保护的技术使用者：纳昂达（南京）生物科技有限公司
技术研发日：2021.11.09
技术公布日：2022/2/6