一种乳酸菌组合物以及犊牛开食料的制作方法

1.本发明涉及一种犊牛开食料，具体涉及一种用于饲料的乳酸菌组合物、包含该组合物的犊牛开食料的复合预混添加剂、及相应的犊牛开食料和配制方法。


背景技术：

2.犊牛出生后消化酶系统发育不健全，且瘤胃、网胃、瓣胃发育不成熟，而瘤胃是反刍动物重要的消化器官，瘤胃的尽早发育，有利于牛消化功能得到充分的发挥；犊牛的免疫系统功能不完善，抗病能力较差，对日粮、温度等的变化敏感，易引起各种疾病(李辉等，2005)。在犊牛的消化系统中建立优势菌群和良好的微生物区系对犊牛的生长发育非常重要，甚至直接影响到成年后的生产性能(吴建豪，2018)。
3.在犊牛开食料产品的设计中，需要同时解决消化率和犊牛健康问题，才能满足实际生产的需要。乳酸菌耐受胃肠道酸性环境，抑制有害菌的生长恢复失调的微生态平衡；可以竞争性地抑制病原菌在肠道内的定植，抑制病原体附到肠细胞上，形成良好的屏障作用；乳酸菌可刺激动物肠道，促进免疫器官的发育成熟，产生局部型免疫反应，提高机体抗体水平或巨噬细胞的活性，增强机体免疫功能(提高疫苗效价)；乳酸菌在肠道内可产生乳酸、乙酸、丙酸和丁酸等挥发性脂肪酸，产生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶，合成维生素、氨基酸等营养物质，提高动物的生长速度，提高养殖效益。目前，关于益生菌的研究表明，饲喂益生菌能提高犊牛生长性能、提高饲料利用率(frizzoal s等，2011)、提高新生犊牛消化道有益菌群数量(heinrichsaj等，2009)，益生菌作为促生长剂(signorini m l等，2011)改善犊牛犊牛的瘤胃功能(帅丽芳等，2002)，使瘤胃内呈酸性环境(liu h等，2010)、益生菌产生的多种营养代谢物质有助于饲料的消化吸收，促进犊牛生长发育(孙晴等，2011)。


技术实现要素：

4.针对上述现有技术中所存在的问题以及饲料领域的发展趋势，本发明首先提供一种用作饲料添加剂的乳酸菌组合物产品，其由以下8种单菌配伍而成的乳酸菌组合物，具体为：嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)，菌株保藏号为cgmccno.7.423；长双岐杆菌长亚种(bifidobacterium longum subsp.longum)，菌株保藏号为cgmcc no.7.427；植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)，菌株保藏号为cgmcc no.7.426；屎肠球菌(enterococcus faecium)，菌株保藏号为cgmcc no.7.428；干酪乳杆菌(lactobacillus casei)，菌株保藏号为cgmcc no.7.425；德氏乳杆菌保加利亚亚种(lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)，菌株保藏号为cgmcc no.7.424；嗜热链球菌(streptococcus thermophilus)，菌株保藏号为cgmcc no.7.430；以及，乳酸乳球菌(lactococcus lactis)，菌株保藏号为cgmcc no.7.429。上述八株菌株于2021年07月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。其中，乳酸菌组合物中，各菌株的添加质量比为1:1:1:1:1:1:1:1。
5.具体地，所述嗜酸乳杆菌的具体获得方式及相关施用参数为：
6.菌株编号：sy-r1；采集地：北京；具体采集位置：北京养猪育种中心卸甲山猪场；分离基物：仔猪胃；分离方法：平板划线法；培养基(成分g/l)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、醋酸钠5.0g、硫酸镁0.1g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g；特征特性：厌氧琼脂平板上培养，形成较小(直径约0.5mm)、网形、凸起、表面粗糙、边缘卷曲的菌落；细胞形状：杆菌；培养温度：37℃；培养时间：16～18h；是否扩增：是；混合前菌落数要求：≥106；经过16s rrna扩增与测序分析，序列如seq id no:1所示。主要作用：调节免疫，平衡肠道菌群；分泌抗菌物质，缓解胃肠道炎症；合成维生素(vb、vk)；竞争营养物质及肠黏膜位置，抑制病源菌的肠道定植。
7.所述长双岐杆菌长亚种的具体获得方式及相关施用参数为：
8.菌株编号：sy-r5；采集地：北京；具体采集位置：北京养猪育种中心卸甲山猪场；分离基物：仔猪小肠；分离方法：平板划线法；培养基(成分g/l)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0g、柠檬酸二铵2.0g、醋酸钠5.0g、硫酸镁0.1g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g、l-半胱氨酸0.5g；特征特性：革兰氏阳性、不运动、细胞呈杆状、一端有时呈分叉状、严格厌氧的细菌属；细胞形状：杆菌；培养温度：37℃；培养时间：16～18h(厌氧培养)；是否扩增：是；混合前菌落数要求：≥106；测序序列如seq id no:5所示。主要作用：调节免疫，平衡肠道菌群；维持肠道酸性环境，预防便秘和腹泻；合成维生素和氨基酸等活性成分。
9.所述植物乳杆菌的具体获得方式及相关施用参数为：
10.菌株编号：sy-r4；采集地：北京；具体采集位置：北京市通州区永乐店渠头牛场；分离基物：青贮玉米；分离方法：平板划线法；培养基(成分g/l)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、醋酸钠5.0g、硫酸镁0.1g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g；特征特性：厌氧或兼性厌氧,菌种为直或弯的杆状，单个、有时成对或成链状，最适ph6.5左右，属于同型发酵乳酸菌；细胞形状：杆菌；培养温度：37℃；培养时间：16～18h；是否扩增：是；混合前菌落数要求：≥106；测序序列如seq id no:4所示。主要作用：抗逆性强，耐酸碱、可发酵多种碳源；分泌有机酸、消化酶及抗菌成分，平衡肠道菌群，提高饲料消化率。
11.所述屎肠球菌的具体获得方式及相关施用参数为：
12.菌株编号：sy-r6；采集地：北京；具体采集位置：北京养猪育种中心种猪资源场；分离基物：猪肠道；分离方法：平板划线法；培养基(成分g/l)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、醋酸钠5.0g、硫酸镁0.1g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g；特征特性：圆形或椭圆形，呈单个、成对或短链状排列的革兰氏阳性球菌，无芽孢、无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌，油镜下观察屎肠球菌菌体多单生，对生和链状较少；细胞形状：球菌；培养温度：37℃；培养时间：16～18h；是否扩增：是；混合前菌落数要求：≥106；测序序列如seq id no:6所示。主要作用：增强动物免疫力，合成抗菌物质；分泌有机酸，维持肠道菌群平衡，预防腹泻。
13.所述干酪乳杆菌的具体获得方式及相关施用参数为：
14.菌株编号：sy-r3；采集地：北京；具体采集位置：北京市通州区永乐店渠头牛场；分离基物：青贮玉米；分离方法：平板划线法；培养基(成分g/l)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、
酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、醋酸钠5.0g、硫酸镁0.1g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g；特征特性：革兰氏阳性菌，不产芽孢，无鞭毛，不运动，菌体长短不一，两端呈方形，常成链；菌落粗糙，灰白色，有时呈微黄色；细胞形状：杆菌；培养温度：37℃；培养时间：16～18h；是否扩增：是；混合前菌落数要求：≥106；测序序列如seq id no:3所示。主要作用：抗逆性强，耐酸碱；增强动物免疫力，合成抗菌物质和有机酸，竞争营养物质及肠黏膜位置，抑制病原菌的肠道定殖，预防腹泻。
15.所述德氏乳杆菌保加利亚亚种的具体获得方式及相关施用参数为：
16.菌株编号：sy-r2；采集地：河北；具体采集位置：石家庄中元牧业；分离基物：鲜奶；分离方法：平板划线法；培养基(成分g/l)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、醋酸钠5.0g、硫酸镁0.1g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g；特征特性：兼性厌氧，在需氧环境下发育不良，菌体粗而长，2-20
×
1μ，两端稍圆，单个，平行或短键排列；细胞形状：杆菌；培养温度：37℃；培养时间：16～18h；是否扩增：是；混合前菌落数要求：≥106；测序序列如seq id no:2所示。主要作用：调节动物免疫力，合成抗菌物质，预防梭菌引起的腹泻。
17.所述嗜热链球菌的具体获得方式及相关施用参数为：
18.菌株编号：sy-r8；采集地：河北；具体采集位置：石家庄中元牧业；分离基物：鲜奶；分离方法：平板划线法；培养基(成分g/l)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、醋酸钠5.0g、硫酸镁0.1g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g；特征特性：耗氧的革兰氏阳性菌，以两个卵圆型为一对的球菌连成约0.7到0.9微米的长链；细胞形状：球菌；培养温度：37℃；培养时间：16～18h；是否扩增：是；混合前菌落数要求：≥106；测序序列如seq id no:8所示。主要作用：抗逆性强，耐酸碱；增强动物免疫力，增强肠道屏障作用，改善肠道健康。
19.所述乳酸乳球菌的具体获得方式及相关施用参数为：
20.菌株编号：sy-r7；采集地：北京；具体采集位置：北京养猪育种中心种猪资源场；分离基物：猪肠道；分离方法：平板划线法；培养基(成分g/l)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母提取物5.0g、葡萄糖20.0g、吐温801.0g、柠檬酸氢二铵2.0g、醋酸钠5.0g、硫酸镁0.1g、硫酸锰0.05g、磷酸氢二钾2.0g；特征特性：细胞呈球形或卵圆形，革兰氏阳性，兼性厌氧，不产荚膜和芽孢；细胞形状：球菌；培养温度：37℃；培养时间：16～18h；是否扩增：是；混合前菌落数要求：≥106；测序序列如seq id no:7所示。主要作用：调节动物免疫力，合成抗菌物质，抑制肠道腐败菌的增殖，改善肠道健康。
21.本发明提供的上述乳酸菌组合物可以作为饲料、尤其是初生家禽/家畜饲料的益生菌添加剂来使用，可以替代现有饲料中的抗生素的基本作用，对于提高适口性、生长速率，同时降低腹泻率、增强抗病力强等各方面综合作用显著，可以真正实现饲料的无抗生素添加的目标。
22.特别地，上述乳酸菌组合物的最佳应用为犊牛开食料。
23.除上述生理特征外，本技术的乳酸菌组合物在耐高温、适应初生家畜、尤其是犊牛的强酸性胃液环境以及耐胆碱的特性：
24.韩庆功等(2018)试验表明，植物乳杆菌在温度70℃条件下处理2min，存活率可以达到88.9％，但当温度升高到80℃时处理2min，存活率则下降至34.95％。而本发明的上述
乳酸菌组合物的复合菌在65℃理2.5min、5min及7.5min以及85℃处理2.5min存活率均在96％以上，对存活率几乎没有影响，适于例如高温制粒等高温施用条件；
25.marie k.k.,oetzel g.r.等报道，奶牛正常瘤胃液的ph值为5.5～7.5；satter等(1974)报道，瘤胃微生物蛋白合成的最适宜ph为6.0-7.0。jia x.b.研究发现ph是评价瘤胃发酵程度的一个综合指标，其中适宜纤维素降解的ph范围为6.0～6.8，适宜vfa形成的ph值范围为6.2～6.6，周勃等发现瘤胃理想的酸度是6.4-6.8，呈中性至弱酸性，此酸度是瘤胃微生物存活的最佳条件，对酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维的消化降解和挥发性脂肪酸的形成有所帮助。复合乳酸菌ph为3时处理90min，存活率高80.54％，ph为4、5、6时处理90min，存活率均在90％以上。
26.牛消化道中的胆盐含量为0.03％～0.3％，上述复合乳酸菌在0.3％牛胆盐处理1h，存活率为33.55，处理2h，存活率为25.63％，处理3h，存活率为9.82％，而郭奇苑(2010)等从15日龄健康犊牛胃内分离出的4株乳酸菌用0.3％胆盐处理2h，存活率均未超过0.5％。
27.所述复合乳酸菌对大肠埃希氏菌有抑制作用，抑制圈直径为10.2mm；对杆菌肽锌、亚甲基水杨酸杆菌肽的耐受性最强，最小抑菌浓度(mic)大于1280mg/kg，其次是黄霉素，以下依次是土霉素钙、莫能菌素、盐霉素、金霉素均有较强的耐受性。
28.综上，由上述8种菌株组成的复合乳酸菌组合物组成的添加剂可以作为饲料预混料的一重要组成部分来应用。添加该乳酸菌组合物的预混料(或饲料)可以无需加入任何形式的抗生素，能够同时实现腹泻率低、生长速度快、抗病力强、无抗生素等方面的需求。
29.进一步的，本发明还提供一种高性价比的犊牛开食料，专门针对30天左右断奶的犊牛，进行引导开食之用。具体地，本发明的犊牛开食料包括如下原料(各组分以重量份计，总计共2000份)：
30.[0031][0032]
其中，犊牛开食料预混料的原料含量为(各组分以重量份计，共1000份)：
[0033]
商品名称通用名称重量份稻壳粉稻壳粉0～100抗氧化剂乙氧基喹啉10.72天地香香味剂3.14乐达甜5000z调味剂7.2磷酸氢钙磷酸氢钙12.85～14.99石粉石粉15.14～17.70犊牛开食料多矿(自用)微量元素预混料75牛用多维-n(自用)维生素预混料38小苏打碳酸氢钠293.85～332.83氯化钠氯化钠140.78～164.24氧化镁氧化镁209.32～235.45克霉丙酸，丙酸铵35.72乳健宝乳酸菌组合物71.44
[0034]
犊牛开食料多维的原料含量为(各组分以重量份计，共80份)：
[0035][0036]
[0037]
犊牛开食料多矿配制方法(各组分以重量份计，共500份)：
[0038]
商品名称通用名称名称重量份30％硫酸亚铁30％硫酸亚铁43.02～50.191％碘酸钙1％碘酸钙22.37～26.101％氯化钴1％氯化钴7.74～9.0325％硫酸铜25％硫酸铜18～2135％硫酸锌35％硫酸锌63.45～74.0330％硫酸锰30％硫酸锰98.1～114.451％亚硒酸钠1％亚硒酸钠9～10.5麦饭石麦饭石150～240
[0039]
本发明中上述原料均为市售可得原料。
[0040]
此外，本发明还提供所述犊牛开食料的制备方法。生产工艺多级预混保证混合均匀度：1.首先按照配方配制乳酸菌组合物、犊牛多矿、和犊牛多维；2.再按照配方配制犊牛预混料；3.最后按照配方将预混料与其他组分混合均匀，制得犊牛开食料成品。犊牛开食料预混料配方中涉及的所有原料，经过品控部门的质量检验合格后才能接收入库，各组分按照配方比例使用电子称准确计量，投入混合机中混合均匀后即可称量、打包、入库。整个生产过程严格按照iso9001质量管理体系和haccp食品安全管理体系的要求操作。
附图说明
[0041]
图1为实验例中对于三组犊牛的腹泻率的测试结果对比图。
具体实施方式
[0042]
为方便本领域人员更好地理解本发明，下面结合具体实施例对本发明提供的仔猪代乳料来进一步说明本发明目的的实现、功能特点及有益效果。现在给出本发明的具体实施方式如下。
[0043]
实施例：犊牛开食料配制实例
[0044]
犊牛开食料配制方法(各组分以重量份计)：
[0045][0046]
犊牛开食料预混料配置方法(各组分以重量份计)：
[0047]
[0048][0049]
犊牛开食料多维配制方法(各组分以重量份计)：
[0050][0051]
犊牛开食料多矿配制方法(各组分以重量份计)：
[0052][0053]
试验例：犊牛开食料效果试验
[0054]
1.材料与方法
[0055]
1.1试验材料
[0056]
上述制备实施例制备的犊牛开食料为试验组日粮；某公司犊牛开食料，生产企业是山东齐发药业有限公司，商品名是莫球，其中，莫能菌素预混剂中莫能菌素有效成分含量为20％，按产品使用说明饲喂，为对照组。
[0057]
其中，对照例产品所标注的原料配比(重量份)为：预混料46.1，石粉22.55，玉米83,43％豆粕450.85，小麦麸33.25，小麦次粉78.2，膨化大豆153，菜籽粕49.9，甘蔗糖蜜83.15。以有效成分计，饲料中含莫能菌素62.5mg/kg。
[0058]
1.2试验动物及分组
[0059]
选择30头自然分娩的新生健康荷斯坦犊牛，按照出生胎次、初生重和出生时间相近的原则分为3组，每组10头，各组间犊牛初始体重差异不显著，每头犊牛使用犊牛岛单独饲养，除开食料不同外，牛奶和压片玉米的饲喂量均保持一致。
[0060]
饲喂方式：新生犊牛每天喂奶6kg左右，分2-3次定量饲喂；提供新鲜、洁净、充足的饮水。犊牛出生一周左右，即可训食犊牛开食料，自由采食，保证充足洁净的饮水供应；犊牛连续5天采食1.5kg开食料后，即可断奶(大约50天左右)。断奶后方可饲喂优质干草。
[0061]
具体的试验分组见下表：
[0062]
试验分组饲料品类对照组某公司犊牛开食料试验1组实施例1开食料试验2组实施例2开食料
[0063]
1.3试验的日常管理
[0064]
犊牛饲养管理均与场内保持一致，每天记录牛奶饲喂量，开食料和压片玉米的剩
料量和添加量，计算每天采食量，对照组和试验组由专人饲养。
[0065]
1.4测定项目与方法
[0066]
(1)犊牛生长性能：分别于犊牛出生，饲养30日龄和60日龄进行体重称量。计算试验期犊牛体增重和日均增重
[0067]
(2)试验过程中记录犊牛每天的疾病发生情况和治疗情况，记录每头犊牛的发病天数和发病犊牛数，腹泻率的计算：
[0068]
腹泻率(％)＝(腹泻犊牛头数
×
腹泻天数)/(试验犊牛数
×
正试期天数)
×
100％
[0069]
2试验结果及分析
[0070]
2.1新型犊牛开食料对犊牛体重指标的影响
[0071][0072]
注：同行数据肩标字母相同或没有表示差异不显著(p》0.05)，肩标字母小写不同表示差异显著(p《0.05)，肩标字母大写表示差异极显著(p《0.01)，下同。
[0073]
2.2益生菌制剂对犊牛采食量的影响
[0074]
益生菌对试验期犊牛采食量的影响
[0075][0076]
2.3新型犊牛开食料对犊牛腹泻率的影响
[0077]
3试验结果
[0078]
本试验结果表明，饲喂本发明的犊牛开食料能明显改善犊牛的健康状况，降低犊牛的腹泻率(参见图1的柱状图结果对比，最优提高35.8％，实施例2产品)，提高犊牛的断奶重和日均增重，提高饲料消化率。与莫能菌素含量为62.5mg/kg的现有技术的含抗生素的开食料相比，本发明的产品通过益生菌的添加，完全可以实现更为优异的料肉比、增重率和抗病率等方面的效果。