一种产门冬胰岛素融合蛋白的重组大肠杆菌发酵培养方法与流程

技术特征：
1.一种适用于重组大肠杆菌发酵的培养基，其特征在于，所述培养基包含酵母蛋白胨、酵母浸粉、甘油、boc-l-赖氨酸、缓冲剂和微量元素；其中，所述酵母蛋白胨的含量范围为10～25g/l培养基，所述酵母浸粉的含量范围为25～62.5g/l培养基，所述甘油的含量范围为3～11.25g/l培养基，所述boc-l-赖氨酸的含量范围为0.4～1.3g/l培养基，以培养基体积计。2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述酵母蛋白胨的含量范围为11～15g/l培养基，所述酵母浸粉的含量范围为30～45g/l培养基，所述甘油的含量范围为4～8g/l培养基，所述boc-l-赖氨酸的含量范围为0.5-1.1g/l培养基，以培养基体积计。3.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包含硫酸铵。4.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述缓冲剂包括磷酸二氢钾和磷酸氢二钾。5.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基的ph为6.8-7.4，较佳地为6.8-7.2。6.一种利用权利要求1所述的培养基进行发酵的方法，其特征在于，包括步骤：(1)提供一如权利要求1所述的培养基；(2)将含有重组大肠杆菌的种子液接种到所述培养基中进行分批培养和补料培养；(3)向培养液中流加阿拉伯糖进行诱导培养，从而获得发酵产物。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述分批培养的培养温度为30-35℃，较佳地为32-34℃。8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述补料培养的培养温度为36-38℃。9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述补料培养的碳源为甘油，较佳地，所述甘油的浓度为750.0ml/l(v/v)。10.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的重组大肠杆菌中包含或整合有表达门冬胰岛素融合蛋白的表达盒，并且所述的门冬胰岛素融合蛋白具有式i所示的结构：a-fp-tev-r-g
ꢀꢀ
(i)式中，
“-”
代表肽键；a为无或前导肽，fp为绿色荧光蛋白折叠单元，tev为酶切位点，较佳地为tev酶酶切位点；r为用于酶切的精氨酸或赖氨酸；g为门冬胰岛素或其活性片段；其中，所述的绿色荧光蛋白折叠单元包含2-6个，较佳地2-3个选自下组的β-折叠单元：β-折叠单元氨基酸序列u1vpilveldgdvng(seq id no:11)u2hkfsvrgegegdat(seq id no:12)u3kltlkfictt(seq id no:13)u4yvqertisfkd(seq id no:14)u5tyktraevkfegd(seq id no:15)
u6tlvnrielkgidf(seq id no:16)u7hnvyitadkq(seq id no:17)u8gikanfkirhnved(seq id no:18)u9vqladhyqqntpig(seq id no:19)u10hylstqsvlskd(seq id no:20)u11hmvllefvtaagi(seq id no:21)。

技术总结
本发明提供了一种适于重组大肠杆菌发酵产门冬胰岛素融合蛋白的培养基。具体地，本发明提供了一种包含酵母蛋白胨、酵母浸粉、甘油、Boc-L-赖氨酸、缓冲剂和微量元素的培养基。本发明还提供了利用该培养基发酵生产门冬胰岛素融合蛋白的方法。利用本发明的培养基发酵，能获得较高的菌密度和较高的门冬胰岛素融合蛋白产量，且发酵培养时间短，原料易得，无病毒携带风险，成本较低，适用于工业生产。适用于工业生产。


技术研发人员：李克朗 张振山 吴松 刘慧玲
受保护的技术使用者：宁波鲲鹏生物科技有限公司
技术研发日：2020.07.27
技术公布日：2022/1/28