一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法与流程

技术特征：
1.一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，所述的兴奋剂为曲托喹酚、去甲乌药碱、罂粟碱、可待因、那可丁、吗啡和蒂巴因，包括如下步骤：步骤1，在待测样品中加入所述7种兴奋剂对应的同位素内标中间液，之后用去离子水和甲酸的乙腈溶液提取，从得到的提取液中分离出第一上清液，将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，与第一上清液合并得到第二上清液，然后加入无水硫酸镁进行涡旋振荡、离心，得到第三上清液，将第三上清液吹近干，用乙腈、甲酸和水形成的混合溶液溶解，最后过滤，得到待测液；步骤2，将待测液用高效液相色谱串联质谱仪进行测定，得到相应的谱图信息；将由所述7种兴奋剂的混合标准中间液和与所述7种兴奋剂对应的同位素内标混合中间液用空白基质溶液配制的混合标准工作液，用与待测液相同的条件进行测定，得到相应的谱图信息；步骤3，将步骤2形成的两组谱图信息进行比对，得到所述待测液和混合标准工作液中所有兴奋剂的色谱峰峰面积，以及混合标准工作液和所述待测液中对应的内标物的峰面积；步骤4，结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、以及待测液中待测组分的峰面积、待测样品质量、去离子水和甲酸的乙腈溶液的总体积、稀释倍数，采用基质外标法，求出去甲乌药碱、曲托喹酚、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的含量；结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、内标物的峰面积与浓度，以及待测液中内标物的浓度与峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测样品质量、去离子水和甲酸的乙腈溶液的总体积、稀释倍数，采用基质内标法，求出吗啡和可待因的含量。2.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1中所述的待测样品为固体样品、半固体样品或液体样品，固体样品经粉碎后混匀得到，半固体样品或液体样品经搅拌均匀后得到。3.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1中所述的待测样品、同位素内标中间液、去离子水和甲酸的乙腈溶液的比例为(1.99-2.01)g：0.075ml：(1-3)ml：15ml。4.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1将所述的同位素内标中间液加入到待测样品中后，先加去离子水涡旋10-20s，再加入甲酸的乙腈溶液涡旋混匀后，振荡提取10-15min，之后超声提取10-15min，最后在6000-8000r/min下离心4-6min，得到第一上清液。5.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤1中加入的无水硫酸镁与待测样品的质量比为(3-5)g：(3-5)g，加入无水硫酸镁后涡旋振荡1-2min，之后在6000-8000r/min下离心4-6min，得到第三上清液。6.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤2中的高效液相色谱采用c18色谱柱，流动相a为甲酸的水溶液，甲酸的体积占整个溶液体积的0.1％，流动相b为乙腈，梯度洗脱程序如下：0-1min内，流动相a的体积比例保持95％；1-2min内，流动相a的体积比例由95％线性减小至80％；2-3min内，流动相a的体积比例由80％线性减小至40％；3-4min内，流动相a的体积比例由40％线性减小至20％；4-8.5min内，流动相a的比例由20％线性减小至10％，8.5-10.5min内，流动相a的比例保持10％，10.5-11min内，流动相a的比例由10％线性增加至
95％，11-15min内，流动相a的比例保持95％；步骤2所述的质谱仪采用如下参数进行工作：扫描方式为多反应监测，毛细管电压为3.5kv，鞘气温度为400℃，干燥器温度为300℃，鞘气流量为11l/min，干燥器流量为7l/min。7.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤2采用如下过程配制混合标准工作液：用去离子水和甲酸的乙腈溶液对权利要求1步骤1所述待测样品对应的空白样品进行提取，从得到的提取液中分离出第四上清液，将提取液的剩余部分用相同的方式进行提取，与第四上清液合并得到空白基质溶液，分别移取所述7种兴奋剂对应的混合标准中间液和同位素内标混合中间液，用空白基质溶液稀释，得到混合标准工作溶液。8.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤2和步骤3中所述的谱图信息为色谱峰、定性离子对和每个离子的信噪比；步骤3在进行谱图信息比对时，采用如下标准：待测液中兴奋剂的保留时间与混合标准工作液中对应兴奋剂的保留时间偏差在
±
5％以内，且不超过
±
0.5min；待测液中兴奋剂的定性离子对的相对离子丰度与混合标准工作液中对应兴奋剂的相对离子丰度一致，且每个离子的信噪比≥3。9.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤4采用如下公式求出去甲乌药碱、曲托喹酚、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的含量：式中：x
i
为待测样品中各待测物的含量，单位为微克每千克；c为混合标准工作液中待测组分的含量，单位为纳克每毫升；a为待测液中待测组分的峰面积；a
s
为混合标准工作液中待测组分的峰面积；v为去离子水和甲酸的乙腈溶液的总体积，单位为毫升；m为待测样品质量，单位为克；f为稀释倍数。10.根据权利要求1所述的香辛料中7种兴奋剂的检测方法，其特征在于，步骤4采用如下公式求出吗啡和可待因的含量：式中：x
i
为待测样品中各待测物的含量，单位为微克每千克；c为混合标准工作液中待测组分的含量，单位为纳克每毫升；c
i
为待测液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升；a为待测液中待测组分的峰面积；a
si
为混合标准工作液中内标物的峰面积；
v为去离子水和甲酸的乙腈溶液的总体积，单位为毫升；c
si
为混合标准工作液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升；a
i
为待测液中内标物的峰面积；a
s
为混合标准工作液中待测组分的峰面积；m为待测样品质量，单位为克；f为稀释倍数。

技术总结
本发明一种香辛料中7种兴奋剂的检测方法，在样品加入同位素内标中间液，用去离子水和甲酸的乙腈溶液提取，分离出上清液，将剩余部分提取合并，加入无水硫酸镁涡旋振荡、离心，得到的上清液吹近干，溶解过滤；之后将待测液和混合标准工作液用高效液相色谱串联质谱仪测定，得到谱图信息；结合混合标准工作液中待测组分含量与峰面积、及待测液中待测组分峰面积、样品质量、提取体积、稀释倍数，求出去甲乌药碱、曲托喹酚、罂粟碱、那可丁和蒂巴因含量；结合混合标准工作液中待测组分的含量与峰面积、内标物的峰面积与浓度，及待测液中内标物的浓度与峰面积、待测液中待测组分的峰面积、待测样品质量、提取体积、稀释倍数，求出剩余兴奋剂的含量。奋剂的含量。


技术研发人员：张亚锋 王蓓蓓 卫星华 梁红月 李卓 董曼曼 贾寒冰 李敏 李欣雨
受保护的技术使用者：西安市食品药品检验所（西安市药品不良反应监测中心）
技术研发日：2021.10.25
技术公布日：2022/1/25