pfkfb3抑制剂在制备治疗婴幼儿血管瘤的药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及医学生物领域，具体涉及pfkfb3抑制剂在制备治疗婴幼儿血管瘤的药物中的应用。
背景技术：
2.婴幼儿血管瘤(infantile hemangioma，ih)是婴幼儿最常见的良性肿瘤，发病率约4％-5％，有多条信号通路参与其发生发展过程，包括血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体信号通路、notch信号通路、血管紧张素信号通路以及哺乳动物西罗莫司靶蛋白信号通路等，但ih的确切发病机制仍然不明，既往研究表明，能量代谢是内皮细胞血管生成极其重要的始动因素，因而靶向内皮细胞代谢可能为抑制血管生成提供新的治疗方法。
3.研究表明，糖代谢重编程作为肿瘤细胞的特征之一，在包括肺癌、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用。本发明旨在探究糖代谢通路关键酶在ih中的表达情况及其作用，以期进一步揭示ih发生发展的病理机制，为ih的治疗寻找新的潜在靶点。
技术实现要素：
4.基于以上问题，本发明提供pfkfb3抑制剂在制备治疗婴幼儿血管瘤的药物中的应用，本发明为靶向干预婴幼儿血管瘤的发展提供了新的潜在靶点。
5.为解决以上技术问题，本发明提供了pfkfb3抑制剂在制备治疗婴幼儿血管瘤的药物中的应用，所述pfkfb3抑制剂通过抑制糖酵解通路关键酶pfkfb3的活性而抑制hemec的增殖与迁移，从而促进hemec的凋亡。
6.进一步的，所述pfkfb3抑制剂为特异性抑制剂pfk15。
7.与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明为婴幼儿血管瘤的治疗提供了新的方向，有助于进一步揭示婴幼儿血管瘤的发生发展机理，为靶向干预婴幼儿血管瘤的发展提供了新的潜在靶点。
附图说明
8.图1为本发明的实施例的糖酵解关键酶在增殖期与消退期ih组织中的表达情况(200
×
)；
9.图2为本发明的实施例的糖酵解关键酶在huvec与hemec中的表达情况；
10.图3为本发明的实施例的pfk15抑制hemec增殖(a)与迁移(b,400
×
)(*p《0.05,**p《0.01)的结果图；
11.图4为本发明的实施例的pfk15促进hemec凋亡结果图(**p《0.01,***p《0.001)。
具体实施方式
12.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作
为对本发明的限定。
13.实施例：
14.本实施例收集从2020年6月至2020年12月在四川大学华西医院小儿外科行手术切除且经病理证实的、既往无任何治疗病史的婴幼儿血管瘤组织标本，本研究经四川大学华西医院伦理委员会批准，且告知所有患者家属并签署知情同意书。
15.本实施例使用的试剂及来源如下：兔抗人glut1、hk2、pfkfb3、pfk1、pkm2、ldha多克隆抗体购自proteintech、santa cruz和cst公司，免疫组织化学检测即用型通用二抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔igg和dab显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司；胎牛血清和ebm-2培养基购自美国gibco公司，ecm培养基购自cell stem公司；cck8检测试剂盒购自索莱宝公司，ripa蛋白裂解液和bca蛋白定量检测试剂盒均购自碧云天公司，ecl试剂购自四正柏公司。本实施例利用上述试剂进行了免疫组织化学实验、hemec分离与培养实验、huvec的分离与培养实验、westernbolt实验、细胞干预实验、cck-8实验、transwell实验和annexinv/pi双染实验，并对上述实验结果进行了统计学处理。
16.见附图1，为本实施例应用免疫组化法检测糖酵解关键酶在增殖期与消退期ih组织中的表达情况，结果发现糖酵解关键酶glut1、hk2、pfkfb3、pfk1、pkm2及ldha主要表达于细胞质中，且在增殖期ih中表达高于消退期ih。见附图2，本实施例为进一步揭示糖酵解关键酶在ih中的表达情况，采用western blot技术在细胞蛋白表达水平层面进一步验证，western blot结果发现，糖酵解关键酶的蛋白表达在脐静脉内皮细胞(huvec)中比血管瘤内皮细胞(hemec)低。
17.本实施例为进一步探究糖酵解关键酶对hemec生物学功能的影响，发明人选取了pfkfb3基因作为研究目标。见附图3，cck-8结果显示，与对照组相比，pfk15可以抑制hemec的增殖，并呈一定的剂量相关性(0.625μmol/l、1.25μmol/l时，p《0.05；2.5μmol/l、5μmol/l及10μmol/l时，p《0.01)；当作用浓度为5μmol/l时，hemec细胞活性为51.62％，故选用5μmol/l作为pfk15的后续实验药物干预浓度(图3a)；transwell迁移实验结果显示，与对照组相比，实验组迁移细胞数量明显减少，且二者差异具有统计学意义(163
±
12vs 64
±
7,p《0.01，图3b)，说明pfkfb3抑制剂pfk15能显著抑制hemec的增殖与迁移。
18.见附图4，流式分析结果显示，经5μmol/lpfk15处理24h后，hemecs组正常细胞比例明显低于huvec组(86.40
±
0.55vs 91.33
±
0.74,p《0.001)，细胞凋亡率较对照组升高(11.67
±
0.74vs 7.25
±
0.41,p《0.01)，这表明抑制pfkfbe表达可以促进hemec的凋亡。
19.pfkfb共有4种亚型：pfkfb1-4，其中pfkfb3活性最强且在人原位肿瘤中表达最高，作为糖酵解通路上的关键酶之一，其活性的增强可以促进糖酵解通路最重要的限速酶pfk1表达增高，最终促进糖酵解通量，最终为肿瘤细胞的生长繁殖提供能量与物质基础。本实施例选用特异性抑制剂pfk15抑制pfkfb3表达后，hemec的增殖能力与迁移能力降低，细胞凋亡增加，这表明pfkfb3在hemec增殖过程中发挥着重要的作用，说明阻断pfkfb3可能成为ih治疗的潜在靶点。
20.综上所述，糖酵解通路关键酶在ih增殖期组织与hemec中高表达，抑制关键酶pfkfb3的活性可以抑制hemec的增殖与迁移，促进凋亡。本实施例的发现不仅将有助于进一步揭示婴幼儿血管瘤的发生发展机理，还表明靶向干预糖酵解关键酶可能存在ih治疗新的潜在靶点，使pfkfb3抑制剂有望应用于制备治疗婴幼儿血管瘤的药物中。
21.如上即为本发明的实施例。上述实施例以及实施例中的具体参数仅是为了清楚表述发明验证过程，并非用以限制本发明的专利保护范围，本发明的专利保护范围仍然以其权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书及附图内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。
技术特征：
1.pfkfb3抑制剂在制备治疗婴幼儿血管瘤的药物中的应用，其特征在于，所述pfkfb3抑制剂通过抑制糖酵解通路关键酶pfkfb3的活性而抑制hemec的增殖与迁移，从而促进hemec的凋亡。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述pfkfb3抑制剂为特异性抑制剂pfk15。
技术总结
本发明涉及医学生物领域，公开了PFKFB3抑制剂在制备治疗婴幼儿血管瘤的药物中的应用，所述PFKFB3抑制剂通过抑制糖酵解通路关键酶PFKFB3的活性而抑制HemEC的增殖与迁移，从而促进血管瘤内皮细胞(Hemangioma-derived endothelial cell,HemEC)的凋亡。本发明为婴幼儿血管瘤的治疗提供了新的方向，有助于进一步揭示婴幼儿血管瘤的发生发展机理，为靶向干预婴幼儿血管瘤的发展提供了新的潜在靶点。预婴幼儿血管瘤的发展提供了新的潜在靶点。预婴幼儿血管瘤的发展提供了新的潜在靶点。
技术研发人员：吉毅 杨开颖 邱桐 张学鹏 陈思源 周江元 龚雪 兰钰茹 张赓 张梓欣
受保护的技术使用者：四川大学华西医院
技术研发日：2021.09.27
技术公布日：2022/1/21
再多了解一些
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