一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法与流程

技术特征：
1.一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，其特征在于，其先通过交联试剂将目标免疫多肽对应的特异性抗体包被到磁珠，继而通过磁珠沉淀富集目标免疫多肽，将富集后的目标免疫多肽从磁珠上洗脱，并取洗脱液进行质谱检测。2.根据权利要求1所述的一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，其特征在于，所述的交联试剂是dmp(二甲基吡咪酯)；所述的磁珠是protein a beads(蛋白a磁珠)。3.根据权利要求2所述的一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，其特征在于，其包括以下详细步骤：步骤s1，采用化学交联试剂dmp将对应的特异性抗体交联包被到protein a beads上，并将protein a beads制备成hla免疫亲和柱；步骤s2，采用温和的裂解试剂对细胞或者组织样品进行裂解，获得蛋白质裂解液；步骤s4，将蛋白质裂解液引入到交联有特异性抗体的protein a beads，混匀孵育；步骤s5，回收交联有抗体的protein a beads并用缓冲液冲洗，除去非特异性结合的物质；步骤s6，向步骤s5中被清洗完的protein a beads加入洗脱试剂，收集洗脱protein a beads后的液体，为洗脱液；步骤s8，将洗脱液浓缩后进行质谱检测，并采用搜库软件对质谱采集数据进行结果搜库分析。4.根据权利要求3所述的一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，其特征在于，其还包括步骤s3，向蛋白质裂解液中加入没有结合抗体的protein a beads，在室温下进行混匀孵育，再除去没有结合抗体的protein a beads。5.根据权利要求4所述的一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，其特征在于，其还包括步骤s7，步骤s6中收集到的洗脱液为第一洗脱液，将第一洗脱液采用c18脱盐小柱进行分级脱盐和纯化，对脱盐柱依次进行活化、平衡、上样、脱盐和洗脱，收集到的洗脱液为第二洗脱液；所述的第二洗脱液用于步骤s8中进行质谱检测。6.根据权利要求3所述的一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，其特征在于，所述的步骤s2中的裂解试剂中添加有表面活性剂；裂解过程中通过机械手段辅助裂解。7.根据权利要求6所述的一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，其特征在于，所述的表面活性剂包括np40或者legalca630或者脱氧胆酸钠；所述的机械手段包括细胞超声碎裂或者使用组织匀浆仪搅拌。8.根据权利要求3所述的一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，其特征在于，所述的步骤s6中的洗脱试剂是乙酸或者三氟乙酸。

技术总结
本发明提供一种基于免疫沉淀法提取生物样品中免疫多肽的分析方法，属于免疫多肽分析技术领域，通过交联试剂制备免疫亲和柱，再对生物样本的裂解物进行免疫沉淀，从而富集得到HLA-肽段复合物，再通过C18小柱进行一个简单的两步洗脱，该步骤可以同时实现免疫多肽的除杂和脱盐，回收的成分即可在浓缩后进行质谱检测，可以实现无论是细胞还是组织等生物样本中免疫多肽的高效提取，样品前处理过程不依赖复杂的仪器，即可完成免疫多肽的纯化和除盐，大大缩短操作所需时长。大缩短操作所需时长。大缩短操作所需时长。


技术研发人员：阮宏强 李紫艺 张惠萍
受保护的技术使用者：上海中科新生命生物科技有限公司
技术研发日：2021.09.30
技术公布日：2022/1/18