一种分析番茄中氟烯线砜及其代谢物残留的UPLC-MS/MS方法与流程

一种分析番茄中氟烯线砜及其代谢物残留的uplc-ms/ms方法
技术领域：
1.本发明属于农产品中农药残留的测定技术领域，涉及番茄中氟烯线砜及其3个代谢物的残留测定方法。


背景技术：

2.氟烯线砜(fluensulfone)是由安道麦马克西姆有限公司开发的非熏蒸新型杀线虫剂，是氟代烯烃类硫醚化合物，具有触杀活性，可使种植者摆脱多年来对熏蒸型杀线虫剂的依赖，毒性低、环境风险低、使用简单，在防治线虫方面有很好的发展前景。其化学名称为5-氯-2-[(3,4,4-三氟丁-3-烯-1-基)磺酰基]-1,3-噻唑，或5-氯-1,3-噻唑-2-基3,4,4-三氟丁-3-烯-1-基砜，cas登记号为318290-98-1，相对分子质量为291.7；分子式为c7h5clf3no2s2。氟烯线砜有3个代谢物，bsa、tsa、和mes，其中bsa的英文通用名为3,4,4-trifluoro-but-3-ene-1-sulfonic acid，tsa的英文通用名为5-chloro-1,3-thiazole-2-sulfonic acid，mes的英文通用名为5-chloro-2-methylsulfonyl thiazole。
[0003]
目前我国只在黄瓜登记了氟烯线砜，美国规定氟烯线砜的残留定义为母体及其代谢物bsa、tsa之和，在果类蔬菜上的最大残留限量(mrl)为0.7mg/kg，我国尚未制定其限量标准。但国内外尚无氟烯线砜的残留分析方法报道，因此亟需建立氟烯线砜及其代谢物的残留分析方法。
[0004]
本研究采用改进的quechers前处理技术，建立了可同时检测番茄中氟烯线砜母体及其代谢物bsa、tsa、mes的超高效液相色谱-串联质谱分析方法，采用电喷雾正、负两种电离方式，比较了不同色谱柱对分离效果及响应信号的影响，优化了前处理方法，确定了最佳定容溶剂。该方法具有操作简便、快速、成本低、净化效果好，灵敏度高等优势，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求，可为农产品中氟烯线砜的残留分析提供技术支持。


技术实现要素：

[0005]
本发明的目的在于公开一种采用改进的quechers方法处理样品，分析番茄中氟烯线砜及其代谢物残留的uplc-ms/ms方法。
[0006]
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的，本发明所述的番茄中氟烯线砜及其代谢物残留的测定方法，包括以下步骤：
[0007]
a、准确称取匀浆好的番茄样品5g(精确至0.01g)于50ml聚丙烯塑料离心管中，加入15ml提取液，于垂直振荡器上震荡10min，4000r/min，离心5min，取上清液至刻度试管，加提取液定容至20ml，涡旋混匀。
[0008]
b、取2ml上清液于装有50mg psa、20mg gcb的10ml聚丙烯塑料离心管中，涡旋30s，4000r/min，离心5min，取上清液1ml，过0.22μm有机滤膜于2ml进样小瓶，待测。
[0009]
c、准备标准溶液：分别称取氟烯线砜及其代谢物bsa、tsa、mes标准品适量，用甲醇溶解并定容，配制浓度约为200μg/ml的标准储备液，避光-18℃保存，可使用六个月。分别移取4种农药标准储备液适量，用甲醇稀释，配制成浓度为10μg/ml的单个标准溶液和浓度为
10μg/ml、1μg/ml混合标准工作溶液，现用现配。
[0010]
d、准备基质匹配标准溶液：将空白番茄样品按相同前处理方法处理，得到空白样品基质溶液。分别移取适量混合标准工作溶液，用空白样品基质溶液稀释，配制浓度为0.002μg/ml、0.01μg/ml、0.025μg/ml、0.05μg/ml、0.125μg/ml、0.25μg/ml的系列基质匹配标准溶液。
[0011]
e、采用uplc-ms/ms对基质匹配标准溶液和供试样品进行测定，以目标化合物的浓度为横坐标，以定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，以此标准曲线来计算供试样品中目标化合物的残留量。
[0012]
在uplc-ms/ms测定时采用的色谱条件为：色谱柱：acquity uplc hss t3柱(2.1mm
×
100mm，1.8μm)；流动相：乙腈-0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱条件见表1。流速：0.2ml/min；进样量：5μl；柱温：40℃。
[0013]
表1梯度洗脱条件
[0014][0015]
*注：6表示线性变化，1表示立即变化。
[0016]
采用的质谱条件为：电离方式：电喷雾正离子esi( )、电喷雾负离子esi(-)；毛细管电压：3.0kv；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：450-500℃；脱溶剂气流速：900-1000l/hr；锥孔反吹气流速：150l/hr；雾化气流速：7bar。检测方式：多反应监测扫描(mrm)；4种目标化合物的保留时间及质谱采集参数见表2。
[0017]
本发明方法可用于检测番茄中氟烯线砜及其代谢物残留量，具有高效、快速、操作简便、成本低、净化效果好、灵敏度高等优势，准确度和精密度均符合多残留分析方法的要求。与现有技术相比本发明方法具有以下优良效果：
[0018]
(1)本发明方法公开了一种分析番茄中氟烯线砜及其代谢物残留的uplc-ms/ms方法，目前尚无相关文献报道。
[0019]
(2)本发明方法采用quechers方法前处理，操作简便、检测成本低、净化效果好。
[0020]
(3)本发明方法采用uplc-ms/ms测定，可用于氟烯线砜及其3个代谢物的同步分析，具有快速、高效、灵敏度高、定性定量准确的优势。
[0021]
本发明方法的灵敏度：
[0022]
以信噪比为3计算方法的检出限，以最小添加浓度为定量限，同时满足信噪比大于等于10的要求。氟烯线砜和mes的检测限为0.002mg/kg，bsa和tsa的检测限为0.001mg/kg，定量限均为0.01mg/kg。
[0023]
本发明方法的线性：
[0024]
为了消除基质效应，采用基质匹配标准工作溶液绘制标准曲线。以农药的浓度为横坐标，定量离子的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，线性方程和相关系数见表3。氟烯线砜和吡唑醚菌酯在0.002～0.25μg/ml浓度范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系，相关系数均大于0.99。
[0025]
本发明方法的准确度和精密度：
[0026]
在三个浓度水平做加标回收试验，每个浓度水平做5个平行样品，分别进行样品前处理和uplc-ms/ms分析，并按照加标量和测定值计算回收率。番茄中氟烯线砜和3个代谢物的平均回收率和相对标准偏差(rsd)见表4。由表4可以看出，4种化合物在番茄中的回收率在70％和108％之间，相对标准偏差在2.0％和12.0％之间，符合残留分析的要求。
[0027]
表2氟烯线砜及其代谢物的保留时间和质谱采集参数
[0028][0029]
表3氟烯线砜及其代谢物的标准曲线、相关系数和灵敏度
[0030][0031]
表4番茄中氟烯线砜及其代谢物的加标回收率及相对标准偏差(n＝5)
[0032]
具体实施方式
[0033]
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。
[0034]
实施例1
[0035]
40％氟烯线砜乳油，制剂用药量0.9ml/m2，移栽前7天土壤喷雾施药1次，以成熟期采集的番茄样品为样本，采用本发明方法进行样品前处理，超高效液相色谱-串联质谱法测定。制备方法如下：
[0036]
1、仪器与试剂：
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美国waters acquity
tm uplc i-class超高效液相色谱仪，xevo tq-s三重四极杆质谱仪；瑞士mettler电子天平(感量0.00001g和0.01g)；托摩根高通量组织研磨仪；旋涡混合器；台式高速离心机；美国milli-q纯水仪。
[0038]
氟烯线砜标准品纯度为98.6％，bsa标准品纯度97.8％，tsa标准品纯度99.1％，mes标准品纯度99.4％；乙腈、甲醇、甲酸为色谱纯，水为gb/t 6682规定的一级水。
[0039]
2、样品前处理方法：
[0040]
准确称取匀浆好的番茄样品5g(精确至0.01g)于50ml聚丙烯塑料离心管中，加入15ml提取液，于垂直振荡器上震荡10min，4000r/min，离心5min，取上清液至刻度试管，加提取液定容至20ml，涡旋混匀。取2ml上清液于装有50mg psa、20mg gcb的10ml聚丙烯塑料离心管中，涡旋30s，4000r/min，离心5min，取上清液1ml，过0.22μm有机滤膜于2ml进样小瓶，待测。
[0041]
3、准备标准工作溶液：
[0042]
分别移取4种化合物标准储备液适量，用甲醇稀释，配制浓度为10μg/ml的单个标准溶液和浓度为10μg/ml、1μg/ml混合标准工作溶液，现用现配。
[0043]
4、准备基质匹配标准溶液：
[0044]
对空白番茄样品按相同前处理方式处理(参照步骤2“样品前处理方法”)，得到空白样品基质溶液。分别取适量混合标准工作溶液，用空白样品基质溶液配制浓度为0.002μg/ml、0.01μg/ml、0.025μg/ml、0.05μg/ml、0.125μg/ml、0.25μg/ml的系列基质匹配标准溶液。
[0045]
5、测定方法
[0046]
对系列浓度的基质匹配标准溶液进行测定，以浓度为横坐标，以定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。然后对供试番茄样品进行测定，得到农药的定量离子的峰面积，代入标准曲线，计算得4种化合物的残留量见表5。
[0047]
在用uplc-ms/ms法测定时采用的色谱条件为：色谱柱：acquity uplc hss t3柱(2.1mm
×
100mm，1.8μm)；流动相：乙腈-0.1％甲酸，按表1的梯度洗脱条件。流速：0.2ml/min；进样量：5μl；柱温：40℃。
[0048]
采用的质谱条件为：电离方式：电喷雾正离子esi( )、电喷雾负离子esi(-)；毛细管电压：3.0kv；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：450-500℃；脱溶剂气流速：900-1000l/hr；锥孔反吹气流速：150l/hr；雾化气流速：7bar。检测方式：多反应监测扫描(mrm)；4种化合物的保留时间及质谱采集参数见表2。
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表5实测样品中氟烯线砜及其代谢物残留量结果
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