一种同时检测维生素K1、MK4和MK7的方法与流程

技术特征：
1.一种同时检测维生素k1、mk4和mk7的方法，其特征在于，包括以下步骤：取生物样品，加入三种待测物的同位素内标混合溶液，再加入提取溶剂提取，离心，取上清液干燥后用复溶液溶解，得到待测样品，采用液相色谱串联质谱法检测；所述液相色谱串联质谱法所采用的色谱柱为c18色谱柱，所述c18色谱柱的粒径为1.6～2.2μm，所述c18色谱柱的长度为40～60mm。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述c18色谱柱的粒径为1.7μm，所述c18色谱柱的长度为50mm。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱法的流动相a为0.15～0.25wt％甲酸的水溶液，流动相b为0.15～0.25wt％甲酸的甲醇溶液，采用梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序包括：0～0.5min，流动相b的体积百分比为88～92％；0.5～1min，流动相b的体积百分比由88～92％升高到95～98％；1～2min，流动相b的体积百分比由95～98％升高到99～100％；2～4.5min，流动相b的体积百分比为99～100％；4.5～5.6min，流动相b的体积百分比由99～100％降低到88～92％；5.6～6min，流动相b的体积百分比为88～92％。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序包括：0～0.5min，流动相b的体积百分比为90％；0.5～1min，流动相b的体积百分比由90％升高到97％；1～2min，流动相b的体积百分比由97％升高到100％；2～4.5min，流动相b的体积百分比为100％；4.5～5.6min，流动相b的体积百分比由100％降低到90％；5.6～6min，流动相b的体积百分比为90％。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述c18色谱柱的内径为1.8～2.4μm，优选为2.1μm。6.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱法的色谱条件还包括：进样量(8～20)μl；柱温为40-45℃；流速为(0.5
±
0.1)ml/min。7.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述提取溶剂为正己烷；所述生物样品为血浆、血清、脑脊液或尿液。8.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述三种待测物的同位素内标混合溶液为：含有1.0～1.6ng/ml vk1-d7、0.8～1.4ng/ml mk4-d7和1.0～2.5ng/mlmk7-d7的乙醇溶液；所述复溶液为甲醇或含甲酸的甲醇溶液。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述生物样品和同位素内标混合溶液的体积比为1：(1～3)；和/或，所述生物样品和复溶液的体积比为1：(0.20～1.0)。10.根据权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱法的质
谱参数包括：vk1定量离子对：451.4/187.2；vk1定性离子对：451.4/199.2；vk1-d7内标离子对：458.5/194.1；mk4定量离子对：445.2/187.1；mk4定性离子对：445.2/227.1；mk4-d7内标离子对：452.3/194.1；mk7定量离子对：649.5/187.1；mk7定性离子对：649.5/227.2；mk7-d7内标离子对：656.6/194.1；采用apci离子源，正离子模式，多重反应监测离子扫描模式。

技术总结
本发明涉及一种同时检测维生素K1、MK4和MK7的方法，包括以下步骤：取生物样品，加入三种待测物的同位素内标混合溶液，再加入提取溶剂提取，离心，取上清液干燥后用复溶液溶解，得到待测样品，采用液相色谱串联质谱法检测；所述液相色谱串联质谱法所采用的色谱柱为C18色谱柱，所述C18色谱柱的粒径为1.6～2.2μm，所述C18色谱柱的长度为40～60mm。本发明的检测方法不仅能同时检测维生素K1、MK4和MK7的方法，且特异性强，针对维生素K1、MK4和MK7都获得良好的色谱分离度(保留时间相差大于0.5min)，基线低，基质干扰少，方法检测限低，灵敏度高，且稳定性强。且稳定性强。


技术研发人员：赵蓓蓓 佘旭辉 林清娜 董衡 李卓阳
受保护的技术使用者：广州金域医学检验中心有限公司
技术研发日：2021.09.17
技术公布日：2022/1/14