一种同时测定七制香附丸中4种活性成分含量的GC方法与流程

hp-5(30.0m
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0.25mm
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0.25μm)，柱温采用程序升温：初始温度100℃，保持1min，以20℃/min的速度升至150℃，再以3.0℃/min的速度升至210℃，最后以30℃/min的速度升至250℃，保持10min，分流比为5:1，进样口温度为为280℃，fid检测器温度为280℃，载气为氮气，柱流量为1.0ml/min，进样量为1μl。
10.与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
11.1.本发明首次应用气相色谱检测法，同时测定七制香附丸中石竹素、香附烯酮、蒿本内酯和α-香附酮4种挥发性活性成分的含量。
12.2.本发明操作简便，准确度高，分离快速，4种活性成分的理论塔板数均大于3000，分离度均大于1.5，4种活性成分在各自浓度范围内线性良好，相关系数r＞0.9990，回收率在99.04％～101.12％之间。
13.3.能准确、快速的测定七制香附丸中4种活性成分的含量，可以弥补七制香附丸挥发性成分质量控制的缺陷，为七制香附丸质量控制奠定一定的基础。
附图说明
14.图1为本发明实施例中混合对照品溶液色谱图(1.石竹素，2.香附烯酮，3.蒿本内酯，4.α-香附酮，5.正十八烷)。
15.图2为本发明实施例中七制香附丸提取物色谱图(1.石竹素，2.香附烯酮，3.蒿本内酯，4.α-香附酮，5.正十八烷)。
具体实施方式
16.下面结合实施例，对本发明的具体实施方式做进一步的描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
17.＜实施例＞
18.1仪器与试剂
19.shimαdzu 2010型气相色谱仪(日本岛津公司)；sqp型十万分之一电子分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；ls220α型万分之一电子分析天平(普利赛斯有限公司)；kq-2200b型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限责任公司)。
20.七制香附丸(批号分别为200102、201001、200501、200302、200301、200101、191103、191101、191004、190703、190702、190701，依次标记为s1-s12，河南省宛西制药股份有限公司)；正十八烷(山东西亚化学股份有限公司)；α-香附酮(中国食品药品检定研究院)；香附烯酮(上海源叶生物科技有限公司)；石竹素、蒿本内酯(四川省维克奇生物科技有限公司)；甲醇(重庆川东化工集团有限公司)。
21.2方法与结果
22.2.1内标溶液的制备
23.取正十八烷，精密称定73.01mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇制成1.4602mg/ml的内标溶液。
24.2.2对照品溶液的制备
25.精密称取石竹素、香附烯酮、蒿本内酯和α-香附酮对照品适量，加甲醇制成每1ml含石竹257.60μg、香附烯酮1803.52μg、蒿本内酯13188.00μg、α-香附酮579.60μg的混合对
照品储备液。精密量取上述混合对照品储备液0.5ml，置5ml量瓶中，精密加入内标溶液0.3ml，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml含石竹素25.76μg、香附烯酮180.35μg、蒿本内酯1318.80μg、α-香附酮57.96μg的混合对照品溶液，存放于4℃冰箱，备用。
26.2.3样品溶液的制备
27.分别取七制香附丸样品，研细，取药品5.0g，精密称定，置50ml锥形瓶中，加入甲醇10ml，混匀，称量，超声(频率40hz，功率100w)处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，静置，滤过，过0.22μm有机相微孔滤膜，取2.5ml滤液置于5ml量瓶中，精密加入内标溶液0.3ml，加甲醇定容，摇匀，即得。
28.2.4气相色谱测定条件
29.色谱柱为αgilent hp-5(30.0m
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0.25mm
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0.25μm)，柱温采用程序升温：初始温度100℃，保持1min，以20℃/min的速度升至150℃，再以3.0℃/min的速度升至210℃，最后以30℃/min的速度升至250℃，保持10min；fid检测器温度：280℃；载气为氮气，柱流量为1.0ml/min；进样量为1μl，分流比为5:1。
30.2.5系统适用性试验及专属性试验
31.在该色谱条件下，取空白溶液、混合对照品溶液和样品溶液进样测定，在空白溶剂的色谱图中，在待测物的保留时间处，未见峰，表明此方法具有良好的专属性。石竹素、香附烯酮、蒿本内酯和α-香附酮的理论塔板数均大于3000，分离度均大于1.5，符合分析要求。
32.2.6线性关系考察
33.精密量取混合对照品储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置5ml量瓶中，精密加入内标溶液0.3ml，加甲醇定容，得到不同浓度的混合对照品溶液，按色谱条件分别进样测定。以4种活性成分对照品溶液的浓度x(μg/ml)为横坐标，对照品与内标峰面积之比y为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表1。
34.表1 4种活性成分的线性回归方程、相关系数及线性范围
[0035][0036]
2.7精密度试验
[0037]
取混合对照品溶液，按色谱条件连续进样6次，分别计算各成分峰面积与内标峰面积之比，结果石竹素、香附烯酮、蒿本内酯、α-香附酮峰面积比值的rsd分别为1.31％、1.71％、1.56％、1.16％，表明仪器的精密度良好。
[0038]
2.8稳定性试验
[0039]
取七制香附丸样品溶液，室温下放置0，2，4，6，8，12，24小时，按色谱条件分别进样测定，计算样品中石竹素、香附烯酮、蒿本内酯、α-香附酮峰面积与内标峰面积比值。结果石竹素、香附烯酮、蒿本内酯、α-香附酮峰面积比值的rsd分别为2.22％、1.91％、0.90％、1.66％，表明样品溶液在室温下24小时基本稳定，符合分析试验要求。
[0040]
2.9重复性试验
[0041]
按样品溶液制备方法平行配制6份，按色谱条件进样分析，结果石竹素、香附烯酮、蒿本内酯、α-香附酮与内标峰面积比值的rsd分别为2.72％、2.58％、2.58％、2.00％，表明该方法的重复性良好。
[0042]
2.10回收率试验
[0043]
称取已知含量的七制香附丸粉末约2.5g，精密称定，共9份，精密加入各成分对照品溶液，加入量为七制香附丸粉末中石竹素、香附烯酮、蒿本内酯、α-香附酮含量约80％、100％、120％，按供试品溶液制备方法制备，按色谱条件分析测定，记录峰面积，石竹素、香附烯酮、蒿本内酯、α-香附酮的平均回收率分别为99.04％、100.23％、101.12％、99.56％，rsd分别为1.78％，0.92％，1.13％，1.02％，结果表明该方法具有良好的准确性和可靠性。
[0044]
2.11含量测定
[0045]
取12个不同批次七制香附丸样品溶液，按色谱条件进样分析，按内标法计算待测成分的含量，结果石竹素、香附烯酮、蒿本内酯和α-香附酮的平均含量(mg/g)见表2。
[0046]
表2 12个不同批次七制香附丸中活性成分含量测定结果(mg/g)(n＝3)
[0047][0048][0049]
3讨论
[0050]
3.1样品提取方法的选择
[0051]
采用水蒸气蒸馏法、超声提取法提取七制香附丸，结果显示超声提取法效果较好。再单因素考察提取溶剂(甲醇、乙醇、水)和提取时间(30、45、60min)，以4种成分的含量为评价指标，最终确定了甲醇作为提取溶剂，超声提取30min作为样品前处理方法，此条件下各成分提取较完全，提取效率较高。
[0052]
3.2内标参照峰的选择
[0053]
正十八烷在气相色谱法测定中常作为内标参照峰，其性质稳定且易获得，对待测成分峰无干扰，因此，选择正十八烷为内标参照峰。
[0054]
3.3气相色谱条件程序升温的优化
[0055]
本品为中药复方制剂，成分复杂，根据文献资料，采用程序升温试验效果较好，故本试验采用的程序升温为：初始温度100℃，保持1min，以20℃/min的速度升至150℃，再以3.0℃/min的速度升至210℃，最后以30℃/min的速度升至250℃，保持10min。在此条件下，石竹素、香附烯酮、蒿本内酯和α-香附酮4种成分的色谱峰均达到基线分离，峰形对称，分离度均大于1.5，理论塔板数不小于3000，符合分析要求。
[0056]
由以上实例可以看出，本发明实施例对七制香附丸中石竹素、香附烯酮、蒿本内酯和α-香附酮的含量进行了检测，该方法具有操作简便、结果准确和灵敏度高的优点，可以弥补七制香附丸挥发性成分质量控制的缺陷，可更全面、更准确的用于七制香附丸的质量控制，从而确保七制香附丸的安全性和有效性。