黄酮苷-有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐化合物及其制备方法和应用与流程

黄酮苷
‑
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐化合物及其制备方法和应用
1.本技术要求于2020年10月30日提交中国专利局、申请号为2020111958077发明名称为“黄酮苷
‑
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐及其制备方法和应用”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本技术中。
技术领域
2.本发明涉及药物化学技术领域，特别是一种黄酮苷
‑
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐化合物及其制备方法和应用。


背景技术：

3.酪氨酸激酶抑制剂为一类能抑制酪氨酸激酶活性的化合物，酪氨酸激酶抑制剂可作为三磷酸腺苷(atp)与酪氨酸激酶结合的竞争性抑制剂，也可作为酪氨酸的类似物，阻断酪氨酸激酶的活性，抑制细胞增殖，已经开发为数种抗肿瘤药物，包括吉非替尼、厄洛替尼、培唑帕尼、奥希替尼、拉帕替尼等，用于治疗非小细胞肺癌、肾细胞癌、软组织肉瘤(sts)、卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤。黄芩苷和野黄芩苷都是黄酮类糖苷(简称黄酮苷)，具有丰富的药理活性，例如通过抗脂质过氧化提高抗氧化能力，清除自由基和超氧阴离子作用，改善血液循环增加血流量，抗血小板聚集，抑制病毒感染，增强免疫力，抗细胞缺氧，神经保护，抑制肿瘤细胞生长等。
4.目前多靶点酪氨酸激酶抑制剂治疗非小细胞肺癌患者，在有效率和生存数据上差于其他非小细胞肺癌治疗药物。因此，研发选择性更高，活性更强的特异性抑制剂，增加疗效并限制毒性，有望成为治疗非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤的新手段。
5.此外，针对难溶性药物，如何提高其溶解度，加快溶解速度，增加血药浓度也是亟待解决的问题。


技术实现要素：

6.基于此，有必要提供一种黄酮苷
‑
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐化合物及其制备方法和应用。相比于有机胺类酪氨酸激酶抑制剂本身，该黄酮苷
‑
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐化合物对酪氨酸激酶具有更高的抑制活性。
7.本发明一方面，提供一种复盐化合物，为黄酮苷与有机胺类酪氨酸激酶抑制剂的复盐，所述黄酮苷具有如下式(1)所示的结构通式：
[0008][0009]
其中，r1～r9各自独立地选自
‑
h、
‑
oh、c1～c6烷基、烷氧基或取代烷基，且r1和r2中至少有一个选自
‑
oh。
[0010]
在其中一个实施例中，r1和r2均选自
‑
oh。
[0011]
在其中一个实施例中，所述黄酮苷为黄芩苷或野黄芩苷。
[0012]
在其中一个实施例中，所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂中含有至少一个氨基，所述氨基各自独立地选自包括
‑
nh2、
‑
nr’h或
‑
nr
’2，所述r’为给电子基团。
[0013]
在其中一个实施例中，所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂选自吉非替尼、厄洛替尼、培唑帕尼、奥希替尼和拉帕替尼中的任意一种。
[0014]
本发明一方面，还提供一种所述的复盐化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0015]
将所述黄酮苷、所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂和极性非质子有机溶剂混合溶解得到混合溶液；
[0016]
将所述混合溶液进行反应，得到反应液；以及
[0017]
将所述反应液除去溶剂。
[0018]
在其中一个实施例中，所述极性非质子有机溶剂为n,n
‑
二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或乙腈中的一种或多种。
[0019]
本发明另一方面，进一步提供一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的复盐化合物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
[0020]
本发明再一方面，提供所述的复盐化合物或所述的药物组合物在制备酪氨酸激酶抑制剂药物中的应用。
[0021]
在其中一个实施例中，所述酪氨酸激酶抑制剂药物用于恶性肿瘤的治疗，所述恶性肿瘤包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、贲门癌、结肠癌、直肠癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、喉癌、口咽癌、脑瘤、脑胶质瘤。
[0022]
本发明又一方面，提供了一种复盐纳米颗粒，所述复盐纳米颗粒由所述复盐化合物经纳米研磨得到。
[0023]
本发明还一方面，提供所述复盐纳米颗粒在制备酪氨酸激酶抑制剂药物中的应用。
[0024]
在其中一个实施例中，所述酪氨酸激酶抑制剂药物用于恶性肿瘤的治疗，所述恶
性肿瘤包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、贲门癌、结肠癌、直肠癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、喉癌、口咽癌、脑瘤、脑胶质瘤或软组织肉瘤。
[0025]
与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
[0026]
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂呈碱性，可以与无机酸或小分子有机酸成盐，以增加其稳定性和提升物理性能，但是现有技术中一般用于药物成盐的无机酸或小分子有机酸与有机胺类酪氨酸激酶抑制剂所形成的盐并不能提高这些药物的生物活性。而本发明提供的化合物，采用特定结构的黄酮苷与有机胺类酪氨酸激酶抑制剂形成复盐，该黄酮苷的分子结构中含有羧基和酚羟基，可与有机胺类酪氨酸激酶抑制剂中的胺基键合，二者之间的结合作用强于一般的药物成盐。该复盐相比于有机胺类酪氨酸激酶抑制剂本身，表现出对酪氨酸激酶更高的抑制活性，进而对抑制肿瘤具有更好的效果。
[0027]
黄酮苷这类天然化合物水溶解性较差，但是因为分子结构中有羧基和酚羟基，易溶于碱，和小分子有机碱成盐，增强其水溶性。进一步地，本发明提供的复盐化合物通过纳米研磨技术进行研磨，减小物料粒径，使其粒径达到纳米级，可以使复盐化合物具有更好的水溶性。
附图说明
[0028]
图1～图4为本发明实施例1制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图；
[0029]
图5～图8为本发明实施例2制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图；
[0030]
图9～图12为本发明实施例3制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图；
[0031]
图13～图16为本发明实施例4制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图；
[0032]
图17～图20为本发明实施例5制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图；
[0033]
图21～图24为本发明实施例6制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图；
[0034]
图25～图28为本发明实施例7制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图；
[0035]
图29～图32为本发明实施例8制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图；
[0036]
图33～图36为本发明实施例9制备的复盐化合物的核磁共振氢谱、红外光谱、dsc测试图以及xrd图。
具体实施方式
[0037]
以下结合具体实施例对本发明进行进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
[0038]
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0039]
本文中使用的缩写和符号与化学和生物学领域的技术人员通常使用的这类缩写和符号一致。具体地，在实施例和整个说明书中可能使用以下缩写。
[0040]
dmf(n,n
‑
二甲基甲酰胺)dsc(示差扫描量热法)
[0041]
术语和定义
[0042]
除非另外说明或存在矛盾之处，本文中使用的术语或短语具有以下含义：
[0043]
术语“烷基”是指包含伯(正)碳原子、或仲碳原子、或叔碳原子、或季碳原子、或其组合的饱和烃。包含该术语的短语，例如，“c1～c6烷基”是指包含1～6个碳原子的烷基，每次出现时，可以互相独立地为c1烷基、c2烷基、c3烷基、c4烷基、c5烷基或c6烷基。合适的实例包括但不限于：甲基(me、
‑
ch3)、乙基(et、
‑
ch2ch3)、1
‑
丙基(n
‑
pr、n
‑
丙基、
‑
ch2ch2ch3)、2
‑
丙基(i
‑
pr、i
‑
丙基、
‑
ch(ch3)2)、1
‑
丁基(n
‑
bu、n
‑
丁基、
‑
ch2ch2ch2ch3)、2
‑
甲基
‑1‑
丙基(i
‑
bu、i
‑
丁基、
‑
ch2ch(ch3)2)、2
‑
丁基(s
‑
bu、s
‑
丁基、
‑
ch(ch3)ch2ch3)、2
‑
甲基
‑2‑
丙基(t
‑
bu、t
‑
丁基、
‑
c(ch3)3)、1
‑
戊基(n
‑
戊基、
‑
ch2ch2ch2ch2ch3)、2
‑
戊基(
‑
ch(ch3)ch2ch2ch3)、3
‑
戊基(
‑
ch(ch2ch3)2)、2
‑
甲基
‑2‑
丁基(
‑
c(ch3)2ch2ch3)、3
‑
甲基
‑2‑
丁基(
‑
ch(ch3)ch(ch3)2)、3
‑
甲基
‑1‑
丁基(
‑
ch2ch2ch(ch3)2)、2
‑
甲基
‑1‑
丁基(
‑
ch2ch(ch3)ch2ch3)、1
‑
己基(
‑
ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2
‑
己基(
‑
ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3
‑
己基(
‑
ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2
‑
甲基
‑2‑
戊基(
‑
c(ch3)2ch2ch2ch3)、3
‑
甲基
‑2‑
戊基(
‑
ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4
‑
甲基
‑2‑
戊基(
‑
ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3
‑
甲基
‑3‑
戊基(
‑
c(ch3)(ch2ch3)2)、2
‑
甲基
‑3‑
戊基(
‑
ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3
‑
二甲基
‑2‑
丁基(
‑
c(ch3)2ch(ch3)2)、和3,3
‑
二甲基
‑2‑
丁基(
‑
ch(ch3)c(ch3)3。
[0044]
术语“烷氧基”是指具有
‑
o
‑
烷基的基团，即如上所定义的烷基经由氧原子连接至母核结构。包含该术语的短语，例如，“c1～c6烷氧基”是指烷基部分包含1～6个碳原子，每次出现时，可以互相独立地为c1烷氧基、c2烷氧基、c3烷氧基、c4烷氧基、c5烷氧基或c6烷氧基。合适的实例包括但不限于：甲氧基(
‑
o
‑
ch3或
‑
ome)、乙氧基(
‑
o
‑
ch2ch3或
‑
oet)和叔丁氧基(
‑
o
‑
c(ch3)3或
‑
otbu)。
[0045]“氨基”是指氨的衍生物，氨基的非限制性类型包括
‑
nh2、
‑
n(烷基)2、
‑
nh(烷基)、
‑
n(环烷基)2、
‑
nh(环烷基)、
‑
n(杂环基)2、
‑
nh(杂环基)、
‑
n(芳基)2、
‑
nh(芳基)、
‑
n(烷基)(芳基)、
‑
n(烷基)(杂环基)、
‑
n(环烷基)(杂环基)、
‑
n(芳基)(杂芳基)、
‑
n(烷基)(杂芳基)等。
[0046]“药学上可接受的”指在合理医学判断范围内适于施用患者且与合理益处/风险比相称的那些配体、材料、组合物和/或剂型。
[0047]“药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂”指药学上可接受的材料、组合物或媒剂，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或囊封材料。如本文所用，语言“药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂”包括与药物施用相容的缓冲剂、注射用无菌水、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂及吸收延迟剂及诸如此类。在与配制物中其他成分兼容且对患者无害的意义上，每种载体、赋形剂或稀释剂必须为“药学上可接受的”。合适的实例包括但不限于：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖及蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉
及经取代或未经取代的β
‑
环糊精；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素及乙酸纤维素；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油及大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇及聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯及月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁及氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；及(21)药物配制物中所采用的其他无毒兼容物质。
[0048]
涉及基团的“取代”指与基团内的成员原子附接的一个或多个氢原子由选自所限定或适合的取代基中的取代基替代。应理解术语“取代”包括下述隐含条件：这种取代应与取代的原子和取代基的允许化合价一致并且取代导致稳定的化合物。当陈述基团可以含有一个或多个取代基时，该基团内的一个或多个成员原子可以被取代。另外，只要这种取代与原子的允许化合价一致，该基团内的单个成员原子就可以由多于一种取代基取代。“成员原子”指的是形成链或环的一个原子或多个原子。在链中以及环内存在多于一个成员原子的情况下，每个成员原子与该链或环中的相邻成员原子共价结合。组成链或环上的取代基的原子不是该链或环中的成员原子。
[0049]
术语“ic
50”指的是化合物相对于给定活性例如神经受体包括乙酰胆碱脂酶、nmda受体、磷酸鞘氨醇受体的抑制的半最大抑制浓度。ic
50
值越小，说明化合物对给定活性的抑制活性越强。
[0050]
化合物
[0051]
在一个方面，本发明涉及一种复盐化合物，为黄酮苷与有机胺类酪氨酸激酶抑制剂的复盐，所述黄酮苷具有如下式(1)所示的结构通式：
[0052][0053]
其中，r1～r9各自独立地选自
‑
h、
‑
oh、c1～c6烷基、烷氧基或取代烷基，且r1和r2中至少有一个选自
‑
oh。
[0054]
所述黄酮苷，分子结构中葡萄糖酸单元中的羧基氢、黄酮单元中的酚羟基氢(r1或r2中的氢)，共同形成了氢离子丰富区域，是质子供体。所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂中有机胺的氮原子含有孤对电子，是质子受体。二者结合，形成所述黄酮苷
‑
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐。由于空间位阻的原因，所述黄酮苷中葡萄糖酸单元中的羧基氢和黄酮单元中的酚羟基氢分别位于糖环的两侧。当其与有机胺结合时，位于糖环两侧的所述羧基氢和所述酚羟基氢转变为同侧，如式(2)所示，形成质子窝(如式2虚线框所示的质子结构)、羧
基氧电子和氮孤对电子的微环境。从价键理论分析，质子窝中氢质子和胺可形成很稳定的铵盐；从分子轨道理论分析，质子窝中氢的空轨道与胺的孤对电子可以完美结合；从量子化学及量子纠缠理论分析，质子窝中氢电子、羧基氧电子以及有机胺中氮的孤电子对在成盐区域实现缠绕，因为量子纠缠的存在，黄酮苷
‑
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐的有机酸和有机碱互相解离后，其成盐期间形成的量子纠缠继续存在，提高了黄酮苷
‑
有机胺类酪氨酸激酶抑制剂复盐的生物活性。
[0055][0056]
优选的，所述r1和r2均选自
‑
oh。
[0057]
在一些实施例中，r3选自
‑
h或
‑
och3。
[0058]
在一些实施例中，r5、r6、r9均选自
‑
h。
[0059]
在一些实施例中，r7、r8各自独立地选自
‑
h或
‑
oh。
[0060]
在一些实施例中，r8选自
‑
h。
[0061]
在一些实施例中，r7选自
‑
oh。在另一些实施例中，r7选自
‑
h。
[0062]
在一些实施例中，所述黄酮苷可以为芹菜素黄酮苷、黄芩苷、野黄芩苷、白杨素黄酮苷或汉黄芩苷中的任意一种，优选的，所述黄酮苷为黄芩苷或野黄芩苷。
[0063]
所述黄芩苷的分子结构式如下式(1
‑
1)所示：
[0064][0065]
所述野黄芩苷的分子结构式如下式(1
‑
2)所示：
[0066][0067]
所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂中含有至少一个氨基，所述氨基各自独立地选自
‑
nh2、
‑
nr’h或
‑
nr
’2，所述r’为给电子基团
[0068]
在一些实施例中，r’为烷基或烷氧基。
[0069]
在一些实施例中，所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂选自吉非替尼、厄洛替尼、培唑帕尼、奥希替尼和拉帕替尼中的任意一种。
[0070]
吉非替尼，是一种口服表皮生长因子受体酪氨酸激酶(egfr
‑
tk)抑制剂，对egfr
‑
tk的抑制可阻碍肿瘤的生长、转移和血管生成，并增加肿瘤细胞的凋亡。临床用于治疗非小细胞肺癌。吉非替尼的结构式如下所示：
[0071][0072]
厄洛替尼，是一种靶向治疗药物，可特异性地针对肿瘤细胞作用，抑制肿瘤的形成和生长，可抑制人表皮生长因子受体(egfr)的信号传导途径。厄洛替尼通过抑制酪氨酸激酶的活性的方式来抑制肿瘤生长，酪氨酸激酶是egfr细胞内的重要组成部分之一。厄洛替尼可试用于两个或两个以上化疗方案失败的局部晚期或转移的非小细胞肺癌的三线治疗。厄洛替尼的结构式如下所示：
[0073][0074]
培唑帕尼，又叫帕唑帕尼，是血管内皮生长因子受体(vegfr)
‑
1、vegfr
‑
2、vegfr
‑
3、血小板衍生生长因子受体(pdgfr)和纤维母细胞生长因子受体(fgfr)
‑
1和
‑
3、细胞因子受体(kit)、白介素
‑
2受体可诱导t细胞激酶(itk)、白细胞
‑
特异性蛋白酪氨酸激酶(lck)、
和穿膜糖蛋白受体酪氨酸激酶(c
‑
fms)的一种多
‑
酪氨酸激酶抑制剂。培唑帕尼可干扰顽固肿瘤存活和生长所需的新血管生成，靶向作用于血管内皮生长因子受体(vegfr)，通过抑制对肿瘤供血的新血管生成而起作用，适用于晚期肾细胞癌(一种在肾小管中发现癌细胞的肾癌类型)、软组织肉瘤(sts)、上皮性卵巢癌和非小细胞肺癌(nsclc)的治疗。培唑帕尼的结构式如下所示：
[0075][0076]
奥希替尼，是高效选择性egfr突变体抑制剂，对外显子19缺失型egfr、l858r/t790m egfr和野生型egfr的ic50分别为12.92nm，11.44nm和493.8nm。分子量为499.61，分子式是c
28
h
33
n7o2。奥希替尼是针对非小细胞晚期肺癌新药，治疗晚期非小细胞肺癌(nsclc)患者的口服药物。奥希替尼的结构式如下所示：
[0077][0078]
拉帕替尼，是一种口服的小分子表皮生长因子(egfr:erbb
‑
1，erbb
‑
2)酪氨酸激酶抑制剂，化学名称n
‑
[3
‑
氯
‑4‑
[(3
‑
氟苯基)甲氧基]苯基]
‑6‑
[5
‑
[(2
‑
甲磺酰乙基氨基)甲基]
‑2‑
呋喃基]喹唑啉
‑4‑
胺，分子式为c
29
h
26
cl
f
n4o4s，分子量为581.05800。拉帕替尼为抗肿瘤药，临床上主要用于联合卡培他滨治疗erbb
‑
2过度表达的，既往接受过包括蒽环类、紫杉醇、曲妥珠单抗(赫赛汀)治疗的晚期或转移性乳腺癌。拉帕替尼的结构式如下所示：
[0079][0080]
在一个方面，本发明还涉及一种所述的复盐化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0081]
s10，将所述黄酮苷、所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂和极性非质子有机溶剂混合溶解得到混合溶液；
[0082]
s20，将所述混合溶液进行反应，得到反应液；以及
[0083]
s30，将所述反应液除去溶剂。
[0084]
所述黄酮苷和所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂的摩尔比可以为1:3～3:1之间的任意比值，例如还可以包括1:2、1:1.5、1:1、1.5:1、2:1，优选为1:1。
[0085]
所述极性非质子有机溶剂可以为n,n
‑
二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或乙腈中的一种或多种。
[0086]
步骤s10中将所述黄酮苷、所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂和极性非质子有机溶剂混合溶解得到混合溶液的方法可以有多种。优选的，可以包括以下步骤
[0087]
s11，将所述黄酮苷溶于所述极性非质子有机溶剂中，得到第一溶液；
[0088]
s12，将所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂溶于所述极性非质子有机溶剂中，得到第二溶液；
[0089]
s13，将所述第一溶液和所述第二溶液混合，得到所述混合溶液。
[0090]
所述第一溶液中所述黄酮苷的浓度为0.1mol/l～1.0mol/l，优选为0.33mol/l。
[0091]
所述第二溶液中所述有机胺类酪氨酸激酶抑制剂的浓度为0.1mol/l～1.0mol/l，优选为0.33mol/l。
[0092]
所述混合溶液进行反应的步骤中，反应温度可以为30℃～100℃，优选为50℃～70℃，更优选为70℃。
[0093]
所述除去溶剂的方法可为减压浓缩，所述减压浓缩的温度可以为40℃～70℃，优选为60℃。
[0094]
步骤s30还包括提纯的步骤。所述提纯的方法可以为打浆。所述打浆使用的溶剂可以为乙酸乙酯。乙酸乙酯用量按酸(黄芩苷或野黄芩苷)mol/l以1:1至1:5为宜，以1:3最佳；打浆的温度可以为5℃～50℃，优选为20℃～30℃，时间为20分钟～40分钟。
[0095]
所述提纯还包括将打浆之后的溶液进行过滤，过滤后的滤饼进一步干燥。所述干
燥的方法可以为冷冻干燥或真空干燥。所述真空干燥的温度可以为20℃～60℃，优选为30℃，干燥时间可以为8小时～48小时，优选为24小时。所述冷冻干燥的温度为小于0℃，干燥时间可以为3小时～12小时，优选为6小时。
[0096]
在一个方面，本发明涉及含有治疗有效量的上述的复盐化合物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的组合物。
[0097]
在一个方面，本发明涉及所述的复盐化合物在制备酪氨酸激酶抑制剂药物中的应用。
[0098]
在一些实施方式中，根据本发明的复盐化合物制备的酪氨酸激酶抑制剂药物用于恶性肿瘤的治疗，所述恶性肿瘤包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、贲门癌、结肠癌、直肠癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、喉癌、口咽癌、脑瘤、脑胶质瘤、软组织肉瘤，特别用于治疗非小细胞肺癌。
[0099]
在一个方面，本发明进一步涉及治疗神经退行性疾病的方法，所述方法优选包括对需要其的患有神经退行性疾病的患者给药适合量的如上所限定的包括根据本发明的复盐化合物的组合物。
[0100]
在一个方面，本发明进一步涉及一种复盐纳米颗粒，所述复盐纳米颗粒由上述任一实施方式的复盐化合物经纳米研磨得到。
[0101]
在一些实施例中，所述复盐纳米颗粒的平均粒径为50nm～500nm。
[0102]
在一个方面，本发明还涉及所述复盐纳米颗粒的制备方法，包括：
[0103]
将所述复盐化合物、助悬剂和溶剂混合后经纳米研磨机研磨制成。
[0104]
在一些实施例中，所述助悬剂为吐温、羟丙甲纤维素、聚乙二醇、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、脂肪酸甘油酯、多元醇型非离子表面活性剂、聚氧乙烯型非离子表面洁性剂、泊洛沙姆、维生素e聚乙二醇琥珀酸酯、磷脂、明胶、黄原胶、十二烷基硫酸钠和脱氧胆酸纳中的一种或几种。
[0105]
在一些优选实施例中，所述助悬剂为吐温、羟丙甲纤维和聚乙二醇的组合物。
[0106]
在一些实施例中，所述复盐化合物和所述助悬剂的质量比为1000：(0.5～3)。
[0107]
在一些实施例中，所述研磨的转速为2000rpm～3000rpm，所述研磨的时间为30分钟～60分钟。所述研磨使用的纳米研磨机工作腔直径为85mm。如纳米研磨机工作腔直径有变化，应相应调节转速。
[0108]
在一个方面，进一步，本发明还涉及述复盐纳米颗粒在制备酪氨酸激酶抑制剂药物中的应用。
[0109]
在一些实施例中，所述酪氨酸激酶抑制剂药物用于恶性肿瘤的治疗，所述恶性肿瘤包括肺癌、肝癌、胃癌、食道癌、贲门癌、结肠癌、直肠癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、喉癌、口咽癌、脑瘤、脑胶质瘤或软组织肉瘤。
[0110]
给药和配制品
[0111]
含有本发明的化合物、其活性代谢产物或同分异构体的药物的生产及其应用可以根据熟知的制药方法进行。
[0112]
虽然根据本发明可用于治疗的本发明的化合物可以以原始化学化合物的形式给药，但是优选地是与一种或多种助剂、赋形剂、载体、缓冲剂、稀释剂和/或其他常规药物辅
料一起将活性成分在药物组合物中引入。本发明的化合物的这类盐可以是无水的或溶剂化的。
[0113]
在优选实施方式中，本发明提供药物，其包括根据本发明可用的化合物或其药学上可接受的衍生物以及用于其的一种或多种药学上可接受的载体和可选地其他治疗性和/或预防性成分。该一种或多种载体必须是在与配制品的其他成分相容的且对其受体无害的意义上是“可接受的”。
[0114]
本发明的药物可以是适用于口服、直肠、支气管、鼻腔、局部、口腔、舌下、经皮、阴道或肠胃外(包括皮肤、皮下、肌内、腹膜内、静脉内、动脉内、脑内、眼内注射或输注)给药的那些药物，或者为适用于通过吸入或吹气给药(包括粉末和液体气雾剂给药)或通过缓释体系给药的形式的那些药物。缓释体系的适合示例包括含有本发明的化合物的固体疏水聚合物的半渗透基质，该基质可以是成形物品的形式，例如膜或微胶囊。
[0115]
根据本发明可用的化合物与常规助剂、载体或稀释剂一起可以因此被放置成药物及其单位剂量的形式。这样的形式包括：固体，特别地为片剂、填充胶囊、粉剂和药丸(pellet)形式；以及液体，特别地为含水或非水溶液剂、悬浮剂、乳剂、万能药(elixir)和用其装填的胶囊，用于口服的所有形式，用于直肠给药的栓剂以及用于肠胃外使用的无菌注射溶液。这些药物和其单位剂量形式可以在有或没有其他活性化合物或组成部分的情况下包括常规比例的常规成分，且这种单位剂量形式可以含有与待使用的预期日常剂量范围相应的任何适合有效量的活性成分。
[0116]
根据本发明可用的化合物可以以各种各样的口服和肠胃外剂量形式给药。对本领域技术人员而言明显的是，以下剂量形式可以包括一种或多种根据本发明可用的化合物作为活性成分。
[0117]
对于由根据本发明可用的化合物制备药物，药学上可接受的载体可以是固体的或液体的。固体形式制剂包括粉剂、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂(cachet)、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是还可以用作稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包膜材料(encapsulating material)的一种或多种物质。
[0118]
在粉剂中，载体是与粉碎的活性组分混合的粉碎固体。在片剂中，活性组分与具有必要的结合能力的载体以适合的比例混合，并压缩成所需形状和大小。适合的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”意在包括具有包膜材料作为载体的活性化合物配制品，提供其中活性组分在有或没有载体的情况下被载体包围并因此与其结合的胶囊。类似地，包括扁囊剂和锭剂(lozenge)。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以用作适用于口服给药的固体形式。
[0119]
为了制备栓剂，首先熔化低熔点蜡，诸如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物，并使活性组分均匀地分散在其中，如通过搅拌。然后将熔化的均匀混合物倒入大小适中的模具中，允许其冷却并从而凝固。适用于阴道给药的组合物可以表现为除活性成分之外还含有本领域中已知的适当载体的阴道栓(pessary)、止血塞(tampon)、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷剂。液体制剂包括溶液剂、悬浮剂和乳剂，例如水或水
‑
丙二醇溶液。例如，肠胃外注射液体制剂可以配制为含水聚乙二醇溶液。
[0120]
因此，根据本发明的化学化合物可以配制用于肠胃外给药(例如，通过注射，例如
推注(bolus injection)或持续输注)，且可以以单位剂量形式存在于具有添加防腐剂的安瓿、预填装注射器、小体积输注或在多剂量容器中。组合物可以采取下述形式，诸如悬浮剂、溶液剂或者含油或含水载体(vehicle)中的乳剂，且可以含有配制剂(formulation agent)，诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。可替选地，活性成分可以是通过无菌固体的无菌分离或通过溶液冻干获得的粉末形式，用于在使用前与适合的载体例如无菌无热原水复配(constitution)。
[0121]
可以通过将活性组分溶解在水中并根据需要加入适合的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备适用于口服使用的含水溶液。可以通过用粘性材料诸如天然或合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其他熟知的悬浮剂将粉碎的活性组分分散在水中来制备适用于口服使用的含水悬浮剂。
[0122]
还包括预期在使用前不久转化为液体形式制剂用于口服给药的固体形式制剂。这样的液体形式包括溶液剂、悬浮剂和乳剂。除活性组分外，这些制剂还可以含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
[0123]
在本发明的一种实施方式中，局部地或全身地或通过两种途径组合地施用药物。
[0124]
对于给药，在一种实施方式中，可以在含有按重量0.001％至70％的化合物，优选地按重量0.01％至70％的化合物，甚至更优选地按重量0.1％至70％的化合物的配制品中给药本发明的化合物。在一种实施方式中，所给药的化合物的适合量在0.01mg/kg体重至1g/kg体重的范围内。
[0125]
适用于给药的组合物还包括：在调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包括活性剂的锭剂、在惰性基质(如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶)中包括活性成分的软锭剂(pastille)以及在适合的液体载体中包括活性成分的漱口剂(mouthwash)。
[0126]
溶液剂或悬浮剂通过常规手段例如用滴管、移液管或喷雾器直接给药至鼻腔。组合物可以提供为单或多剂量形式。在滴管或移液管的后一种情况中，可以由给药适合的预定体积的溶液或悬浮液的患者来实现。在喷雾器的情况下，可以例如通过计量雾化喷雾泵来实现。
[0127]
对呼吸道的给药也可以通过气雾剂的方式实现，其中用合适的推进剂诸如含氯氟烃(cfc)(例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷)、二氧化碳或其它合适的气体在加压包装中提供活性组分。该气雾剂还可以方便地含有表面活性剂，如卵磷脂。药物的剂量可以通过设置计量阀来控制。
[0128]
可替选地，该活性成分可以提供为干粉形式，例如化合物在合适的粉末基质诸如乳糖、淀粉、诸如羟丙基甲基纤维素的淀粉衍生物以及聚乙烯吡咯烷酮(pvp)中的粉末混合物。方便地，粉末载体会在鼻腔内形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量形式存在，例如，如明胶的胶囊或药筒(cartridges)，或者是粉末可以通过吸入器从其给药的泡罩包装(blister pack)。
[0129]
在包括鼻内组合物的预期向呼吸道给药的组合物中，化合物一般具有小粒径，例如大约5微米或以下。这样的粒径可以通过本领域中已知的手段例如通过微粉化获得。
[0130]
在需要时，可以使用适于使活性成分缓释的组合物。
[0131]
药物制剂优选为单位剂量形式。在这种形式中，制剂被细分为含有合适量的活性组分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装的制剂，该包装含有分立的制剂量，诸如小瓶或
安瓿中的包装片剂、胶囊和粉剂。而且，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者其可以是合适数量的这些剂量形式中任意一种的包装形式。用于口服给药的片剂或胶囊和用于静脉内给药和持续输注的液体是优选的组合物。
[0132]
关于配制和给药的技术的其他详细信息可见于最新版的“remington's pharmaceutical sciences(雷明顿药物科学)(maack publishing co.easton,pa.)和remington:the science and practice of pharmacy“,lippincott williams and wilkins。
[0133]
适合配制品和制造它们的方式也在例如lachman等人著写的“arzneiformenlehre,paul heinz list,einlehrbuchf
ü
rpharmazeuten,wissenschaftlicheverlagsgesellschaft stuttgart,4.auflage,1985”或”the theory and practice of industrial pharmacy”,varghese publishing house,1987”或“modern pharmaceutics”,james swarbrick编辑，第2版”中公开。
[0134]
以下为具体实施例
[0135]
下文参照以下实施例进一步描述本发明，实施例意在说明而并不限制本发明的范围。除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规条件，例如文献、书本中所述的条件或者生产厂家推荐的方法实现。
[0136]
实施例1黄芩苷吉非替尼盐的制备
[0137]
吉非替尼4.47克(0.01mol)悬浮于15ml dmf中，黄芩苷4.46克(0.01mol)加入到30mldmf中，上述吉非替尼dmf溶液加入到黄芩苷dmf溶液中，70℃搅拌反应15小时，反应液60℃减压浓缩至干，得到粗产物。
[0138]
粗产物于室温条件下用30ml乙酸乙酯打浆20分钟，过滤，滤饼均分为两等份，第一份悬浮于15ml水中，冷冻干燥6小时除去溶剂，得到淡黄色固体产物。第二份滤饼30℃真空干燥24小时，得到淡黄色固体产物。第一份得到黄芩苷吉非替尼盐3.74克，收率83.70％。第二份得到黄芩苷吉非替尼盐3.78克，收率84.66％。
[0139]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图1～图4所示，相较于黄芩苷和吉非替尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示黄芩苷的羧基氢与吉非替尼
‑
n成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在244℃、260℃处有峰。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于黄芩苷和吉非替尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0140]
实施例2野黄芩苷吉非替尼盐的制备
[0141]
吉非替尼4.47克(0.01mol)悬浮于15ml dmf中，野黄芩苷4.62克(0.01mol)加入到30mldmf中，上述吉非替尼dmf溶液加入到野黄芩苷dmf溶液中，70℃搅拌反应15小时，反应液60℃减压浓缩至干，得到粗产物。
[0142]
粗产物于室温条件下用30ml乙酸乙酯打浆20分钟，过滤，滤饼均分为两等份，第一份悬浮于15ml水中，冷冻干燥6小时除去溶剂，得到淡黄色固体产物。第二份滤饼30℃真空干燥24小时，得到淡黄色固体产物。第一份得到野黄芩苷吉非替尼盐3.98克，收率87.46％，第二份得到野黄芩苷吉非替尼盐4.10克，收率90.20％。
[0143]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图5～图8所
示，相较于野黄芩苷和吉非替尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示野黄芩苷的羧基氢与吉非替尼
‑
n成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在208℃处有峰。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于野黄芩苷和吉非替尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0144]
实施例3黄芩苷厄洛替尼盐的制备
[0145]
与实施例1的制备方法基本相同，不同之处在于，将吉非替尼替换为厄洛替尼3.93克(0.01mol)。
[0146]
第一份得到黄芩苷厄洛替尼盐3.66克，收率87.17％，第二份得到黄芩苷厄洛替尼盐3.70克，收率88.20％。
[0147]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图9～图12所示，相较于黄芩苷和厄洛替尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示黄芩苷的羧基氢与厄洛替尼
‑
nh成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在105℃、194℃、245℃处有峰。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于黄芩苷和厄洛替尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0148]
实施例4野黄芩苷厄洛替尼盐的制备
[0149]
与实施例2的制备方法基本相同，不同之处在于，将吉非替尼替换为厄洛替尼3.93克(0.01mol)。
[0150]
第一份得到野黄芩苷厄洛替尼盐3.47克，收率81.07％，第二份得到野黄芩苷厄洛替尼盐3.52克，收率82.34％。
[0151]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图13～图16所示，相较于野黄芩苷和厄洛替尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示野黄芩苷的羧基氢与厄洛替尼
‑
nh成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在168℃、203℃处有峰。xrd图谱显示产物具有特征衍射峰。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于野黄芩苷和厄洛替尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0152]
实施例5黄芩苷培唑帕尼盐的制备
[0153]
与实施例1的制备方法基本相同，不同之处在于，将吉非替尼替换为培唑帕尼4.38克(0.01mol)。
[0154]
第一份得到黄芩苷培唑帕尼盐3.49克，收率78.88％，第二份得到黄芩苷培唑帕尼盐3.52克，收率79.38％。
[0155]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图17～图20所示，相较于黄芩苷和培唑帕尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示黄芩苷的羧基氢与培唑帕尼
‑
nh成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在200℃、345℃处有峰。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于黄芩苷和培唑帕尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0156]
实施例6野黄芩苷培唑帕尼盐的制备
[0157]
与实施例2的制备方法基本相同，不同之处在于，将吉非替尼替换为培唑帕尼4.38克(0.01mol)。
[0158]
第一份得到野黄芩苷培唑帕尼盐2.54克，收率56.54％，第二份得到野黄芩苷培唑帕尼盐2.60克，收率57.78％。
[0159]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图21～图24所示，相较于野黄芩苷和培唑帕尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示野黄芩苷的羧基氢与培唑帕尼
‑
nh成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在198℃、320℃处有峰。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于野黄芩苷和培唑帕尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0160]
实施例7黄芩苷奥希替尼盐的制备
[0161]
与实施例1的制备方法基本相同，不同之处在于，将吉非替尼替换为奥希替尼5.96克(0.01mol)。
[0162]
第一份得到黄芩苷奥希替尼盐4.30克，收率82.46％，第二份得到黄芩苷奥希替尼盐4.35克，收率83.49％。
[0163]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图25～图28所示，相较于黄芩苷和奥希替尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示黄芩苷的羧基氢与奥希替尼
‑
n成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在154℃、210℃、337℃处有风。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于黄芩苷和奥希替尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0164]
实施例8野黄芩苷奥希替尼盐的制备
[0165]
与实施例1的制备方法基本相同，不同之处在于，将吉非替尼替换为奥希替尼5.96克(0.01mol)。
[0166]
第一份得到野黄芩苷奥希替尼盐4.18克，收率79.07％，第二份得到野黄芩苷奥希替尼盐4.22克，收率79.77％。
[0167]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图29～图32所示，相较于黄芩苷和奥希替尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示野黄芩苷的羧基氢与奥希替尼
‑
n成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在154℃、211℃、339℃处有峰。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于黄芩苷和奥希替尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0168]
实施例9野黄芩苷拉帕替尼盐的制备
[0169]
与实施例2的制备方法基本相同，不同之处在于，将吉非替尼替换为拉帕替尼5.81克(0.01mol)。
[0170]
第一份得到野黄芩苷拉帕替尼盐3.61克，收率69.13％，第二份得到野黄芩苷拉帕替尼盐3.64克，收率69.80％。
[0171]
产物通过核磁氢谱、红外光谱、dsc以及xrd进行结构表征测试，结果如图33～图36所示，相较于野黄芩苷和拉帕替尼的单纯混合物，产物更易溶解，核磁共振氢谱化学位移显示野黄芩苷的羧基氢与拉帕替尼
‑
nh成盐，红外光谱同样呈现这一特征，热失重显示产物在210℃、266℃处有峰。产物的物理性质、光谱特征、热力学性质相较于野黄芩苷和拉帕替尼都发生了改变，说明其已成盐。
[0172]
实施例10活性测试
[0173]
酪氨酸激酶抑制剂活性测定：
[0174]
将各复盐化合物分别配制成不同浓度的供试品，使用酪氨酸激酶试剂盒测定供试品对酪氨酸激酶活性的抑制，计算ic50。
[0175]
各复盐化合物的药物活性如表2所示：
[0176]
表2
[0177]
活性成分名称靶点ic50(nm)吉非替尼酪氨酸激酶27.6黄芩苷吉非替尼酪氨酸激酶18.4野黄芩苷吉非替尼酪氨酸激酶16.5厄洛替尼酪氨酸激酶2.5黄芩苷厄洛替尼酪氨酸激酶1.1野黄芩苷厄洛替尼酪氨酸激酶0.9培唑帕尼酪氨酸激酶10.4黄芩苷培唑帕尼酪氨酸激酶4.5野黄芩苷培唑帕尼酪氨酸激酶4.8奥希替尼酪氨酸激酶15.0黄芩苷奥希替尼酪氨酸激酶6.8野黄芩苷奥希替尼酪氨酸激酶7.5拉帕替尼酪氨酸激酶9.8野黄芩苷拉帕替尼酪氨酸激酶6.2黄芩苷酪氨酸激酶大于100野黄芩苷酪氨酸激酶大于100
[0178]
由表2可知，黄芩苷吉非替尼复盐化合物、野黄芩苷吉非替尼复盐化合物对酪氨酸激酶的抑制活性比吉非替尼对酪氨酸激酶的抑制活性强；
[0179]
黄芩苷厄洛替尼复盐化合物、野黄芩厄洛替尼复盐化合物对酪氨酸激酶的抑制活性比厄洛替尼对酪氨酸激酶的抑制活性强；
[0180]
黄芩苷培唑帕尼复盐化合物、野黄芩苷培唑帕尼复盐化合物对酪氨酸激酶的抑制活性比培唑帕尼对酪氨酸激酶的抑制活性强；
[0181]
黄芩苷奥希替尼复盐化合物、野黄芩苷奥希替尼复盐化合物对酪氨酸激酶的抑制活性比奥希替尼对酪氨酸激酶的抑制活性强；
[0182]
野黄芩苷拉帕替尼复盐化合物对酪氨酸激酶的抑制活性比拉帕替尼对酪氨酸激酶的抑制活性强。
[0183]
实施例11黄芩苷吉非替尼复盐纳米颗粒的制备
[0184]
1、向纳米研磨机中，加入黄芩苷吉非替尼复盐化合物50克，水500毫升，助悬剂吐温
‑
20 50毫克，羟丙甲纤维素50毫克，聚乙二醇6000 50毫克，以2500rpm转速研磨40分钟，得到黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液。
[0185]
2、得到的黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液在流化床干燥设备干燥，干燥进风温度65℃，干燥至水分含量3％左右，制备得到黄芩苷吉非替尼复盐纳米颗粒，粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0186]
制备得到的黄芩苷吉非替尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的黄芩苷吉非替尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了2.5倍。
[0187]
实施例12野黄芩苷吉非替尼复盐纳米颗粒的制备
[0188]
与实施例11的制备方法基本相同，不同之处在于，将黄芩苷吉非替尼复盐化合物替换为野黄芩苷吉非替尼复盐化合物。野芩苷吉非替尼复盐纳米颗粒粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0189]
制备得到的野黄芩苷吉非替尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的野黄芩苷吉非替尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了2.4倍。
[0190]
实施例13黄芩苷厄洛替尼复盐纳米颗粒的制备
[0191]
与实施例11的制备方法基本相同，不同之处在于，将黄芩苷吉非替尼复盐化合物替换为黄芩苷厄洛替尼复盐化合物。黄芩苷厄洛替尼复盐纳米颗粒粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0192]
制备得到的黄芩苷厄洛替尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的黄芩苷厄洛替尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了1.8倍。
[0193]
实施例14野黄芩苷厄洛替尼复盐纳米颗粒的制备
[0194]
与实施例13的制备方法基本相同，不同之处在于，将黄芩苷厄洛替尼复盐化合物替换为野黄芩苷厄洛替尼复盐化合物。野芩苷厄洛替尼复盐纳米颗粒粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0195]
制备得到的野黄芩苷厄洛替尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的野黄芩苷厄洛替尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了2.0倍。
[0196]
实施例15黄芩苷培唑帕尼复盐纳米颗粒的制备
[0197]
与实施例11的制备方法基本相同，不同之处在于，将黄芩苷吉非替尼复盐化合物替换为黄芩苷培唑帕尼复盐化合物。黄芩苷培唑帕尼复盐纳米颗粒粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0198]
制备得到的黄芩苷培唑帕尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的黄芩苷培唑帕尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了2.2倍。
[0199]
实施例16野黄芩苷培唑帕尼复盐纳米颗粒的制备
[0200]
与实施例15的制备方法基本相同，不同之处在于，将黄芩苷培唑帕尼复盐化合物替换为野黄芩苷培唑帕尼复盐化合物。野芩苷培唑帕尼复盐纳米颗粒粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0201]
制备得到的野黄芩苷培唑帕尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的野黄芩苷培唑帕尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了2.2倍。
[0202]
实施例17黄芩苷奥希替尼复盐纳米颗粒的制备
[0203]
与实施例11的制备方法基本相同，不同之处在于，将黄芩苷吉非替尼复盐化合物替换为黄芩苷奥希替尼复盐化合物。黄芩苷奥希替尼复盐纳米颗粒粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0204]
制备得到的黄芩苷奥希替尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的黄芩苷奥希替尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了2.4倍。
[0205]
实施例18野黄芩苷奥希替尼复盐纳米颗粒的制备
[0206]
与实施例17的制备方法基本相同，不同之处在于，将黄芩苷奥希替尼复盐化合物替换为野黄芩苷奥希替尼复盐化合物。野芩苷奥希替尼复盐纳米颗粒粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0207]
制备得到的野黄芩苷奥希替尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的野黄芩苷奥希替尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了2.2倍。
[0208]
实施例19野黄芩苷拉帕替尼复盐纳米颗粒的制备
[0209]
与实施例11的制备方法基本相同，不同之处在于，将黄芩苷吉非替尼复盐化合物替换为野黄芩苷拉帕替尼复盐化合物。野芩苷拉帕替尼复盐纳米颗粒粒径分布在50nm～500nm范围内。
[0210]
制备得到的野黄芩苷拉帕替尼复盐纳米颗粒相比未经纳米研磨的野黄芩苷拉帕替尼复盐化合物，在10分钟20℃的溶解度增加了2.5倍。
[0211]
实施例20动物在体抗肺癌肿瘤活性测定
[0212]
分别设置空白给药组，黄芩苷组，野黄芩苷组，吉非替尼组，厄洛替尼组，黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液组(黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例11)，野黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液组(野黄芩苷尼洛替尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例12)，黄芩苷厄洛替尼复盐纳米混悬液组(黄芩苷厄洛替尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例13)，野黄芩苷厄洛替尼复盐纳米混悬液组(野黄芩苷厄洛替尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例14)。
[0213]
1、试验细胞及动物
[0214]
小鼠：balb/c nude鼠，雄性，6
‑
8周龄。所有小鼠均自由取食和饮水，在室温(23
±
2)℃条件下饲养。
[0215]
肿瘤细胞：hcc827细胞系，源自nih。
[0216]
2、试验方法
[0217]
建立肺癌肿瘤小鼠，并将合格小鼠随机分组，每组10只，给药方案如下：
[0218]
空白给药组：仅给予生理盐水。
[0219]
黄芩苷组：用无菌pbs将黄芩苷配制成给药溶液，按照38mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0220]
野黄芩苷组：用无菌pbs将野黄芩苷配制成给药溶液，按照38mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0221]
吉非替尼组：用无菌pbs将吉非替尼配制成给药溶液，按照38mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0222]
厄洛替尼组：用无菌pbs将厄洛替尼配制成给药溶液，按照15mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0223]
黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液组：黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照75mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0224]
野黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液组：野黄芩苷吉非替尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照75mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0225]
黄芩苷厄洛替尼复盐纳米混悬液组：黄芩苷厄洛替尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照35mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0226]
野黄芩苷厄洛替尼复盐纳米混悬液组：野黄芩苷厄洛替尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照35mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0227]
给药结束后，测定小鼠的肿瘤体积，计算肿瘤抑制率(抑制率＝(空白给药组肿瘤
体积均值
‑
该给药组肿瘤体积均值)/空白给药组肿瘤体积均值*100％)，结果如下：
[0228]
空白给药组抑制率0，黄芩苷组(38mg/kg)抑制率24％，野黄芩苷组(38mg/kg)抑制率28％，吉非替尼组(38mg/kg)抑制率66％，厄洛替尼组(15mg/kg)68％，黄芩苷吉非替尼纳米混悬液组(75mg/kg)抑制率89％，野黄芩苷吉非替尼纳米混悬液组(75mg/kg)抑制率87％，黄芩苷厄洛替尼纳米混悬液组(35mg/kg)抑制率89％，野黄芩苷厄洛替尼纳米混悬液组(35mg/kg)抑制率86％。
[0229]
实施例21动物在体抗肾癌肿瘤活性测定
[0230]
分别设置空白给药组，黄芩苷组，野黄芩苷组，培唑帕尼组，黄芩苷培唑帕尼复盐纳米混悬液组(黄芩苷培唑帕尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例15)，野黄芩苷培唑帕尼复盐纳米混悬液组(野黄芩苷培唑帕尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例16)。
[0231]
1、试验细胞及动物
[0232]
小鼠：balb/c nude鼠，雄性，6
‑
8周龄。所有小鼠均自由取食和饮水，在室温(23
±
2)℃条件下饲养。
[0233]
肿瘤细胞：a498细胞系，源自nih。
[0234]
2、试验方法
[0235]
建立肾癌肿瘤小鼠，将合格小鼠随机分组，每组10只，给药方案如下：
[0236]
空白给药组：仅给予生理盐水。
[0237]
黄芩苷组：用无菌pbs将黄芩苷配制成给药溶液，按照33mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0238]
野黄芩苷组：用无菌pbs将野黄芩苷配制成给药溶液，按照33mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0239]
培唑帕尼组：用无菌pbs将培唑帕尼配制成给药溶液，按照32mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0240]
黄芩苷培唑帕尼复盐纳米混悬液组：黄芩苷培唑帕尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照65mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0241]
野黄芩苷培唑帕尼复盐纳米混悬液组：野黄芩苷培唑帕尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照75mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0242]
给药结束后，测定小鼠的肿瘤体积，计算肿瘤抑制率(抑制率＝(空白给药组肿瘤体积均值
‑
该给药组肿瘤体积均值)/空白给药组肿瘤体积均值*100％)，结果如下：
[0243]
空白给药组抑制率0，黄芩苷组(33mg/kg)抑制率30％，野黄芩苷组(33mg/kg)抑制率28％，培唑帕尼组(32mg/kg)抑制率65％，黄芩苷培唑帕尼纳米混悬液组(65mg/kg)抑制率86％，野黄芩苷培唑帕尼纳米混悬液组(65mg/kg)抑制率91％。
[0244]
实施例22动物在体活性测定
[0245]
分别设置空白给药组，黄芩苷组，野黄芩苷组，奥希替尼组，黄芩苷奥希替尼复盐纳米混悬液组(黄芩苷奥希替尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例17)，野黄芩苷奥希替尼复盐纳米混悬液组(野黄芩苷奥希替尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例18)。
[0246]
1、试验细胞及动物
[0247]
小鼠：balb/c nude鼠，雄性，6
‑
8周龄。所有小鼠均自由取食和饮水，在室温(23
±
2)℃条件下饲养。
[0248]
肿瘤细胞：h1975细胞系，源自nih。
[0249]
2、试验方法
[0250]
建立肺癌肿瘤小鼠，将合格小鼠随机分组，每组10只，给药方案如下：
[0251]
空白给药组：仅给予生理盐水。
[0252]
黄芩苷组：用无菌pbs将黄芩苷配制成给药溶液，按照9mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0253]
野黄芩苷组：用无菌pbs将野黄芩苷配制成给药溶液，按照9mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0254]
奥希替尼组：用无菌pbs将奥希替尼配制成给药溶液，按照11mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0255]
黄芩苷奥希替尼复盐纳米混悬液组：黄芩苷奥希替尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照20mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0256]
野黄芩苷奥希替尼复盐纳米混悬液组：野黄芩苷奥希替尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照20mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0257]
给药结束后，测定小鼠的肿瘤体积，计算肿瘤抑制率(抑制率＝(空白给药组肿瘤体积均值
‑
该给药组肿瘤体积均值)/空白给药组肿瘤体积均值*100％)，结果如下：
[0258]
空白给药组抑制率0，黄芩苷组(33mg/kg)抑制率30％，野黄芩苷组(33mg/kg)抑制率28％，奥希替尼组(32mg/kg)抑制率65％，黄芩苷奥希替尼纳米混悬液组(65mg/kg)抑制率86％，野黄芩苷奥希替尼纳米混悬液组(65mg/kg)抑制率91％。
[0259]
实施例23动物在体活性测定
[0260]
分别设置空白给药组，野黄芩苷组，拉帕替尼组，野黄芩苷拉帕替尼复盐纳米混悬液组(野黄芩苷拉帕替尼复盐纳米混悬液制备方法参照实施例19)。
[0261]
1、试验细胞及动物
[0262]
小鼠：balb/c nude鼠，雄性，6
‑
8周龄。所有小鼠均自由取食和饮水，在室温(23
±
2)℃条件下饲养。
[0263]
肿瘤细胞：bt474细胞系，源自nih。
[0264]
2、试验方法
[0265]
建立乳腺肿瘤小鼠，并将合格小鼠随机分组，每组10只，给药方案如下：
[0266]
空白给药组：仅给予生理盐水。
[0267]
野黄芩苷组：用无菌pbs将野黄芩苷配制成给药溶液，按照31mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0268]
拉帕替尼组：用无菌pbs将拉帕替尼配制成给药溶液，按照39mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0269]
野黄芩苷拉帕替尼复盐纳米混悬液组：野黄芩苷拉帕替尼复盐纳米混悬液作为给药溶液，按照20mg/kg给药量，灌胃，每日一次，连续给药21日。
[0270]
给药结束后，测定小鼠的肿瘤体积，计算肿瘤抑制率(抑制率＝(空白给药组肿瘤体积均值
‑
该给药组肿瘤体积均值)/空白给药组肿瘤体积均值*100％)，结果如下：
[0271]
空白给药组抑制率0，野黄芩苷组(31mg/kg)抑制率25％，拉帕替尼组(39mg/kg)抑制率67％，野黄芩苷拉帕替尼纳米混悬液组(20mg/kg)抑制率90％。
[0272]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0273]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。