一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条、制备方法及其应用与流程

技术特征：
1.一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条，其特征在于：包括样品垫，金标p48结合垫，nc膜，吸水垫，pvc底板；pvc底板中央贴有nc膜，nc膜上缘粘贴有吸水滤纸，nc膜下缘依次粘贴样品垫和标记有p48蛋白的胶体金标p48结合垫，p48多克隆抗体、p48蛋白分别标记nc膜上的c线、t线；编码所述p48蛋白的核苷酸序列如seq id no:2所示；所述p48多克隆抗体为利用p48蛋白为抗原制备而成。2.如权利要求1所述的一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：获取p48蛋白；编码所述p48蛋白的核苷酸序列如seq id no:2所示；s2：利用p48蛋白为抗原制备p48多克隆抗体；s3：用p48蛋白标记胶体金，制备金标p48蛋白；s4：准备样品垫，金标p48结合垫，nc膜，吸水垫，pvc底板；将金标p48蛋白涂布在金标垫上，在nc膜上划出c、t线，其中c线包被p48多克隆抗体、t线包被p48蛋白；在pvc底板中央贴上nc膜，nc膜上缘粘贴吸水滤纸，nc膜下缘依次粘贴样品垫和标记有p48蛋白的胶体金标p48结合垫。3.根据权利要求2所述的一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条的制备方法，其特征在于：使用划膜仪按照1μl/cm的用量在nc膜上划出t、c线。4.根据权利要求3所述的一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条的制备方法，其特征在于：t线包被p48蛋白的浓度为2.0mg/ml。5.根据权利要求2所述的一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条的制备方法，其特征在于：p48蛋白的获取方法为，将编码p48蛋白的核苷酸序列进行密码子优化后插入原核表达载体进行表达获得。6.根据权利要求5所述的一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条的制备方法，其特征在于：所述密码子优化包括将第258处、714处、765处、1341处、1358处、1375处、1382处的tga密码子优化为tgg。7.如权利要求1所述的一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条在牛支原体抗体检测中的应用。8.根据权利要求7所述的一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条在牛支原体抗体检测中的应用，其特征在于：所述试纸条在对牛支原体抗体进行检测的方法为，将待检样品滴在样品垫处或将试纸条的样品垫部分插入到待检样品液体中，平放10min后观察结果即可。

技术总结
本发明属于免疫学检测技术领域，尤其涉及一种牛支原体胶体金免疫检测试纸条、制备方法及其应用。本发明研制的双抗原夹心免疫试纸条与市售Bovicheck牛支原体抗体检测试剂盒相比，符合率为94.92％，197份样品中检出46份阳性血清，优于市售Bovicheck牛支原体抗体检测试剂盒，继续优化，有望成为国内初筛M.bovis抗体的适用于临床的快速、简便、特异、敏感的胶体金免疫检测试纸条试剂。本发明研制的试纸条主要包括样品垫，金标p48结合垫，NC膜，吸水垫，PVC底板；兔抗p48蛋白多克隆抗体、p48蛋白分别标记NC膜上的C线、T线。T线。T线。


技术研发人员：陈创夫 王震 石峰 赵阳 王勇 易继海
受保护的技术使用者：石河子大学
技术研发日：2021.09.14
技术公布日：2022/1/3