IL-40的用途和用于检测IL-40活性的方法与流程

il
‑
40的用途和用于检测il
‑
40活性的方法
1.相关专利申请
2.本专利申请要求名为marcela hernandez ruiz等人作为发明人于2019年2月8日提交的标题为uses of il
‑
40and methods for detecting il
‑
40activity的美国临时专利申请no.62/803,037的权益，并由代理人案卷号bld
‑
2001
‑
pv指定。前述申请的全部内容以引用方式并入本文，包括所有文本、表格和附图。
技术领域
3.本技术部分地涉及用于检测il
‑
40及其修饰形式的活性的方法。本技术还部分地涉及il
‑
40用于促进细胞分化的用途。


背景技术：

4.细胞因子是参与免疫应答、宿主防御、炎症和免疫系统发育的小分泌蛋白。细胞因子通常通过结合靶细胞膜上的特异性受体来发挥其效应。细胞因子的实例包括白介素、趋化因子、干扰素和肿瘤坏死因子超家族的成员。某些细胞因子涉及自身免疫疾病、癌症、内分泌失调和其他小病；并且可用于免疫疗法。
5.il
‑
40通常被认为是b细胞相关的细胞因子，并且可用于某些研究应用(例如，研究某些疾病的发病机制；研究免疫细胞活化和分化)、诊断和/或某些类型的免疫疗法。本文提供了用于检测il
‑
40(例如，重组il
‑
40及其修饰形式)的活性的方法。il
‑
40可能参与促进某些免疫细胞的分化。本文提供了使用il
‑
40诱导免疫细胞分化的方法。


技术实现要素：

6.在一些方面，本文提供了用于评估il
‑
40多肽的活性的方法，该方法包括：a)使细胞与包含il
‑
40多肽的第一组合物接触；b)测量细胞的选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、cxcl8、cxcl10、il
‑
1ra、促红细胞生成素、pdgf
‑
aa和vegf的一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生，从而测量细胞因子、趋化因子和/或生长因子产生；以及c)根据(b)中测量的细胞因子、趋化因子和/或生长因子产生来检测第一组合物中的il
‑
40多肽的活性。
7.在一些方面，本文还提供了用于评估il
‑
40多肽的活性的方法，该方法包括：a)使细胞与包含il
‑
40多肽的第一组合物和包含共刺激剂的第二组合物接触；b)测量细胞的选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、ccl17、ccl20、cxcl1、cxcl5、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、il
‑
1ra、il
‑
6、促红细胞生成素、pdgf
‑
aa和vegf的一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生，从而测量细胞因子、趋化因子和/或生长因子产生；并且c)根据(b)中测量的细胞因子、趋化因子和/或生长因子产生来检测第一组合物中的il
‑
40多肽的活性。
8.在一些方面，本文还提供了用于评估il
‑
40多肽的活性的方法，该方法包括：a)使单核细胞群与包含il
‑
40多肽的第一组合物接触；b)检测群中的单核细胞向巨噬细胞的分
化和/或单核细胞活化；以及c)根据b)中检测的单核细胞向巨噬细胞的分化和/或单核细胞活化来评估第一组合物中的il
‑
40多肽的活性。
9.在一些方面，本文还提供了用于诱导单核细胞分化为巨噬细胞的方法，该方法包括使单核细胞与包含il
‑
40多肽的第一组合物接触。
10.在一些方面，本文还提供了试剂盒，该试剂盒包含：a)第一组合物，该第一组合物包含一种或多种选自ifn
‑
γ、gm
‑
csf、ifn
‑
α、il
‑
1β、il
‑
4、il
‑
10、il
‑
13、m
‑
csf、tgf
‑
β和tnf
‑
α的多肽；b)一种或多种用于测量细胞因子、趋化因子和/或生长因子产生的组分，其中细胞因子、趋化因子和/或生长因子选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、ccl17、ccl20、cxcl1、cxcl5、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、il
‑
1ra、il
‑
6、促红细胞生成素、pdgf
‑
aa和vegf中的一种或多种；以及c)使用说明书。
11.在一些方面，本文还提供了用于检测细胞上il
‑
40受体的存在的方法，该方法包括：a)使细胞与包含刺激剂的第一组合物和包含重组人il
‑
40多肽的第二组合物接触；b)将细胞与标记的抗il
‑
40抗体一起孵育；以及c)测量结合细胞的标记的抗il
‑
40抗体的量，从而检测il
‑
40受体的存在。
12.在以下具体实施方式、实施例、权利要求和附图中进一步描述了某些实施方式。
附图说明
13.附图示出了本技术的某些实施方式并且不是限制性的。为了清楚和便于说明，附图未按比例绘制，并且在一些情况下，各种方面可以夸大或放大地示出，以利于理解具体实施方式。
14.图1示出rhil
‑
40对cxcl8产生的影响且其活性由ifn
‑
γ加剧。结果以中间值(media)
±
sem示出，并且刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
15.图2示出rhil
‑
40加上ifn
‑
γ对cxcl9产生的影响。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
16.图3示出rhil
‑
40对ccl2产生的影响且其活性由ifn
‑
γ加剧。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
17.图4示出rhil
‑
40对ccl3产生的影响且其活性由ifn
‑
γ加剧。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
18.图5示出rhil
‑
40对ccl4产生的影响且其活性由ifn
‑
γ加剧。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
19.图6示出rhil
‑
40对ccl5产生的影响且其活性由ifn
‑
γ加剧。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
20.图7示出rhil
‑
40加上ifn
‑
γ对cxcl10产生的影响。结果以中间值
±
sem示出，并且
刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
21.图8示出rhil
‑
40加上ifn
‑
γ对il1ra产生的影响。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
22.图9示出rhil
‑
40加上ifn
‑
γ对il
‑
6产生的影响。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：fc部分(阴影柱)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色柱)，rhil
‑
40(白色柱)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(有点的柱)。
23.图10示出rhil40对促红细胞生成素产生的影响且其活性由tgf
‑
β、m
‑
csf、il
‑
10、gm
‑
csf、ifn
‑
γ或il
‑
1β加剧。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：对照或细胞因子(白色柱)，fc部分或fc部分 细胞因子(黑色柱)，rhil40或rhil40 细胞因子(有点的柱)。
24.图11示出rhil40对pdgf
‑
aa产生的影响且其活性由tgf
‑
β、il
‑
10或il
‑
1β加剧。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：对照或细胞因子(白色柱)，fc部分或fc部分 细胞因子(黑色柱)，rhil40或rhil40 细胞因子(有点的柱)。
25.图12示出rhil40对vegf产生的影响以及其活性由il
‑
4、il
‑
13、m
‑
csf、gm
‑
csf、tnf
‑
α或il
‑
1β加剧。结果以中间值
±
sem示出，并且刺激物如下表示：对照或细胞因子(白色柱)，fc部分或fc部分 细胞因子(黑色柱)，rhil40或rhil40 细胞因子(有点的柱)。
26.图13中的图a
‑
m示出rhil
‑
40对pbmc中趋化因子产生的影响。在pbmc中观察到cxcl8(图a)、cxcl10(图b)、ccl11(图c)、ccl17(图d)、ccl2(图e)、ccl3(图g)、cxcl5(图i)、ccl20(图j)、cxcl1(图k)、cxcl11(图l)和ccl4(图m)的产生在统计上的显著差异。结果以中间值
±
sem示出。
27.图14中的图a
‑
f示出在存在或不存在ifn
‑
γ的情况下，由rhil
‑
40诱导的thp
‑
1形态学变化。
28.图15中的图a
‑
c示出rhil
‑
40加上ifn
‑
γ对thp
‑
1单核细胞表面上hla
‑
a，b，c(图a)、cd40(图b)和cd11b(图c)的表达的影响。结果以柱状图示出，并且刺激物如下表示：未受刺激细胞(灰色点线)，fc部分(灰色虚线)，rhil
‑
40(灰色实线)，ifn
‑
γ(黑色点线)，fc部分加上ifn
‑
γ(黑色虚线)，以及rhil
‑
40加上ifn
‑
γ(黑色实线)。
29.图16示出rhil40对thp
‑
1细胞上il40受体的表达的影响。结果以柱状图示出，并表示如下：未染色细胞(灰色点线)，rhfc部分 同种型
‑
apc(灰色虚线)，rhfc部分 抗fc
–
apc(灰色实线)，rhil40 同种型
‑
apc(黑色虚线)，rhil40 抗fc
–
apc(黑色实线)。
具体实施方式
30.il
‑
40可用于某些研究应用、诊断和/或免疫疗法。因此，用于评估il
‑
40、重组il
‑
40、il
‑
40变体、il
‑
40片段以及il
‑
40的其他修饰形式的活性的生物测定对于开发il
‑
40的实际应用是有用的。本文提供了用于评估il
‑
40的活性的方法。本文还提供了使用il
‑
40诱导细胞分化的方法。
31.il
‑
40
32.本文提供了用于评估白介素
‑
40(il
‑
40)多肽的活性的方法。本文还提供了使用白
介素
‑
40(il
‑
40)诱导细胞分化的方法。白介素
‑
40(可称为il
‑
40、il40、c17orf99(染色体17开放阅读框99)、glpg464或unq464)是一种参与体液免疫调节的细胞因子，并且通常与b细胞相关。il
‑
40在骨髓、胎儿肝脏和某些人b细胞淋巴瘤中表达，并且在活化后的外周b细胞中可诱导il
‑
40表达。il
‑
40存在于哺乳动物基因组中，并且il
‑
40基因(c17orf99)编码与其他细胞因子家族无关的小(～27
‑
kda)分泌蛋白，指示在哺乳动物免疫应答中的功能。初始b细胞在活化后可表达il
‑
40，并且在用各种细胞因子诸如il
‑
4和tgf
‑
β1培养之后的产生增加。
33.il
‑
40通常存在于哺乳动物中，包括人、小鼠、大鼠和黑猩猩。人il
‑
40核酸序列的实例在本文提供为seq id no:2(genbank登录号nm_001163075.1)，并且人il
‑
40氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:1(genbank登录号np_001156547.1)。小鼠il
‑
40核酸序列的实例在本文提供为seq id no:4(genbank登录号nm_029964.1)，并且小鼠il
‑
40氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:3(genbank登录号np_084240.1)。
34.il
‑
40多肽可指前体il
‑
40多肽(包括信号肽)或成熟il
‑
40多肽(不包括信号肽)。在一些实施方式中，il
‑
40多肽是前体il
‑
40多肽(例如，包含seq id no:1的氨基酸1
‑
265的前体人il
‑
40多肽；包含seq id no:3的氨基酸1
‑
252的前体小鼠il
‑
40多肽)。在一些实施方式中，il
‑
40多肽是成熟il
‑
40多肽(例如，包含seq id no:1的氨基酸21
‑
265的成熟人il
‑
40多肽；包含seq id no:3的氨基酸19
‑
252的成熟小鼠il
‑
40多肽)。
35.在一些实施方式中，il
‑
40多肽是重组il
‑
40多肽。重组il
‑
40多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即il
‑
40核酸序列)编码的il
‑
40多肽。在一些实施方式中，il
‑
40多肽是重组人il
‑
40多肽(rhil
‑
40)。在一些实施方式中，il
‑
40多肽是重组小鼠il
‑
40多肽(rmil
‑
40)。
36.本文中的il
‑
40多肽可指未经修饰的il
‑
40多肽。未经修饰的多肽通常是指天然或野生型全长(前体或成熟)多肽，其没有氨基酸取代、没有插入、没有缺失、没有化学修饰、没有氨基酸侧链修饰、没有标签、没有可检测标记、没有融合等。
37.本文中的il
‑
40多肽可指修饰il
‑
40多肽。修饰多肽通常是指包含一个或多个氨基酸取代、一个或多个插入、一个或多个缺失、一种或多种化学修饰、一个或多个氨基酸侧链修饰、一个或多个标签、一个或多个可检测标记、一个或多个融合等，以及它们的组合的多肽。修饰可以包括例如添加一个或多个荧光团、糖基化、异戊二烯化、聚乙二醇化、连接至固体表面、生物素化、抗体缀合、与治疗剂缀合、半胱氨酸处的化学修饰(例如，氨乙基化、碘乙酰胺、马来酰亚胺、dha形成、二硫化物形成、dha与硫醇的反应，以及二硫化物的脱硫)、引入一个或多个非天然氨基酸等，以及它们的组合。
38.在一些实施方式中，il
‑
40多肽是指il
‑
40变体或突变体。此类变体包括例如il
‑
40多肽的氨基酸序列内残基的缺失和/或插入和/或取代。il
‑
40变体可包括缺失、插入和取代的任何组合。在一些实施方式中，il
‑
40多肽包含一个或多个氨基酸取代。这些变体具有从il
‑
40多肽移除的至少一个氨基酸残基以及在其位置中插入的不同残基。例如，il
‑
40变体可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸取代。il
‑
40变体可包括保守取代和/或非保守取代，并且可以使用本文所述的用于评估il
‑
40活性的一种或多种生物测定来筛选变体。取代的实例在以下列出：
39.氨基酸残基取代实例
40.ala(a)
ꢀꢀꢀꢀ
val；leu；ile；val
41.arg(r)
ꢀꢀꢀꢀ
lys；gln；asn；lys
42.asn(n)
ꢀꢀꢀꢀ
gln；his；asp,lys；gln；arg
43.asp(d)
ꢀꢀꢀꢀ
glu；asn
44.cys(c)
ꢀꢀꢀꢀ
ser；ala
45.gln(q)
ꢀꢀꢀꢀ
asn；glu
46.glu(e)
ꢀꢀꢀꢀ
asp；gln
47.gly(g)
ꢀꢀꢀꢀ
ala
48.his(h)
ꢀꢀꢀꢀ
asn；gln；lys；arg
49.ile(i)
ꢀꢀꢀꢀ
leu；val；met；ala；leu；phe；正亮氨酸
50.leu(l)
ꢀꢀꢀꢀ
正亮氨酸；ile；val；ile；met；ala；phe
51.lys(k)
ꢀꢀꢀꢀ
arg；gln；asn
52.met(m)
ꢀꢀꢀꢀ
leu；phe；ile
53.phe(f)
ꢀꢀꢀꢀ
leu；val；ile；ala；tyr
54.pro(p)
ꢀꢀꢀꢀ
ala
55.ser(s)
ꢀꢀꢀꢀ
thr
56.thr(t)
ꢀꢀꢀꢀ
ser
57.trp(w)
ꢀꢀꢀꢀ
tyr；phe
58.tyr(y)
ꢀꢀꢀꢀ
trp；phe；thr；ser
59.val(v)
ꢀꢀꢀꢀ
ile；leu；met；phe；ala；正亮氨酸
60.对il
‑
40多肽的生物学特性的实质性修饰可以通过选择在维持以下方面的效果上有显著差异的取代来实现：(a)多肽骨架在取代区域中的结构，例如作为折叠或螺旋构象，(b)分子在靶位点的电荷或疏水性，和/或(c)侧链的体积。天然存在的残基基于共同的侧链特性被划分为以下组：
61.(1)疏水性：正亮氨酸，met，ala，val，leu，ile；
62.(2)中性亲水性：cys，ser，thr；
63.(3)酸性：asp，glu；
64.(4)碱性：asn，gln，his，lys，arg；
65.(5)影响链取向的残基：gly，pro；以及
66.(6)芳族：trp，tyr，phe。
67.非保守取代通常需要将这些类别之一的成员交换为另一类别。
68.在一些实施方式中，il
‑
40多肽包含一个或多个插入。在一些实施方式中，il
‑
40多肽包含一个或多个插入，其中每个插入包含一个或多个氨基酸。例如，每个插入可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个插入的氨基酸。在一些实施方式中，il
‑
40多肽包含一个或多个缺失。在一些实施方式中，il
‑
40多肽包含一个或多个缺失，其中每个缺失从全长氨基酸序列移除一个或多个氨基酸。例如，每个缺失可移除1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个氨基酸。
69.在一些实施方式中，il
‑
40多肽包含融合多肽。融合多肽可称为融合蛋白或嵌合蛋白。融合多肽通常通过连接两个或多个编码独立蛋白质的基因而产生。该融合构建体的翻
译可以导致具有衍生自各原始蛋白的功能特性的单个或多个多肽。重组融合蛋白可以通过用于生物学研究或疗法的重组dna技术人工产生。融合多肽的实例包括与荧光蛋白标签(例如绿色荧光蛋白(gfp))、治疗性蛋白(例如抗体)，或本文所述的任何蛋白标签融合的il
‑
40。在一些实施方式中，融合多肽包含接头(例如，柔性接头、刚性接头、可剪切接头)。
70.在一些实施方式中，il
‑
40多肽包含一种或多种标签(例如，一种或多种氨基酸或肽标签；一种或多种亲和标签)。标签可有利于il
‑
40多肽的检测、分离和/或纯化。标签有时特异性地结合例如固相或可检测标记的分子或部分，从而具有分离、纯化和/或检测il
‑
40多肽的实用性。在一些实施方式中，标签包括以下元件中的一种或多种：fc(衍生自免疫球蛋白fc结构域)、flag(例如dykddddkg)、v5(例如gkpipnpllgldst)、c
‑
myc(例如eqkliseedl)、hsv(例如qpelapedped)、流感病毒血凝素ha(例如ypydvpdya)、vsv
‑
g(例如ytdiemnrlgk)、细菌谷胱甘肽
‑
s
‑
转移酶、麦芽糖结合蛋白、链霉亲和素
‑
或亲和素
‑
结合标签(例如pcdna
tm
6 bioease
tm
biotinylation system(invitrogen))、硫氧还原蛋白、β
‑
半乳醣苷酶、vsv
‑
糖蛋白、荧光蛋白(例如绿色荧光蛋白或其多种颜色变体之一(例如，黄色、红色、蓝色))、聚赖氨酸或聚精氨酸序列、聚组氨酸序列(例如his6)或其他螯合金属(例如，钴、锌、铜)的序列，和/或与含砷分子结合的富含半胱氨酸的序列。在某些实施方式中，富含半胱氨酸的标签包含氨基酸序列cc
‑
xn
‑
cc，其中x是任何氨基酸并且n是1至3，并且富含半胱氨酸的序列有时是ccpgcc。在某些实施方式中，标签包括富含半胱氨酸的元件和聚组氨酸元件(例如ccpgcc和his6)。
71.标签可以与结合配偶体结合。例如，一些标签与抗体(例如flag)结合，并且有时与小分子特异性结合。例如，聚组氨酸标签特异性地螯合二价金属，诸如铜、锌和钴；聚赖氨酸或聚精氨酸标签与锌指特异性结合；谷胱甘肽s
‑
转移酶标签与谷胱甘肽结合；并且富含半胱氨酸的标签与含砷分子特异性结合。含砷分子包括lumio
tm
试剂(invitrogen,california)，诸如flash
tm
(edt2[4',5'
‑
双(1,3,2
‑
二硫砷烷
‑2‑
基)荧光素
‑
(1,2
‑
乙二硫醇)2])和reash试剂。此类抗体和小分子有时与固相连接以用于分离靶蛋白或靶肽。
[0072]
在一些实施方式中，il
‑
40多肽包含一个或多个可检测标记物或标记。在一些实施方式中，il
‑
40多肽与可检测标记物或标记缀合。例如，对于研究和诊断应用，修饰il
‑
40多肽可以用可检测部分标记。许多标记是可用的，其通常包括放射性同位素(例如
35
s、
14
c、
125
i、3h和
131
i)、荧光标记(例如，稀土螯合物(铕螯合物)或荧光素及其衍生物、罗丹明及其衍生物、丹酰、丽丝胺、藻红蛋白、texas red和brilliant violet
tm
)，以及酶底物标记(例如，描述于美国专利no.4,275,149中，其以引用方式并入本文，荧光素酶(例如萤火虫荧光素酶和细菌荧光素；美国专利no.4,737,456，其以引用方式并入本文)、萤光素、2,3
‑
二氢酞嗪二酮、苹果酸脱氢酶、脲酶、过氧化物酶诸如辣根过氧化物酶(hrp)、碱性磷酸酶、β
‑
半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶)、杂环氧化酶(诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)、乳过氧化物酶、微过氧化物酶等)。
[0073]
在某些情况下，标记间接缀合至il
‑
40多肽。例如，il
‑
40多肽可以与生物素缀合，并且上述任何合适的标记可以与亲和素缀合，或反之亦然。生物素选择性地结合亲和素，标记能够以该间接方式与il
‑
40多肽缀合。或者，为了实现标记与il
‑
40多肽的间接缀合，使il
‑
40多肽与小半抗原(例如地高辛)缀合，并且使上述标记类型之一与抗半抗原抗体(例如抗地高辛抗体)缀合。
[0074]
在一些实施方式中，il
‑
40多肽是指il
‑
40多肽的片段。通常，il
‑
40片段包含比全长成熟il
‑
40更少的氨基酸。例如，il
‑
40片段可包括成熟人il
‑
40多肽的一部分(即seq id no:1的氨基酸21
‑
265的一部分)，或成熟小鼠il
‑
40多肽的一部分(即seq id no:3的氨基酸19
‑
252的一部分)。全长成熟人il
‑
40的长度为245个氨基酸。因此，人il
‑
40的片段的长度可为244个氨基酸或更短。全长成熟小鼠il
‑
40的长度为234个氨基酸。因此，小鼠il
‑
40的片段的长度可为233个氨基酸或更短。
[0075]
在一些实施方式中，il
‑
40多肽是指il
‑
40多肽的功能片段。本文提供了用于评估il
‑
40多肽以及il
‑
40的功能片段的活性的方法。在一些实施方式中，il
‑
40的功能片段是表现出全长成熟il
‑
40的至少50％活性的片段。例如，il
‑
40的功能片段是表现出全长成熟il
‑
40的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0076]
在一些实施方式中，将il
‑
40多肽固定到固体载体或基底上。在一些实施方式中，将il
‑
40多肽非扩散地固定到固体载体上(例如，il
‑
40多肽不从固体载体脱离)。固体载体或基底可以是il
‑
40多肽可直接或间接地附着于其上的任何物理上可分离的固体，包括但不限于由微阵列和孔提供的表面，以及粒子诸如珠(例如，顺磁珠、磁珠、微珠、纳米珠)、微粒和纳米粒子。固体载体也可包括例如芯片、柱、光纤、擦拭物、过滤器(例如平面过滤器)、一根或多根毛细管、玻璃以及改性或官能化玻璃(例如可控孔度玻璃(cpg))、石英、云母、重氮化膜(纸或尼龙)、聚甲醛、纤维素、醋酸纤维素、纸、陶瓷、金属、准金属、半导电材料、量子点、包被的珠或粒子、其他色谱材料、磁性粒子；塑料(包括丙烯酸树脂、聚苯乙烯、苯乙烯或其他材料的共聚物、聚丁烯、聚氨酯、teflon
tm
、聚乙烯、聚丙烯、聚酰胺、聚酯、聚偏二氟乙烯(pvdf)等)、多糖、尼龙或硝化纤维、树脂、硅石或基于硅石的材料(包括硅、硅胶和改性硅)、(pvdf)等)、多糖、尼龙或硝化纤维、树脂、硅石或基于硅石的材料(包括硅、硅胶和改性硅)、碳、金属(例如钢、金、银、铝、硅和铜)、无机玻璃、导电聚合物(包括聚合物诸如聚吡咯和聚吲哚)；微米或纳米结构表面，诸如核酸瓦片阵列、纳米管、纳米线或纳米粒子装饰表面；或多孔表面或凝胶，诸如甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺、糖聚合物、纤维素、硅酸盐，或其他纤维或链聚合物。在一些实施方式中，固体载体或基底可以使用被动或化学衍生的涂层用任何数量的材料(包括聚合物，诸如葡聚糖、丙烯酰胺、明胶或琼脂糖)涂覆。珠和/或粒子可以是游离的或彼此结合的(例如烧结的)。在一些实施方式中，固体载体或基底可以是粒子的集合。在一些实施方式中，粒子可包含硅石，并且硅石可包括二氧化硅。在一些实施方式中，硅石可以是多孔的，并且在某些实施方式中，硅石可以是无孔的。在一些实施方式中，粒子还包含赋予粒子顺磁性的试剂。在某些实施方式中，该试剂包括金属，并且在某些实施方式中，该试剂是金属氧化物(例如，铁或铁氧化物，其中铁氧化物含有fe
2
和fe
3
的混合物)。il
‑
40多肽可以通过共价键或通过非共价相互作用连接至固体载体，并且可以直接或间接地(例如，经由中间试剂诸如间隔分子或生物素)连接至固体载体。
[0077]
刺激剂和共刺激剂
[0078]
本文提供的某些方法包括使用刺激剂或共刺激剂。刺激剂和共刺激剂的用途可以包括在例如评估il
‑
40多肽的活性的方法中，和/或诱导细胞分化(例如诱导单核细胞分化为巨噬细胞)的方法中。刺激剂可以在某些情况下使用(例如，在暴露于il
‑
40之前刺激细胞)。共刺激剂可以在某些情况下使用(例如，在il
‑
40暴露期间共刺激细胞)。在一些实施方式中，使细胞或细胞群与刺激剂/共刺激剂接触。在一些实施方式中，使细胞或细胞群与刺激剂/共刺激剂和il
‑
40多肽同时接触。在一些实施方式中，使细胞或细胞群与刺激剂/共刺
激剂接触，然后与il
‑
40多肽接触。
[0079]
在某些情况下，刺激剂/共刺激剂可加强或增强il
‑
40对细胞或细胞群的效应。例如，刺激剂/共刺激剂可以增强响应于il
‑
40刺激的某些细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生。刺激剂/共刺激剂也可以增强响应于il
‑
40刺激的某些类型的细胞分化。在某些情况下，当与il
‑
40组合时，刺激剂/共刺激剂可以提供协同增强。例如，刺激剂/共刺激剂可以协同地增强响应于il
‑
40刺激的某些细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生。刺激剂/共刺激剂也可以协同地增强响应于il
‑
40刺激的某些类型的细胞分化。由刺激剂或共刺激剂提供的增强可以是累加的、倍增的或指数的。
[0080]
任何合适的刺激剂/共刺激剂可以与本文所提供的方法结合使用。在一些实施方式中，刺激剂/共刺激剂包括可溶性/分泌性蛋白。在一些实施方式中，刺激剂/共刺激剂包括细胞因子。在一些实施方式中，刺激剂/共刺激剂包括趋化因子。刺激剂/共刺激剂的非限制性实例包括干扰素
‑
γ(ifn
‑
γ)、干扰素
‑
α(ifn
‑
α)、脂多糖(lps)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm
‑
csf)、白介素1β(il
‑
1β)、白介素4(il
‑
4)、白介素13(il
‑
13)、巨噬细胞集落刺激因子(m
‑
csf)、感染(例如真菌感染、蠕虫感染)、免疫复合物、白介素
‑
1受体(il
‑
1r)、白介素10(il
‑
10)、转化生长因子β(tgf
‑
β)、糖皮质素、白介素6(il
‑
6)、白血病抑制因子(lif)、肿瘤坏死因子α(tnf
‑
α)、腺苷、补体成分和白介素32(il
‑
32)。
[0081]
ifn
‑
γ
[0082]
本文提供的某些方法包括使用干扰素
‑
γ(ifn
‑
γ)作为刺激剂或共刺激剂。干扰素
‑
γ(也称为ifn
‑
γ、ifnγ、ifn
‑
g、ifng、ifn
‑
gamma、干扰素γ、免疫干扰素、ii型干扰素)是二聚化可溶性细胞因子和ii型类别的干扰素。ifn
‑
γ通常涉及针对某些病毒、细菌和原生动物感染的先天和适应性免疫。ifn
‑
γ可用作巨噬细胞的激活剂以及ii类主要组织相容性复合体(mhc)分子表达的诱导剂。ifn
‑
γ可直接抑制病毒复制，并可提供免疫刺激和免疫调节效应。异常的ifn
‑
γ表达通常与许多自身炎症性疾病和自身免疫疾病相关。ifn
‑
γ通常由以下产生：自然杀伤(nk)和自然杀伤t(nkt)细胞，作为先天性免疫应答的一部分；cd4 th1和cd8细胞毒性t淋巴细胞(ctl)效应t细胞，一旦抗原特异性免疫发展；以及非细胞毒性先天淋巴细胞(ilc)。
[0083]
任何合适的ifn
‑
γ、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，ifn
‑
γ是人ifn
‑
γ。人ifn
‑
γ核酸序列的实例在本文提供为seq id no:6(genbank登录号nm_000619.3)，并且人ifn
‑
γ氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:5(genbank登录号np_000610.2)。在一些实施方式中，ifn
‑
γ是小鼠ifn
‑
γ。小鼠ifn
‑
γ核酸序列的实例在本文提供为seq id no:8(genbank登录号nm_008337.4)，并且小鼠ifn
‑
γ氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:7(genbank登录号np_032363.1)。
[0084]
ifn
‑
γ可指前体ifn
‑
γ多肽(包括信号肽)或成熟ifn
‑
γ多肽(不包括信号肽)。在一些实施方式中，ifn
‑
γ是前体ifn
‑
γ多肽(例如，包含seq id no:5的氨基酸1
‑
166的前体人ifn
‑
γ多肽；包含seq id no:5的氨基酸1
‑
161的前体人ifn
‑
γ多肽；包含seq id no:7的氨基酸1
‑
155的前体小鼠ifn
‑
γ多肽)。在一些实施方式中，ifn
‑
γ多肽是成熟ifn
‑
γ多肽(例如，包含seq id no:5的氨基酸24
‑
166的成熟人ifn
‑
γ多肽；包含seq id no:5的氨基酸24
‑
161的成熟人ifn
‑
γ多肽；包含seq id no:7的氨基酸23
‑
155的成熟小鼠ifn
‑
γ多肽)。
[0085]
在一些实施方式中，ifn
‑
γ是重组ifn
‑
γ多肽。重组ifn
‑
γ多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即ifn
‑
γ核酸序列)编码的ifn
‑
γ多肽。在一些实施方式中，ifn
‑
γ是重组人ifn
‑
γ多肽(rhifn
‑
γ)。在一些实施方式中，ifn
‑
γ是重组小鼠ifn
‑
γ多肽(rmifn
‑
γ)。在一些实施方式中，ifn
‑
γ是市售的重组人ifn
‑
γ(例如biolegend目录号570202)。在一些实施方式中，ifn
‑
γ是市售的重组小鼠ifn
‑
γ(例如biolegend目录号575302)。
[0086]
ifn
‑
γ可指未经修饰的ifn
‑
γ多肽、修饰ifn
‑
γ多肽、ifn
‑
γ变体、ifn
‑
γ突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，ifn
‑
γ是指包含与seq id no:5或seq id no:7至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，ifn
‑
γ可指包含与seq id no:5或seq id no:7至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0087]
在一些实施方式中，ifn
‑
γ是指ifn
‑
γ多肽的片段。通常，ifn
‑
γ片段包含比全长成熟ifn
‑
γ更少的氨基酸。例如，ifn
‑
γ片段可包括成熟人ifn
‑
γ多肽的一部分(例如，seq id no:5的氨基酸24
‑
166的一部分；seq id no:5的氨基酸24
‑
161的一部分)，或成熟小鼠ifn
‑
γ多肽的一部分(即seq id no:7的氨基酸23
‑
155的一部分)。全长成熟人ifn
‑
γ的一个实例的长度为143个氨基酸。因此，人ifn
‑
γ的片段的长度可为142个氨基酸或更短。全长成熟人ifn
‑
γ的另一实例的长度为138个氨基酸。因此，人ifn
‑
γ的片段的长度可为137个氨基酸或更短。全长成熟小鼠ifn
‑
γ的长度为133个氨基酸。因此，小鼠ifn
‑
γ的片段的长度可为132个氨基酸或更短。
[0088]
在一些实施方式中，ifn
‑
γ是指ifn
‑
γ多肽的功能片段。用于评估ifn
‑
γ和ifn
‑
γ的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定ifn
‑
γ片段是否是功能片段。例如，一种用于评估ifn
‑
γ活性的测定是在靶细胞中诱导抗病毒状态，有时称为细胞病变保护效应(cpe)测定。cpe测定的实例使用脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus)(emcv)攻击的a549人肺癌细胞，并且将效应与人ifn
‑
γ的标准(例如gxg01
‑
902
‑
535，bei resources)进行比较。在一些实施方式中，ifn
‑
γ的功能片段是表现出ifn
‑
γ标准或全长成熟ifn
‑
γ的至少50％活性的片段。例如，ifn
‑
γ的功能片段是表现出ifn
‑
γ标准或全长成熟ifn
‑
γ的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0089]
il
‑4[0090]
本文提供的某些方法包括使用白介素4(il
‑
4)作为刺激剂或共刺激剂。白介素4(也称为il
‑
4、b细胞生长因子1(bcgf
‑
1)、b
‑
细胞刺激因子1(bsf
‑
1)、白介素
‑
4、淋巴细胞刺激因子1、mgc79402)是涉及th2
‑
介导的应答的发展的主要细胞因子，其与变态反应和哮喘相关。i型受体包含il
‑
4rα和公共γ
‑
链(γc)，其也是细胞因子il
‑
2、
‑
7、
‑
9、
‑
15和
‑
21所共享的并且存在于造血细胞中。il
‑
4可以利用包含il
‑
4rα和il
‑
13rα1的ii型复合物，其存在于非造血细胞中。该第二受体复合物是il
‑
13的功能性受体，其与il
‑
4共享约25％的同源性。i型受体复合物可仅由il
‑
4形成且在th2发育中呈活性。相比之下，由il
‑
4或il
‑
13形成的ii型受体复合物在气道过度敏感和粘液分泌期间更具活性，并且不存在于t细胞中。
[0091]
任何合适的il
‑
4、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例
如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，il
‑
4是人il
‑
4。人il
‑
4核酸序列的实例在本文提供为seq id no:13(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_000589)，并且人il
‑
4氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:12(genbank登录号np_000580.1)。在一些实施方式中，il
‑
4是小鼠il
‑
4。小鼠il
‑
4核酸序列的实例在本文提供为seq id no:15(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_021283)，并且小鼠il
‑
4氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:14(genbank登录号np_067258.1)。
[0092]
il
‑
4可指前体il
‑
4多肽(包括信号肽)或成熟il
‑
4多肽(不包括信号肽)。在一些实施方式中，il
‑
4是前体il
‑
4多肽(例如，包含seq id no:12的氨基酸1
‑
153的前体人il
‑
4多肽；包含seq id no:14的氨基酸1
‑
140的前体小鼠il
‑
4多肽)。在一些实施方式中，il
‑
4多肽是成熟il
‑
4多肽(例如，包含seq id no:12的氨基酸25
‑
153的成熟人il
‑
4多肽；包含seq id no:14的氨基酸21
‑
140的成熟小鼠il
‑
4多肽；包含seq id no:14的氨基酸23
‑
140的成熟小鼠il
‑
4多肽)。
[0093]
在一些实施方式中，il
‑
4是重组il
‑
4多肽。重组il
‑
4多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即il
‑
4核酸序列)编码的il
‑
4多肽。在一些实施方式中，il
‑
4是重组人il
‑
4多肽(rhil
‑
4)。在一些实施方式中，il
‑
4是重组小鼠il
‑
4多肽(rmil
‑
4)。在一些实施方式中，il
‑
4是市售的重组人il
‑
4(例如biolegend目录号574002)。在一些实施方式中，il
‑
4是市售的重组小鼠il
‑
4(例如biolegend目录号574302)。
[0094]
il
‑
4可指未经修饰的il
‑
4多肽、修饰il
‑
4多肽、il
‑
4变体、il
‑
4突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，il
‑
4是指包含与seq id no:12或seq id no:14至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，il
‑
4可指包含与seq id no:12或seq id no:14至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0095]
在一些实施方式中，il
‑
4是指il
‑
4多肽的片段。通常，il
‑
4片段包含比全长成熟il
‑
4更少的氨基酸。例如，il
‑
4片段可包括成熟人il
‑
4多肽的一部分(即seq id no:12的氨基酸25
‑
153的一部分)，或成熟小鼠il
‑
4多肽的一部分(即seq id no:14的氨基酸21
‑
140的一部分)。全长成熟人il
‑
4的实例的长度为129个氨基酸。因此，人il
‑
4的片段的长度可为128个氨基酸或更短。全长成熟小鼠il
‑
4的实例的长度为120个氨基酸。因此，小鼠il
‑
4的片段的长度可为119个氨基酸或更短。全长成熟小鼠il
‑
4的另一实例的长度为118个氨基酸。因此，小鼠il
‑
4的片段的长度可为117个氨基酸或更短。
[0096]
在一些实施方式中，il
‑
4是指il
‑
4多肽的功能片段。用于评估il
‑
4和il
‑
4的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定il
‑
4片段是否是功能片段。例如，一种用于评估il
‑
4活性的测定是细胞增殖测定。细胞增殖测定的实例根据tf
‑
1细胞增殖的剂量依赖性刺激来测量il
‑
4的ed
50
。细胞增殖测定的另一实例根据ctll
‑
2细胞增殖的剂量依赖性刺激来测量il
‑
4的ed
50
。在一些实施方式中，il
‑
4的功能片段是表现出il
‑
4标准(例如人il
‑
4的who国际标准(who international standard for human il
‑
4)(nibsc代码：88/656))或全长成熟il
‑
4的至少50％活性的片段。例如，il
‑
4的功能片段是表现出il
‑
4标准或全长成熟il
‑
4的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0097]
il
‑
10
[0098]
本文提供的某些方法包括使用白介素10(il
‑
10)作为刺激剂或共刺激剂。白介素
10(也称为il
‑
10、b
‑
tcgf、csif、tgif)起初被描述为由辅助性t细胞2(th2)细胞克隆产生的细胞因子。其抑制th1细胞中的干扰素(ifn)
‑
γ合成，因此其最初称为细胞因子合成抑制因子(csif)。巨噬细胞是il
‑
10的主要来源，并且其分泌可由内毒素(经由toll样受体4，nf
‑
κb依赖性)、肿瘤坏死因子tnf
‑
α(经由tnf受体p55，nf
‑
κb依赖性)、儿茶酚胺和il
‑
1来刺激。il
‑
10通过抑制单核细胞/巨噬细胞、嗜中性粒细胞和t细胞中的促炎性细胞因子、趋化因子、粘附分子以及抗原呈递和共刺激分子的表达来控制炎性过程。il
‑
10抑制单核细胞和巨噬细胞产生促炎介质，诸如内毒素
‑
和ifn
‑
γ
‑
诱导的il
‑
1α、il
‑
6、il
‑
8、g
‑
csf、gm
‑
csf和tnf
‑
α释放。此外，其增强抗炎介质诸如il
‑
1ra和可溶性tnfα受体的产生。il
‑
10抑制单核细胞和巨噬细胞向t细胞呈递抗原的能力。这通过使组成型和ifnγ
‑
诱导的ii类mhc、共刺激分子诸如cd86以及一些粘附分子诸如cd58的细胞表面水平下调来实现。
[0099]
任何合适的il
‑
10、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，il
‑
10是人il
‑
10。人il
‑
10核酸序列的实例在本文提供为seq id no:17(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_000572)，并且人il
‑
10氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:16(genbank登录号np_000563.1)。在一些实施方式中，il
‑
10是小鼠il
‑
10。小鼠il
‑
10核酸序列的实例在本文提供为seq id no:19(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_010548)，并且小鼠il
‑
10氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:18(genbank登录号np_034678.1)。
[0100]
il
‑
10可指前体il
‑
10多肽(包括信号肽)或成熟il
‑
10多肽(不包括信号肽)。在一些实施方式中，il
‑
10是前体il
‑
10多肽(例如，包含seq id no:16的氨基酸1
‑
178的前体人il
‑
10多肽；包含seq id no:18的氨基酸1
‑
178的前体小鼠il
‑
10多肽)。在一些实施方式中，il
‑
10多肽是成熟il
‑
10多肽(例如，包含seq id no:16的氨基酸19
‑
178的成熟人il
‑
10多肽；包含seq id no:18的氨基酸19
‑
178的成熟小鼠il
‑
10多肽)。
[0101]
在一些实施方式中，il
‑
10是重组il
‑
10多肽。重组il
‑
10多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即il
‑
10核酸序列)编码的il
‑
10多肽。在一些实施方式中，il
‑
10是重组人il
‑
10多肽(rhil
‑
10)。在一些实施方式中，il
‑
10是重组小鼠il
‑
10多肽(rmil
‑
10)。在一些实施方式中，il
‑
10是市售的重组人il
‑
10(例如biolegend目录号715602；biolegend目录号571002)。在一些实施方式中，il
‑
10是市售的重组小鼠il
‑
10(例如biolegend目录号575802)。
[0102]
il
‑
10可指未经修饰的il
‑
10多肽、修饰il
‑
10多肽、il
‑
10变体、il
‑
10突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，il
‑
10是指包含与seq id no:16或seq id no:18至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，il
‑
10可指包含与seq id no:16或seq id no:18至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0103]
在一些实施方式中，il
‑
10是指il
‑
10多肽的片段。通常，il
‑
10片段包含比全长成熟il
‑
10更少的氨基酸。例如，il
‑
10片段可包括成熟人il
‑
10多肽的一部分(即seq id no:16的氨基酸19
‑
178的一部分)，或成熟小鼠il
‑
10多肽的一部分(即seq id no:18的氨基酸19
‑
178的一部分)。全长成熟人il
‑
10的实例的长度为160个氨基酸。因此，人il
‑
10的片段的长度可为159个氨基酸或更短。全长成熟小鼠il
‑
10的实例的长度为160个氨基酸。因此，小鼠il
‑
10的片段的长度可为159个氨基酸或更短。
[0104]
在一些实施方式中，il
‑
10是指il
‑
10多肽的功能片段。用于评估il
‑
10和il
‑
10的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定il
‑
10片段是否是功能片段。例如，一种用于评估il
‑
10活性的测定是ifn
‑
γ抑制测定。ifn
‑
γ抑制测定的实例测量了il
‑
10抑制pha活化的人pbmc中inf
‑
γ的诱导的程度。用于评估il
‑
10活性的另一种测定涉及剂量依赖性刺激mc/9细胞增殖。在一些实施方式中，il
‑
10的功能片段是表现出il
‑
10标准或全长成熟il
‑
10的至少50％活性的片段。例如，il
‑
10的功能片段是表现出il
‑
10标准或全长成熟il
‑
10的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0105]
tgf
‑
β
[0106]
本文提供的某些方法包括使用转化生长因子β(tgf
‑
β)作为刺激剂或共刺激剂。转化生长因子β(也称为tgf
‑
β、tgf
‑
β1、tgfb、dpd1、转化生长因子、转化生长因子β1、tgf
‑
β
‑
1)在细胞中作为390
‑
氨基酸多肽合成。弗林蛋白酶在278位残基裂解蛋白质，得到对应于潜在联系多肽(lap)的n
‑
末端裂解产物，并且前体的25
‑
kd c
‑
末端部分构成成熟tgf
‑
β1。tgf
‑
β激活剂可从lap释放tgf
‑
β。这些激活剂包括降解lap、血小板反应蛋白
‑
1、活性氧类，以及整联蛋白avb6和avb8的蛋白酶。小鼠tgf
‑
β将初始t细胞转化为防止自身免疫的调节性t(treg)细胞。虽然人tgf
‑
β1广泛用于在体外诱导foxp3 ，但其可能不是人treg分化的必需因素。可以通过tgf
‑
β1以及il
‑
6或il
‑
21的组合由初始cd4 t细胞诱导小鼠th17。然而，人th17分化的调节是不同的。tgf
‑
β1似乎以剂量依赖性方式对人th17分化具有双重效应。虽然tgf
‑
β1对来自脐带血的人初始cd4 t细胞中rorγt的表达是必需的，但tgf
‑
β1可在高剂量下抑制rorγt的功能。通过使用无血清培养基，已经阐明人th17分化的最佳条件是tgf
‑
β1、il
‑
1β和il
‑
2与il
‑
6、il
‑
21或il
‑
23的组合。
[0107]
任何合适的tgf
‑
β、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，tgf
‑
β是人tgf
‑
β。人tgf
‑
β核酸序列的实例在本文提供为seq id no:21(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_000660.7)，并且人tgf
‑
β氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:20(genbank登录号np_000651.3)。人tgf
‑
β核酸序列的另一实例提供为genbank登录号bc000125.1，并且人tgf
‑
β氨基酸序列的另一实例提供为genbank登录号p01137。在一些实施方式中，tgf
‑
β是小鼠tgf
‑
β。小鼠tgf
‑
β核酸序列的实例在本文提供为seq id no:23(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_011577.2)，并且小鼠tgf
‑
β氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:22(genbank登录号np_035707)。
[0108]
tgf
‑
β可指前体tgf
‑
β多肽(包括信号肽)或成熟tgf
‑
β多肽(不包括信号肽；或不包括信号肽和潜在联系多肽)。在一些实施方式中，tgf
‑
β是前体tgf
‑
β多肽(例如，包含seq id no:20的氨基酸1
‑
390的前体人tgf
‑
β多肽；包含seq id no:22的氨基酸1
‑
390的前体小鼠tgf
‑
β多肽)。在一些实施方式中，tgf
‑
β多肽是成熟tgf
‑
β多肽(例如，包含seq id no:20的氨基酸30
‑
390的成熟人tgf
‑
β多肽；包含seq id no:20的氨基酸279
‑
390的成熟人tgf
‑
β多肽；包含seq id no:22的氨基酸29
‑
390的成熟小鼠tgf
‑
β多肽；包含seq id no:22的氨基酸279
‑
390的成熟小鼠tgf
‑
β多肽)。
[0109]
在一些实施方式中，tgf
‑
β是重组tgf
‑
β多肽。重组tgf
‑
β多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即tgf
‑
β核酸序列)编码的tgf
‑
β多肽。在一些实施方式中，tgf
‑
β是重组人tgf
‑
β多肽(rhtgf
‑
β)。在一些实施方式中，tgf
‑
β是重组小
鼠tgf
‑
β多肽(rmtgf
‑
β)。在一些实施方式中，tgf
‑
β是市售的重组人tgf
‑
β(例如biolegend目录号580704；biolegend目录号781802)。在一些实施方式中，tgf
‑
β是市售的重组小鼠tgf
‑
β(例如biolegend目录号763102)。
[0110]
tgf
‑
β可指未经修饰的tgf
‑
β多肽、修饰tgf
‑
β多肽、tgf
‑
β变体、tgf
‑
β突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，tgf
‑
β是指包含与seq id no:20或seq id no:22至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，tgf
‑
β可指包含与seq id no:20或seq id no:22至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0111]
在一些实施方式中，tgf
‑
β是指tgf
‑
β多肽的片段。通常，tgf
‑
β片段包含比全长成熟tgf
‑
β更少的氨基酸。例如，tgf
‑
β片段可包括成熟人tgf
‑
β多肽的一部分(例如，seq id no:20的氨基酸30
‑
390的一部分；seq id no:20的氨基酸279
‑
390的一部分)，或成熟小鼠tgf
‑
β多肽的一部分(例如，seq id no:22的氨基酸29
‑
390的一部分；seq id no:22的氨基酸279
‑
390的一部分)。全长成熟人tgf
‑
β的实例的长度为112个氨基酸。因此，人tgf
‑
β的片段的长度可为111个氨基酸或更短。全长成熟小鼠tgf
‑
β的实例的长度为112个氨基酸。因此，小鼠tgf
‑
β的片段的长度可为111个氨基酸或更短。
[0112]
在一些实施方式中，tgf
‑
β是指tgf
‑
β多肽的功能片段。用于评估tgf
‑
β和tgf
‑
β的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定tgf
‑
β片段是否是功能片段。例如，一种用于评估tgf
‑
β活性的测定是细胞增殖抑制测定。细胞增殖抑制测定的实例测量了tgf
‑
β抑制由重组小鼠il
‑
4诱导的小鼠ht
‑
2细胞增殖的程度。在一些实施方式中，tgf
‑
β的功能片段是表现出tgf
‑
β标准或全长成熟tgf
‑
β的至少50％活性的片段。例如，tgf
‑
β的功能片段是表现出tgf
‑
β标准或全长成熟tgf
‑
β的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0113]
gm
‑
csf
[0114]
本文提供的某些方法包括使用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm
‑
csf)作为刺激剂或共刺激剂。粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(也称为gm
‑
csf、集落刺激因子2、csf2、csf
‑
α、pluripoietin
‑
α、嗜酸细胞集落刺激因子(eo
‑
csf)、爆式促进活性物质(bpa))在响应于感染的紧急血细胞生成(主要是骨髓细胞生成)信号传导中发挥作用，包括骨髓中的粒细胞和巨噬细胞产生及其在损伤或侵害部位的维持、存活和功能活化。gm
‑
csf的受体是包含主要结合亚基(gmrα)和主要信号传导亚基(βc)的异源二聚体。受体亚基在白细胞表面上共表达，其中βc以低于gmrα的水平表达。还报道了某些非造血细胞类型表达gm
‑
csf受体且在体外对gm
‑
csf刺激作出反应。
[0115]
任何合适的gm
‑
csf、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，gm
‑
csf是人gm
‑
csf。人gm
‑
csf核酸序列的实例在本文提供为seq id no:25(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_000758)，并且人gm
‑
csf氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:24(genbank登录号np_000749.2)。在一些实施方式中，gm
‑
csf是小鼠gm
‑
csf。小鼠gm
‑
csf核酸序列的实例在本文提供为seq id no:27(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_009969)，并且小鼠gm
‑
csf氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:26(genbank登录号np_034099.2)。
[0116]
gm
‑
csf可指前体gm
‑
csf多肽(包括信号肽)或成熟gm
‑
csf多肽(不包括信号肽)。在一些实施方式中，gm
‑
csf是前体gm
‑
csf多肽(例如，包含seq id no:24的氨基酸1
‑
144的前体人gm
‑
csf多肽；包含seq id no:26的氨基酸1
‑
141的前体小鼠gm
‑
csf多肽)。在一些实施方式中，gm
‑
csf多肽是成熟gm
‑
csf多肽(例如，包含seq id no:24的氨基酸18
‑
144的成熟人gm
‑
csf多肽；包含seq id no:26的氨基酸18
‑
141的成熟小鼠gm
‑
csf多肽)。
[0117]
在一些实施方式中，gm
‑
csf是重组gm
‑
csf多肽。重组gm
‑
csf多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即gm
‑
csf核酸序列)编码的gm
‑
csf多肽。在一些实施方式中，gm
‑
csf是重组人gm
‑
csf多肽(rhgm
‑
csf)。在一些实施方式中，gm
‑
csf是重组小鼠gm
‑
csf多肽(rmgm
‑
csf)。在一些实施方式中，gm
‑
csf是市售的重组人gm
‑
csf(例如biolegend目录号572902)。在一些实施方式中，gm
‑
csf是市售的重组小鼠gm
‑
csf(例如biolegend目录号576302)。
[0118]
gm
‑
csf可指未经修饰的gm
‑
csf多肽、修饰gm
‑
csf多肽、gm
‑
csf变体、gm
‑
csf突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，gm
‑
csf是指包含与seq id no:24或seq id no:26至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，gm
‑
csf可指包含与seq id no:24或seq id no:26至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0119]
在一些实施方式中，gm
‑
csf是指是gm
‑
csf多肽的片段。通常，gm
‑
csf片段包含比全长成熟gm
‑
csf更少的氨基酸。例如，gm
‑
csf片段可包括成熟人gm
‑
csf多肽的一部分(即seq id no:24的氨基酸18
‑
144的一部分)，或成熟小鼠gm
‑
csf多肽的一部分(即seq id no:26的氨基酸18
‑
141的一部分)。全长成熟人gm
‑
csf的实例的长度为127个氨基酸。因此，人gm
‑
csf的片段的长度可为126个氨基酸或更短。全长成熟小鼠gm
‑
csf的实例的长度为124个氨基酸。因此，小鼠gm
‑
csf的片段的长度可为123个氨基酸或更短。
[0120]
在一些实施方式中，gm
‑
csf是指gm
‑
csf多肽的功能片段。用于评估gm
‑
csf和gm
‑
csf的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定gm
‑
csf片段是否是功能片段。例如，一种用于评估gm
‑
csf活性的测定是细胞增殖测定。细胞增殖测定的实例通过tf
‑
1细胞增殖的剂量依赖性刺激来测定gm
‑
csf的ec
50
。在一些实施方式中，gm
‑
csf的功能片段是表现出gm
‑
csf标准(例如人gm
‑
csf的第一who国际标准(1st who international standard for human gm
‑
csf)(nibsc代码：88/646))或全长成熟gm
‑
csf的至少50％活性的片段。例如，gm
‑
csf的功能片段是表现出gm
‑
csf标准或全长成熟gm
‑
csf的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0121]
m
‑
csf
[0122]
本文提供的某些方法包括使用巨噬细胞集落刺激因子(m
‑
csf)作为刺激剂或共刺激剂。巨噬细胞集落刺激因子(也称为m
‑
csf、csf1、csf
‑
1、mcsf)最初被表征为糖蛋白，其在小鼠骨髓培养物中诱导由前体形成单核细胞和巨噬细胞集落。m
‑
csf以生物活性浓度组成性存在于人血清中。其结合cd14 单核细胞并促进人外周血单核细胞的存活/增殖。此外，m
‑
csf增强了可诱导单核细胞功能，包括单核细胞中的吞噬细胞活性、微生物杀伤、对肿瘤细胞的细胞毒性以及炎性细胞因子诸如il
‑
1、tnfα和ifn
‑
γ的合成。m
‑
csf在成熟人破骨细胞中诱导rankl产生；因此，m
‑
csf是成熟破骨细胞再吸收活性的有效刺激物。而且，m
‑
csf在人
肿瘤的人单核细胞中诱导vegf；高水平的m
‑
csf、单核吞噬细胞和vegf与患有癌症的患者的不良预后相关。高水平的m
‑
csf可能与不同的病理诸如肺纤维化(pulmonary fibrosis)和动脉粥样硬化(atherosclerosis)相关。m
‑
csf与其受体m
‑
csfr结合，并且该受体由第二配体il
‑
34共享。人m
‑
csf和il
‑
34表现出物种间特异性——两者均与人和小鼠m
‑
csf受体结合。
[0123]
任何合适的m
‑
csf、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，m
‑
csf是人m
‑
csf。人m
‑
csf核酸序列的实例在本文提供为seq id no:29(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_172212.2和nm_172212.3)，并且人m
‑
csf氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:28(genbank登录号np_757351.2)。在一些实施方式中，m
‑
csf是小鼠m
‑
csf。小鼠m
‑
csf核酸序列的实例在本文提供为seq id no:31(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_001113530.1)，并且小鼠m
‑
csf氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:30(genbank登录号np_001107002.1)。
[0124]
m
‑
csf可指前体m
‑
csf多肽(包括信号肽)或成熟m
‑
csf多肽(不包括信号肽)。在一些实施方式中，m
‑
csf是前体m
‑
csf多肽(例如，包含seq id no:28的氨基酸1
‑
190的前体人m
‑
csf多肽；包含seq id no:28的氨基酸1
‑
450的前体人m
‑
csf多肽；包含seq id no:28的氨基酸1
‑
554的前体人m
‑
csf多肽；包含seq id no:30的氨基酸1
‑
262的前体小鼠m
‑
csf多肽；包含seq id no:30的氨基酸1
‑
552的前体小鼠m
‑
csf多肽)。在一些实施方式中，m
‑
csf多肽是成熟m
‑
csf多肽(例如，包含seq id no:28的氨基酸33
‑
190的成熟人m
‑
csf多肽；包含seq id no:28的氨基酸33
‑
450的成熟人m
‑
csf多肽；包含seq id no:28的氨基酸33
‑
554的成熟人m
‑
csf多肽；包含seq id no:30的氨基酸33
‑
262的成熟小鼠m
‑
csf多肽；包含seq id no:30的氨基酸33
‑
552的成熟小鼠m
‑
csf多肽)。
[0125]
在一些实施方式中，m
‑
csf是重组m
‑
csf多肽。重组m
‑
csf多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即m
‑
csf核酸序列)编码的m
‑
csf多肽。在一些实施方式中，m
‑
csf是重组人m
‑
csf多肽(rhm
‑
csf)。在一些实施方式中，m
‑
csf是重组小鼠m
‑
csf多肽(rmm
‑
csf)。在一些实施方式中，m
‑
csf是市售的重组人m
‑
csf(例如biolegend目录号574802)。在一些实施方式中，m
‑
csf是市售的重组小鼠m
‑
csf(例如biolegend目录号576402)。
[0126]
m
‑
csf可指未经修饰的m
‑
csf多肽、修饰m
‑
csf多肽、m
‑
csf变体、m
‑
csf突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，m
‑
csf是指包含与seq id no:28或seq id no:30至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，m
‑
csf可指包含与seq id no:28或seq id no:30至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0127]
在一些实施方式中，m
‑
csf是指m
‑
csf多肽的片段。通常，m
‑
csf片段包含比全长成熟m
‑
csf更少的氨基酸。例如，m
‑
csf片段可包括成熟人m
‑
csf多肽的一部分(例如，seq id no:28的氨基酸33
‑
190的一部分；seq id no:28的氨基酸33
‑
450的一部分；seq id no:28的氨基酸33
‑
554的一部分)，或成熟小鼠m
‑
csf多肽的一部分(例如，seq id no:30的氨基酸33
‑
262的一部分；seq id no:30的氨基酸33
‑
552的一部分)。全长成熟人m
‑
csf的实例的长度为158个氨基酸。因此，人m
‑
csf的片段的长度可为157个氨基酸或更短。全长成熟小鼠m
‑
csf的实例的长度为230个氨基酸。因此，小鼠m
‑
csf的片段的长度可为229个氨基酸或更短。
[0128]
在一些实施方式中，m
‑
csf是指m
‑
csf多肽的功能片段。用于评估m
‑
csf和m
‑
csf的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定m
‑
csf片段是否是功能片段。例如，一种用于评估m
‑
csf活性的测定是细胞增殖测定。细胞增殖测定的实例通过m
‑
nfs60细胞增殖的剂量依赖性刺激来测定m
‑
csf的ec
50
。在一些实施方式中，m
‑
csf的功能片段是表现出m
‑
csf标准或全长成熟m
‑
csf的至少50％活性的片段。例如，m
‑
csf的功能片段是表现出m
‑
csf标准或全长成熟m
‑
csf的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0129]
ifn
‑
α
[0130]
本文提供的某些方法包括使用干扰素α(ifn
‑
α)作为刺激剂或共刺激剂。干扰素α也可称为ifn
‑
α、ifn
‑
α2、ifn
‑
α2b、ifn
‑
αa、ifna2或ifna2b。干扰素分为i型、ii型和iii型。i型ifn(ifn
‑
α和ifn
‑
β)在数量、分布和表达上最为丰富。而且，它们在哺乳动物中在结构和功能上均是高度保守的。ifn
‑
α2已被用于治疗癌症，诸如膀胱癌(bladder cancer)、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)和白血病(leukemia)。ifn
‑
α2增强患有头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma)(hnscc)的患者受抑制的免疫功能。ifn
‑
α2通过ifnγ依赖性和非依赖性机制来引发t和nk细胞介导的肿瘤细胞的细胞毒作用。ifn
‑
α2通过刺激穿孔素
‑
颗粒酶b体系来增强受抑制的t细胞细胞毒性(ifnγ依赖性)。而且，ifn
‑
α2诱导nk细胞中穿孔素
‑
颗粒酶b的表达(nk介导的细胞毒性，ifnγ非依赖性)。ifn
‑
α2可以是免疫刺激剂并且可以影响舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma)患者的临床结果。ifn
‑
α已用于治疗慢性丙型肝炎(chronic hepatitis c)(chc)；然而，ifn
‑
α相对不稳定并且需要频繁的肠胃外给药。聚乙二醇化的ifn
‑
α(即聚乙二醇(peg)
‑
ifn
‑
α)降低体外活性但增加ifn
‑
α的稳定性和血浆半衰期；因此，peg
‑
ifn
‑
α已在chc治疗中代替ifn
‑
α。
[0131]
任何合适的ifn
‑
α、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，ifn
‑
α是人ifn
‑
α。人ifn
‑
α核酸序列的实例在本文提供为seq id no:33(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_000605)，并且人ifn
‑
α氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:32(genbank登录号np_000596.2)。在一些实施方式中，ifn
‑
α是小鼠ifn
‑
α。小鼠ifn
‑
α核酸序列的实例在本文提供为seq id no:35(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_206870)，并且小鼠ifn
‑
α氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:34(genbank登录号np_996753.1)。
[0132]
ifn
‑
α可指前体ifn
‑
α多肽(包括信号肽)或成熟ifn
‑
α多肽(不包括信号肽)。在一些实施方式中，ifn
‑
α是前体ifn
‑
α多肽(例如，包含seq id no:32的氨基酸1
‑
188的前体人ifn
‑
α多肽；包含seq id no:34的氨基酸1
‑
190的前体小鼠ifn
‑
α多肽)。在一些实施方式中，ifn
‑
α多肽是成熟ifn
‑
α多肽(例如，包含seq id no:32的氨基酸24
‑
188的成熟人ifn
‑
α多肽；包含seq id no:34的氨基酸24
‑
190的成熟小鼠ifn
‑
α多肽)。
[0133]
在一些实施方式中，ifn
‑
α是重组ifn
‑
α多肽。重组ifn
‑
α多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即ifn
‑
α核酸序列)编码的ifn
‑
α多肽。在一些实施方式中，ifn
‑
α是重组人ifn
‑
α多肽(rhifn
‑
α)。在一些实施方式中，ifn
‑
α是重组小鼠ifn
‑
α多肽(rmifn
‑
α)。在一些实施方式中，ifn
‑
α是市售的重组人ifn
‑
α(例如biolegend目录号592702)。在一些实施方式中，ifn
‑
α是市售的重组小鼠ifn
‑
α(例如biolegend目录号
752802)。
[0134]
ifn
‑
α可指未经修饰的ifn
‑
α多肽、修饰ifn
‑
α多肽、ifn
‑
α变体、ifn
‑
α突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，ifn
‑
α是指包含与seq id no:32或seq id no:34至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，ifn
‑
α可指包含与seq id no:32或seq id no:34至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0135]
在一些实施方式中，ifn
‑
α是指ifn
‑
α多肽的片段。通常，ifn
‑
α片段包含比全长成熟ifn
‑
α更少的氨基酸。例如，ifn
‑
α片段可包括成熟人ifn
‑
α多肽的一部分(例如，seq id no:32的氨基酸24
‑
188的一部分)，或成熟小鼠ifn
‑
α多肽的一部分(例如seq id no:34的氨基酸24
‑
190的一部分)。全长成熟人ifn
‑
α的实例的长度为165个氨基酸。因此，人ifn
‑
α的片段的长度可为164个氨基酸或更短。全长成熟小鼠ifn
‑
α的实例的长度为167个氨基酸。因此，小鼠ifn
‑
α的片段的长度可为166个氨基酸或更短。
[0136]
在一些实施方式中，ifn
‑
α是指ifn
‑
α多肽的功能片段。用于评估ifn
‑
α和ifn
‑
α的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定ifn
‑
α片段是否是功能片段。例如，一种用于评估ifn
‑
α活性的测定是细胞病变效应抑制测定。例如，可以在使用emc病毒对l929或a549细胞的细胞病变效应抑制测定中测定ifn
‑
α的比活性。在一些实施方式中，ifn
‑
α的功能片段是表现出ifn
‑
α标准或全长成熟ifn
‑
α的至少50％活性的片段。例如，ifn
‑
α的功能片段是表现出ifn
‑
α标准或全长成熟ifn
‑
α的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0137]
il
‑
1β
[0138]
本文提供的某些方法包括使用白介素1β(il
‑
1β)作为刺激剂或共刺激剂。白介素1β也可称为il
‑
1β、分解代谢蛋白、前白介素1β，或前白介素
‑1‑
β。人和小鼠中的il
‑
1β不编码典型的信号肽，因此，新合成的前
‑
il
‑
1β在活化单核细胞和巨噬细胞的细胞质内积聚。无活性的前il
‑
1β转化为其成熟形式需要il
‑
1β
‑
转化酶(ice)(也称为半胱天冬酶
‑
1)的蛋白水解作用。由lps活化的单核细胞/巨噬细胞分泌成熟il
‑
1β不是组成型过程。这些细胞遭遇了特异性激活翻译后加工事件的次级刺激。此外，由于其促炎性质，il
‑
1β被视为促肿瘤细胞因子。在il
‑
1β的影响下观察到肿瘤转移和血管生成增强。il
‑
1β能够促进小鼠肺癌模型中的肿瘤进展。此外，il
‑
1β对转移和肿瘤血管生成的上调与基质金属蛋白酶的活性增加以及促血管生成分子肝细胞生长因子的表达相关。
[0139]
任何合适的il
‑
1β、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，il
‑
1β是人il
‑
1β。人il
‑
1β核酸序列的实例在本文提供为seq id no:37(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_000576)，并且人il
‑
1β氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:36(genbank登录号np_000567.1)。在一些实施方式中，il
‑
1β是小鼠il
‑
1β。小鼠il
‑
1β核酸序列的实例在本文提供为seq id no:39(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_008361)，并且小鼠il
‑
1β氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:38(genbank登录号np_032387.1)。
[0140]
il
‑
1β可指前体il
‑
1β多肽(包括前肽)或成熟il
‑
1β多肽(不包括前肽)。在一些实施方式中，il
‑
1β是前体il
‑
1β多肽(例如，包含seq id no:36的氨基酸1
‑
269的前体人il
‑
1β多肽；包含seq id no:38的氨基酸1
‑
269的前体小鼠il
‑
1β多肽)。在一些实施方式中，il
‑
1β
多肽是成熟il
‑
1β多肽(例如，包含seq id no:36的氨基酸117
‑
269的成熟人il
‑
1β多肽；包含seq id no:38的氨基酸118
‑
269的成熟小鼠il
‑
1β多肽)。
[0141]
在一些实施方式中，il
‑
1β是重组il
‑
1β多肽。重组il
‑
1β多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即il
‑
1β核酸序列)编码的il
‑
1β多肽。在一些实施方式中，il
‑
1β是重组人il
‑
1β多肽(rhil
‑
1β)。在一些实施方式中，il
‑
1β是重组小鼠il
‑
1β多肽(rmil
‑
1β)。在一些实施方式中，il
‑
1β是市售的重组人il
‑
1β(例如biolegend目录号579402)。在一些实施方式中，il
‑
1β是市售的重组小鼠il
‑
1β(例如biolegend目录号575102)。
[0142]
il
‑
1β可指未经修饰的il
‑
1β多肽、修饰il
‑
1β多肽、il
‑
1β变体、il
‑
1β突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，il
‑
1β是指包含与seq id no:36或seq id no:38至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，il
‑
1β可指包含与seq id no:36或seq id no:38至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0143]
在一些实施方式中，il
‑
1β是指il
‑
1β多肽的片段。通常，il
‑
1β片段包含比全长成熟il
‑
1β更少的氨基酸。例如，il
‑
1β片段可包括成熟人il
‑
1β多肽的一部分(例如seq id no:36的氨基酸117
‑
269的一部分)，或成熟小鼠il
‑
1β多肽的一部分(例如seq id no:38的氨基酸118
‑
269的一部分)。全长成熟人il
‑
1β的实例的长度为153个氨基酸。因此，人il
‑
1β的片段的长度可为152个氨基酸或更短。全长成熟小鼠il
‑
1β的实例的长度为152个氨基酸。因此，小鼠il
‑
1β的片段的长度可为151个氨基酸或更短。
[0144]
在一些实施方式中，il
‑
1β是指il
‑
1β多肽的功能片段。用于评估il
‑
1β和il
‑
1β的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定il
‑
1β片段是否是功能片段。例如，一种用于评估il
‑
1β活性的测定是细胞增殖测定。例如，可通过d10.g4.1细胞增殖的剂量依赖性刺激来测定il
‑
1β的ed
50
。在一些实施方式中，il
‑
1β的功能片段是表现出il
‑
1β标准或全长成熟il
‑
1β的至少50％活性的片段。例如，il
‑
1β的功能片段是表现出il
‑
1β标准或全长成熟il
‑
1β的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0145]
il
‑
13
[0146]
本文提供的某些方法包括使用白介素13(il
‑
13)作为刺激剂或共刺激剂。白介素13也可称为il
‑
13、alrh、bhr1、p600、il
‑
13、mgc116786、mgc116788、mgc116789、nc30或il13。人il
‑
13初始从活化t细胞的cdna文库中克隆。il
‑
13是主要由活化t(h)2细胞分泌的免疫调节细胞因子，并且其是变态反应性炎症(allergic inflammation)发病机制中的介质。il
‑
13与il
‑
4共享许多功能特性，并且它们共享共同受体亚基，即il
‑
4受体的α亚基(il
‑
4rα)。il
‑
13通过与由il
‑
4rα和两种il
‑
13结合蛋白(即il
‑
13rα1和il
‑
13rα2)构成的复合受体系统相互作用来介导其效应。il
‑
13受体复合物的连接导致了经由胰岛素受体底物(irs)
‑
1和2以及stat
‑
6途径的信号传导。与il
‑
4类似，il
‑
13是由t(h)2型辅助性t细胞响应于通过t细胞抗原受体的信号传导而产生的细胞因子，并且是在高亲和性受体与免疫球蛋白e(ige)交联时由肥大细胞和嗜碱性粒细胞产生的细胞因子。il
‑
13与气道过度敏感和粘液分泌过多、炎性肠病(inflammatory bowel disease)和寄生线虫驱逐有关。
[0147]
任何合适的il
‑
13、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，il
‑
13是人
il
‑
13。人il
‑
13核酸序列的实例在本文提供为seq id no:41(全mrna序列，提供为genbank登录号x69079)，并且人il
‑
13氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:40(genbank登录号caa48823.1或p35225.2)。人il
‑
13氨基酸序列的另一实例提供为genbank登录号np_002179.2。在一些实施方式中，il
‑
13是小鼠il
‑
13。小鼠il
‑
13核酸序列的实例在本文提供为seq id no:43(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_008355)，并且小鼠il
‑
13氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:42(genbank登录号np_032381.1)。
[0148]
il
‑
13可指前体il
‑
13多肽(包括信号肽)或成熟il
‑
13多肽(不包括信号肽)。在一些实施方式中，il
‑
13是前体il
‑
13多肽(例如，包含seq id no:40的氨基酸1
‑
132的前体人il
‑
13多肽；包含seq id no:40的氨基酸1
‑
146的前体人il
‑
13多肽；包含seq id no:42的氨基酸1
‑
131的前体小鼠il
‑
13多肽)。在一些实施方式中，il
‑
13多肽是成熟il
‑
13多肽(例如，包含seq id no:40的氨基酸21
‑
132的成熟人il
‑
13多肽；包含seq id no:42的氨基酸26
‑
131的成熟小鼠il
‑
13多肽)。
[0149]
在一些实施方式中，il
‑
13是重组il
‑
13多肽。重组il
‑
13多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即il
‑
13核酸序列)编码的il
‑
13多肽。在一些实施方式中，il
‑
13是重组人il
‑
13多肽(rhil
‑
13)。在一些实施方式中，il
‑
13是重组小鼠il
‑
13多肽(rmil
‑
13)。在一些实施方式中，il
‑
13是市售的重组人il
‑
13(例如biolegend目录号571102)。在一些实施方式中，il
‑
13是市售的重组小鼠il
‑
13(例如biolegend目录号575902)。
[0150]
il
‑
13可指未经修饰的il
‑
13多肽、修饰il
‑
13多肽、il
‑
13变体、il
‑
13突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，il
‑
13是指包含与seq id no:40或seq id no:42至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，il
‑
13可指包含与seq id no:40或seq id no:42至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0151]
在一些实施方式中，il
‑
13是指il
‑
13多肽的片段。通常，il
‑
13片段包含比全长成熟il
‑
13更少的氨基酸。例如，il
‑
13片段可包括成熟人il
‑
13多肽的一部分(例如seq id no:40的氨基酸21
‑
132的一部分)，或成熟小鼠il
‑
13多肽的一部分(例如seq id no:42的氨基酸26
‑
131的一部分)。全长成熟人il
‑
13的实例的长度为112个氨基酸。因此，人il
‑
13的片段的长度可为111个氨基酸或更短。全长成熟小鼠il
‑
13的实例的长度为106个氨基酸。因此，小鼠il
‑
13的片段的长度可为105个氨基酸或更短。
[0152]
在一些实施方式中，il
‑
13是指il
‑
13多肽的功能片段。用于评估il
‑
13和il
‑
13的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定il
‑
13片段是否是功能片段。例如，一种用于评估il
‑
13活性的测定是细胞增殖测定。例如，可通过tf
‑
1细胞增殖的剂量依赖性刺激来测定il
‑
13的ed
50
。在一些实施方式中，il
‑
13的功能片段是表现出il
‑
13标准或全长成熟il
‑
13的至少50％活性的片段。例如，il
‑
13的功能片段是表现出il
‑
13标准或全长成熟il
‑
13的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0153]
tnf
‑
α
[0154]
本文提供的某些方法包括使用肿瘤坏死因子α(tnf
‑
α)作为刺激剂或共刺激剂。肿瘤坏死因子α(tnf
‑
α)也可称为恶病质素、坏死素、巨噬细胞细胞毒因子(mcf)、分化诱导因子(dif)或tnfsf2。tnf
‑
α从巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、t
‑
细胞(主要cd4 )、nk
‑
细
胞以及多种转化细胞系中释放。可溶性同源三聚体tnf
‑
α通过tnf
‑
α的整合膜前体形式的蛋白水解从细胞中释放。结合至一些tnf
‑
α受体的tnf
‑
α诱导细胞凋亡，并且取决于细胞类型、受体表达，并且信号转导状态可以诱导其他应答。tnf
‑
α参与炎症反应。
[0155]
任何合适的tnf
‑
α、或其功能片段、或修饰形式可与本文所述的方法结合使用(例如，作为与il
‑
40的共刺激剂；作为il
‑
40暴露前的刺激剂)。在一些实施方式中，tnf
‑
α是人tnf
‑
α。人tnf
‑
α核酸序列的实例在本文提供为seq id no:45(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_000594)，并且人tnf
‑
α氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:44(genbank登录号np_000585.2)。在一些实施方式中，tnf
‑
α是小鼠tnf
‑
α。小鼠tnf
‑
α核酸序列的实例在本文提供为seq id no:47(全mrna序列，提供为genbank登录号nm_013693)，并且小鼠tnf
‑
α氨基酸序列的实例在本文提供为seq id no:46(genbank登录号np_038721.1)。
[0156]
tnf
‑
α可指前体tnf
‑
α多肽(整合膜前体形式)或成熟tnf
‑
α多肽(可溶性同源三聚体形式)。在一些实施方式中，tnf
‑
α是前体tnf
‑
α多肽(例如，包含seq id no:44的氨基酸1
‑
233的前体人tnf
‑
α多肽；包含seq id no:46的氨基酸1
‑
235的前体小鼠tnf
‑
α多肽)。在一些实施方式中，tnf
‑
α多肽是成熟tnf
‑
α多肽(例如，包含seq id no:44的氨基酸77
‑
233的成熟人tnf
‑
α多肽；包含seq id no:46的氨基酸80
‑
235的成熟小鼠tnf
‑
α多肽)。
[0157]
在一些实施方式中，tnf
‑
α是重组tnf
‑
α多肽。重组tnf
‑
α多肽通常是由已克隆到支持dna表达和信使rna翻译的载体或系统中的dna(即tnf
‑
α核酸序列)编码的tnf
‑
α多肽。在一些实施方式中，tnf
‑
α是重组人tnf
‑
α多肽(rhtnf
‑
α)。在一些实施方式中，tnf
‑
α是重组小鼠tnf
‑
α多肽(rmtnf
‑
α)。在一些实施方式中，tnf
‑
α是市售的重组人tnf
‑
α(例如biolegend目录号570102)。在一些实施方式中，tnf
‑
α是市售的重组小鼠tnf
‑
α(例如biolegend目录号575202)。
[0158]
tnf
‑
α可指未经修饰的tnf
‑
α多肽、修饰tnf
‑
α多肽、tnf
‑
α变体、tnf
‑
α突变体；或其片段或其功能片段。本文描述了未经修饰的多肽、修饰多肽、突变体、变体和片段。在一些实施方式中，tnf
‑
α是指包含与seq id no:44或seq id no:46至少约75％相同的氨基酸序列的多肽。例如，tnf
‑
α可指包含与seq id no:44或seq id no:46至少约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列的多肽。
[0159]
在一些实施方式中，tnf
‑
α是指tnf
‑
α多肽的片段。通常，tnf
‑
α片段包含比全长成熟tnf
‑
α更少的氨基酸。例如，tnf
‑
α片段可包括成熟人tnf
‑
α多肽的一部分(例如seq id no:44的氨基酸77
‑
233的一部分)，或成熟小鼠tnf
‑
α多肽的一部分(例如seq id no:46的氨基酸80
‑
235的一部分)。全长成熟人tnf
‑
α的实例的长度为157个氨基酸。因此，人tnf
‑
α的片段的长度可为156个氨基酸或更短。全长成熟小鼠tnf
‑
α的实例的长度为156个氨基酸。因此，小鼠tnf
‑
α的片段的长度可为155个氨基酸或更短。
[0160]
在一些实施方式中，tnf
‑
α是指tnf
‑
α多肽的功能片段。用于评估tnf
‑
α和tnf
‑
α的功能片段的活性的任何合适的方法均可用于确定tnf
‑
α片段是否是功能片段。例如，一种用于评估tnf
‑
α活性的测定是细胞毒性测定。例如，可以通过经放线菌素d刺激的l929细胞的剂量依赖性细胞毒性来测定tnf
‑
α的ed
50
。在一些实施方式中，tnf
‑
α的功能片段是表现出tnf
‑
α标准(例如人tnf
‑
α的第三who国际标准(3rd who international standard for human tnf
‑
α)(nibsc代码：12/154))或全长成熟tnf
‑
α的至少50％活性的片段。例如，tnf
‑
α的功能片段是表现出tnf
‑
α标准或全长成熟tnf
‑
α的至少50％、至少60％、至少70％、至少
80％、至少90％、至少95％或更高活性的片段。
[0161]
细胞
[0162]
本文所述的某些方法包括刺激细胞或细胞群(例如，用il
‑
40；用刺激剂；用il
‑
40 共刺激剂)。细胞可以从受试者和/或细胞源获得，或者可以作为已建立的细胞系获得。细胞源可包括胚胎干细胞(es)、诱导性多能干细胞(ipsc)等的群。细胞可以从胚胎或者衍生自胚胎的干细胞培养物分离。细胞可以从诱导性多能干细胞(ipsc)培养物分离。细胞可以以各种方式从受试者获得(例如，从活组织诸如活体组织切片、拔取的毛囊、体液如尿液或体腔液收获得到，或从循环中分离)。受试者可包括任何动物，包括但不限于任何哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、犬、猫、牛、马、猪、非人灵长类动物和人类。在某些实施方式中，受试者是人类。在一些实施方式中，受试者是在宫内环境中妊娠长于胚胎的动物或人，并且通常是出生后的人类或出生后的动物(例如，新生儿、新生动物、成年人或成年动物)。受试者有时是幼年动物、幼年人、成年动物或成年人。
[0163]
在一些实施方式中，细胞从受试者的样品分离。分离的细胞是指已经从其原始环境的组分中分离(例如，从宿主分离和/或从样品纯化)并因此从其原始环境通过人为干预(例如，“通过人工”)而改变的细胞。样品可包括从受试者或其部分中分离或获得的任何标本。标本的非限制性实例包括得自受试者的流体或组织，包括但不限于血液或血液制品(例如血清、血浆等)、脐带血、骨髓、绒膜绒毛、羊水、脑脊液、脊髓液、灌洗液(例如支气管肺泡、胃、腹膜、导管、耳、关节镜)、活检样品或活体组织切片、口腔拭子、腹腔穿刺样品、女性生殖道的洗液、尿液、粪便、痰、唾液、鼻粘膜、前列腺液、灌洗液、精液、淋巴液、胆汁、泪液、汗液、母乳、乳腺液、硬组织(例如肝、脾、肾、肺或卵巢)等，或它们的组合。术语血液涵盖全血、血液制品或血液的任何级分，诸如常规定义的血清、血浆、血沉棕黄层等。血浆是指由经抗凝血剂处理的血液离心所得到的全血的级分。血清是指血样凝聚后剩余的流体的似水部分。
[0164]
在一些实施方式中，细胞包括正常健康细胞(例如未病变细胞)。在一些实施方式中，细胞包括遗传改变的细胞。在一些实施方式中，细胞包括未遗传改变的细胞。在一些实施方式中，细胞包括病变细胞。病变细胞可包括来自携带致病突变的受试者的细胞。病变细胞可包括来自异常组织的细胞，诸如来自瘤变、增生、恶性肿瘤或良性肿瘤。在某些实施方式中，病变细胞包括不是肿瘤细胞的细胞。在某些实施方式中，病变细胞可包括从受试者的循环(例如循环肿瘤细胞(ctc))中分离的细胞。在某些实施方式中，病变细胞可包括从例如身体样品分离的细胞，诸如尿液、精液、大便(粪便)等。
[0165]
在一些实施方式中，细胞包括原代细胞。原代细胞通常直接从活组织诸如活体组织切片、拔取的毛囊、身体样品诸如大便样品、体液如尿液、精液或体腔液获取，或者从循环中分离。在某些情况下，原代细胞尚未传代。在某些情况下，原代细胞已经传代一次。原代细胞可以从分化的组织中分离。通常，原代细胞是新鲜分离的，例如，通过组织消化和铺板。原代细胞可以或不可冷冻，然后稍后解冻。此外，从其中分离出原代细胞的组织可以或不可在临处理前以一些其他方式冷冻或保存。通常，在细胞已传代超过一次之后，细胞不再是原代细胞。一次或多次传代并在传代后立即冷冻的细胞在解冻时也不被视为原代细胞。在某些实施方式中，细胞初始是原代细胞，而在传代后变成非原代细胞。在一些实施方式中，在从分化组织分离细胞之后且在本文所述的方法中使用之前，使细胞在细胞培养物中维持或增殖。
[0166]
在一些实施方式中，细胞包括非原代细胞，诸如来自已建立的细胞系的细胞、转化细胞、来自先前冷冻的收集物的解冻细胞等。任何合适的细胞系可以与本文所述的方法结合使用。已建立的细胞系的实例包括例如thp
‑
1(急性髓性白血病(acute myeloid leukemia))、du145(前列腺癌(prostate cancer))、h295r(肾上腺皮质癌(adrenocortical cancer))、hela(宫颈癌(cervical cancer))、kbm
‑
7(慢性髓细胞性白血病(chronic myelogenous leukemia))、lncap(前列腺癌(prostate cancer))、mcf
‑
7(乳腺癌(breast cancer))、mda
‑
mb
‑
468(乳腺癌)、pc3(前列腺癌)、saos
‑
2(骨癌(bone cancer))、sh
‑
sy5y(成神经细胞瘤(neuroblastoma)，克隆自骨髓瘤(myeloma))、t
‑
47d(乳腺癌)、u87(恶性胶质瘤(glioblastoma))、vero(绿猴属非洲绿猴(african green monkey chlorocebus)肾上皮细胞系)、mc3t3(胚胎颅盖(embryonic calvarium))、gh3(垂体瘤(pituitary tumor))、pc12(嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma))、cho(中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary))、mdck(肾上皮)、a6(肾上皮)和ab9。在一些实施方式中，细胞包括thp
‑
1细胞。
[0167]
在一些实施方式中，细胞包括免疫细胞。免疫细胞可包括例如淋巴细胞、白细胞、无颗粒白细胞、单核细胞、巨噬细胞、b细胞、树突细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、先天淋巴细胞(ilc)、巨核细胞、髓源性抑制细胞(mdsc)、自然杀伤细胞(nk细胞)、血小板、红细胞(rbc)、t细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和胸腺细胞。在一些实施方式中，细胞包括或者衍生自外周血单核细胞(pbmc)，其可包括例如t细胞、b细胞、自然杀伤细胞和单核细胞。
[0168]
在一些实施方式中，细胞包括单核细胞。单核细胞是白细胞或白血细胞的一种类型，并且可分化成巨噬细胞和髓系树突细胞。单核细胞是脊椎动物先天免疫系统的一部分，并且可影响适应性免疫的过程。在人血液中存在单核细胞的至少三种亚类，其可根据某些标记物来表征。例如，典型单核细胞的特征在于cd14细胞表面受体的高水平表达(cd14 cd16
‑
单核细胞)；非典型单核细胞示出cd14的低水平表达以及cd16受体的额外共表达(cd14 cd16 单核细胞)；并且中间单核细胞的特征在于cd14的高水平表达以及cd16的低水平表达(cd14 cd16 单核细胞)。
[0169]
在一些实施方式中，细胞包括巨噬细胞。巨噬细胞是一类吞没并消化外源蛋白和其他物质、细胞碎片、微生物和癌细胞的白血细胞。巨噬细胞可称为吞噬细胞、组织细胞、库弗氏(kupffer)细胞、肺泡巨噬细胞或小胶质细胞，并且可存在于几乎所有的身体组织中。巨噬细胞参与非特异性防御(先天免疫)，并可通过募集其他免疫细胞诸如淋巴细胞来帮助引发特异性防御机制(适应性免疫)。巨噬细胞还具有抗炎作用并且可以通过细胞因子的释放来减少免疫反应。促进炎症的巨噬细胞通常称为m1巨噬细胞，而减少炎症并促进组织修复的巨噬细胞通常称为m2巨噬细胞。巨噬细胞通过单核细胞的分化而产生。巨噬细胞可以使用流式细胞术和/或免疫组织化学染色，通过其对蛋白质诸如cd14、cd40、cd11b、cd64、f4/80、emr1、溶菌酶m、mac
‑
1/mac
‑
3和cd68的特异性表达来鉴定。功能障碍性巨噬细胞可引起疾病，诸如导致频繁感染的慢性肉芽肿病(chronic granulomatous disease)。
[0170]
在一些实施方式中，细胞包括非免疫细胞。非免疫细胞可包括例如上皮细胞(例如体腔内衬细胞)、衍生自中枢神经系统的细胞(例如神经细胞、神经元、神经胶质细胞)、基质细胞(例如结缔组织细胞、成纤维细胞、周细胞)、干细胞(例如胚胎干细胞、成体干细胞)、肌细胞(例如骨骼、心脏、平滑肌)、软骨小体(例如软骨细胞)、骨细胞(例如成骨细胞、破骨细
胞、骨细胞、骨衬细胞)、皮肤细胞(例如角质细胞、黑素细胞、默克尔细胞、朗格汉斯细胞)、内皮细胞(例如血管内衬细胞细胞)、脂肪细胞(例如白色脂肪细胞、棕色脂肪细胞)和生殖细胞(精细胞、卵细胞)。
[0171]
在一些实施方式中，细胞包括上皮细胞。上皮细胞或上皮通常是指排列在中空器官的一个或多个细胞，以及构成腺体和身体外表面的那些。上皮细胞可包括鳞状上皮细胞、柱状上皮细胞、腺瘤上皮细胞或移行上皮细胞。取决于器官和位置，上皮细胞可以单层排列或者可以多层排列，并且可包括角质细胞(ke)上皮细胞或非角质细胞(nke)上皮细胞。
[0172]
角质细胞形成了存在于解剖学部位诸如皮肤、眼表面、口腔粘膜、食道和子宫颈处的鳞状上皮。角质细胞最终分化为扁平高度角质化的无活力细胞，其通过形成保护性屏障来帮助防御环境和感染。角质细胞上皮细胞的实例包括但不限于真皮角质细胞、眼上皮细胞、角膜上皮细胞、口腔粘膜上皮细胞、食道上皮细胞和宫颈上皮细胞。
[0173]
非角质细胞(nke)上皮细胞形成身体的上皮，诸如存在于乳腺、前列腺、肝脏、呼吸道、视网膜和胃肠道中。nke细胞通常分化为例如在吸收和/或分泌中起作用的功能性活细胞。这些细胞通常不形成鳞状上皮细胞特征性的高度角质化结构。nke细胞的实例包括但不限于前列腺细胞、乳腺细胞、肝细胞、肝上皮细胞、胆管上皮细胞、胆囊细胞、胰岛细胞、胰腺β细胞、胰腺导管上皮细胞、肺上皮细胞、气道上皮细胞、鼻上皮细胞、肾细胞、膀胱细胞、尿道上皮细胞、胃上皮细胞、大肠上皮细胞、小肠上皮细胞、睾丸上皮细胞、卵巢上皮细胞、输卵管上皮细胞、甲状腺细胞、甲状旁腺细胞、肾上腺细胞、胸腺细胞、垂体细胞、腺细胞、羊膜上皮细胞、视网膜色素上皮细胞、汗腺上皮细胞、皮脂腺上皮细胞和毛囊细胞。
[0174]
细胞因子、趋化因子和生长因子产生
[0175]
本文所述的某些方法包括测量一种或多种细胞因子和/或趋化因子的产生。本文所述的某些方法包括测量一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生。
[0176]
细胞因子通常是指参与细胞信号传导的小蛋白(通常约5
–
20kda)，并且细胞因子的释放可对附近细胞的行为有影响。细胞因子通常被视为免疫调节剂，并且可能涉及自分泌信号传导、旁分泌信号传导和内分泌信号传导。细胞因子可包括趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子、单核因子、集落刺激因子和肿瘤坏死因子。细胞因子可通过免疫细胞(例如单核细胞、巨噬细胞、b淋巴细胞、t淋巴细胞和肥大细胞)、内皮细胞、成纤维细胞和基质细胞产生。
[0177]
在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种细胞因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种白介素。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种il
‑
6家族细胞因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种il
‑
1家族细胞因子。本文的方法可包括测量下表1所提供的一种或多种细胞因子的产生。表1中还提供了相应的人基因和人受体，然而，表1中所列的细胞因子、基因和受体不限于人细胞因子、基因和受体。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的结合至表1所提供的一种或多种受体的细胞因子。
[0178]
[0179][0180]
趋化因子通常指细胞因子(细胞分泌的信号蛋白)的亚家族。趋化因子可在附近反应细胞中诱导定向趋化作用，并可称为趋化性细胞因子。趋化因子较小(通常约8
‑
10kda)并且通常在保守位置具有4个半胱氨酸残基以形成其三维形状。某些趋化因子是促炎性的并且可在将免疫系统的细胞募集到感染部位的免疫应答期间被诱导，并且某些趋化因子是稳态的并且在组织维持或发育的正常过程期间参与控制细胞的迁移。趋化因子可分为亚家族(即c、cx3c、cc和cxc)，并通过与靶细胞表面上存在的g蛋白
‑
连接的跨膜受体(趋化因子受体)相互作用而发挥其生物学效应。
[0181]
在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种趋化因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种c家族趋化因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种cx3c家族趋化因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种cc家族趋化因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种cxc家族趋化因子。本文的方法可包括测量下表2所提供的一种或多种趋化因子的产生。表2中还提供了相应的人基因和人受体，然而，本文的趋化因子、基因和受体不限于人趋化因子、基因和受体。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的结合至表2所提供的一种或多种受体的趋化因子。
[0182]
[0183][0184]
生长因子通常是指能够刺激细胞生长、增殖、愈合、细胞分化等的物质。生长因子可以是蛋白质或激素(例如类固醇激素)。在某些情况下，细胞因子可以归类为生长因子。生长因子可包括例如促红细胞生成素、血小板源性生长因子(pdgf)、pdgf
‑
aa和血管内皮生长因子(vegf)。
[0185]
在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、ccl17、ccl20、cxcl1、cxcl5、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、il
‑
1ra和il
‑
6的细胞因子和/或趋化因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、ccl17、ccl20、cxcl1、cxcl5、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、il
‑
1ra、il
‑
6、促红细胞生成素、pdgf
‑
aa和vegf的细胞因子、趋化因子和/或生长因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、cxcl8、cxcl10和il
‑
1ra的细胞因子和/或趋化因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的一种或多种选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、cxcl8、cxcl10、il
‑
1ra、促红细胞生成素、pdgf
‑
aa和vegf细胞因子、趋化因子和/或生长因子。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的ccl2。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的ccl3。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的ccl4。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的ccl5。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的ccl11。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的ccl17。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的ccl20。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的cxcl1。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的cxcl5。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的cxcl8。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的cxcl9。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的cxcl10。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的cxcl11。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的il
‑
1ra。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的il
‑
6。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的促红细胞生成素。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的pdgf
‑
aa。在一些实施方式中，本文的方法包括测量细胞产生的vegf。
[0186]
细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生可以使用用于测量蛋白质分泌和/或dna表达(例如mrna)的任何合适的方法、设备或机器来测量。例如，细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生可以通过免疫测定法(例如酶联免疫吸附测定(elisa)、蛋白质免疫沉淀、免疫电泳、western印迹、蛋白质免疫染色)、光谱测定法(例如高效液相色谱法(hplc)、液相色谱
‑
质谱法(lc/ms))、流式细胞术、定量聚合酶链反应(qpcr)、凝胶电泳、光度计、荧光计、分光光度计、合适的基因芯片或微阵列分析、质谱法、色谱法、细胞荧光分析、荧光显微术、合适的荧光或数字成像方法、共聚焦激光扫描显微术、激光扫描细胞计量术、亲和层析、手动成批模式分离、电场悬浮、合适的核酸测序方法和/或核酸测序设备等以及它们的组合来测量。免疫测定法的实例包括具有具有预包被板的legend max
tm
elisa试剂盒(biolegend)、macrophage/microglia legendplex
tm
板(biolegend)和chemokine inflammatory legendplex
tm
板(biolegend)。
[0187]
用于评估il
‑
40活性的方法
[0188]
本文提供了用于评估il
‑
40活性的方法。用于评估il
‑
40活性的方法通常离体(即在生物体外)或体外(即在试管、培养皿或生物体外的其他容器中进行或发生)进行。术语离体和体外可互换使用，并且通常与在人工环境或人工系统中进行的方法结合使用。本文的方法通常包括使细胞与il
‑
40或il
‑
40和共刺激剂接触，并且此类接触通常离体/体外(例如在细胞培养物中)进行。
[0189]
在一些实施方式中，方法包括使细胞与il
‑
40接触，测量本文所述的一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生，并且根据细胞因子产生检测il
‑
40的活性。在一些实施方式中，检测il
‑
40的活性包括将测试条件下(il
‑
40刺激)的细胞因子/趋化因子/生长因子产生与对照条件下(无il
‑
40刺激)的细胞因子/趋化因子/生长因子产生进行比较。在一些实施方式中，检测il
‑
40的活性包括将测试条件下的细胞因子/趋化因子/生长因子产生与标准曲线中的细胞因子/趋化因子/生长因子产生(例如，针对多种不同量的活性il
‑
40测量的细胞因子/趋化因子/生长因子产生)进行比较。活性il
‑
40可包括il
‑
40标准(例如，未经修饰的全长成熟il
‑
40；包含增强活性的修饰的全长成熟il
‑
40)。在一些实施方式中，检测il
‑
40的活性包括将测试条件下的细胞因子/趋化因子/生长因子产生与对照所测量的细胞因子/趋化因子/生长因子产生进行比较，从而提供比较。对照可包括例如在不存在il
‑
40时测量的细胞因子/趋化因子/生长因子产生。通常，对于对照，或对于生成标准曲线，测量用于评估il
‑
40活性(测试条件)的相同细胞(例如，相同细胞类型、相同细胞来源和/或相同细胞群)的细胞因子产生。通常，对于对照，或对于生成标准曲线，细胞因子/趋化因子/生长因子产生可以是细胞因子/趋化因子/生长因子的测量水平，或者细胞因子、趋化因子、生长因子的组合中的细胞因子/趋化因子/生长因子；或细胞因子和趋化因子；或细胞因子和生长因子；或趋化因子和生长因子；或细胞因子、趋化因子和生长因子的测量水平。通常，对于测试条件和对照条件或标准曲线的条件，测量相同的细胞因子/趋化因子/生长因子的水平，或者相同的细胞因子、趋化因子，或细胞因子和趋化因子，或细胞因子和生长因子，或趋化因子和生长因子，或细胞因子、趋化因子和生长因子在相同的细胞因子/趋化因子/生长因子组合中的水平。
[0190]
在一些实施方式中，方法包括使细胞与il
‑
40和共刺激剂(例如ifn
‑
γ、gm
‑
csf、ifn
‑
α、il
‑
1β、il
‑
4、il
‑
10、il
‑
13、m
‑
csf、tgf
‑
β、tnf
‑
α)接触，测量本文所述的一种或多种
细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生，并且根据细胞因子、趋化因子和/或生长因子产生来检测il
‑
40的活性。在一些实施方式中，检测il
‑
40的活性包括将测试条件下(il
‑
40 共刺激剂)的细胞因子/趋化因子/生长因子产生与对照条件下(无il
‑
40、无共刺激剂、或无il
‑
40 共刺激剂)的细胞因子/趋化因子/生长因子产生进行比较。在一些实施方式中，检测il
‑
40的活性包括将测试条件下的细胞因子/趋化因子/生长因子产生与标准曲线中的细胞因子/趋化因子/生长因子产生(例如，针对多种不同量的活性il
‑
40或活性il
‑
40 共刺激剂测量的细胞因子/趋化因子/生长因子产生)进行比较。活性il
‑
40可包括il
‑
40标准(例如，未经修饰的全长成熟il
‑
40；包含增强活性的修饰的全长成熟il
‑
40)。在一些实施方式中，检测il
‑
40的活性包括将测试条件下的细胞因子/趋化因子/生长因子产生与对照所测量的细胞因子/趋化因子/生长因子产生进行比较，从而提供比较。对照可包括例如在不存在il
‑
40时测量的细胞因子/趋化因子/生长因子产生；在不存在共刺激剂时测量的细胞因子/趋化因子/生长因子产生；在不存在il
‑
40和共刺激剂时测量的细胞因子/趋化因子/生长因子产生。通常，对于对照，或对于生成标准曲线，测量用于评估il
‑
40活性(测试条件)的相同细胞(例如，相同细胞类型、相同细胞来源和/或相同细胞群)的细胞因子/趋化因子/生长因子产生。通常，对于对照，或对于生成标准曲线，细胞因子/趋化因子/生长因子产生可以是细胞因子/趋化因子/生长因子的测量水平，或者细胞因子、趋化因子、生长因子的组合中的细胞因子/趋化因子/生长因子，或细胞因子和趋化因子，或细胞因子和生长因子，或趋化因子和生长因子，或细胞因子、趋化因子和生长因子的测量水平。通常，对于测试条件和对照条件或标准曲线的条件，测量相同的细胞因子/趋化因子/生长因子的水平，或者相同的细胞因子、趋化因子、生长因子，或细胞因子和趋化因子，或细胞因子和生长因子，或趋化因子和生长因子，或细胞因子、趋化因子和生长因子在相同的细胞因子/趋化因子/生长因子组合中的水平。
[0191]
在一些实施方式中，与对照条件下(即，不存在il
‑
40或il
‑
40 共刺激剂)的产生相比，在测试条件下(即，在il
‑
40刺激下或在il
‑
40 共刺激剂刺激下)的一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生增加。在一些实施方式中，与对照条件下的产生相比，测试条件下的一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生增加至少约10％。例如，与对照条件下的产生相比，测试条件下的一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生可增加至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、500％、1000％或更多。在一些实施方式中，与对照条件下的产生相比，测试条件下的一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生增加至少约2倍。例如，与对照条件下的产生相比，测试条件下的一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生可增加至少约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍或更多倍。
[0192]
在一些实施方式中，方法包括使细胞或细胞群与il
‑
40接触，检测细胞的分化或群中的一个或多个细胞的分化，并且根据分化评估il
‑
40的活性。在一些实施方式中，方法包括使免疫细胞群与il
‑
40接触，检测群中的一个或多个免疫细胞的分化，并且根据分化评估il
‑
40的活性。在一些实施方式中，方法包括使单核细胞群与il
‑
40接触，检测群中的单核细胞向巨噬细胞的分化，并且根据单核细胞向巨噬细胞的分化评估il
‑
40的活性。巨噬细胞分化可指巨噬细胞分化的任何阶段，包括但不限于m1、m2a、m2b、m2c和m2d。
[0193]
单核细胞向巨噬细胞的分化可根据细胞形态学的变化来检测。例如，单核细胞向巨噬细胞的分化的特征可在于附着/粘附于培养板、具有扁平和/或伸展外观的细胞、具有触角/延伸/突起的细胞，和/或具有不规则形状的细胞(与球形或基本上球形的单核细胞相比)。在一些实施方式中，与对照条件下(即，不存在il
‑
40或il
‑
40 共刺激剂)没有或基本上没有(例如，少于1％)单核细胞向巨噬细胞分化相比，在测试条件下(即，在il
‑
40刺激下或在il
‑
40 共刺激剂刺激下)观察到群中细胞的一部分发生单核细胞向巨噬细胞分化。例如，可在测试条件下观察到群中至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的细胞发生单核细胞向巨噬细胞分化。在一些实施方式中，在il
‑
40刺激下观察到群中至少约10％的细胞发生单核细胞向巨噬细胞分化。在一些实施方式中，在il
‑
40 共刺激剂刺激下观察到群中至少约30％的细胞发生单核细胞向巨噬细胞分化。
[0194]
可根据一种或多种标记物、细胞因子、趋化因子和/或生长因子的表达和/或产生的变化来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。在一些实施方式中，根据一种或多种标记物(例如细胞表面标记物)的表达(存在或不存在、提高或降低)来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。可以使用用于检测细胞表面蛋白(例如，免疫测定法(elisa)、流式细胞术)和/或mrna表达(例如，逆转录酶定量pcr)的任何合适的方法来检测和/或定量标记物的表达。在一些实施方式中，根据一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生(存在或不存在、增加或减少)来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。可以使用用于检测分泌蛋白的任何合适的方法(例如，本文所述的检测方法)来检测和/或定量细胞因子、趋化因子和/或生长因子的产生。标记物、细胞因子、趋化因子和/或生长因子的存在、不存在、增加和减少可以通过测量与对照条件下(即，不存在il
‑
40或不存在il
‑
40 共刺激剂)的表达或产生水平相比测试条件下(即，由il
‑
40刺激或由il
‑
40 共刺激剂刺激)的表达或产生水平来测定。
[0195]
下表3中提供了可用于鉴定单核细胞向巨噬细胞分化的标记物的实例。
[0196][0197]
下表4中提供了可用于鉴定单核细胞向巨噬细胞分化的细胞因子和趋化因子的实例。
[0198][0199]
在一些实施方式中，根据一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s、cd33、cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的表达来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。在一些实施方式中，根据一种或多种选自cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的提高的表达来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。在一些实施方式中，根据一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s和cd33的标记物的降低的表达来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。在一些实施方式中，根据一种或多种选自ccl10、ccl11、ccl5、ccl8、ccl9、ccl2、ccl3、ccl4、ccl17、ccl22、ccl24、ccl1、ccr2、ccl5、cxcl10、cxcl8、cxcl9和cxcl16的趋化因子的增加的产生来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。在一些实施方式中，根据一种或多种选自tnf、il
‑
1β、il
‑
6、il
‑
12、il
‑
23、il
‑
10、tgf
‑
β、il
‑
1ra、il
‑
1、tnf
‑
α和il
‑
10的细胞因子的增加的产生来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0200]
用于诱导细胞分化的方法
[0201]
本文的某些方法包括诱导细胞分化。可以根据本文的方法离体或体外诱导细胞分化。在一些实施方式中，通过使细胞或细胞群与il
‑
40接触来诱导细胞分化。本文的某些方法包括诱导免疫细胞分化。在一些实施方式中，通过使免疫细胞或免疫细胞群与il
‑
40接触来诱导免疫细胞分化。本文的某些方法包括诱导单核细胞向巨噬细胞的分化。在一些实施方式中，通过使单核细胞或单核细胞群与il
‑
40接触来诱导单核细胞向巨噬细胞的分化。巨噬细胞分化可指巨噬细胞分化的任何阶段，包括但不限于m1、m2a、m2b、m2c和m2d。
[0202]
单核细胞向巨噬细胞的分化可根据细胞形态学的变化来检测。本文描述了用于评估细胞形态学的变化方法。可根据一种或多种标记物、细胞因子、趋化因子和/或生长因子的表达和/或产生的变化来检测单核细胞向巨噬细胞的分化。本文描述了可用于检测单核细胞向巨噬细胞的分化的标记物、细胞因子、趋化因子和/或生长因子，以及用于检测/定量其表达/产生的方法。
[0203]
试剂盒
[0204]
在某些实施方式中提供了试剂盒。试剂盒可以包括可用于以任何合适的组合执行本文所述的任何方法的本文所述的任何组分和组合物(例如，ifn
‑
γ、gm
‑
csf、ifn
‑
α、il
‑
1β、il
‑
4、il
‑
10、il
‑
13、m
‑
csf、tgf
‑
β和/或tnf
‑
α；用于测量细胞因子、趋化因子和/或生长因子产生的一种或多种组分，细胞或细胞群)。在一些实施方式中，试剂盒还包括il
‑
40(例如，用作标准/对照和/或供用户生成标准曲线)。用于测试的il
‑
40可以由试剂盒的用户/购买者提供。试剂盒还可包括可用于实施本文所述的任何方法的任何试剂、缓冲剂或其他组分。例如，试剂盒可包括在结合条件下免疫特异性结合一种或多种细胞因子、趋化因子和/或生长因子的一种或多种结合分子。
[0205]
试剂盒的组分可存在于单独的容器中，或者多种组分可存在于单个容器中。合适的容器包括单个管(例如小瓶)、细胞培养板、板的一个或多个孔(例如，6孔板、12孔板、24孔板、96孔板、384孔板等)等。
[0206]
试剂盒还可包括用于执行本文所述的一种或多种方法和/或本文所述的一种或多种组分的描述的说明书。说明书和/或描述可以是印刷形式并且可以包括在试剂盒插页中。在一些实施方式中，说明书和/或描述被提供为存在于合适的计算机可读存储介质(例如，便携式闪存驱动器、dvd、cd
‑
rom、磁盘等)上的电子存储数据文件。试剂盒还可包括提供此类说明书或描述的互联网位置的书面描述。
[0207]
实施例
[0208]
下文阐述的实施例示出了某些实施方式而不对技术作出限制。
[0209]
实施例1：il
‑
40刺激下thp
‑
1细胞的细胞因子和趋化因子产生和细胞形态学的变化
[0210]
在该实施例中，测量了在il
‑
40刺激和ifn
‑
γ il
‑
40共刺激下thp
‑
1细胞产生的某些细胞因子和趋化因子。还观察了il
‑
40刺激和ifn
‑
γ il
‑
40共刺激下thp
‑
1细胞的细胞形态学的变化。
[0211]
材料和方法
[0212]
重组蛋白
[0213]
编码c17orf99(染色体17开放阅读框99)的核酸[智人(homo sapiens)(人)ncbi参考序列：np_001156547]，也称为il
‑
40或unq464，用于产生重组人蛋白i(rhil
‑
40)。该蛋白
质在c末端含有fc部分，以用于回收和纯化目的。来自igg1蛋白的rhfc部分用作对照。重组蛋白、rhfc、rhil
‑
40、ifn
‑
γ(biolegend目录号570202)、ifn
‑
α(biolegend目录号592702)、il
‑
4(biolegend目录号592702)、il
‑
13(biolegend目录号571102)、tgf
‑
β(biolegend目录号580704)、m
‑
csf(biolegend目录号574802)、gm
‑
csf(biolegend目录号572902)、il
‑
10(biolegend目录号715602)、tnf
‑
α(biolegend目录号570102)和il
‑
1β(biolegend目录号579402)获自biolegend。
[0214]
细胞培养
[0215]
在37℃和5％co2的潮湿气氛中，在补充有10％胎牛血清(fbs)的rpmi
‑
1640培养基中培养并维持thp
‑
1细胞系。为了进行刺激实验，在补充有1.1％fbs的rpmi
‑
1640培养基中培养thp
‑
1细胞。将30,000个thp
‑
1细胞接种在96孔板中，并且在存在或不存在ifn
‑
γ(250或50ng/ml)、ifn
‑
α、il
‑
4、il
‑
13、tgf
‑
β、m
‑
csf、gm
‑
csf、il
‑
10、tnf
‑
α或il
‑
1β(50ng/ml)的情况下用相同微摩尔浓度的rhil
‑
40(biolegend,ca)或rhfc部分(biolegend,ca)刺激24、48或72小时，终体积为200μl。
[0216]
通过密度离心从全血分离健康人pbmc。在补充有1.1％fbs的rpmi
‑
1640培养基中培养细胞。将30,000个pbmc接种在96孔板中，并用相同微摩尔浓度的rhil
‑
40(biolegend,ca)或rhfc部分(对照)刺激24小时，终体积为200μl。
[0217]
细胞因子和趋化因子定量
[0218]
使用具有预包被板的legend max elisa试剂盒，或人macrophage/microglia和chemokine inflammatory legendplex板，测量细胞培养物上清液中ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、ccl17、ccl20、cxcl1、cxcl5、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、il
‑
12p70、il
‑
12p40、tnf
‑
α、il
‑
6、il
‑
4、il
‑
10、il
‑
1β、精氨酸酶、il
‑
1ra和il
‑
23的浓度。方案遵循供应商的建议。
[0219]
细胞表型
[0220]
使用keyence bz
‑
x700显微镜，以相差模式和10x镜头分辨率记录rhil
‑
40刺激后24小时的thp
‑
1细胞形态学的变化。
[0221]
数据分析
[0222]
将不同刺激的效应归一化。为此，将每种分子以pg/ml计的值除以在对照条件(未受刺激细胞)下获得的值。
[0223]
为了定量rhil
‑
40或rhil40 ifn
‑
γ在thp
‑
1单核细胞形态学中的效应，在几个视场中计数细胞总数和附着于板表面的细胞。使用以下计算确定具有形态变化的细胞的百分比：
[0224]
(附着细胞数
×
100％)/总细胞数。
[0225]
结果
[0226]
cxcl8产生
[0227]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(0.29μm、0.58μm、1.16μm、2.31μm、4.63μm、9.25μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量cxcl8的产生，结果示于图1中。当用rhil
‑
40或rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激细胞时，观察到cxcl8的剂量依赖性产生。在用rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激后观察到较高的效应。
[0228]
cxcl9产生
[0229]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(1.16μm、4.63μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量cxcl9的产生，结果示于图2中。当用rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激thp
‑
1细胞时，观察到cxcl9产生的显著增加。另外，在用rhfc ifn
‑
γ刺激的细胞中观察到cxcl9分泌的较低效应。
[0230]
ccl2产生
[0231]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(1.16μm、4.63μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量ccl2的产生，结果示于图3中。当用rhil
‑
40刺激时，观察到ccl2的剂量依赖性产生。当用rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激细胞时达到ccl2的最大检测水平，而与rhil
‑
40浓度无关。另外，在用rhfc ifn
‑
γ刺激的细胞中观察到ccl2分泌的较低效应。
[0232]
ccl3产生
[0233]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(1.16μm、4.63μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量ccl3的产生，结果示于图4中。在用rhil
‑
40刺激之后，观察到ccl3的剂量依赖性产生。当用rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激时观察到协同效应。使用对rhil
‑
40评价的两个最高浓度观察到类似的效应。在用rhfc ifn
‑
γ刺激的细胞中也观察到ccl3分泌的效应。
[0234]
ccl4产生
[0235]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(1.16μm、4.63μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量ccl4的产生，结果示于图5中。当用rhil
‑
40刺激时，观察到ccl4的剂量依赖性产生。当用rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激时观察到协同效应。使用对rhil
‑
40评价的两个最高浓度观察到类似的效应。在用rhfc ifn
‑
γ刺激的细胞中也观察到ccl4分泌的效应。
[0236]
ccl5产生
[0237]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(1.16μm、4.63μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量ccl5的产生，结果示于图6中。当用rhil
‑
40或rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激时，观察到ccl5产生的增加。在用rhfc和rhfc ifn
‑
γ刺激的细胞中也观察到ccl5分泌的效应。
[0238]
cxcl10产生
[0239]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(1.16μm、4.63μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量cxcl10的产生，结果示于图7中。当用rhil40、rhfc ifn
‑
γ或rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激thp
‑
1细胞时，观察到cxcl10产生的显著增加。单独的rhil
‑
40能够诱导cxcl10的产生。cxcl10的产生在ifn
‑
γ存在时加剧，其示出在与rhil
‑
40组合时较高产生。
[0240]
il1ra产生
[0241]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(0.58μm、2.31μm、4.63μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量il1ra的产生，结果示于图8中。当用rhil
‑
40或rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激时，观察到il1ra的剂量依赖性产生。当用rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激时观察到协同效应。在用rhfc ifn
‑
γ刺激的细胞中也观察到il1ra分泌的效应。
[0242]
il
‑
6产生
[0243]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(0.58μm、2.31μm、4.63μm或18.5μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量il
‑
6的产生，结果示于图9中。当用rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激thp
‑
1细胞时，观察到il
‑
6产生的显著增加。
[0244]
类似于用rhil40和ifn
‑
γ刺激的thp
‑
1细胞的趋化因子和生长因子产生的效应，当用rhil40和il
‑
10、gm
‑
csf、tnf
‑
α或il
‑
1β刺激细胞24小时的时候，观察到几种分子的产生加剧。
[0245]
促红细胞生成素产生
[0246]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(4.63μm)
±
50ng/ml的il
‑
4、il
‑
13、ifn
‑
α、tgf
‑
β、m
‑
csf、il
‑
10、gm
‑
csf、ifn
‑
γ、tnf
‑
α或il
‑
1β刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量促红细胞生成素的产生，结果示于图10中。当用rhil
‑
40刺激thp
‑
1细胞时观察到促红细胞生成素产生的显著增加，并且当用rhil40加上tgf
‑
β、m
‑
csf、il
‑
10、gm
‑
csf、ifn
‑
γ或il
‑
1β共刺激细胞时其产生有所加剧。
[0247]
pdgf
‑
aa产生
[0248]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil40(4.63μm)
±
50ng/ml的il
‑
4、il
‑
13、ifn
‑
α、tgf
‑
β、m
‑
csf、il
‑
10、gm
‑
csf、ifn
‑
γ、tnf
‑
α或il
‑
1β刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量pdgf
‑
aa的产生，结果示于图11中。当用rhil
‑
40刺激thp
‑
1细胞时观察到pdgf
‑
aa产生的显著增加，并且当用rhil40加上ifn
‑
γ、tgf
‑
β、il
‑
10或il
‑
1β共刺激细胞时其产生有所加剧。
[0249]
vegf产生
[0250]
在用不同浓度的重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(4.63μm)
±
250ng/ml的il
‑
4、il
‑
13、ifn
‑
α、tgf
‑
β、m
‑
csf、il
‑
10、gm
‑
csf、ifn
‑
γ、tnf
‑
α或il
‑
1β刺激thp
‑
1细胞24小时的细胞上清液中测量vegf的产生，结果示于图12中。当用rhil
‑
40刺激thp
‑
1细胞时观察到vegf产生的显著增加，并且当用rhil40加上il
‑
4、il
‑
13、m
‑
csf、gm
‑
csf、tnf
‑
α或il
‑
1β共刺激细胞时其产生有所加剧。
[0251]
各种细胞因子和趋化因子以及生长因子的产生
[0252]
thp
‑
1细胞
[0253]
将thp
‑
1细胞用重组蛋白rhfc或rhil
‑
40(4.63μm)
±
ifn
‑
γ(250ng/ml)、单独的ifn
‑
γ刺激24小时或者未经刺激(对照)。使用多重化技术(legendplex)通过elisa或流式细胞术评价上清液中23种细胞因子、趋化因子或生长因子产生的变化。通过用对照条件下的值归一化各刺激的平均值(pg/ml)来计算差异。当用rhil
‑
40刺激细胞时，观察到ccl3、cxcl8、ccl4、ccl2、cxcl10、ccl11、ccl5、il
‑
1ra、促红细胞生成素、pdgf
‑
aa和vegf的分泌增加。发现当用rhil
‑
40 ifn
‑
γ刺激细胞时ccl3、cxcl8、ccl4、ccl2、cxcl10、ccl11、ccl5、cxcl9、cxcl1、cxcl11、cxcl5、ccl20、ccl17、il
‑
1ra、il
‑
6、促红细胞生成素和pdgf
‑
aa的分泌与其余刺激相比有显著的差异。ifn
‑
γ和rhfc ifn
‑
γ对几种评价的分子也有影响。结果示于下表5中。
[0254][0255][0256]
pbmc
[0257]
分离来自健康供体样品的pbmc，并用rhfc或等摩尔浓度的il
‑
40多肽刺激24小时，结果示于图13。使用多重化技术(legendplex)通过elisa或流式细胞术评价上清液中13种趋化因子产生的变化。通过将各刺激的平均值(pg/ml)相对于对照条件下的值归一化来计
算差异。当用rhil
‑
40刺激细胞时，观察到cxcl1、cxcl5、cxcl8、ccl2、ccl3、ccl4、ccl17和ccl20的分泌显著增加。
[0258]
细胞形态学
[0259]
在存在或不存在ifn
‑
γ的情况下，观察了rhil
‑
40诱导的thp
‑
1细胞的形态学变化。将thp
‑
1细胞用ifn
‑
γ(250ng/ml)(图14，图b)、rhfc(2.31um)(图14，图c)、rhfc ifn
‑
γ(图14，图d)、rhil
‑
40(2.31um)(图14，图e)、rhil
‑
40 ifn
‑
γ(图14，图f)刺激24小时或未受刺激(图14，图a)。通过光学显微术(keyence bz
‑
x700)以相差模式(放大率10x)记录形态学变化。计算具有形态学变化的细胞的百分比，计数细胞并使用下式：(附着于板的细胞数
×
100％)/总细胞数。在图14的图b(13％)、图14的图e(10％)和图14的图f(35％)中观察到细胞形状和附着于板的差异。ifn
‑
γ和il
‑
40示出协同效应。在图14的图a、或图14的图c中没有观察到细胞形态学的变化。
[0260]
类似地，在用il
‑
10、tnf
‑
α和il
‑
1β共刺激下，在存在ifn
‑
γ的情况下观察到rhil
‑
40诱导的thp
‑
1细胞的形态学变化。用各细胞因子(50ng/ml)、rhfc(2.31um)、rhfc 各细胞因子、rhil
‑
40(2.31um)、rhil
‑
40 各细胞因子刺激thp
‑
1细胞24小时，或细胞未受刺激。通过光学显微术(keyence bz
‑
x700)以相差模式(放大率10x)记录形态学变化。巨噬细胞数/视场为4个不同视场在相同条件下的平均值。
[0261]
细胞表面分子
[0262]
用rhfc、rhil
‑
40、ifn
‑
γ、ifn
‑
γ rhfc或ifn
‑
γ rh
‑
il
‑
40刺激thp
‑
1细胞，结果示于图15中。rhil40加上共刺激细胞因子如ifn
‑
γ的刺激诱导了共刺激蛋白如hla
‑
a，b，c(图a)、cd40(图b)和cd11b(图c)的过表达。
[0263]
il
‑
40受体的鉴定
[0264]
在来自健康供体的thp
‑
1细胞和cd11b 细胞中观察到il
‑
40受体表达，结果示于图16。鉴定阳性细胞，将细胞与偶联至fc标签的rhil
‑
40多肽在4℃下一起孵育30分钟，然后与偶联至apc荧光团的第二抗体抗
‑
标签在4℃下一起孵育15分钟，之后进行流式细胞术分析。
[0265]
实施例2：氨基酸和核酸序列的实例
[0266]
[0267]
[0268]
[0269]
[0270]
[0271]
[0272]
[0273]
[0274]
[0275]
[0276]
[0277][0278]
实施例3：实施方式的实例
[0279]
下文阐述的实施例示出了某些实施方式而不对技术作出限制。
[0280]
a1.一种用于评估il
‑
40多肽的活性的方法，其包括：
[0281]
a)使细胞与包含il
‑
40多肽的第一组合物接触；
[0282]
b)测量所述细胞产生的一种或多种选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、cxcl8、cxcl10和il
‑
1ra的细胞因子和/或趋化因子，从而测量细胞因子产生；以及
[0283]
c)根据(b)中测量的所述细胞因子产生来检测所述第一组合物中的il
‑
40多肽的活性。
[0284]
a2.根据实施方式a1所述的方法，其中与未接触所述第一组合物的细胞的产生相比，所述一种或多种细胞因子和/或趋化因子的产生增加。
[0285]
a3.根据实施方式a1或a2所述的方法，其中(a)包括使所述细胞与包含共刺激剂的第二组合物接触。
[0286]
a4.根据实施方式a3所述的方法，其中所述共刺激剂包括ifn
‑
γ。
[0287]
a5.根据实施方式a3或a4所述的方法，其中(a)包括使所述细胞与所述第一组合物和所述第二组合物同时接触。
[0288]
a6.根据实施方式a3或a4所述的方法，其中(a)包括在所述细胞与所述第一组合物接触之前，使所述细胞与所述第二组合物接触。
[0289]
a7.根据实施方式a3至a6中任一项所述的方法，其中与未接触所述第一组合物和所述第二组合物的细胞的产生相比，所述一种或多种细胞因子和/或趋化因子的产生增加。
[0290]
a8.一种用于评估il
‑
40多肽的活性的方法，其包括：
[0291]
a)使细胞与包含il
‑
40多肽的第一组合物和包含共刺激剂的第二组合物接触；
[0292]
b)测量所述细胞产生的一种或多种选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、ccl17、ccl20、cxcl1、cxcl5、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、il
‑
1ra和il
‑
6的细胞因子和/或趋化因子，从而测量细胞因子产生；以及
[0293]
c)根据(b)中测量的所述细胞因子产生来检测所述第一组合物中的il
‑
40多肽的活性。
[0294]
a9.根据实施方式a8所述的方法，其中与未接触所述第一组合物和所述第二组合物的细胞的产生相比，所述一种或多种细胞因子和/或趋化因子的产生增加。
[0295]
a10.根据实施方式a8或a9所述的方法，其中所述共刺激剂包括ifn
‑
γ。
[0296]
a11.根据实施方式a8至a10中任一项所述的方法，其中(a)包括使所述细胞与所述第一组合物和所述第二组合物同时接触。
[0297]
a12.根据实施方式a8至a10中任一项所述的方法，其中(a)包括在所述细胞与所述第一组合物接触之前，使所述细胞与所述第二组合物接触。
[0298]
a13.根据实施方式a1至a12中任一项所述的方法，其中所述细胞来自受试者。
[0299]
a14.根据实施方式a1至a12中任一项所述的方法，其中所述细胞来自细胞系。
[0300]
a15.根据实施方式a1至a14中任一项所述的方法，其中所述细胞是分离的细胞。
[0301]
a16.根据实施方式a1至a15中任一项所述的方法，其中所述细胞是免疫细胞。
[0302]
a17.根据实施方式a16所述的方法，其中所述细胞是单核细胞。
[0303]
a18.根据实施方式a16所述的方法，其中所述细胞是巨噬细胞。
[0304]
a19.根据实施方式a1至a15中任一项所述的方法，其中所述细胞是非免疫细胞。
[0305]
a20.根据实施方式a19所述的方法，其中所述细胞是基质细胞或者衍生自中枢神经系统的细胞。
[0306]
a21.根据实施方式a1至a20中任一项所述的方法，其中所述方法是离体或体外进行的。
[0307]
a22.根据实施方式a1至a21中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组il
‑
40多肽。
[0308]
a23.根据实施方式a1至a21中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是人il
‑
40多肽。
[0309]
a24.根据实施方式a23所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组人il
‑
40多肽。
[0310]
a25.根据实施方式a23或a24所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列。
[0311]
a26.根据实施方式a23或a24所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的
氨基酸21
‑
265。
[0312]
a27.根据实施方式a23或a24所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列的片段。
[0313]
a28.根据实施方式a23或a24所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代。
[0314]
a29.根据实施方式a23或a24所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含含有seq id no:1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代的片段。
[0315]
a30.根据实施方式a1至a21中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是小鼠il
‑
40多肽。
[0316]
a31.根据实施方式a30所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组小鼠il
‑
40多肽。
[0317]
a32.根据实施方式a30或a31所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列。
[0318]
a33.根据实施方式a30或a31所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸19
‑
252。
[0319]
a34.根据实施方式a30或a31所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列的片段。
[0320]
a35.根据实施方式a30或a31所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代。
[0321]
a36.根据实施方式a30或a31所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含含有seq id no:3的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代的片段。
[0322]
a37.根据实施方式a1至a36中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含一种或多种化学修饰。
[0323]
a38.根据实施方式a1至a37中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含标签。
[0324]
a39.根据实施方式a1至a38中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含可检测标记。
[0325]
a40.根据实施方式a1至a39中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含融合多肽。
[0326]
b1.一种用于评估il
‑
40多肽的活性的方法，其包括：
[0327]
a)使单核细胞群与包含il
‑
40多肽的第一组合物接触；
[0328]
b)检测所述群中的单核细胞向巨噬细胞的分化；以及
[0329]
c)根据(b)中检测的所述单核细胞向巨噬细胞的分化来评估所述第一组合物中的il
‑
40多肽的活性。
[0330]
b2.根据实施方式b1所述的方法，其中根据细胞形态学的变化来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0331]
b3.根据实施方式b2所述的方法，其中所述群中至少约10％的细胞显示出细胞形态学的变化。
[0332]
b4.根据实施方式b1所述的方法，其中根据一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s、cd33、cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的表达来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0333]
b4.1根据实施方式b1所述的方法，其中根据一种或多种选自cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的提高的表达来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0334]
b4.2根据所述实施方式b1所述的方法，其中根据一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s和cd33的标记物的降低的表达来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0335]
b5.根据实施方式b1所述的方法，其中根据一种或多种选自ccl10、ccl11、ccl5、ccl8、ccl9、ccl2、ccl3、ccl4、ccl17、ccl22、ccl24、ccl1、ccr2、ccl5、cxcl10、cxcl8、cxcl9和cxcl16的趋化因子的增加的产生来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0336]
b5.1根据实施方式b1所述的方法，其中根据一种或多种选自tnf、il
‑
1β、il
‑
6、il
‑
12、il
‑
23、il
‑
10、tgf
‑
β、il
‑
1ra、il
‑
1、tnf
‑
α和il
‑
10的细胞因子的增加的产生来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0337]
b6.根据实施方式b1所述的方法，其中(a)包括使所述单核细胞群与包含共刺激剂的第二组合物接触。
[0338]
b7.根据实施方式b6所述的方法，其中所述共刺激剂包括ifn
‑
γ。
[0339]
b8.根据实施方式b6或b7所述的方法，其中(a)包括使所述单核细胞群与所述第一组合物和所述第二组合物同时接触。
[0340]
b9.根据实施方式b6或b7所述的方法，其中(a)包括在所述细胞与所述第一组合物接触之前，使所述单核细胞群与所述第二组合物接触。
[0341]
b10.根据实施方式b6至b9中任一项所述的方法，其中根据细胞形态学的变化来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0342]
b11.根据实施方式b10所述的方法，其中所述群中至少约30％的细胞显示出细胞形态学的变化。
[0343]
b12.根据实施方式b6至b9中任一项所述的方法，其中根据一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s、cd33、cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的表达来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0344]
b12.1根据实施方式b6至b9中任一项所述的方法，其中根据一种或多种选自cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的提高的表达来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0345]
b12.2根据实施方式b6至b9中任一项所述的方法，其中根据一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s和cd33的标记物的降低的表达来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0346]
b13.根据实施方式b6至b9中任一项所述的方法，其中根据一种或多种选自ccl10、ccl11、ccl5、ccl8、ccl9、ccl2、ccl3、ccl4、ccl17、ccl22、ccl24、ccl1、ccr2、ccl5、cxcl10、cxcl8、cxcl9和cxcl16的趋化因子的增加的产生来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0347]
b13.1根据实施方式b6至b9中任一项所述的方法，其中根据一种或多种选自tnf、il
‑
1β、il
‑
6、il
‑
12、il
‑
23、il
‑
10、tgf
‑
β、il
‑
1ra、il
‑
1、tnf
‑
α和il
‑
10的细胞因子的增加的产生来检测所述单核细胞向巨噬细胞的分化。
[0348]
b14.根据实施方式b1至b13.1中任一项所述的方法，其中所述单核细胞群来自受试者。
[0349]
b15.根据实施方式b1至b13.1中任一项所述的方法，其中所述单核细胞群来自细胞系。
[0350]
b16.根据实施方式b1至b15中任一项所述的方法，其中所述单核细胞群包括分离的单核细胞。
[0351]
b17.根据实施方式b1至b16中任一项所述的方法，其中所述方法是离体或体外进行的。
[0352]
b18.根据实施方式b1至b17中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组il
‑
40多肽。
[0353]
b19.根据实施方式b1至b17中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是人il
‑
40多肽。
[0354]
b20.根据实施方式b19所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组人il
‑
40多肽。
[0355]
b21.根据实施方式b19或b20所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列。
[0356]
b22.根据实施方式b19或b20所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸21
‑
265。
[0357]
b23.根据实施方式b19或b20所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列的片段。
[0358]
b24.根据实施方式b19或b20所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代。
[0359]
b25.根据实施方式b19或b20所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含含有seq id no:1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代的片段。
[0360]
b26.根据实施方式b1至b17中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是小鼠il
‑
40多肽。
[0361]
b27.根据实施方式b26所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组小鼠il
‑
40多肽。
[0362]
b28.根据实施方式b26或b27所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列。
[0363]
b29.根据实施方式b26或b27所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸19
‑
252。
[0364]
b30.根据实施方式b26或b27所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列的片段。
[0365]
b31.根据实施方式b26或b27所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代。
[0366]
b32.根据实施方式b26或b27所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含含有seq id no:3的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代的片段。
[0367]
b33.根据实施方式b1至b32中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含一种或多种化学修饰。
[0368]
b34.根据实施方式b1至b33中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含标签。
[0369]
b35.根据实施方式b1至b34中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含可检测标记。
[0370]
b36.根据实施方式b1至b35中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含融合多肽。
[0371]
c1.一种用于诱导单核细胞分化为巨噬细胞的方法，其包括使单核细胞与包含il
‑
40多肽的第一组合物接触。
[0372]
c2.根据实施方式c1所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于细胞形态学的变化。
[0373]
c3.根据实施方式c2所述的方法，其中单核细胞群中至少约10％的细胞显示出细胞形态学的变化。
[0374]
c4.根据实施方式c1所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s、cd33、cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的表达。
[0375]
c5.根据实施方式c1所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的表达提高。
[0376]
c6.根据实施方式c1所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s和cd33的标记物的表达降低。
[0377]
c7.根据实施方式c1所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自ccl10、ccl11、ccl5、ccl8、ccl9、ccl2、ccl3、ccl4、ccl17、ccl22、ccl24、ccl1、ccr2、ccl5、cxcl10、cxcl8、cxcl9和cxcl16的趋化因子的产生增加。
[0378]
c8.根据实施方式c1所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自tnf、il
‑
1β、il
‑
6、il
‑
12、il
‑
23、il
‑
10、tgf
‑
β、il
‑
1ra、il
‑
1、tnf
‑
α和il
‑
10的细胞因子的产生增加。
[0379]
c9.根据实施方式c1所述的方法，其包括使所述单核细胞与包含共刺激剂的第二组合物接触。
[0380]
c10.根据实施方式c9所述的方法，其中所述共刺激剂包括ifn
‑
γ。
[0381]
c11.根据实施方式c9或c10所述的方法，其包括使所述单核细胞与所述第一组合物和所述第二组合物同时接触。
[0382]
c12.根据实施方式c9或c10所述的方法，其包括在所述单核细胞与所述第一组合物接触之前，使所述单核细胞与所述第二组合物接触。
[0383]
c13.根据实施方式c9至c12中任一项所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于细胞形态学的变化。
[0384]
c14.根据实施方式c13所述的方法，其中单核细胞群中至少约30％的细胞显示出细胞形态学的变化。
[0385]
c15.根据实施方式c9至c12中任一项所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s、cd33、cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的表达。
[0386]
c16.根据实施方式c9至c12中任一项所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自cd44、cd81、cd49e、cd18、cd11b、cd54(icam
‑
1)、cd11c、
cd68、cd80、cd86、cd163、il
‑
1r和cd200r的标记物的表达提高。
[0387]
c17.根据实施方式c9至c12中任一项所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自cd14、ly6c、cd115、cd15s和cd33的标记物的表达降低。
[0388]
c18.根据实施方式c9至c12中任一项所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自ccl10、ccl11、ccl5、ccl8、ccl9、ccl2、ccl3、ccl4、ccl17、ccl22、ccl24、ccl1、ccr2、ccl5、cxcl10、cxcl8、cxcl9和cxcl16的趋化因子的产生增加。
[0389]
c19.根据实施方式c9至c12中任一项所述的方法，其中单核细胞向巨噬细胞的所述分化的特征在于一种或多种选自tnf、il
‑
1β、il
‑
6、il
‑
12、il
‑
23、il
‑
10、tgf
‑
β、il
‑
1ra、il
‑
1、tnf
‑
α和il
‑
10的细胞因子的产生增加。
[0390]
c20.根据实施方式c1至c19中任一项所述的方法，其中所述单核细胞来自受试者。
[0391]
c21.根据实施方式c1至c19中任一项所述的方法，其中所述单核细胞来自细胞系。
[0392]
c22.根据实施方式c1至c19中任一项所述的方法，其中所述单核细胞是分离的单核细胞。
[0393]
c23.根据实施方式c1至c22中任一项所述的方法，其中所述方法是离体或体外进行的。
[0394]
c24.根据实施方式c1至c23中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组il
‑
40多肽。
[0395]
c25.根据实施方式c1至c23中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是人il
‑
40多肽。
[0396]
c26.根据实施方式c25所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组人il
‑
40多肽。
[0397]
c27.根据实施方式c25或c26所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列或seq id no:1的氨基酸21
‑
265；或其功能片段；或其修饰多肽；或其修饰的功能片段。
[0398]
c28.根据实施方式c1至c23中任一项所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是小鼠il
‑
40多肽。
[0399]
c29.根据实施方式c28所述的方法，其中所述il
‑
40多肽是重组小鼠il
‑
40多肽。
[0400]
c30.根据实施方式c28或c29所述的方法，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列或seq id no:3的氨基酸19
‑
252；或其功能片段；或其修饰多肽；或其修饰的功能片段。
[0401]
d1.一种试剂盒，其包括：
[0402]
a)包含ifn
‑
γ多肽的第一组合物；
[0403]
b)一种或多种用于测量细胞因子和/或趋化因子产生的组分，其中所述细胞因子和/或趋化因子选自ccl2、ccl3、ccl4、ccl5、ccl11、ccl17、ccl20、cxcl1、cxcl5、cxcl8、cxcl9、cxcl10、cxcl11、il
‑
1ra和il
‑
6中的一种或多种；以及
[0404]
c)使用说明书。
[0405]
d2.根据实施方式d1所述的试剂盒，其还包括包含il
‑
40多肽的第二组合物。
[0406]
d3.根据实施方式d2所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽是重组il
‑
40多肽。
[0407]
d4.根据实施方式d2所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽是人il
‑
40多肽。
[0408]
d5.根据实施方式d4所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽是重组人il
‑
40多肽。
[0409]
d6.根据实施方式d4或d5所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列。
[0410]
d7.根据实施方式d4或d5所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸21
‑
265。
[0411]
d8.根据实施方式d4或d5所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列的片段。
[0412]
d9.根据实施方式d4或d5所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代。
[0413]
d10.根据实施方式d4或d5所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含含有seq id no:1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代的片段。
[0414]
d11.根据实施方式d2所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽是小鼠il
‑
40多肽。
[0415]
d12.根据实施方式d10所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽是重组小鼠il
‑
40多肽。
[0416]
d13.根据实施方式d11或d12所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列。
[0417]
d14.根据实施方式d11或d12所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸19
‑
252。
[0418]
d15.根据实施方式d11或d12所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列的片段。
[0419]
d16.根据实施方式d11或d12所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含seq id no:3的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代。
[0420]
d17.根据实施方式d11或d12所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含含有seq id no:3的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代的片段。
[0421]
d18.根据实施方式d2至d17中任一项所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含一种或多种化学修饰。
[0422]
d19.根据实施方式d2至d18中任一项所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含标签。
[0423]
d20.根据实施方式d2至d19中任一项所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含可检测标记。
[0424]
d21.根据实施方式d2至d20中任一项所述的试剂盒，其中所述il
‑
40多肽包含融合多肽。
[0425]
d22.根据实施方式d1至d21中任一项所述的试剂盒，其中所述一种或多种用于测量细胞因子和/或趋化因子产生的组分中的每一种包含在结合条件下免疫特异性结合细胞因子和/或趋化因子之一的结合分子。
[0426]
d23.根据实施方式d1至d22中任一项所述的试剂盒，其还包括细胞或细胞群。
[0427]
***
[0428]
本文引用的每个专利、专利申请、出版物和文献的全部内容据此以引用方式并入本文。上述专利、专利申请、出版物和文献的引用既不承认任何前述内容都是相关的现有技术，也不构成对这些出版物或文献的内容或日期的任何承认。它们的引用并不指示检索的
相关公开内容。关于文献的日期或内容的所有陈述均基于可用信息，而并不是对其准确性或正确性的承认。
[0429]
在不偏离本技术的基本方面的情况下，可以对前述内容进行修改。尽管已经参考一个或多个具体实施方式相当详细地描述了本技术，但是本领域的普通技术人员将认识到，可以对本技术中具体公开的实施方式进行改变，然而这些修改和改进在本技术的范围和精神之内。
[0430]
本文例示性描述的技术可适当地在不存在本文未具体公开的任何要素的情况下来实践。因此，例如，在本文的每种情况下，术语“包含”、“基本上由
……
组成”和“由
……
组成”中的任一者可以被其它两个术语中的任一者替代。所采用的术语和表达被作为描述而非限制的术语使用，并且使用的此类术语和表达不排除所示出和描述的特征的任何等同物或其部分，并且在所要求保护的技术的范围之内各种修改均是可能的。术语“一种”或“一个”可指其修饰的一个或多个要素(例如，“一种试剂”可意指一种或多种试剂)，除非上下文清楚地描述了一个要素或多于一个要素。如本文所用，术语“约”是指在基础参数的10％内的值(即，加或减10％)，并且在一系列值的开头使用的术语“约”修饰所述值中的每一者(即，“约1、2和3”是指约1、约2和约3)。例如，“约100克”的重量可以包括90克与110克之间的重量。此外，当本文描述值的列表(例如，约50％、60％、70％、80％、85％或86％)时，该列表包括其所有中间值和分数值(例如，54％、85.4％)。因此，应当理解，尽管本发明技术已经由代表性实施方式和可选的特征具体地公开，但是本领域技术人员可采用本文所公开的概念的修改和变化，并且认为此类修改和变化在该技术的范围之内。
[0431]
在随后的权利要求中阐述了本技术的某些实施方式。