一种马的胚胎移植方法与流程

1.本发明涉及胚胎移植技术领域，具体涉及一种马的胚胎移植方法。


背景技术：

2.胚胎移植，又称受精卵移植，是指将雌性动物体内的的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状况相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。传统的移植胚胎，一般通过手术移植，但是移植成功率不高，而且有创伤，无法满足马胚胎移植的需求。
3.综上所述，研发一种马的胚胎移植方法，仍是胚胎移植技术领域中急需解决的关键问题。


技术实现要素：

4.针对现有技术所存在的上述缺点，本发明的目的在于提供一种马的胚胎移植方法，本发明选择优良的供体母马以及国产受体母马，经过供体和受体的冲洗、胚胎采集、对胚胎清洗、胚胎检测、胚胎装管以及将胚胎移入受体母马过程，将供体母马的胚胎移植给受体母马，采用的非手术胚胎移植方法，胚胎移植平均成功率能够达到92%，有效的提高了胚胎移植成功率，同时，能够有效的提高每匹供体母马的生崽产量。
5.为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种马的胚胎移植方法，包括以下步骤：s1、供体和受体的选择：选择高育种价值的供体母马和健壮的受体母马，在供体母马发情期内、卵泡直径≥40mm时静脉注射绒促性素，注射量为1000
‑
3000单位/匹；s2、器材准备：将与胚胎接触的试剂及耗材置于37℃无菌环境中预热6
‑
8小时，并对实验室、无菌操作台、实验器械进行酒精擦拭及紫外线灭菌；s3、供体和受体的冲洗：对麻醉后的供体母马和受体母马进行冲洗，并保持供体母马和受体母马的外阴及周围清洁、无菌、无水；s4、胚胎采集：从供体母马体内采集胚胎；s5、对胚胎清洗：寻找胚胎，并采用洗胚管对胚胎进行清洗；s6、胚胎检测：将洗好的胚胎置于50倍以上的体视显微镜下，按照检测标准进行胚胎质量鉴定和分级，选择优秀的胚胎备用；s7、胚胎装管：将优秀的胚胎移入胚胎移植管中；s8、将胚胎移入受体母马：采用移胚枪将胚胎移入受体母马。
6.本发明进一步设置为：在所述步骤s1中，选择高育种价值的供体母马是指选择生产性能高、遗传性稳定、无遗传和传染性疾病的母马为供体母马。
7.本发明进一步设置为：在所述步骤s3中，供体和受体的冲洗，包括以下步骤：s301、将已禁水禁食10
‑
24小时的供体母马和受体母马，用2ml2%的普鲁卡因麻醉；s302、用2%的氯铵溶液对供体母马和受体母马外阴及周围。
8.本发明进一步设置为：在所述步骤s4中，从供体母马体内采集胚胎，包括以下步骤：s401、技术人员戴无菌手套，将采胚管送入母马子宫中；s402、向采胚管的气囊充气，使采胚管卡在子宫颈口内；s403、采胚管放置好后，向母马子宫内灌注采胚液并轻柔子宫；s404、导出采胚液对子宫冲洗，重复对子宫冲洗5
‑
7次，将采胚液用采胚皿收集，完成冲洗。
9.本发明进一步设置为：在所述步骤s5中，寻找胚胎，并采用洗胚管对胚胎进行清洗，包括以下步骤：s501、将采胚皿静止10
‑
20min，待胚胎降至采胚皿的底部，移去上层液，然后将采胚皿置于10
‑
20倍体视显微镜下寻找胚胎；s502、用洗胚管将胚胎从采胚皿中移入洗胚皿的第一个皿孔中，更换新的洗胚管，并将胚胎从采胚皿的第一个皿孔移入第二个皿孔，如此反复进行7次清洗。
10.本发明进一步设置为：在所述步骤s501中，寻找胚胎时按从上到下、从左到右的s形路线寻找胚胎，并根据采胚皿底部的横纵线，记录每一枚胚胎所处的坐标方位。
11.本发明进一步设置为：在所述步骤s7中， 按液体
‑
气体
‑
液体
‑
胚胎
‑
液体
‑
气体
‑
液体的顺序将优秀的胚胎移入胚胎移植管中。
12.本发明进一步设置为：在所述步骤s8中，采用移胚枪将胚胎移入受体母马，包括以下步骤：s801、将装好胚胎的移胚管，放入移胚枪内；s802、操作人员戴无菌手套，将移胚枪送入受体母马子宫中；s803、缓慢的将移植枪伸入子宫角大弯处，轻柔的插入内芯并推出胚胎，取出移植枪即完成胚胎移植。
13.有益效果采用本发明提供的技术方案，与已知的公有技术相比，具有如下有益效果：本发明选择优良的供体母马以及国产受体母马，通过非手术胚胎移植方式，将供体母马的胚胎移植给受体母马，具体经过供体和受体的冲洗、胚胎采集、对胚胎清洗、胚胎检测、胚胎装管以及将胚胎移入受体母马过程，胚胎移植平均成功率能够达到92%，有效的提高了胚胎移植成功率，同时，能够有效的提高每匹供体母马的生崽产量，具有更广阔的市场前景，更适宜推广。
附图说明
14.图1为一种马的胚胎移植方法的流程图。
具体实施方式
15.为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
16.下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
17.实施例1请参照图1所示，一种马的胚胎移植方法，包括以下步骤：步骤一、供体和受体的选择：选择高育种价值的供体母马和健壮的受体母马，在供体母马发情期内、卵泡直径≥40mm时静脉注射绒促性素，注射量为1000单位/匹。
18.选择高育种价值的供体母马是指选择生产性能高、遗传性稳定、无遗传和传染性疾病的母马为供体母马。
19.步骤二、器材准备：将与胚胎接触的试剂及耗材置于37℃无菌环境中预热6小时，并对实验室、无菌操作台、实验器械进行酒精擦拭及紫外线灭菌。
20.步骤三、供体和受体的冲洗：对麻醉后的供体母马和受体母马进行冲洗，并保持供体母马和受体母马的外阴及周围清洁、无菌、无水。
21.供体和受体的冲洗，包括以下步骤：301）、将已禁水禁食10小时的供体母马和受体母马，用2ml2%的普鲁卡因麻醉。
22.302）、用2%的氯铵溶液对供体母马和受体母马外阴及周围。
23.步骤四、胚胎采集：从供体母马体内采集胚胎。
24.从供体母马体内采集胚胎，包括以下步骤：401）、技术人员戴无菌手套，将采胚管送入母马子宫中。
25.402）、向采胚管的气囊充气，使采胚管卡在子宫颈口内。
26.403）、采胚管放置好后，向母马子宫内灌注采胚液并轻柔子宫。
27.404）、导出采胚液对子宫冲洗，重复对子宫冲洗5次，将采胚液用采胚皿收集，完成冲洗。
28.步骤五、对胚胎清洗：寻找胚胎，并采用洗胚管对胚胎进行清洗。
29.寻找胚胎，并采用洗胚管对胚胎进行清洗，包括以下步骤：501）、将采胚皿静止10min，待胚胎降至采胚皿的底部，移去上层液，然后将采胚皿置于10倍体视显微镜下寻找胚胎。
30.502）、用洗胚管将胚胎从采胚皿中移入洗胚皿的第一个皿孔中，更换新的洗胚管，并将胚胎从采胚皿的第一个皿孔移入第二个皿孔，如此反复进行7次清洗。
31.寻找胚胎时按从上到下、从左到右的s形路线寻找胚胎，并根据采胚皿底部的横纵线，记录每一枚胚胎所处的坐标方位。
32.步骤六、胚胎检测：将洗好的胚胎置于50倍以上的体视显微镜下，按照检测标准进行胚胎质量鉴定和分级，选择优秀的胚胎备用，检测标准见表1。
33.表1：胚胎质量鉴定及分级
级别标准a级优秀。胚胎细胞团呈均匀对称的球形，单个卵裂球的大小、颜色、密度一致，不规则的细胞相对较少，至少有85%的细胞物质是完整的，具有活性的胚胎细胞团。透明带光滑、完整。b级良好。胚胎细胞团的大小和形状以及单个细胞的颜色和密度存在一定的不规则。至少有50%的细胞结构是完好的、具活性的胚胎细胞团。c级质差。胚胎细胞团的大小和形状以及单个细胞的颜色和密度存在严重的不规则。至少有25%的细胞结构是完好的、具活性的胚胎细胞团。d级死亡或退化。退化的胚胎、卵母细胞或单细胞胚胎，没有活力。
步骤七、胚胎装管：将优秀的胚胎移入胚胎移植管中。
34.按液体
‑
气体
‑
液体
‑
胚胎
‑
液体
‑
气体
‑
液体的顺序将优秀的胚胎移入胚胎移植管中。
35.步骤八、将胚胎移入受体母马：采用移胚枪将胚胎移入受体母马。
36.采用移胚枪将胚胎移入受体母马，包括以下步骤：801）、将装好胚胎的移胚管，放入移胚枪内。
37.802）、操作人员戴无菌手套，将移胚枪送入受体母马子宫中。
38.803）、缓慢的将移植枪伸入子宫角大弯处，轻柔的插入内芯并推出胚胎，取出移植枪即完成胚胎移植。
39.实施例2本实施例所提供的一种马的胚胎移植方法大致和实施例1相同，其主要区别在于：在步骤一中，绒促性素的注射量为2000单位/匹；在步骤二中，37℃无菌环境中预热7小时；在步骤三中，供体母马和受体母马的禁水禁食时间为17小时；在步骤四中，对子宫冲洗6次；在步骤五中，将采胚皿静止15min，采胚皿置于15倍体视显微镜下寻找胚胎。
40.实施例3本实施例所提供的一种马的胚胎移植方法大致和实施例1相同，其主要区别在于：在步骤一中，绒促性素的注射量为3000单位/匹；在步骤二中，37℃无菌环境中预热8小时；在步骤三中，供体母马和受体母马的禁水禁食时间为24小时；在步骤四中，对子宫冲洗7次；在步骤五中，将采胚皿静止20min，采胚皿置于20倍体视显微镜下寻找胚胎。
41.胚胎移植测试选择种马：冰岛公马 2匹；选择供体母马：冰岛母马5匹；选择受体母马：国产母马100匹；对受体母马进行分组，每组20匹，采用本发明中实施例1的方法对各组分别进行胚胎移植测试，测试结果见表2。
42.表2：胚胎移植测试数据统计表 一组二组三组四组五组移植成功数1820191817成功率900���%通过分析上述表中的相关数据可知，通过本发明所提供的一种马的胚胎移植方法马的胚胎移植平均成功率为92%，具有良好移植成功率，能够有效的提高马的繁殖能力。由此表明本发明提供的一种马的胚胎移植方法具有更广阔的市场前景，更适宜推广。
43.本发明选择优良的供体母马以及国产受体母马，通过非手术胚胎移植方式，将供体母马的胚胎移植给受体母马，具体经过供体和受体的冲洗、胚胎采集、对胚胎清洗、胚胎检测、胚胎装管以及将胚胎移入受体母马过程，胚胎移植平均成功率能够达到92%，有效的
提高了胚胎移植成功率，同时，能够有效的提高每匹供体母马的生崽产量，具有更广阔的市场前景，更适宜推广。
44.以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不会使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。