一种多酚植物油的制备方法及其应用与流程

1.本发明涉及一种多酚提取物的制备方法及其应用，特别是涉及一种多酚植物油的制备方法及其应用。


背景技术：

2.多酚为酚羟基类化合物的总称，中草药的有效成分如槲皮素、芦丁、儿茶素及白藜芦醇等均属于多酚。多酚类物质具有广泛的药理活性，如抗氧化、抗菌、抗炎、降脂、降糖及对心血管系统的保护作用等。很多常见植物油中也含有丰富的多酚，如橄榄油、石榴籽油、亚麻籽油中多酚含量分别为22.78、188及170
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220μg/g(lu,et al.,journal of oleo science,2020,69(2):161
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166；申元福,等.食品研究与开发,2017,38(24):118
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123；李媛媛,等.中国油脂,2015,40(1):55
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58.)。大量研究报道了橄榄油、石榴籽油以及亚麻籽油等的抗炎、抗氧化、抗癌及降脂等保健作用，橄榄油作为地中海饮食的重要组成部分，其对人体健康的有益功效已为人们所熟知，而植物油产生药理活性的物质基础主要来源于其多酚类组分。植物油在饮食中常被限量使用，如何在低剂量下使其功效得到发挥，是功能性食品研究的一大热点。
3.增加植物油中多酚含量是改善植物油治疗与保健作用的有效方法。可将从植物中提取的多酚直接添加至植物油中，以提高油的多酚浓度。植物中多酚提取的常用溶剂为水及不同浓度的乙醇溶液，具有提取效率高、操作简便及有效成分含量高等优点，但经水或乙醇溶液提取而得的多酚通常极性较大，添加至植物油时不易溶解，使油出现浑浊，影响油的品质和外观。也可选择无水乙醇或甲醇为溶剂提取植物中的多酚，再将多酚加入植物油中。多酚在醇中有较高的溶解度，醇提物可获得高浓度多酚，然而，醇提多酚的极性仍然较大，将其加入植物油时同样会存在溶解不佳的问题，而无法获得澄清的、富含多酚的植物油。为增加多酚与植物油的相容性，可考虑将提取溶剂改为脂溶性较大的有机溶剂，如正己烷、石油醚及乙酸乙酯等，但多酚为极性化合物，选择脂溶性溶剂提取，收率低，同时伴有其他油脂类杂质，食用后有增加体内胆固醇和甘油三酯水平的风险。
4.因此，有必要提供一种能完全溶于植物油中的多酚提取物的制备方法。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种能完全溶于植物油中的多酚植物油的制备方法，该方法制备的多酚植物油既可单独使用，也可加入植物油中，用以增加植物油中多酚含量，还可作为多酚化合物的溶解剂，溶解多酚化合物后再加入植物油中，从而获得澄清的、富含多酚的植物油。
6.本发明的另一目的在于提供该多酚植物油在制备药物、食品和化妆品中的应用。
7.本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
8.取植物油，按比例加入无水乙醇或甲醇，在25～60℃进行提取，静置使分层，取醇层，重复提取至少1次，合并醇提液，除去溶剂，即得多酚植物油。
9.进一步地，所述无水乙醇或甲醇按植物油与无水乙醇或甲醇的体积比为1:3～30加入。
10.进一步地，所述提取采用超声提取、回流提取、微波提取或索氏提取。
11.进一步地，所述提取至少1次，每次时间为5～120min。
12.进一步地，所述植物油为石榴籽油、橄榄油、火麻仁油、山茶油、亚麻籽油中的一种或一种以上的组合。
13.本发明制备得到的多酚植物油可直接加入至植物油中，得到澄清的、富含多酚的植物油。
14.本发明制备得到的多酚植物油可作为多酚化合物的溶解剂，溶解多酚化合物后再加入植物油中，获得澄清的、富含多酚的植物油。
15.本发明制备得到的多酚植物油作为抗氧化剂、抑菌剂及抗炎物质应用于药物及化妆品的制备。
16.本发明制备得到的多酚植物油作为抗氧化剂、抑菌剂应用于食品的制备。
17.本发明选择多酚含量丰富的植物油，如石榴籽油、火麻油、山茶油及橄榄油等，用无水乙醇或甲醇进行提取，在研究过程中还考察了以1
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丙醇和异丙醇为溶剂，发现其能与植物油混溶，不适合作为提取溶剂。甲醇和无水乙醇与植物油不相溶，提取后经静置或离心处理，能看到醇相与油相的明显分离，便于操作。经多次提取后，合并醇层，除去溶剂，即得多酚植物油。采用此方法制得的多酚植物油其多酚含量较原植物油提高8倍以上，同时抗氧化、抗菌及抗炎活性等均显著提高。同时由于多酚植物油是从植物油中提取而得，为植物油的组成部分，将其添加至植物油中，可顺利溶入植物油，无溶解度问题，并且由于显著增加了植物油中的多酚含量而增强了植物油的保健作用。
18.此外，为增强植物油抗氧化能力及降脂降压等保健功效，常常需要在植物油中添加多酚化合物，如羟基酪醇、芦丁、儿茶酚等。若将多酚化合物直接加入植物油中，由于化合物脂溶性差，在植物油中溶解度较低，添加量十分有限，同时在放置过程中易析出。采用先将多酚化合物加入多酚植物油中，由于多酚植物油与多酚化合物均为醇溶性物质，根据相似相溶的原理，多酚化合物在醇溶油中的溶解度提高，添加量也相应增大；待化合物溶解完全后，再将醇溶油加回至植物油中，可有效解决多酚化合物直接添加于植物油中溶解度不佳和易析出的问题。因此，多酚植物油在食品、医药保健及化妆品领域的应用前景广阔。
附图说明
19.图1为实施例1中石榴多酚油和石榴籽油对dpph自由基的清除率。
20.图2为实施例1中石榴多酚油和石榴籽油对abts自由基的清除率。
21.图3为实施例1中石榴多酚油和石榴籽油对大肠杆菌抑菌圈的比较。
22.图4为实施例1中石榴多酚油和石榴籽油对枯草芽孢杆菌抑菌圈的比较。
23.图5为实施例1中石榴多酚油和石榴籽油对酵母菌抑菌圈的比较。
24.图6为实施例1中石榴多酚油、石榴籽油和橄榄油对小鼠足趾肿胀的抑制作用比较。
具体实施方式
25.下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
26.实施例1
27.本实施例提供的多酚石榴籽油的制备方法包括如下步骤：
28.(1)取石榴籽油，按石榴籽油:无水乙醇＝1:20的体积比加入无水乙醇，在50℃超声提取30min；
29.(2)提取结束后，离心、静置使分层，取醇层，重复提取2次，合并醇层；
30.(3)在50℃旋转蒸发除去无水乙醇，即得澄清的多酚石榴籽油。
31.采用folin酚法，以没食子酸为对照品，测定石榴籽油(pomegranate seed oil，pso)和多酚石榴籽油(polyphenol enriched pomegranate seed oil，p
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pso)中总多酚的含量。
32.分别取0.5ml石榴籽油及多酚石榴籽油，分别依次加入稀释10倍后的folin酚溶液3.5ml，混匀，放置5min，再加入7.5％na2co3溶液2.5ml，混匀，反应30min，定容至10ml。取反应液，以10000r/min的转速离心10min，上清液经0.45μm的微孔滤膜过滤一次，得供试品溶液，测定其在760nm波长处的吸光度值a，由标准曲线计算多酚含量。石榴籽油及多酚石榴籽油的多酚含量分别为138及1471μg/ml，多酚油中多酚含量为原油的10倍。
33.通过测定原油和多酚油对dpph及abts自由基的清除率考察二种油的抗氧化活性。分别取不同体积的石榴籽油及多酚石榴籽油，加无水乙醇稀释至800μl，再加入200μl异丙醇，混匀。加入dpph溶液2ml，于暗处放置20min，在517nm处测定吸光度值a。空白对照组以无水乙醇替代油，同法操作，平行测定两份，考察二种油对dpph自由基清除率。
34.分别取不同体积的石榴籽油及多酚石榴籽油，用无水乙醇稀释至800μl，再加入200μl异丙醇，混匀。加abts自由基溶液2ml，于暗处放置6min，在734nm处测a值。空白对照组以无水乙醇替代油，同法操作，平行测定两份。考察二种油对abts

自由基清除率。
35.结果见图1，2，由图可知，多酚石榴籽油清除自由基的能力显著高于石榴籽油(p<0.05)。
36.采用滤纸片法考察多酚石榴籽油和石榴籽油对革兰氏阴性菌大肠杆菌、革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌及真菌酵母菌的抗菌作用。在超净工作台上操作。用酒精灯灼烧接种环，待其冷却后，挑取细菌于250ml液体培养液中，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌使用牛肉膏蛋白胨培养液，酵母菌使用酵母浸出粉胨葡萄糖培养液。将含细菌的培养液置恒温水浴震荡器中，于37℃、140rpm下摇床培养24h，用0.8％琼脂培养基将细菌分别稀释成一定密度的菌液，分别取2ml，涂布到固体培养皿中。以dmso为溶剂分别稀释多酚石榴籽油和石榴籽油得到80％、40％、20％系列梯度样液，空白对照为dmso，大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的阳性对照为3mg/ml头孢噻肟钠，酵母菌的阳性对照为10mg/ml水杨酸。用移液枪吸取10μl样品溶液，加至纸片上，将纸片用灭菌的镊子放入培养皿中，纸片距离边缘大于1.5cm，间距大于2.5cm，一份样品使用3张纸片重复测定。于37℃恒温培养箱中培养24h，培养结束后，将平板取出，用游标卡尺精密测量抑菌圈的大小。
37.结果见图3～5，由图可知，两种油对革兰氏阴性菌的抑制作用强于革兰氏阳性菌及真菌，其中，多酚石榴籽油对大肠杆菌的抑菌圈普遍大于石榴籽油，在80％高浓度条件下抑制作用显著强于石榴籽油(p<0.05)；高中低浓度的多酚油对枯草芽孢杆菌的抑菌圈明显
大于石榴籽油(p<0.05或p<0.01)，多酚石榴籽油对真菌酵母菌的抑制作用也普遍高于石榴籽油，但无显著性差异(p>0.05)。表明多酚石榴籽油较石榴籽油有更强的抗菌活性。
38.取体重20～22g的昆明种雄性小鼠55只，随机分为11组，每组5只，包括石榴籽油高中低剂量组、多酚石榴籽油高中低剂量组及橄榄油(olive oil)高中低剂量组，高中低口服灌胃剂量分别为20、10及5ml/kg，阳性对照为布洛芬(ibuprofen)混悬液，口服剂量为100mg/kg，阴性对照为生理盐水(saline)，口服灌胃剂量10ml/kg。给药前小鼠禁食4h，可自由饮水，随后为小鼠灌胃各组药物。给药后1h在小鼠足趾部皮下注射浓度为1％的卡拉胶50μl，4h后于相同部位剪下小鼠左右足趾，测定重量，计算肿胀度。结果见图5，由图可知，与生理盐水组相比，阳性对照布洛芬、石榴籽油、多酚石榴籽油及橄榄油均对卡拉胶引起的小鼠足趾肿胀有明显的抑制作用(p<0.05)，在低剂量时，石榴籽油与多酚石榴籽油的抗炎效果显著强于橄榄油(p<0.05)；中剂量多酚石榴籽油的抗炎作用与橄榄油相当，二者均明显高于石榴籽油(p<0.05)；在高剂量时，多酚石榴籽油抑制足趾肿胀的作用显著高于橄榄油与石榴籽油(p<0.01)。此实验证实了多酚石榴籽油较普通植物油有更强的抗炎活性。
39.实施例2
40.本实施例提供的富含多酚的橄榄油的制备方法包括如下步骤：
41.(1)取橄榄油，按橄榄油:甲醇＝1:3的体积比加入甲醇，在30℃超声提取3次，每次2h；
42.(2)提取结束后，静置使分层，取醇层，重复提取2次，合并醇提液；
43.(3)采用旋转薄膜蒸发法除去甲醇，得到澄清的橄榄多酚油；
44.(4)将橄榄多酚油加入原油中，以提高原油的多酚含量，从而得到富含多酚的橄榄油。
45.实施例3
46.本实施例提供的多酚火麻油的制备方法包括如下步骤：
47.(1)取火麻油，按火麻油:无水乙醇＝1:30的质量比加入无水乙醇，在50℃回流提取15min；
48.(2)提取结束后，静置使分层，取醇层，重复提取2次，合并醇层；
49.(3)减压蒸馏除去无水乙醇，即得富含多酚的火麻油。
50.实施例4
51.本实施例提供的多酚植物油的制备方法包括如下步骤：
52.(1)取山茶油及橄榄油，按1:1体积比混合后，加入混合油20倍体积的甲醇，在50℃索氏提取60min；
53.(2)提取结束后，静置使分层，取醇层，加无水乙醇重复提取2次，每次20min，合并醇层；
54.(3)减压蒸馏除去甲醇，即得富含多酚的植物油。
55.实施例5
56.本实施例提供的多酚亚麻籽油的制备方法包括如下步骤：
57.(1)取亚麻籽油，加入亚麻籽油10倍体积的无水乙醇，在室温下微波提取5min；
58.(2)提取结束后，静置使分层，取醇层，继续加入10倍体积的无水乙醇重复提取2次，每次20min，合并醇提液；
59.(3)减压蒸馏除去甲醇，即得富含多酚的亚麻籽油。
60.实施例6
61.(1)取橄榄油，加入橄榄油20倍体积的无水乙醇，在40℃微波提取3次，第1次20min，第2、3次每次30min；
62.(2)提取结束后，静置使分层，取醇层，重复提取1次，得醇提液；
63.(3)采用旋转薄膜蒸发法除去无水乙醇，得到澄清的橄榄多酚油；
64.(4)在橄榄多酚油中加入羟基酪醇，超声或加热使溶解，使其浓度为2mg/ml；
65.(5)按体积比1:1将加有羟基酪醇的橄榄多酚油与橄榄原油混合均匀，得到富含多酚的橄榄油。