一种检测环丙沙星的ELISA试剂盒的制作方法

一种检测环丙沙星的elisa试剂盒
技术领域
1.本实用新型属于环丙沙星检测技术领域，尤其是涉及一种检测环丙沙星的elisa试剂盒。


背景技术：

2.环丙沙星(ciprofloxacin，cip)，又称环丙氟哌酸，属于第三代喹诺酮类抗菌合成药物，其抗菌谱广、抗菌活性强，是现在临床应用的氟喹诺酮类药物中抗菌活性最强的药物之一，已广泛应用于人类临床和畜牧养殖业。由于这类药易诱发细菌耐药性，长期应用会出现蓄积中毒，从而可引起关节软骨病、光敏反应、肝肾毒性及导致淋巴细胞染色体变异的基因毒性，以及可引起人肌腱破裂。它作为一种人畜共用药，药物残留通过食物链对人体健康危害更大，不利于该类药物对人类疾病的治疗。因此加强对该药在动物性食品中的残留检测和监督就显得非常必要。欧盟、美国。日本、中国等均对动物源性食品中环丙沙星最高残留量都作了禁用或限用的规定。
3.目前检测动物源性食品中环丙沙星残留的主要方法有微生物法、荧光法、高效液相色谱法(hplc)、液质联用法(lc
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ms)、毛细管电泳法和酶联免疫吸附法(elisa)等。常用的环丙沙星检测方法是色谱检测法和免疫学检测法。色谱检测法灵敏、准确，需要昂贵的仪器和专门的工作人员，而且样品处理较繁琐，其应用受到一定的限制，尤其是在基层大规模筛选和现场检测中更加突出。免疫学检测法灵敏、特异、快速、简便，克服了以上的不足，适合大规模筛选。
4.但是现有的检测试剂盒结构比较单一，只是将所有的物件进行罗列存放，但是实际在使用时，不便于取放，且在转移过程中具有相互碰撞而损坏的风险。


技术实现要素：

5.本实用新型要解决的问题是提供一种检测环丙沙星的elisa试剂盒，结构简单，设计合理，分区进行设计；其中，盒体设置检测区和存放区，检测区内设置有酶标板定位组件便于在检测时平置酶标板和将酶标板进行摇晃；存放区内设置第一存放抽屉和第二存放抽屉且通过第一缓冲存放板和第二缓冲存放板进行存放各种试剂，便于取放，同时可以防止相互之间碰撞而导致损坏。
6.为解决上述技术问题，本实用新型采用的技术方案是：一种检测环丙沙星的elisa试剂盒，包括盒体和盒盖，所述盒盖铰设在盒体上；所述盒体由上到下分为检测区和存放区两部分，所述检测区内设置有两组酶标板定位组件，所述存放区中间设置有隔板从而将存放区分为两部分，且分别滑动连接有第一存放抽屉和第二存放抽屉；
7.所述第一存放抽屉内卡设固定有第一缓冲存放板，所述第一缓冲存放板内卡设固定有6瓶环丙沙星标准溶液和2瓶环丙沙星抗体；
8.所述第二存放抽屉内卡设固定有第二缓冲存放板，所述第二缓冲存放板内卡设固定有1瓶酶标二抗、1瓶终止液、2瓶底物显色液、1瓶洗涤液和1 瓶复溶液，所述第二缓冲存
放板内还卡设有酶标板和说明书。
9.在本技术方案中，检测区用于检测时使用，在进行检测时，可将酶标板放置于定位组件内进行平置；设置第一存放抽屉和第二存放抽屉用于存放各种溶液；设置第一缓冲存放板和第二缓冲存放板来卡设溶液瓶，便于存放且方便取放，各瓶溶液分开存放可有效避免相互碰撞而损坏。
10.进一步地，所述存放区的底部侧壁上开设有滑动槽道，所述第一存放抽屉和第二存放抽屉的底部侧壁上设置有与滑动槽道相匹配的滑动接块，所述滑动接块卡设在滑动槽道内且沿滑动槽道滑动连接。
11.进一步地，所述第一缓冲存放板内开设有用于回收废弃物的回收槽、8 个定位孔和8个标签凸台，8个所述定位孔分别用于存放环丙沙星标准溶液和环丙沙星抗体，每个所述标签凸台分别设置在每个相应的定位孔的旁侧，以便于贴设相应标签而将每个定位孔内的液体进行区分。
12.进一步地，所述第一存放抽屉内还设置有第一密封盖，所述第一密封盖盖设于第一缓冲存放板的上侧，所述第一密封盖的底部设置有密封板，所述密封板插设在回收槽内而将回收槽进行密封。
13.进一步地，所述第二缓冲存放板内开设有用于卡设酶标板的卡槽、用于放置说明书的存放槽、6个固定孔和6个第二标签凸台，6个所述固定孔分别用于固定存放底物显色液、终止液、洗涤液、酶标二抗和复溶液；每个所述第二标签凸台分别设置在相应的固定孔的旁侧，以便于贴设相应标签而将每个固定孔内的液体进行区分。
14.进一步地，所述第二存放抽屉内还设置有第二密封盖，所述第二密封盖，所述第二密封盖盖设于第二缓冲存放板的上侧且与第二缓冲存放板相抵持。
15.进一步地，所述检测区中间位置固定设置有间隔板从而将检测区分为两部分，每一部分内设置有一组酶标板定位组件，所述酶标板定位组件包括两个相对设置的定位板和若干个缓冲弹簧，所述定位板的底壁与检测区的底壁滑动连接，两个所述定位板通过缓冲弹簧分别与检测区的内壁和间隔板的侧壁进行固定；
16.所述定位板上呈台阶式设计开设有多个台阶，两个定位板的台阶相对设置，从而不同高度的台阶之间形成一个相应的固定卡槽。
17.进一步地，所述盒盖的顶壁上设置有提手，所述盒盖的底壁上设置有凸块，所述凸块与检测区的开口相适配。
18.进一步地，所述盒盖的侧壁上设置有两个连接板，两个所述连接板上分别对应匹配有第二连接板，两个所述第二连接板分别固定安装在第一存放抽屉的侧壁和第二存放抽屉的侧壁上，所述连接板和第二连接板之间开设有使用锁件或固定销进行固定的连接孔以便于将两者进行固定。
19.进一步地，所述酶标板的孔内包被有环丙沙星偶联抗原；6瓶所述环丙沙星标准溶液的浓度分别为0μg/l、2μg/l、6μg/l、18μg/l、48μg/l和144μg/l；所述的酶标二抗为用辣根过氧化物酶标记的环丙沙星抗抗体；所述底物显色液包括a液和b液，其中a液为过氧化脲，b液为四甲基联苯胺；所述终止液为2mol/l的硫酸。
20.本实用新型具有的优点和积极效果是：
21.本实用新型的试剂盒结构简单，设计合理，分区进行设计；其中，盒体设置检测区
和存放区，检测区内设置有酶标板定位组件便于在检测时平置酶标板和将酶标板进行摇晃；存放区内设置第一存放抽屉和第二存放抽屉且通过第一缓冲存放板和第二缓冲存放板进行存放各种试剂，便于取放，同时可以防止相互之间碰撞而导致损坏。
附图说明
22.图1是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒的拆分图；
23.图2是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒的整体结构示意图；
24.图3是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒中盒体的剖视图；
25.图4是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒中盒盖的结构示意图；
26.图5是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒中第一存放抽屉的结构示意图；
27.图6是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒中第一缓冲存放板的结构示意图；
28.图7是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒中第一密封盖的结构示意图；
29.图8是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒中第二存放抽屉的结构示意图；
30.图9是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒中第二缓冲存放板的结构示意图；
31.图10是本实用新型一种检测环丙沙星的elisa试剂盒中第二密封盖的结构示意图；
32.图中：1
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盒体，2
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盒盖，21
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提手，22
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凸块，23
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连接板，24
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第二连接板， 25
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连接孔，3
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检测区，31
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将隔板，4
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存放区，41
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滑动槽道，42
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滑动接块， 5
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酶标板定位组件，51
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定位板，511
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台阶，512
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固定卡槽，52
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缓冲弹簧，6
‑ꢀ
隔板，7
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第一存放抽屉，8
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第二存放抽屉，9
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第一缓冲存放板，91
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回收槽， 92
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定位孔，93
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标签凸台，10
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第二缓冲存放板，101
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卡槽，102
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存放槽，103
‑ꢀ
固定孔，104
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第二标签凸台，11
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第一密封盖，111
‑
密封板，12
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第二密封盖。
具体实施方式
33.下面结合附图对本实用新型的具体实施方式作详细说明。
34.实施例：
35.参照图1和图2，一种检测环丙沙星的elisa试剂盒，包括盒体1和盒盖2，盒盖2铰设在盒体1上；盒体1由上到下分为检测区3和存放区4两部分，检测区3内设置有两组酶标板定位组件5，存放区4中间设置有隔板 6从而将存放区4分为两部分，且分别滑动连接有第一存放抽屉7和第二存放抽屉8；其中，检测区3用于检测时使用，在进行检测时，可将酶标板放置于定位组件5内进行平置；设置第一存放抽屉7和第二存放抽屉8用于存放各种溶液。
36.其中，第一存放抽屉7内卡设固定有第一缓冲存放板9，第一缓冲存放板9内卡设固定有6瓶环丙沙星标准溶液和2瓶环丙沙星抗体；
37.第二存放抽屉8内卡设固定有第二缓冲存放板10，第二缓冲存放板10 内卡设固定有1瓶酶标二抗、1瓶终止液、2瓶底物显色液、1瓶洗涤液和1 瓶复溶液，第二缓冲存放板10
内还卡设有酶标板和说明书。设置第一缓冲存放板9和第二缓冲存放板10来卡设溶液瓶，便于存放且方便取放，各瓶溶液分开存放可有效避免相互碰撞而损坏。
38.参照图1、图3和图5，在本实施例中，存放区4的底部侧壁上开设有滑动槽道41，第一存放抽屉7和第二存放抽屉8的底部侧壁上设置有与滑动槽道41相匹配的滑动接块42，滑动接块42卡设在滑动槽道41内且沿滑动槽道41滑动连接。其中，设置滑动槽道41与滑动接块42进行匹配，便于将第一存放抽屉7和第二存放抽屉8与盒体1的内壁进行限位，从而便于在将第一存放抽屉7和第二存放抽屉8拉出时保持稳定。
39.参照图6，在本实施例中，第一缓冲存放板9内开设有用于回收废弃物的回收槽91、8个定位孔92和8个标签凸台93，8个定位孔92分别用于存放环丙沙星标准溶液和环丙沙星抗体，每个标签凸台93分别设置在每个相应的定位孔92的旁侧，以便于贴设相应标签而将每个定位孔92内的液体进行区分。第一缓冲存放板9内设置回收槽91用于盛放使用过后的试剂瓶和酶标板；设置定位孔92用于存放固定溶液瓶，从而将溶液瓶的位置进行固定，防止倾倒而洒出；设置标签凸台93用于贴设标签，从而将不同的溶液瓶区分出来，以便于使用时取放，减少寻找的时间。
40.其中，参照图5和图7，第一存放抽屉7内还设置有第一密封盖11，第一密封盖11盖设于第一缓冲存放板9的上侧，第一密封盖11的底部设置有密封板111，密封板111插设在回收槽91内而将回收槽91进行密封。设置第一密封盖11将第一缓冲存放板9进行定位，其中密封板111将回收槽91 的开口封死，可以防止回收槽91内的杂物与旁边的试剂瓶接触，从而保证卫生。
41.在本实施例中，参照图9，第二缓冲存放板10内开设有用于卡设酶标板的卡槽101、用于放置说明书的存放槽102、6个固定孔103和6个第二标签凸台104，6个固定孔103分别用于固定存放底物显色液、终止液、洗涤液、酶标二抗和复溶液；每个第二标签凸台104分别设置在相应的固定孔103的旁侧，以便于贴设相应标签而将每个固定孔103内的液体进行区分。第二缓冲存放板10内设置卡槽101用于卡设酶标板，设置存放槽102用于放置说明书，设置固定孔103则用于卡设固定溶剂瓶，防止溶剂瓶之间碰撞保证安全存放；设置第二标签凸台104用于贴设标签，从而将不同的溶液瓶区分出来，便于使用时取放，减少寻找的时间。
42.其中，参照图8和图10，第二存放抽屉8内还设置有第二密封盖12，第二密封盖12，第二密封盖12盖设于第二缓冲存放板10的上侧且与第二缓冲存放板10相抵持。第二密封盖12设置在第二缓冲存放板10的上侧，用于将第二存放抽屉8的上部空间进行封合，从而保证内部存放的物品正常有序的存放，防止漏出。
43.在本实施例中，参照图3，检测区3中间位置固定设置有间隔板31从而将检测区3分为两部分，每一部分内设置有一组酶标板定位组件5，酶标板定位组件5包括两个相对设置的定位板51和若干个缓冲弹簧52，定位板51 的底壁与检测区3的底壁滑动连接，两个定位板51通过缓冲弹簧52分别与检测区3的内壁和间隔板31的侧壁进行固定；设置酶标板定位组件5用于将酶标板进行夹持防止，以便于检测时使用；其中，在使用时，将酶标板放置在定位板51之间进行夹持，在酶标板将两个定位板51分开，从而缓冲弹簧52产生相应的弹力而使得两个定位板51将酶标板固定夹持；并且当需要轻微震荡时，可以稍微移动定位板51，在缓冲弹簧52的带动下即可带动整个酶标板左右晃动而实现震荡。
44.定位板51上呈台阶式设计开设有多个台阶511，两个定位板51的台阶511相对设
置，从而不同高度的台阶511之间形成一个相应的固定卡槽512。定位板51设置多个台阶511从而两个定位板51之间形成多个不同宽度的固定卡槽512，可以适应于各种宽度的酶标板，其适用范围广。
45.在本实施例中，参照图4，盒盖2的顶壁上设置有提手21，盒盖的底壁上设置有凸块22，凸块22与检测区3的开口相适配。设置提手21便于将整个试剂盒进行移动。
46.在本实施例中，参照图2，盒盖2的侧壁上设置有两个连接板23，两个连接板23上分别对应匹配有第二连接板24，两个第二连接板24分别固定安装在第一存放抽屉7的侧壁和第二存放抽屉8的侧壁上，连接板23和第二连接板24之间开设有使用锁件或固定销进行固定的连接孔25以便于将两者进行固定。设置连接板23和第二连接板24便于将盒盖2和第一存放抽屉7 以及第二存放抽屉8进行固定，从而防止三者开启，在进行固定时，可以使用锁或固定销配合螺母将第一连接板23和第二连接板24锁死即可，在使用时再打开即可。
47.其中，在本实施例中，酶标板的孔内包被有环丙沙星偶联抗原；6瓶环丙沙星标准溶液的浓度分别为0μg/l、2μg/l、6μg/l、18μg/l、48μg/l和 144μg/l；的酶标二抗为用辣根过氧化物酶标记的环丙沙星抗抗体；底物显色液包括a液和b液，其中a液为过氧化脲，b液为四甲基联苯胺；终止液为2mol/l的硫酸；洗涤液为ph值7.2，含有0.01％吐温
‑
20、3g/l叠氮化钠防腐剂、0.01mol/l的磷酸盐缓冲液，其中的百分比为重量体积百分比；复溶液为ph值7.0、0.01mol/l的磷酸盐缓冲液。其中，本实施例中的环丙沙星包被抗原和环丙沙星单克隆抗体均来自武汉阳达生物科技有限公司；酶标二抗是将环丙沙星抗抗体与辣根过氧化物酶(hrp)进行偶联得到，其中环丙沙星抗抗体是以山羊为免疫动物，以环丙沙星单克隆抗体为免疫原对无病原体山羊进行免疫得到。
48.本实用新型的检测环丙沙星的elisa试剂盒在进行制备时：
49.1、酶标板的制备：用包被缓冲液(ph9.6碳酸盐)将包被原稀释成 15μg/ml，每孔加入100μl，4℃避光孵育16h，倾去孔中液体，用洗涤液洗涤1次，静置30s，拍干，然后在每孔中加入200μl封闭液，37℃避光孵育 2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空密封保存。
50.2、组装试剂盒：
①
将第一缓冲存放板9和第二缓冲存放板10分别放置于第一存放抽屉7和第二存放抽屉8内；
②
将6瓶环丙沙星标准溶液和环丙沙星抗体分别置于第一缓冲存放板9的定位孔92内，并将相应的标签贴设在每个定位孔92对应的标签凸台93上；
③
将酶标板卡设在第二缓冲存放板 10的卡槽101内，将说明书放置于存放槽102内，将底物显色液、终止液、洗涤液、酶标二抗以及复溶液分别卡设在固定孔103中，并将相应的标签贴设在每个固定孔103对应的第二标签凸台104上；
④
之后将第一密封盖11 和第二密封盖12分别盖设在第一存放抽屉7和第二存放抽屉8内，并将第一存放抽屉7和第二存放抽屉8与盒体1进行组合；
⑤
将盒盖2扣合，并使用锁具贯穿两个连接孔25从而将连接板23和第二连接板24进行锁合，即将盒盖2与盒体1进行固定且此时第一存放抽屉7、第二存放抽屉8与盒体 1进行固定不再移动。
51.本实用新型的检测环丙沙星的elisa试剂盒检测步骤如下：
52.1、将酶标板放置到合适固定卡槽512内，并保持水平；加标准溶液/样本50μl到酶标板对应的微孔中，再加入抗体和酶标二抗混合液(10:1)50μl/ 孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。
53.2、小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液250μl/孔，充分洗涤4
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5次，每次间
隔10s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头轻轻戳破)。
54.3、加入底物液a液50μl/孔，再加底物液b液50μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中显色15min。
55.4、加入终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪检测波长450nm，参比波长620nm，测定每孔od值。
56.以上对本实用新型的具体实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本实用新型的较佳实施例，不能被认为用于限定本实用新型的实施范围。凡依本实用新型申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本实用新型的专利涵盖范围之内。