一种包载局部镇痛药物的近红外响应脂质体温敏凝胶的制作方法

一种包载局部镇痛药物的近红外响应脂质体温敏凝胶
1.技术领域
2.本发明提供一种包载局部镇痛药物的近红外响应脂质体温敏凝胶，本发明还公开了其制备方法，属于药物制剂技术领域。


背景技术：

3.疼痛是术后常见的主诉。根据疼痛持续的时间和性质，可将疼痛分为急性和慢性。目前常用缓解疼痛的方法主要有两类：分别是药物和非药物治疗。非药物治疗大多是和其他治疗方式联合使用，也可单独用于一些症状较轻的疼痛或不适。药物治疗中常见的镇痛药物有阿片类镇痛药、非甾体类抗炎药和其他辅助药物。其中，阿片类药物是目前发现止痛最强的药物，主要应用于急性疼痛，中重度疼痛，但阿片类药物主要来自于罂粟中的生物碱及其衍生物，因此很容易上瘾并产生依赖，大剂量的阿片类药物还会产生呼吸抑制。非甾体类抗炎药主要用于炎症、发热和轻中度疼痛治疗，但容易引起胃肠道不良反应。此外，这些药物的特异性缺乏会引起全身性副作用的高发。
4.临床常用的局麻药按化学性质可以分为两种，分别是酰胺类和酯类。酰胺类包括罗哌卡因（rop）、布比卡因、利多卡因、依替卡因、丙胺卡因和甲哌卡因；酯类包括普鲁卡因、可卡因和丁卡因。rop，一种长效酰胺局麻药，是一种纯s对映体，具有较高的pka和相对较低的脂质溶解度。
5.传统的局麻药制剂均为注射剂，但作为单一疗法仍有其局限性，例如相对较短的半衰期。这些药物提供的感觉和运动神经阻滞，可在12
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24 h内消失，而此时正是术后疼痛的高峰。为了从源头上抑制局部疼痛，在周围神经及其附近注射局部麻醉剂已成为治疗术后疼痛有用的辅助手段。


技术实现要素：

6.本发明提供的一种包载局部镇痛药物的近红外响应脂质体温敏凝胶及制备方法，通过水凝胶将包载局部镇痛药物的近红外响应脂质体包裹制备成缓释植入剂，能够延长作用时间，在近红外（nir）作用下，按需释放药物。
7.本发明提到的一种包载局部镇痛药物的近红外响应脂质体温敏凝胶的制备方法，操作简便，适合工业化生产。
8.本发明所述的包载局部镇痛药物的近红外响应脂质体温敏凝胶的制备方法，包括以下步骤：1）将合成中性磷脂和egg pc、胆固醇、镇痛药物、光敏剂按摩尔比为（4.5
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36）：2：2：（0.01
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0.09）的混合比例在1 ml乙醇中溶解，磁力搅拌条件下20
‑
120 s内均匀注入到10 ml 0.2 m ph为7.4的磷酸盐缓冲液（pbs）中，微粒自发形成，室温搅拌挥发溶剂30 min，获得脂质体溶液；
ml pbs中，室温搅拌挥发溶剂30 min，获得脂质体溶液；将浓度(w/v)为2%壳聚糖（cs）0.1m盐酸溶液、浓度(w/v)为55%β
‑
甘油磷酸钠（β
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gp）水溶液按体积比为3：1的混合比例在冰浴条件下混合，搅拌30 min后，获得凝胶基质；将浓度(w/v)为40%的脂质体溶液加入凝胶基质，均匀搅拌30min，即得。
15.实施例2称取dopc、egg pc、胆固醇、rop和pdpc(obu)8在1 ml极性有机溶剂中以质量比2:7:2:2:0.09超声分散作为油相，将油相溶液在磁力搅拌下40 s内均匀注入作为水相的10 ml pbs中，室温搅拌挥发溶剂30 min，获得脂质体溶液；将浓度(w/v)为2%壳聚糖（cs）0.1m盐酸溶液、浓度(w/v)为55%β
‑
甘油磷酸钠（β
‑
gp）水溶液按体积比为5：1的混合比例在冰浴条件下混合，搅拌30 min后，获得凝胶基质；将浓度(w/v)为40%的脂质体溶液加入凝胶基质，均匀搅拌30min，即得。
16.实施例3称取dlpc、egg pc、胆固醇、rop和pdpc(obu)8在1 ml极性有机溶剂中以质量比2:7:2:2:0.09超声分散作为油相，将油相溶液在磁力搅拌下40 s内均匀注入作为水相的10 ml pbs中，室温搅拌挥发溶剂30 min，获得脂质体溶液；将浓度(w/v)为2%壳聚糖（cs）0.1m盐酸溶液、浓度(w/v)为55%β
‑
甘油磷酸钠（β
‑
gp）水溶液按体积比为7：1的混合比例在冰浴条件下混合，搅拌30 min后，获得凝胶基质；将浓度(w/v)为40%的脂质体溶液加入凝胶基质，均匀搅拌30min，即得。
17.实施例4称取mspc、egg pc、胆固醇、rop和pdpc(obu)8在1 ml极性有机溶剂中以质量比2:7:2:2:0.09超声分散作为油相，将油相溶液在磁力搅拌下40 s内均匀注入作为水相的10 ml pbs中，室温搅拌挥发溶剂30 min，获得脂质体溶液；将浓度(w/v)为2%壳聚糖（cs）0.1m盐酸溶液、浓度(w/v)为55%β
‑
甘油磷酸钠（β
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gp）水溶液按体积比为9：1的混合比例在冰浴条件下混合，搅拌30 min后，获得凝胶基质；将浓度(w/v)为40%的脂质体溶液加入凝胶基质，均匀搅拌30min，即得。
18.实施例5称取dlpc、dspc、egg pc、胆固醇、rop和pdpc(obu)8在1 ml极性有机溶剂中以质量比5:2:2:2:2:0.09超声分散作为油相，将油相溶液在磁力搅拌下40 s内均匀注入作为水相的10 ml pbs中，室温搅拌挥发溶剂30 min，获得脂质体溶液；将浓度(w/v)为2%壳聚糖（cs）0.1m盐酸溶液、浓度(w/v)为55%β
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甘油磷酸钠（β
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gp）水溶液按体积比为5：1的混合比例在冰浴条件下混合，搅拌30 min后，获得凝胶基质；将浓度(w/v)为40%的脂质体溶液加入凝胶基质，均匀搅拌30min，即得。
19.本发明效果实验例1脂质体光触发能力实验取实施例1
‑
4含有不同磷脂的脂质体溶液5 ml装入25kda mwco透析袋中，于20 ml含0.02%吐温的0.2 m ph 7.4 的pbs中透析，将透析装置置于37
°
c磁力搅拌器，转速为500 rpm。其中阴性对照组放置于黑暗环境，实验组在一定nir下照射40 min，随后，提取各组上清液，采用hplc测定上清液中释放rop的浓度，并绘制曲线。
20.结果显示，在脂质体nir响应实验中，当磷脂种类为dlpc时nir照射40 min后rop的
释放量最大。含有双烯丙基氢的不饱和磷脂dlpc具有最强的光触发效率，而不饱和磷脂理化性质不稳定，因此在脂质体制剂中增加了带负电的饱和磷脂dspc作为实施例5的制备处方以增强脂质体稳定性。
21.dlpc与光敏剂以共价键结合结构示意图见说明书附图1；脂质体在nir照射后rop释放情况见说明书附图2。
22.本发明效果实验例2脂质体性质表征实验将制备好的脂质体取出2 ml，稀释后加入到样品池中，在zs90粒度电位分析仪中平衡60 s，检测温度为25
°
c，每个样品3次平行。将制备好的脂质体取出1 ml，与1 ml和甲醇混匀破乳，然后加入2 ml流动相混匀过滤，用hplc测定rop的总含量（dtot）。将制备好的脂质体取出1 ml，放入超滤离心管中离心(4000 rpm, 20 min)，分离出游离药物（dfree），用hplc定量。通过以下公式计算脂质体中rop的包封率：ee% = 考察实施例1
‑
5制备脂质体的出粒径、分散性指数（pdi）及包封率情况，结果如下表：从结果可以看出，在粒径和包封率检测实验中，实施例5中dlpc与dspc即不饱和脂质与饱和脂质联合使用制备的脂质体与传统单一种类脂质制备的脂质体相比，粒径大小更适宜且包封率更高。
23.实施例5中的脂质体粒径电位分布图见说明书附图3。
24.本发明效果实验例3脂质体外观实验取适量实施例5制备的脂质体溶液，超纯水稀释后，滴加到硅片上，室温下干燥后，喷金于扫描电镜（sem）样品台上进行测试，考察脂质体的表面形态。
25.结果表明，近红外响应的rop脂质体形态圆润，分散均匀，未有粘连，大小在150
‑
250nm之间。
26.脂质体的扫描电镜图见说明书附图4。
27.本发明效果实验例4脂质体光响应释放行为实验
1）持续照射取实施例5中5 ml的脂质体溶液装入25kda mwco透析袋中，于20 ml的含有0.02%吐温的ph 7.4 pbs中透析，将透析装置置于37
°
c磁力搅拌器上搅拌(500 rpm)。其中阴性对照组放置于黑暗环境，实验组在50 mw和150 mw 730 nm激光下各照射40 min，每10 min取样2 ml，然后补加2 ml pbs，hplc测定各时间点rop的浓度；2）间隔照射取实施例5中5 ml的脂质体溶液装入25kda mwco透析袋中，于20 ml的含有0.02%吐温的ph 7.4 pbs中透析，将透析装置置于37
°
c磁力搅拌器上搅拌(500 rpm)。分别在0 min、10 min、20 min、30 min的时间点，50 mw和150mw 730 nm 激光各照射10 min，各组在预定的时间间隔，取样2 ml后补加2 ml pbs，hplc测定各时间点rop的浓度。
28.结果证明了近红外响应rop脂质体保证了光响应释放行为，本发明中间隔照射与连续照射释放趋势得到一致的结论，即rop的累计释放量随激光强度增加而增加；且关闭近红外激光后释放速度减缓。
29.脂质体光响应释放行为曲线见说明书附图5。
30.本发明效果实验例5脂质体温敏凝胶胶凝实验取实施例1
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4制备的脂质体温敏凝胶置于37℃水浴中，考察成胶时间、ph和凝胶状态情况，结果如下表：（成胶时间：混合溶液自35
°
开始到倾斜试管90
°
后30 s液面不移动的时间）从结果中可以看出，实施例2从成胶时间、ph和凝胶状态都呈最优。
31.本发明效果实验例6脂质体温敏凝胶外观实验将实施例7制备的脂质体温敏凝胶用pbs溶液稀释 100倍后，滴入具有一层支持膜的铜网上，溶液在铜网上保持5
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10 min后，用滤纸吸干，再向铜网上滴加一滴醋酸铀溶液进行复染，30 s后滤纸吸干，室温干燥后采用扫描电子显微镜观测脂质体温敏凝胶的表面形态。
32.sem结果显示，nir脂质体温敏凝胶呈网络结构，脂质体包埋在凝胶的结构中，且凝胶基质对脂质体的粒径和形态无显著影响。
33.脂质体温敏凝胶的扫描电镜图见说明书附图6。
34.本发明效果实验例7nir响应脂质体和nir响应脂质体温敏凝胶的体外释放实验取rop浓度为1mg/ml的样品各5 ml，样品分别为lip、lip nir、lip/gel、lip/gel和rop@gel，放入活化的透析袋内（mwco，25 kda），两端用夹子封口，37
°
c下孵育形成凝胶样品，待脂质体凝胶完全固化后，再放入30 ml pbs（0.2 m, ph 7.4）缓冲液中（37
°
c），然后放
置在37
°
c摇床内，以100 rpm的速度恒温振荡。放入后立即进行nir照射(50 mw、10 min)，在固定的时间点取出2 ml释放介质，同时补加同温度的等量的释放介质。将取出的释放介质用0.22
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m的聚醚砜滤膜过滤，放入4
°
c冰箱备用。hplc法测定各时间点的透析液中的rop浓度，计算rop的累计释放百分率。
35.结果数据表明，释放行为均表现为先突释再缓释，且在nir作用下响应提高释放速率。本发明的近红外响应脂质体温敏凝胶兼具了两种剂型的优势：脂质体有利于减缓药物从凝胶内的释放速率；同时，凝胶又增加脂质体的原位性并延缓包封在脂质体中的药物释放，在一定程度上避免突释。与游离药物相比，罗哌卡因脂质体温敏凝胶显示了最佳的缓释效果。
36.脂质体和脂质体温敏凝胶的体外释药曲线图见说明书附图7。