一种源于四棱豆的抗菌消炎槟榔伴侣分子胶囊液及其制备方法与流程

1.本发明属于药品技术领域，尤其是一种源于四棱豆的抗菌消炎槟榔伴侣分子胶囊液及其制备方法。


背景技术：

2.四棱豆[psophocarpus tetragonolobus(l.)dc.]，又叫翼豆、果阿豆、尼拉豆、皇帝豆、香龙豆，是豆科一年生或多年生攀缘草本植物，原产地在非洲及东南亚热带潮湿地区，传入我国已超过100年历史，主要分布于滇、桂、琼、粤等南方各省，多作鲜食蔬菜，被人们称为绿色金子蔬菜。四棱豆地上部开花结荚、地下部长薯块，其种子、块根、嫩芽、嫩叶和花皆可食用，营养丰富，具备一定的药用价值。四棱豆的研究和推广应用，对扩大粮、油、蔬菜生产基地与开发加工一些新型食品和药品具有重要意义。
[0003]
四棱豆叶片中富含的β
‑
胡萝卜素，有防癌、抗癌、防老抗衰、保护心血管、减弱辐射等功效，可作外敷剂治疗眼疾。豆荚可以清热解毒。块根性凉、味微甜涩，是我国傣族的一种传统药物，有治疗咽痛、齿痛、口腔溃疡、泌尿系统炎症的功效。四棱豆的茎叶干物质含铁170mg/100g，四棱豆被誉为“补血蔬菜”，对预防缺铁性疾病。四棱豆叶甲醇提取物对铜绿假单胞菌的抑制作用较强，其最低抑菌浓度值为2.55mg/ml，半数致死浓度为1.30mg/ml。四棱豆里的类黄酮物质还表现出抗病毒、抗不良微生物和抗炎活性，对抑制血小板聚集和抵抗溃疡也有一定作用。四棱豆全身是宝，具有较好的药用价值，其加工和开发应用前景广阔。
[0004]
而槟榔是重要的中药材，在南方一些少数民族将其果实作为一种咀嚼嗜好品，具有“杀虫，破积，降气行滞，行水化湿”的功效。但其为世界卫生组织国际癌症研究机构致癌物清单1类致癌物，“十个口腔癌，九个嚼槟榔”已经是一个客观的事实。咀嚼槟榔不仅与口腔疾病紧密联系，如：口腔黏膜下纤维性变、白斑、口腔癌，还与食道癌、肝肾疾病等有关。而口腔疾病大多数是由细菌生物膜感染引起的。抗生素是治疗细菌感染的常用药物，目前用于治疗细菌感染的抗生素和化学抑菌剂会干扰口腔和消化道的正常细菌菌群，另外，唾液的持续冲洗作用很难使药物在口腔保持有效浓度，因此提高抑菌剂在生物膜内的生物利用度和保持力，迫切需要开发新的输送体系。聚合物药物载体可以保护治疗分子的稳定性和完整性，将药物运送到所需的靶点且进行药物的释放，减少对其他器官的副作用，口腔细菌感染治疗方法的开发仍具有挑战性。
[0005]
通过检索，发现如下一篇与本发明专利申请相关的专利公开文献：
[0006]
一种用于治疗老年性甲状腺机能亢进症的中药胶囊(cn105535472a)，公开了一种用于治疗老年性甲状腺机能亢进症的中药胶囊，由以下重量配比的中药材制备而成：柴胡12份、川楝子12份、川芎6份、苍术6份、白芍12份、野百合10份、野柿10份、瘿袋花10份、浙贝母10份、云南琵琶甲8份、幌伞树8份、滇刺枣8份、夏枯草8份、生牡蛎8份、黄精6份、生地6份、猪靥6份、鹿衔草6份、黄大豆6份、四棱豆6份、黄芪14份、椭圆叶花锚6份、万寿竹5份、铁力木花4份、石胡椒3份、三匹风3份、银杏花粉2份。临床实验证明，本发明通过选择合适的药材及
其配比，达到治疗老年性甲状腺机能亢进症的显著功效，且安全无毒副作用。
[0007]
通过对比，本发明专利申请与上述专利公开专利文献存在本质的不同。


技术实现要素：

[0008]
本发明目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊、槟榔伴侣分子胶囊液及应用。
[0009]
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0010]
一种源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊，制备步骤如下：
[0011]
⑴
将采摘的四棱豆根、茎、叶浸泡于蒸馏水中，洗净、切分、自然晾干，并于鼓风干燥箱中50℃干燥至恒重，分别打成粉末，过160目
‑
200目筛筛选出四棱豆粉末，按四棱豆根：茎：叶的质量比为1
‑
2：1
‑
2：3
‑
5混合为提取原料粉，备用；
[0012]
⑵
酶解
‑
超声偶联法对功能活性物质的提取
[0013]
称取提取原料粉，加入浓度为60％
‑
70％的乙醇充分搅拌溶解，料液比g：m l＝1～3：25～30，待四棱豆粉末与乙醇充分混匀后，加入纤维素酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶，三者的重量比为1.5～2：0.8～1：0.6～1，总酶用量为四棱豆重量的0.5％～1％，用盐酸或氢氧化钠分别调节ph为5.5～6.0，置于超声波清洗器中进行超声辅助提取，在45℃～56℃恒温水浴中酶解1.5～2.0h，超声功率35～40kw；
[0014]
(3)功能活性成分纯化
[0015]
2500r/min离心15min～20min，取离心上清液，过ab
‑
8大孔树脂柱，蒸馏水清洗树脂柱后用20％～30％乙醇洗柱，洗脱速率为0.6～0.8倍柱体积/h、吸附时间为2.5h～3h、洗脱体积为2.5～3倍柱体积，得到提取液，减压抽滤浓缩至原体积1/5，用60～70％乙醇进行沉降，在0.06mpa～0.15mpa下，35℃～40℃减压干燥6h～8h，得功能活性粉末；
[0016]
(4)通过多肽自组装进行功能活性物质分子包埋
[0017]
将功能活性粉末首先加入到ph4.0～4.5的水溶液中形成30～40mm的活性物质混合液，然后滴入至40～60mm的磷酸缓冲液中，进一步加入至1.5～2mg
·
ml
‑1的水溶性壳聚糖中，缓慢加入并振荡均匀，45℃～56℃恒温水浴中反应3～5min，反应同时滴入0.2～0.5mg
·
ml
‑1贻贝粘蛋白，促使活性多肽与壳聚糖形成混合自组装纳米分子液的同时，将活性物质中的多酚等活性分子耦合包埋入分子微胶囊中。用无水乙醇进行沉降，之后2500r/min离心15min～20min，取离心液得活性物质分子包埋微胶囊离心液，取沉淀物得多肽
‑
壳聚糖自组装分子微胶囊；其中，活性物质混合液：水溶性壳聚糖：贻贝粘蛋白的比例ml：g：mg为20：0.10
‑
0.25：30
‑
50；
[0018]
(5)活性物质微胶囊的制备
[0019]
取制备的活性物质分子包埋微胶囊离心液，将其(未包封的活性物质)加入水溶性壳聚糖、贻贝粘蛋白混合物中，其中，水溶性壳聚糖：贻贝粘蛋白的质量比为3～4：0.5～1.0，室温下磁力搅拌10h～12h，转速6000r/min～8000r/min，将所得微胶囊用无水乙醇进行沉降，然后与多肽
‑
壳聚糖自组装分子微胶囊混合，得到活性物质微乳液，然后冷冻干燥20～24小时，得到粉末状的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊，真空保存。
[0020]
进一步地，所述胶囊呈规整的球形且尺寸均一，具有明显的核
‑
壳结构，最大包封率为30.27％，包封量为0.6018g/g，12h时累积释放率最大达到66.21％。
[0021]
如上所述的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊在作为口腔疾病药物方面中的应用。
[0022]
进一步地，所述口腔疾病为由细菌感染引起的口腔疾病。
[0023]
进一步地，所述细菌为金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌。
[0024]
如上所述的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊在制备口腔疾病药物方面中的应用。
[0025]
如上所述的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊在作为皮肤疾病药物方面中的应用。
[0026]
如上所述的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊在制备皮肤疾病药物方面中的应用。
[0027]
利用如上所述的微胶囊的抗菌消炎槟榔伴侣分子胶囊液，其特征在于：制备步骤如下：
[0028]
槟榔伴侣分子胶囊液的制备：
[0029]
配置含质量浓度1.25％～1.50％羧甲基纤维素钠、质量浓度1.25％～1.75％羟丙基甲基纤维素的混合水溶液；按照料液比1～2：2～5的比例添加四棱豆的抗菌消炎微胶囊，均质压力为30mpa、均质时间3min～5min、温度55℃～65℃进行均质，制得质地均一的槟榔伴侣分子胶囊液。
[0030]
如上所述的抗菌消炎槟榔伴侣分子胶囊液的使用方法，步骤如下：
[0031]
槟榔伴侣分子胶囊液在鲜食或干制槟榔中的调制工艺：
[0032]
将处理好的槟榔浸泡于槟榔伴侣分子胶囊液中3min～5min，捞出后真空度0.08～
‑
0.1兆帕，负压处理10～20min，制得包裹有四棱豆抗菌消炎微胶囊的鲜食槟榔；
[0033]
或者，通过点卤机器将槟榔伴侣分子胶囊液注入到干制槟榔芯中。
[0034]
本发明取得的优点和积极效果为：
[0035]
1、本发明抗菌消炎微胶囊，微胶囊的粘附性高，呈凝胶状，可应用于人体皮肤及口腔内部，较好地黏附在皮肤及口腔受感染部位，并因为其抗冲洗能力强，可以在口腔内存留至少6h，起到持续高效的消炎抑菌作用。解决了口腔用药生物利用度低，黏附性能差及活性成分在口腔中存留时间不长的问题。
[0036]
2、本发明微胶囊对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性均达到99％以上，如图1所示，为微胶囊应用于由细菌感染引起的口腔类疾病提供了强有力的理论支撑和实践依据。
[0037]
3、本发明胶囊以四棱豆活性成分粉末自身多肽—壳聚糖自组装凝胶包埋和外加壳聚糖—贻贝粘蛋白为壳材的分子包埋耦合包埋制备凝胶包埋液，同时采用乳液模板
‑
界面聚合法制备微胶囊。该微胶囊呈规整的球形，具有明显的核
‑
壳结构，最大包封率为30.27％，包封量为0.6018g/g。
[0038]
4、本发明采用新工艺条件对活性成分同时提取出四棱豆中对多肽物质和多酚类物质，促使其生成共价复合物，有利于产品的功能特性最大化，也节省了提取成本和时间成本。
[0039]
5、本发明槟榔伴侣分子胶囊液可与槟榔产品有良好的适配性，可较好地黏附在槟榔表面，配备伴侣液的鲜食或干制槟榔可有效减轻长期咀嚼槟榔导致的口腔疾病。
附图说明
[0040]
图1为本发明中不同质量浓度微胶囊的抑菌性能图；
[0041]
图2为本发明中槟榔伴侣胶囊液粘附效果折线图。
具体实施方式
[0042]
下面详细叙述本发明的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
[0043]
本发明中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规的市售产品；本发明中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
[0044]
一种源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊，制备步骤如下：
[0045]
⑴
将采摘的四棱豆根、茎、叶浸泡于蒸馏水中，洗净、切分、自然晾干，并于鼓风干燥箱中50℃干燥至恒重，分别打成粉末，过160目
‑
200目筛筛选出四棱豆粉末，按四棱豆根：茎：叶的质量比为1
‑
2：1
‑
2：3
‑
5混合为提取原料粉，备用；
[0046]
⑵
酶解
‑
超声偶联法对功能活性物质的提取
[0047]
称取提取原料粉，加入浓度为60％
‑
70％的乙醇充分搅拌溶解，料液比g：m l＝1～3：25～30，待四棱豆粉末与乙醇充分混匀后，加入纤维素酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶，三者的重量比为1.5～2：0.8～1：0.6～1，总酶用量为四棱豆重量的0.5％～1％，用盐酸或氢氧化钠分别调节ph为5.5～6.0，置于超声波清洗器中进行超声辅助提取，在45℃～56℃恒温水浴中酶解1.5～2.0h，超声功率35～40kw；
[0048]
(3)功能活性成分纯化
[0049]
2500r/min离心15min～20min，取离心上清液，过ab
‑
8大孔树脂柱，蒸馏水清洗树脂柱后用20％～30％乙醇洗柱，洗脱速率为0.6～0.8倍柱体积/h、吸附时间为2.5h～3h、洗脱体积为2.5～3倍柱体积，得到提取液，减压抽滤浓缩至原体积1/5，用60～70％乙醇进行沉降，在0.06mpa～0.15mpa下，35℃～40℃减压干燥6h～8h，得功能活性粉末；
[0050]
(4)通过多肽自组装进行功能活性物质分子包埋
[0051]
将功能活性粉末首先加入到ph4.0～4.5的水溶液中形成30～40mm的活性物质混合液，然后滴入至40～60mm的磷酸缓冲液中，进一步加入至1.5～2mg
·
ml
‑1的水溶性壳聚糖中，缓慢加入并振荡均匀，45℃～56℃恒温水浴中反应3～5min，反应同时滴入0.2～0.5mg
·
ml
‑1贻贝粘蛋白，促使活性多肽与壳聚糖形成混合自组装纳米分子液的同时，将活性物质中的多酚等活性分子耦合包埋入分子微胶囊中。用无水乙醇进行沉降，之后2500r/min离心15min～20min，取离心液得活性物质分子包埋微胶囊离心液，取沉淀物得多肽
‑
壳聚糖自组装分子微胶囊；其中，活性物质混合液：水溶性壳聚糖：贻贝粘蛋白的比例ml：g：mg为20：0.10
‑
0.25：30
‑
50；
[0052]
(5)活性物质微胶囊的制备
[0053]
取制备的活性物质分子包埋微胶囊离心液，将其(未包封的活性物质)加入水溶性壳聚糖、贻贝粘蛋白混合物中，其中，水溶性壳聚糖：贻贝粘蛋白的质量比为3～4：0.5～1.0，室温下磁力搅拌10h～12h，转速6000r/min～8000r/min，将所得微胶囊用无水乙醇进行沉降，然后与多肽
‑
壳聚糖自组装分子微胶囊混合，得到活性物质微乳液，然后冷冻干燥20～24小时，得到粉末状的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊，真空保存。
[0054]
较优地，所述胶囊呈规整的球形且尺寸均一，具有明显的核
‑
壳结构，最大包封率为30.27％，包封量为0.6018g/g，12h时累积释放率最大达到66.21％。
[0055]
如上所述的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊在作为口腔疾病药物方面中的应用。
[0056]
较优地，所述口腔疾病为由细菌感染引起的口腔疾病。
[0057]
较优地，所述细菌为金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌。
[0058]
如上所述的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊在制备口腔疾病药物方面中的应用。
[0059]
如上所述的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊在作为皮肤疾病药物方面中的应用。
[0060]
如上所述的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊在制备皮肤疾病药物方面中的应用。
[0061]
利用如上所述的微胶囊的抗菌消炎槟榔伴侣分子胶囊液，其特征在于：制备步骤如下：
[0062]
槟榔伴侣分子胶囊液的制备：
[0063]
配置含质量浓度1.25％～1.50％羧甲基纤维素钠、质量浓度1.25％～1.75％羟丙基甲基纤维素的混合水溶液；按照料液比1～2：2～5的比例添加四棱豆的抗菌消炎微胶囊，均质压力为30mpa、均质时间3min～5min、温度55℃～65℃进行均质，制得质地均一的槟榔伴侣分子胶囊液。
[0064]
如上所述的抗菌消炎槟榔伴侣分子胶囊液的使用方法，步骤如下：
[0065]
槟榔伴侣分子胶囊液在鲜食或干制槟榔中的调制工艺：
[0066]
将处理好的槟榔浸泡于槟榔伴侣分子胶囊液中3min～5min，捞出后真空度0.08～
‑
0.1兆帕，负压处理10～20min，制得包裹有四棱豆抗菌消炎微胶囊的鲜食槟榔；
[0067]
或者，通过点卤机器将槟榔伴侣分子胶囊液注入到干制槟榔芯中。
[0068]
具体地，相关制备及检测如下：
[0069]
一种源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊，制备步骤如下：
[0070]
1、将采摘的四棱豆根、茎、叶浸泡于蒸馏水中，洗净、切分、自然晾干，并于鼓风干燥箱中50℃干燥至恒重，分别打成粉末，过160目筛筛选出四棱豆粉末，按1：1：5份重量比例混合为提取原料粉备用。
[0071]
2、酶解
‑
超声偶联法对功能活性物质的提取
[0072]
称取混合提取原料粉，加入浓度为60％
‑
70％的乙醇充分搅拌溶解，料液比g：m l＝1：25，待四棱豆粉末与乙醇充分混匀后，加入纤维素酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶，三者的重量比为2：1：1，酶为四棱豆重量的1％，用盐酸或氢氧化钠分别调节ph为5.5～6.0，置于超声波清洗器中进行超声辅助提取，在45℃～56℃恒温水浴中酶解1.5h，超声功率40kw。
[0073]
3、功能活性成分纯化
[0074]
2500r/min离心15min～20min。取离心上清液，过ab
‑
8大孔树脂柱，蒸馏水清洗树脂柱后用20％乙醇洗柱，洗脱速率为0.8倍柱体积/h、吸附时间为3h、洗脱体积为3倍柱体积，得到提取液，减压抽滤浓缩至原体积1/5，用70％乙醇进行沉降，在0.068mpa下，35℃减压干燥8h，得功能活性粉末。
[0075]
4、通过多肽自组装进行功能活性物质分子包埋
[0076]
功能活性粉末首先加入到ph4.0～4.5的水溶液中形成30mm的活性物质混合液，然后滴入至50mm的磷酸缓冲液中，进一步加入至2mg
·
ml
‑1的水溶性壳聚糖中，缓慢加入并振荡均匀，55℃恒温水浴中反应5min，反应同时滴入0.5mg
·
ml
‑1贻贝粘蛋白，促使活性多肽与壳聚糖形成混合自组装纳米分子液的同时，将活性物质中的多酚等活性分子耦合包埋入分子微胶囊中。用无水乙醇进行沉降，之后2500r/min离心20min，取离心液得活性物质分子包埋微胶囊离心液，取沉淀物得多肽
‑
壳聚糖自组装分子微胶囊。活性物质微乳液：水溶性壳聚糖：贻贝粘蛋白的比例ml：g：mg为20：0.15：30。
[0077]
5)活性物质微胶囊的制备
[0078]
取制备的活性物质分子包埋微胶囊离心液，将未包封的活性物质加入水溶性壳聚糖、贻贝粘蛋白混合中(质量比3：1)，室温下磁力搅拌12h，转速8000r/min，将所得微胶囊用无水乙醇进行沉降，进一步与多肽
‑
壳聚糖自组装分子微胶囊混合，得到活性物质微乳液，然后冷冻干燥24小时，得到粉末状的源于四棱豆的抗菌消炎微胶囊，真空保存。
[0079]
利用如上所述的微胶囊的源于四棱豆的抗菌消炎槟榔伴侣分子胶囊液，制备步骤如下：
[0080]
槟榔伴侣分子胶囊液的制备：
[0081]
配置含1.25％羧甲基纤维素钠、1.5％羟丙基甲基纤维素的混合水溶液。按照料液比2：3的比例添加四棱豆的抗菌消炎微胶囊。均质压力为30mpa、均质时间5min、温度55℃进行均质，制得质地均一的槟榔伴侣分子胶囊液。
[0082]
如上所述的抗菌消炎槟榔伴侣分子胶囊液的使用方法，步骤如下：槟榔伴侣分子胶囊液在鲜食或干制槟榔中的调制工艺：
[0083]
将处理好的槟榔浸泡于槟榔伴侣分子胶囊液中3min，捞出后真空度0.08～
‑
0.1兆帕，负压处理20min。制得包裹有四棱豆抗菌消炎微胶囊的鲜食槟榔。或者，通过点卤机器将槟榔伴侣分子胶囊液注入干制槟榔芯中。
[0084]
相关检测如下：
[0085]
以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别作为口腔感染部位分泌物含有的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的代表，采用菌落计数法测定微胶囊的抑菌性能。将紫外灭菌的微胶囊加入到103cfu/ml的菌悬液中处理10h后移取20μl置于固体营养琼脂培养基，涂抹均匀，静置0.5h后将其倒置放入37℃
±
1℃培养箱中培养24h，观察统计培养基上菌落的数量。此外，只添加菌液，不添微胶囊的作为空白对照。每个实验重复3次，抑菌率由以下公式计算：
[0086]
抑菌率/％＝(对照组细菌菌落的数量－样本组细菌菌落的数量)/对照组细菌菌落的数量
×
100
[0087]
采用牛津杯抑菌圈法测试材料的抑菌性能。在每个培养基中心垂直放上一个牛津杯(内径6mm、外径8mm、高10mm的圆形小管，管的两端要光滑)，轻轻加压，使其与培养基紧密接触，之后吸取50μl浓度为106cfu/ml的菌液到培养基上用接种环涂抹均匀，再依次吸取壳聚糖、四棱豆活性成分提取物及微胶囊样液50μl加入到牛津杯中，置于37℃恒温箱中培养24h，添加乙醇(etoh)的作为阳性对照，只添加菌液的为阴性对照，试验重复3次，观察结果，抑菌圈用游标卡尺测量。
[0088]
按照抑菌圈直径大小评价材料的抑菌性能，抑菌圈直径大小见表1和图1。在牛津杯抑菌实验培养过程中，一方面细菌开始生长，另一方面材料呈球面扩散，离杯越近，材料浓度越大，离杯越远，材料浓度越小。结果表明微胶囊的抑菌性优于四棱豆活性成分提取物、壳聚糖，微胶囊抑菌圈直径>20mm属于极度敏感型，活性成分提取物的抑菌圈直径≥10≤15mm属于中度敏感型。
[0089]
表1微胶囊、活性成分提取物、壳聚糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对抑菌性能
[0090][0091]
制备槟榔伴侣分子胶囊液，将超声清洗干净的猪皮浸泡在槟榔伴侣分子胶囊液1min，使用与槟郎伴侣分子胶囊液中类黄酮浓度相同的类黄酮稀释溶液里浸泡1min作为对照，除浸泡液不同，其他处理均为一样，使用人工唾液冲洗6h，然后将它们一起冷冻干燥保存待用。以活性物质中的类黄酮存留率为指标，判断微胶囊的黏附性能。
[0092]
表2槟榔伴侣胶囊液粘附效果表
[0093][0094]
从表2、图2能明显看出，经人工唾液冲洗6h后，实验组仍能保持较好的槟榔伴侣胶囊液的浓度，具备应用价值。
[0095]
尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例所公开的内容。