去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼的组合物在制备抗肝癌药物中的应用的制作方法

1.本发明属于医药技术领域，具体而言，涉及一种去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联合组合物制备抗肝癌的药物及应用。


背景技术：

2.肝细胞癌是全球第三大癌症相关死亡原因，具有高转移率和复发率的特点。超过80%的肝癌患者诊断时已为晚期，使得治疗非常受限，并且预后很差。由于肿瘤的复发和转移，肝癌患者5年生存率仍低于20%。尽管已出现各种治疗肝癌转移的策略，如肿瘤疫苗、免疫治疗等，但生存率在最近几十年里只有轻微的提高。
3.转移是肿瘤恶性行为的主要特征，是导致临床治疗失败的重要原因。因此，寻找治疗或预防肿瘤转移的靶点是肿瘤治疗的重点。
4.另外，随着药物治疗期的延长，临床耐药性也发展为常态，单药治疗已受限。因此，采用联合用药抑制肿瘤侵袭转移在临床上具有重要意义。联合用药能更有效地抑制癌症，从而更有效地治疗癌症患者。
5.foxo1是fox转录因子家族的重要成员，通过调节细胞的氧化应激、增殖及凋亡等多种生理过程，参与生物体的生长发育、代谢及肿瘤形成等。已有研究表明foxo1能抑制肝癌细胞的侵袭与转移。因此，靶向激活foxo1可能会达到抑制肝癌细胞转移的目的。
6.索拉菲尼是fda批准的首个抗肝癌化疗药物，可有效延长晚期肝细胞癌患者的生存期，但其疗效因耐药性的发展而受限。因此，寻求可以协同索拉菲尼抗肝癌的药物，可有效减少索拉菲尼的用量，降低索拉菲尼的毒副作用，提高治疗安全指数，同时弥补索拉菲尼单药治疗的缺陷与不足。
7.课题组通过前期大量的化合物活性筛选实验，获得了一个既能抑制肝癌细胞的侵袭转移，又能激活foxo1的化合物——去甲基斑蝥素酸镁，并通过联合用药筛选，发现其与索拉菲尼联用具有协同抑制肝癌细胞侵袭转移的效果。
8.目前关于本发明中提及的去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼联用通过激活foxo1抑制肝癌细胞侵袭转移的研究，国内外未见任何报道。


技术实现要素：

9.本发明要解决的技术问题是克服现有治疗药物的缺陷和不足，特别是针对与肝癌有效药物不多的现状，提供一种癌症治疗的药物组合物，该药物组合为去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼，能够显著提高索拉菲尼治疗癌症的效果，尤其是治疗肝癌的效果。
10.本发明的第一个目的在于提供去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用在制备癌症治疗药物方面的应用。
11.本发明的第二个目的是提供一种包含去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼的治疗癌症的药物。
12.去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用在制备癌症治疗药物方面的应用。
13.优选地，所述癌症为肝癌。
14.去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用在制备抑制癌细胞侵袭与转移的药物方面的应用。
15.优选地，所述癌细胞为肝癌细胞。
16.优选地，上述抑制癌细胞的药物为抑制癌细胞侵袭与转移的药物。
17.更优选地，所述肝癌细胞为肝癌细胞种smmc
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7721、sk
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hep
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1。
18.一种癌症治疗药物，所述药物包含去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼。
19.优选地，所述癌症为肝癌。
20.优选地，所述去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼的质量比为：75~100份：50份。
21.优选地，所述药物的作用靶点是转录因子foxo1。
22.更优选地，所述药物是抑制肝癌细胞的侵袭与转移。
23.为了寻找能够产生协同抗癌作用的药物组合，我们对斑蝥素类衍生物和抗肝癌的小分子抑制剂类药物进行了联合筛选。
24.以肝癌smmc
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7721细胞株为测试细胞株，经过长期大量的筛选实验和分析研究后发现，其中的一个配对组合能够产生协同作用，显著增强抗癌效率。这对组合药物为：去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼。
25.去甲基斑蝥素酸镁的结构式为：索拉菲尼，cas为284461
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73
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0，分子式c
21
h
16
clf3n4o3，分子量464.825，结构式为：紧接着，我们通过transwell细胞侵袭和迁移实验检测了去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼联用对肝癌smmc
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7721细胞侵袭和迁移的影响，结果发现低浓度的去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼联用就能有效抑制癌细胞侵袭和迁移，并且联合效果优于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单药使用。
26.进一步地，我们又在肝癌sk
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hep
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1细胞株上对去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼联合方案进行了进一步验证，实验结果发现去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼对肝癌sk
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hep
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1细胞
的侵袭与转移的确能够产生协同抑制作用，显著增强抗癌效率。
27.为了明确去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼协同抑制肝癌smmc
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7721、sk
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hep
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1细胞侵袭和转移是否与转录因子foxo1的激活有关。我们通过western blot实验证实了去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼联用能增强foxo1的激活，并且联合效果优于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单药使用。上述结果表明，去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼协同抑制肝癌细胞的侵袭与转移是通过激活转录因子foxo1来实现的。
28.与现有技术相比，本发明的有益效果例如包括：本发明联用药物可以显著提升抑制肝癌smmc
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7721、sk
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hep
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1细胞侵袭转移的效果，而且抑制效果明显优于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单独使用，且疗效明确，说明二者在本发明特定配比下配合实验后具有协同增效的作用，有很好的临床应用前景。
29.此外，由于去甲基斑蝥素酸镁是传统中药—斑蝥素的衍生物，相比于斑蝥素，它具有毒性低、水溶性好等特点，与索拉菲尼联用时可以大大减少索拉菲尼的使用量，从而降低索拉菲尼毒副作用，并提高治疗安全指数。这种联用方案显示出的协同增效的效果，具有弥补单药治疗的缺陷与不足，具有很好的临床应用前景。
附图说明
30.图1是肝癌smmc
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7721、sk
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hep
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1细胞经不同组处理后细胞侵袭和迁移结果。
31.图2是肝癌smmc
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7721、sk
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hep
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1细胞经不同组处理后western blot实验检测磷酸化的foxo1蛋白结果。
具体实施方式
32.以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定，除非特别说明，本发明采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规试剂、设备和方法。
33.除非特别说明，本发明所用材料和试剂均为市售品。
34.实施例1去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用通过激活转录因子foxo1的表达抑制肝癌smmc
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7721细胞的侵袭与转移本实施例共分为4组，对照组（不加药），去甲基斑蝥素酸镁组（浓度：7.5 μm），索拉菲尼组（浓度：5 μm），去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼联用组（浓度分别为7.5 μm，5 μm）。
35.细胞侵袭实验。肝癌smmc
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7721细胞经不同组处理24 h后，收集、重悬细胞，接种于带有基质胶的transwell小室的上孔中，接种密度20000个/孔，于下孔内加入600 μl含有10%胎牛血清的rpmi
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1640培养基，37℃、5% co2环境下培养24 h后，弃培养液，4%多聚甲醛固定，经1%结晶紫染色液染色后，于体视显微镜下观察拍照。结果如图1a所示，相对于对照组，药物处理组的细胞侵袭率明显低于对照组；但当去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用后肝癌smmc
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7721细胞的侵袭率更低，明显优于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单独使用，协同抑制肝癌smmc
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7721细胞侵袭的效果良好。
36.细胞迁移实验。将经不同组处理24 h后的肝癌smmc
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7721细胞悬液接种于transwell小室的上孔中，接种密度20000个/孔，于下孔内加入600 μl含有10%胎牛血清的
rpmi
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1640培养基，37℃、5% co2环境下培养24 h后，弃培养液，4%多聚甲醛固定，1%结晶紫染色液染色后，于体视显微镜下观察拍照。结果如图1b所示，与去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单药组相比，联合用药组抑制肝癌smmc
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7721细胞的迁移能力显著优于单药组，协同效果良好。
37.为了确定去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联合增效的机制是否与转录因子foxo1的激活有关，我们采用western blot检测了磷酸化foxo1蛋白的表达，结果如图2a所示，相比于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单药组，联合用药组能显著降低磷酸化foxo1蛋白的表达，已有研究表明foxo1的脱磷酸化在细胞核中的积累是foxo1激活的标志，说明去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用能显著激活foxo1蛋白表达，进而抑制肝癌smmc
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7721细胞的侵袭与转移，协同效果良好。
38.综上，本案例的研究结果发现：去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联合用药能显著抑制肝癌smmc
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7721细胞的侵袭转移；而且抑制效果明显优于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单独使用，疗效明确，说明二者在本发明特定配比下配合实验后具有协同增效的作用，有很好的临床应用前景。
39.实施例2去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用通过激活转录因子foxo1的表达抑制肝癌sk
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hep
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1细胞的侵袭与转移本实施例共分为4组，对照组（不加药），去甲基斑蝥素酸镁组（浓度：10 μm），索拉菲尼组（浓度：5 μm），去甲基斑蝥素酸镁与索拉菲尼联用组（浓度分别为10 μm，5 μm）。
40.细胞侵袭实验。肝癌sk
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hep
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1细胞经不同组处理24 h后，收集、重悬细胞，接种于带有基质胶的transwell小室的上孔中，接种密度20000个/孔，于下孔内加入600 μl含有10%胎牛血清的rpmi
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1640培养基，37℃、5% co2环境下培养24 h后，弃培养液，4%多聚甲醛固定，经1%结晶紫染色液染色后，于体视显微镜下观察拍照。结果如图1c所示，相对于对照组，药物处理组的细胞侵袭率明显低于对照组；但当去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用后肝癌sk
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1细胞的侵袭率更低，明显优于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单独使用，协同抑制肝癌sk
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hep
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1细胞侵袭的效果良好。
41.细胞迁移实验。将经不同组处理24 h后的肝癌sk
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hep
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1细胞悬液接种于transwell小室的上孔中，接种密度20000个/孔，于下孔内加入600 μl含有10%胎牛血清的rpmi
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1640培养基，37℃、5% co2环境下培养24 h后，弃培养液，4%多聚甲醛固定，1%结晶紫染色液染色后，于体视显微镜下观察拍照。结果如图1d所示，与去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单药组相比，联合用药组抑制肝癌sk
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1细胞的迁移能力明显优于单药组，协同效果良好。
42.为了确定去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联合增效的机制是否与转录因子foxo1的激活有关，我们采用western blot检测了磷酸化foxo1蛋白的表达，结果如图2b所示，相比于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单药组，联合用药组能显著降低磷酸化foxo1蛋白的表达量，已有研究表明foxo1的脱磷酸化在细胞核中的积累是foxo1激活的标志，说明去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联用能显著激活foxo1蛋白表达，进而抑制肝癌sk
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1细胞的侵袭与转移，协同效果良好。
43.综上，本案例的研究结果发现：去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼联合用药能显著提
升抑制肝癌sk
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hep
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1细胞的侵袭转移；而且抑制效果明显优于去甲基斑蝥素酸镁和索拉菲尼单独使用，且疗效明确，说明二者在本发明特定配比下配合实验后具有协同增效的作用，有很好的临床应用前景。