生殖器使用的局部、等渗组合物的制作方法

生殖器使用的局部、等渗组合物
1.相关申请的交叉引用
2.根据美国35u.s.c.第119条第(e)项，本技术要求2018年12月11日提交的美国申请号62/778,278的优先权的权益，将其通过引用以其全文特此并入。


背景技术：

3.人的生殖器微生物组是微生物物种的独特组合，这些微生物物种包含至少一百种细菌和各种真菌、病毒和原生动物物种。个体之间的生殖器微生物组的组成有相当大的差异，具有许多因素，如卫生制度、饮食、环境、年龄、种族、疾病、性活动、性取向和生活史，影响特定微生物物种的存在及其代谢活动。与人体其他位置相比，生殖器内的环境条件是不同的。因此，指示用于泌尿生殖器、肛门生殖器、阴道和/或阴茎使用的产品，为了调节生殖器微生物组，可能需要不同的益生元和/或益生菌组分。
4.另外，生殖器微生物组是独特的，因为它在性二元体(sexual dyad)成员之间以及哺乳动物母亲和新生儿之间是共有的，作为新生儿建立自己的微生物组的主要模式。如果健康的生殖器微生物组得不到支持，则可能发生二元体内的疾病和/或生物失调。微生物组一致性和微生物物种在性伴侣之间以及母亲和她的孩子之间的转移被很好地记录。性伴侣可以来回传播破坏有益菌的致病菌，增加炎症，并增加疾病风险，包括不孕症、生殖功能障碍、不良妊娠结局、自身免疫性疾病、性传播疾病(例如，hiv、hsv、hpv)、癌症(例如，前列腺癌、宫颈癌)和系统性疾病(如认知损害)。
5.此外，老年人和儿童/婴儿经常被破坏生殖器微生物组，特别是由于穿着屏障保护尿布和慢性尿失禁，这可能导致慢性炎症和疾病。在清洁期间改善泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的健康细菌可以改善其整体健康。使用目前的肥皂或清洁擦拭物连续清洁泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器器区域可能会刺激皮肤并破坏微生物组。护理提供者持续用改变皮肤ph和破坏有益菌的产品洗手可能会限制护理者的健康微生物组，从而减少有益菌向老年人或儿童转移以帮助恢复健康微生物组的机会。
6.现有的清洁产品和生殖器疗法(例如，沐浴露、擦拭物、酵母治疗剂、大多数润滑剂)具有破坏生殖器组织并杀死健康细菌的ph、盐水平和成分。例如，一种流行的、可商购获得的尿布擦拭物的ph为3。而世界卫生组织(who)指出，这一ph水平与人类生殖器组织不一致。who提供了紧急咨询，要求与生殖器和直肠区域接触的产品具有安全的盐(离子)、ph和成分制剂，如世界卫生组织咨询说明“use and procurement of additional lubricants with male and female condoms:who/unfpa/fhi360”(2012)中所公开，将其通过引用以其全文特此并入，特别是关于附件1中商业润滑剂的ph和渗透压。然而，商业产品并没有改变。
7.仍然需要用于泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的组合物，其对生殖器组织无害，并且保护和支持这些区域的有益区域微生物组。本发明公开的实施方案解决了这一需求并提供其他相关优点。


技术实现要素：

8.本公开提供了用于维持某些受试者身体区域(包括泌尿生殖器(例如，与尿排泄和繁殖的功能有关的受试者区域)和/或肛门生殖器区域(例如，与肛门和生殖器有关))的微生物组的组合物和方法。特别地，本公开涉及等渗的、对生殖器微生物组友好的局部组合物，其包含益生元寡糖、金属辅助因子和乙酸冰片酯(例如，经由包含乙酸冰片酯的精油)，其处于补充受试者性别、生命阶段和用途的ph水平。本公开的等渗的、对生殖器微生物组友好的组合物可以用于使受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域水合、润滑受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域、清洁受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域、减少受试者泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的刺激或炎症、增强受试者的生殖器微生物群(例如，增加受试者有益生殖器微生物群的菌落计数)、增强受试者的生殖器组织功能等。
附图说明
9.图1描绘了本公开的涂抹器，其可以用于将组合物递送至泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域(例如，阴道)。
10.图2描绘了图1所示涂抹器的使用。
11.图3a描绘了处于储存构型的本公开涂抹器。图3b描绘了处于即将施用构型的图3a中的涂抹器。图3c描绘了处于处置构型中的涂抹器。
12.图4a描绘了拆开的本公开涂抹器(例如，当它可以成套提供)。图4b描绘了正被组装的图4a的涂抹器。
13.图5示出了用前臂(前窝(ante fossa))对照的阴茎(n＝6)的各个区域的平均ph值。误差条示出了标准偏差。
14.图6示出了在施用本公开的发泡洗涤组合物(制剂a)和本公开的调理剂(制剂b)后，用前臂(前窝)对照的阴茎各个区域的平均ph值。为了进行比较，还示出了商业nivea洗液和随后astroglide调理剂的ph值。误差条示出了每次测量的标准偏差。
15.图7a示出了与在牛精子运动性研究中测量的对照相比，精子的总运动性百分比。图7b示出了与牛精子运动性研究中的对照相比，前向运动精子的百分比。测试的制剂是71519a、71519b、71519c、0618ca45和0618ca68(表15)。
16.图9示出了与商业rephresh和replens润滑剂相比，与本公开的润滑剂组合物混合的猪粘液的粘膜粘附性(表21)。误差条表示标准偏差。
具体实施方式
17.在更详细地阐述本公开之前，理解本公开可能有助于提供本文中使用的某些术语的定义。另外的定义在本公开通篇中阐述。
18.在本说明书中，除非另有说明，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应当理解为包括所叙述范围内的任何整数的值，并且在适当时包括其分数(诸如，整数的十分之一和百分之一)。此外，除非另有说明，否则本文所述的与任何物理特征(诸如聚合物亚单元、尺寸或厚度)相关的任何数字范围应理解为包括所述范围内的任何整数。除非另有说明，否则本文所述的任何浓度范围应理解为包括该范围内的任何整数及其分数的浓
fermentum)、短乳杆菌(lactobacillus brevis)、干酪乳杆菌(lactobacillus casei)、德氏乳杆菌(lactobacillus delbrueckii)、阴道乳杆菌(lactobacillus vaginalis)、唾液乳杆菌(lactobacillus salivarius)、罗伊氏乳杆菌(lactobaccillus reuteri)和鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)。经常在健康女性阴道区域中以少量存在的另外的细菌物种包括：惰性乳杆菌(lactobacillus iners)，以及来自普氏菌属(prevotella)、巨球菌属(megasphaera)、梭菌属(colstridium)、芽孢杆菌属(baccilus)、加德纳菌属(gardnerella)、纤毛菌属(sneathia)和支原菌属(mycoplasma)的物种。另外，可能是一些女性正常阴道微生物群的一部分的产酸细菌包括惰性乳杆菌，以及普氏菌属、奇异菌属(atopobium)、纤毛菌属(leptotrichia)、明串珠菌属(leuconostoc)、巨球菌属、片球菌属(pediococcus)、链球菌属(streptococcus)和魏斯氏菌属(weissella)物种。正常阴道微生物群中发现的物种可能根据年龄和种族而变化。在一些种族和生命阶段中，产酸、健康的阴道微生物组可能不是主要由乳杆菌构成的。证据显示，乳杆菌优势与所有年龄女性的最佳生殖和生殖器健康结局相关。各种微生物群(以及它们与阴道和非阴道健康两者的联系)在j.si等人,cell host&microbe 21(2017):97
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105中公开，将其通过引用以其全文特此并入，并且特别是关于阴道微生物群，包括乳杆菌和普氏菌属物种。
26.如本文所用，术语“生殖道微生物群”是指通常定殖于女性上生殖道(包括子宫颈、子宫、输卵管和卵巢)并且是非致病性的集体微生物。在某些实施方案中，女性生殖道微生物群也可以由来自假单胞菌属(pseudomonas)、不动杆菌属(acinetobacter)、漫游球菌属(vagococcus)、鞘脂菌属(sphingobium)、丹毒丝菌属(erysipelothrix)、费克蓝姆菌属(facklamia)或普氏菌属的物种构成。
27.如本文所用，术语“阴茎微生物群”或“阴茎菌群”是指是通常定殖于阴茎、包皮和远端尿道的非致病性的集体微生物。阴茎包括阴茎轴和远端龟头，包括龟头、龟头冠状、尿道口、舟状窝、系带、冠状沟和包皮。在某些实施方案中，阴茎微生物群包括卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、惰性乳杆菌、加氏乳杆菌、链球菌、非致病性普氏菌、棒状杆菌(corynebacteria)、葡萄球菌(staphylococcus)、厌氧球菌(anaerococcus)、不解糖嗜胨菌(peptoniphilus)、大芬戈尔德菌(finegoldia)、卟啉单胞菌属(porphyromonas)、丙酸菌属(propionibacterium)、代尔夫特菌(delftia)、双歧杆菌(bifidobacterium)、梭菌属(clostridium)、非致病性假单胞菌或其任何组合。在某些实施方案中，男性受试者的阴茎微生物群反映了女性受试者的阴道微生物群和/或生殖道微生物群，其中该男性受试者和女性受试者是性二元体的成员。在正常阴茎微生物群中发现的物种在经割礼和未经割礼的受试者之间可能有所不同。例如，阴茎微生物群也可以包括精子微生物群，如d baud等人,frontiers in microbiol 10(2019):234中公开的那些，将其通过引用以其全文特此并入，并且特别是关于有益的精液微生物群，包括乳杆菌物种。
28.如本文所用，术语“肛门生殖器区域”是指肛门和生殖器的区域。在某些实施方案中，女性肛门生殖器区域包括子宫颈、阴道、外阴、阴蒂、尿道口、尿道口、外阴前庭、会阴和/或肛门。在某些实施方案中，男性肛门生殖器区域包括阴茎、阴茎基部、包皮、尿道口、阴囊、会阴和肛门。如本文所用，术语“泌尿生殖器区域”是指远端泌尿道和生殖器的区域。在某些实施方案中，女性泌尿生殖器区域包括子宫颈、阴道、外阴、阴蒂、阴道口、尿道口、尿道褶皱、外阴前庭和/或会阴。在一些受试者中，由于医源性(例如，手术或激素治疗)或自然/遗
传原因，肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域可能不明显、间性或者从男性到女性或女性到男性过渡。
29.如本文所用，术语“生殖器组织”是指在肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域中发现的活细胞。生殖器组织包括但不限于外阴、阴蒂、阴道、前庭、外阴前庭、尿道口、阴茎、包皮、远端尿道和阴囊的上皮表面细胞(例如，皮肤)、粘膜细胞、免疫细胞、神经细胞、血细胞、结缔组织细胞和肿瘤细胞。由于精子细胞从阴茎排出，并且通常沉积在生殖器组织(例如，阴道)上，因此生殖器组织也包括精液和精子细胞。
30.如本文所用，术语“生殖器流体”是指生殖器官组织内和周围自然产生的身体分泌物。生殖器流体包括但不限于宫颈和阴道分泌物(统称为“宫颈
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阴道流体”(cvf))、精液、耻垢(smega)、精液流体、尿道分泌物、上皮和粘膜涂层、月经流、产后恶露，以及阴道、外阴、阴蒂、阴茎、包皮和阴囊内和周围自然产生的其他流体。
31.如本文所用，术语“生殖周期”或“月经周期”是指产生卵母细胞(卵巢周期)和为妊娠准备子宫(子宫周期)所需的激素变化。生殖周期包括排卵前后的能育时间，以及由于缺乏有活力的卵子而无法受孕的时期。
[0032]“有效量”或“治疗有效量”是指本公开的组合物的量，其在施用至受试者(如人)时足以实现所需的生物效果或治疗，包括以下的任何一种或多种：(1)使泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域水合；(2)润滑泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域；(3)清洁泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域；(4)减少泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的刺激或炎症；(5)维持、支持或增强健康的生殖器和生殖道微生物群；(6)支持或增强生殖器组织功能；(7)支持或增强生殖器流体功能；(8)支持或增强精子活力或功能；(9)校正或恢复最佳的生殖器ph(例如，约4至约5，至约4.5)；(10)减少令人烦恼的生殖器症状(如刺激)；或其任何组合。构成“有效量”的本公开组合物的量将根据制剂、治疗的病症及其严重程度、施用方式、治疗持续时间，或者待治疗的受试者的年龄或性别而变化，但可以由本领域普通技术人员根据其自身知识和本公开常规地确定。
[0033]
如本文所用，术语“受试者”是指例如出于实验、诊断、预防和/或治疗目的可以向其施用根据本公开的组合物的任何生物体。典型的受试者包括任何动物(例如，哺乳动物如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物和人等)。有需要的受试者典型地是希望治疗如本文所述疾病、障碍或病症(特别是，治疗与泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的生物失调相关的疾病、障碍或病症)的受试者。例如，有需要的受试者可能寻求或需要治疗、要求治疗、正在接受治疗、可能在将来接受治疗，或者由经训练的专业人员针对特定疾病、障碍或病症进行护理的人或动物。
[0034]
如本文所用，短语“药学上可接受”通常在所采用水平下对于摄入或与生物组织接触是安全的。药学上可接受的与生理上相容的可互换使用。应当理解，除非另有说明，否则本公开的药物组合物包括营养组合物(例如，膳食补充剂)。
[0035]
本文所述的化合物可以作为药学上可接受的盐存在。典型地，盐由相关数量的阳离子和阴离子(其中至少一种由本文所述的化合物形成)偶联在一起(例如，这些对可以离子键合)构成，使得该盐是电中性的。药学上可接受的盐可以保留或具有与母体化合物相似的活性(例如，10％内的ed
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)，并且具有在药物组合物中提供效用的范围内的毒性特征。例如，药学上可接受的盐可以适用于与人和动物的组织接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏
反应，并且与合理的益处/风险比相称。药学上可接受的盐描述于：berge等人,j.pharmaceutical sciences 66:1
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19,1977和pharmaceutical salts:properties,selection,and use,(p.h.stahl和c.g.wermuth编),wiley
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vch,2008中。盐可以由药学上可接受的无毒酸和碱(包括无机和有机酸和碱)制备。代表性酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二氯乙酸盐、双葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2
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羟基
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乙磺酸盐、羟乙基磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、粘酸盐、2
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萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、泛酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3
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苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一酸盐和戊酸盐。代表性碱式盐包括碱金属或碱土金属盐，包括钠、锂、钾、钙和镁、铝盐，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、咖啡因和乙胺。
[0036]
本公开的药学上可接受的酸加成盐可以通过将本公开化合物与等摩尔或过量的酸反应来形成。可替代地，半盐可以通过将本公开化合物与所需酸以化合物与酸为2:1的比率反应来形成。反应物通常在互溶剂(如乙醚、四氢呋喃、甲醇、乙醇、异丙醇、苯等)中组合。盐通常在例如1小时至10天内从溶液中沉淀出来，并且可以通过过滤或其他常规方法分离。
[0037]
前药典型地是可以在生理条件下或通过溶剂分解转化为本发明的生物活性化合物的化合物。前药可以指药学上可接受的本发明化合物的代谢前体。前药在施用至有需要的受试者时可能是无活性的，但在体内转化为本发明的活性化合物。前药典型地在体内快速转化以产生指定的化合物，例如通过在血液中水解。前药化合物通常在哺乳动物生物体中提供溶解性、组织相容性或延迟释放的优点，如bundgard,h.,design of prodrugs(1985):7
‑
9,21
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24(elsevier,amsterdam)；higuchi,t.等人,acs symposium series,第14卷；和bioreversible carriers in drug design,ed.edward b.roche,american pharmaceutical association and pergamon press,1987中所述，将所述参考文献各自通过引用以其全文特此并入。
[0038]
组合物
[0039]
本公开提供了局部、等渗组合物，其包含益生元寡糖、金属辅助因子和乙酸冰片酯(例如，该组合物包含含有乙酸冰片酯的精油)，其ph范围为约3.5至约8。此类组合物对泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的上皮组织没有刺激或刺激最小；对泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的天然粘液分泌物和粘蛋白没有破坏或破坏最小；对泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的正常、非致病性微生物群的抑制最小或没有抑制；不促进泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的致病菌生长；限制致病菌从二元体的第一个成员向元分体的第二个成员转移；增强有益微生物群物种从二元体的第一个成员向二元体的第二个成员转移；或其任何组合。
[0040]
已经鉴定了不同的生殖器微生物组状态和代谢特征，其与健康相关，并且相反地，与生殖器疾病(例如，阴茎或阴道疾病)、生育能力、不良分娩结局、hiv易感性、hpv易感性、性传播感染、自身免疫性疾病和癌症风险相关。系统性风险疾病(如认知损害/痴呆)也可能
与生殖器微生物组的慢性炎症和生物失调相关，如r.muzambi等人,bmj open 9(2019):e030874中所示，将其通过引入以其全文特此并入，并且特别是关于细菌感染与痴呆之间的联系。另外，后代中的疾病(如1型糖尿病)也与母亲的生殖器微生物组相关，如m.tejesvi等人,sci rep 9(2019):959中所公开，将其通过引入以其全文特此并入，并且特别是关于二元体成员中阴道微生物组与1型糖尿病之间的联系。
[0041]
因此，重要的是在开发生殖和性健康产品和疗法时，考虑生殖器微生物组及其对人类健康的影响。一般来讲，健康的人类阴道微生物组(其主要由优势乳酸杆菌物种控制)维持并利用基于碳水化合物的、富含抗氧化剂的环境(chen等人nat commun 8:875,2017，将其通过引入以其全文特此并入)。这些乳酸杆菌产生不同的代谢物，这些代谢物刺激上皮粘液产生、调节免疫细胞反应性、控制致病生物膜和生物胺的形成，并防止致病菌在阴道内的定殖。阴茎微生物组可以反映女性性伴侣的阴道微生物组，并与其相关。生物失调(指微生物群受损或失衡)可能导致致病性或生态失调微生物的生长。生态失调生物体倾向于选择氨基酸或蛋白质作为能量底物，而不是碳水化合物，产生缺乏抗氧化剂的环境(具有高细胞因子活性代谢物)降解产物，如生物胺和某些抗氧化还原剂。这些产物通常导致多种令人烦恼的症状和病理，从气味到瘙痒、炎症、生物膜产生(其可以保护病原体免受宿主免疫系统的影响)、粘蛋白分泌降解，以及更高的病毒感染和癌症风险。某些生命事件导致个体更易患生物失调，包括：排卵、月经、分娩、青春期、妊娠、性启始、男性的未割包皮、女性的生殖器割除、疾病(例如，糖尿病)、引入新的性伴侣、产后、子宫退化、免疫抑制时间、绝经期或男性更年期，以及癌症治疗。本公开涉及不引发或最小化此类反应的发生和/或维持肛门生殖器和/或泌尿生殖器微生物组的健康微生物组的组合物和方法。
[0042]
阴道和阴茎慢性生物失调的发病机制依赖于生物活性胺的产生。少数物种的生态失调细菌(例如，在生物失调下的微生物组中存在的细菌)产生最大量的生物胺，如胍丁胺、腐胺、尸胺和酪胺，这增加了阴道ph并使阴道微生物组对其他生态失调物种更具吸引力。这些物种还可以产生细菌内毒素，如已与疾病、障碍和病症(如各种癌症和痴呆)有关的脂多糖。阴道生物失调通常与并发的男性伴侣阴茎生物失调有关。代谢状态从糖原/碳水化合物向富含氨基酸环境的这种转变导致阴道ph值从有益的酸性状态(ph约4.5)向更碱性的状态转变。这种转变是由特定细菌引起和延续的，该细菌包括：致病性普氏菌属、埃格特菌属(eggerthellia)、加德纳菌属、奇异菌属、巨球菌属、动弯杆菌属(mobiluncus)、mageeibacillus菌属、孪生菌属(gemella)、韦荣氏球菌属(veillonella)、snethia菌属、支原菌属和一些梭菌属物种。重要的是要注意，这些细菌中的一些不是最丰富的，或者仅存在于生态失调的微生物组中，证实了微生物在环境中发挥的代谢活性和生态作用比其丰度更重要。这些生态失调细菌产生代谢物，导致生殖器ph增加、令人不快的气味、干扰宿主免疫功能的生物膜产生、上皮炎症增加(可能导致如灼伤、瘙痒和/或疼痛的症状)、粘蛋白降解增加(可能导致如疼痛、皮肤粗糙和/或刺激的症状)、氧化应激增加、细胞因子和炎性体产生，以及健康微生物组生物体的生长能力降低。这些情况使个体易于发展进一步的生物失调和疾病状态，包括增加以下风险：不良生殖结局(例如，受精失败、胚胎植入失败、胎儿生长不良、分娩并发症)、性交疼痛、性传播疾病(如高风险人乳头状瘤病毒(hpv)感染和持续性、生殖器单纯疱疹病毒(hsv)感染和人类免疫缺陷病毒(hiv)感染)、自身免疫性病症、癌症以及系统性疾病(例如，认知损害)。对于有气味和分泌物的女性以及有气味和阴茎皮肤
视觉粗糙或发炎的男性来说，这些情况也具有尴尬和社交退缩的社会代价。生殖器生物失调的这些社会方面很少被讨论和治疗。
[0043]
个体的生殖器微生物组也可能影响性伴侣或后代。女性伴侣患有细菌性阴道病(bv)的夫妇显示出高水平的与男性伴侣共有的致病菌(共有超过17种物种)。相比之下，健康的夫妻也共有细菌物种，但具有更窄范围(例如，较少多样化)的微生物(例如，通常4株细菌菌株)，包括乳杆菌。绝经期女性可能会经历慢性细菌生物失调，这有利于致病菌的生长。这种生物失调可能会传播给绝经期女性的性伴侣。对于男性性伴侣，阴茎微生物群在前列腺健康和疾病方面具有重要作用。男性性伴侣的阴茎生物失调可能会诱导慢性炎症，这可能使男性性伴侣易患生育力低下、前列腺炎、慢性骨盆疼痛综合征、良性增生，以及前列腺癌(porter等人,prostate cancer prostatic dis.21:345,2018)。阴茎微生物组还影响全身激素水平(同上)。在传播生物失调的另一个实例中，患有慢性阴茎生物失调的未经割礼男性可能将生物失调传播给女性性伴侣，从而导致复发性细菌性阴道病。目前，患有细菌性阴道病的女性可能会经历多次抗菌治疗。然而，如果不同时治疗男性性伴侣，则女性的复发和持续再治疗已成为常规。
[0044]
自然阴道清洁和保护女性免受阴道性交过程中遇到的病原体的侵害取决于几个因素，包括：1)酸性环境(例如，约4.0至约4.5的ph)，这有助于阴道上皮细胞外层的持续溶解和脱落；2)在阴道腔中形成的宫颈
‑
阴道流体(cvf)，与血液和浸泡内部组织的流体相比，其具有低盐/离子浓度，这进一步促进了最外层阴道上皮细胞衬里的溶解和脱落，以及3)由嵌入阴道衬里中的粘蛋白颗粒形成的阴道腔的酸性粘蛋白涂层衬里，其脱落至外部腔。阴道衬里的持续翻转导致来自阴道的流出物，从而有助于病原体在女性体内寄存之前将它们清除。然而，通常阴道腔环境的低ph和低盐环境可能对精子有毒性。这种毒性在排卵期间通过宫颈管来源的分泌物向支持精子活力和运动性的更中性ph(例如，约6至约7的ph)的转变以及射精期间精子在精液中的沉积而减轻。精液具有更碱性的ph(例如，ph为约8)和更高的盐浓度(宫颈
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阴道流体(cvf)的3倍和血液的1.5倍)。排卵时阴道性交过程中精液和宫颈流体的混合在阴道穹窿中提供了中性ph和平衡的盐环境。这种环境有助于保护精子通过女性生殖道(阴道和子宫颈)。然而，如果女性生理周期的生育期后阴道腔的酸性、低盐环境没有快速恢复，则可能发生阴道生物失调。
[0045]
在生殖过程中，性二元体的共有微生物组的影响尤其显著。正在试图怀孕的性二元体通常会破坏生殖器微生物群。人类的生殖需要女性在阴道中的宿主防御与男性的射精之间优雅的相互作用，这提供了精子细胞的运输和存活，从而随后使卵子受精。生育力低下的女性具有增加水平的阴道生物失调和较差的阴道微生物组恢复力。阴茎生物失调可能会干扰精子和/或精液质量。在生育力差的夫妇中，恢复和维持健康的生殖器微生物组至关重要。此外，细菌性阴道病和其他形式的生物失调可能会增加以下风险：性传播疾病；癌症(例如，宫颈癌)；盆腔炎疾病；不孕症；流产；异位妊娠；以及不良的生殖和分娩结局。细菌性阴道病还与上生殖道生物失调相关，可能影响输卵管和子宫。上生殖道生物失调可能导致不孕症；流产异位妊娠；和妊娠并发症，包括胎膜早破、未足月产、早产、低出生体重、绒毛膜羊膜炎和子宫内膜炎。患有活跃的细菌性阴道病的孕妇具有更高的剖宫产风险。
[0046]
另外，胎儿和新生儿的微生物组由母亲
‑
胎儿、母亲
‑
儿童二元体形成。最初的胎儿微生物组是由母体生殖道微生物发展而来的。新生儿的微生物组在出生时在暴露于母体阴
道、粪便和皮肤微生物群时被接种。通过剖腹产破坏微生物组的母婴传播可能会增加后代患乳糜泻、哮喘、1型糖尿病和肥胖症的风险(参见，mueller等人,trends mol.med.21:109,2015)。
[0047]
生殖器生物失调在接受性别再分配手术的个体中也是常见的。新创造的生殖器的积极和持续管理需要日常清洁和干预，以协助这些新创造区域的健康生殖器生物群系发展(参见，weyers等人,bmc microbiol.9:102,2009)。
[0048]
另外，尿失禁、糖尿病、生殖器硬化性苔藓、间质性膀胱炎和自身免疫性病症可能会增加生殖器生物失调(thomson,j.reprod.med.50:513,2005；alam等人immune netw 14:7,2014)。患有此类疾病的个体可能对目前用于常规生殖器护理和亲昵行为的制剂中的成分或化学物质引起的疾病加重非常敏感，如a chung等人,world j urol(2019):1
‑
5中所公开。
[0049]
总体而言，这些疾病、障碍和/或病症在许多人群中均控制不佳且管理不善。此外，某些全身性疾病如痴呆(例如，与失禁和糖尿病相关)和癌症(例如，与苔藓患者的鳞状细胞癌相关)的病因学与肛门生殖器区域和/或泌尿生殖器区域的生物失调有关。
[0050]
本公开提供了可以优化生殖器健康并调节生殖器微生物组代谢的生殖器产品。本公开的局部、等渗组合物包括用于支持有益产乳酸细菌的生长、优势、恢复力和代谢的组分，和用于抑制生态失调细菌生长和代谢的组分。通过影响生殖器微生物组的代谢，有益细菌物种(例如，乳杆菌物种)的生长和代谢活性可以被增强，并且导致生殖器生物失调和疾病的细菌物种的生长和代谢可以被抑制，以恢复和维持生殖器健康。通过治疗二元体、三元体和高阶重要社会团体的所有成员，也可以改善二元体、三元体或更大社会团体的所有成员的健康。此外，处于高压力、拥挤或不卫生状况下的人，如军人、被监禁的个体、住在宿舍或避难所的人、遭受人为或自然灾害的人中的成员，也可能通过日常互动形成具有广泛共有肛门生殖器微生物群的二元体或其他社会团体。生活在此类环境中的人们可以受益于由本公开组合物提供的改善的清洁和个人护理。
[0051]
本公开的局部、等渗组合物包含益生元寡糖，其量以重量计在组合物的约0.001％至约5％范围。益生元寡糖是指寡糖底物，其诱导微生物群(例如，生殖器微生物群)的有益微生物的生长或活性。在某些实施方案中，益生元是不可消化的并抵抗人胃肠道中的胃酸和酶的分解、由生殖器微生物群(例如，有益的生殖器微生物群)选择性地发酵、选择性地靶向并刺激特定生殖器微生物群(例如，健康和/或有益的生殖器微生物群)的生长和活性，或其任何组合。
[0052]
可以将一种或多种益生元添加到组合物中。合适的益生元可以包括寡糖，特别是低聚半乳糖(gos)、帕拉金糖寡糖、大豆寡糖、低聚龙胆糖、低聚木糖、非降解淀粉、乳蔗糖、乳果糖、乳糖醇、麦芽糖醇、聚葡萄糖等。可以用于本公开组合物的益生元寡糖的实例包括棉子糖、乳果糖、海藻糖、低聚半乳糖、α
‑
葡聚糖寡糖、β
‑
葡聚糖寡糖、麦芽糖、木糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、菊粉、果胶，或其任何组合。在某些实施方案中，益生元寡糖不包括木糖。
[0053]
本公开的局部、等渗组合物还可以包含金属辅助因子。金属辅助因子可以是金属离子或其盐，其通常用作酶活性的催化剂。具体地，金属辅助因子可以辅助参与蛋白聚糖(如糖胺聚糖)糖基化的酶，其参与多种生理功能，包括屏障免疫保护、上皮水合作用并且为天然体液(如宫颈
‑
阴道分泌物、阴茎包皮分泌物、耻垢、远端尿道部分和精液)提供粘性。在
乳杆菌生长的某些条件下，金属辅助因子可能是必需的。致病菌可以螯合此类金属辅助因子，作为建立对有益生殖器微生物群的优势的行为。可以存在金属辅助因子，其量以重量计在组合物的约0.0001％至约0.1％范围。金属辅助因子可以包含锌、硒、锰、钴、铁、铜，包括其盐，或其任何组合。金属辅助因子可以作为包含抗衡离子的辅助因子金属离子的盐(例如，氯化物盐)被添加到组合物中。例如，金属辅助因子可以包含mn
2
、mn
3
、mn
4
、mn
6
、mn
7
、zn
1
、zn
2
、se
2
、se 4
、se
6
、co
2
、co
3
、fe
2
、fe
3
、cu
1
、cu
2
或其药学上可接受的盐(例如氯化物盐)，或任何前述物质的水合物。在一些实施方案中，金属辅助因子是氯化锰(ii)。应当理解，这些金属盐的一些水合物可以在局部等渗溶液中解离形成金属辅助因子。
[0054]
乙酸冰片酯是一种常见于松针、缬草根、冷杉针、铁杉、柏树、迷迭香，偶尔还有杜松子和绿薄荷中的化合物。乙酸冰片酯具有乙酰胆碱酯酶酶抑制、抗炎和镇痛活性，如针对l yang等人,biomed pharmacother 103(2018):234
‑
239、s.lu等人biomed res int 2018(2018):3589874、t zhang等人front pharmacol 8(2017):786和d szwajgier等人,curr alzheimer res 16(2019):963中所述的几种适应症所示，将其各自通过引用以其全文特此并入。在一些实施方案中，该药物组合物包含乙酸冰片酯或其药学上可接受的盐或前药。在一些实施方案中，该药物组合物包含冰片或其药学上可接受的盐或任何前述物质的前药(例如，酯前药)。本公开的组合物可以包含以重量计为组合物的多于约0.0001％的乙酸冰片酯(例如，多于约0.00025％的乙酸冰片酯、约0.0001％至约1％的乙酸冰片酯、约0.0001％至约0.5％的乙酸冰片酯、约0.0001％至约0.3％的乙酸冰片酯、约0.0001％至约0.2％的乙酸冰片酯、约0.0001％至约0.1％的乙酸冰片酯、约0.0001％至约0.001％的乙酸冰片酯、约0.001％至约0.01％的乙酸冰片酯、约0.01％至约0.1％的乙酸冰片酯、约0.1％至约1％的乙酸冰片酯、约0.01％至约0.3％的乙酸冰片酯、约0.1％至约0.3％的乙酸冰片酯、约0.00025％至约0.20％的乙酸冰片酯、0.0005％至约0.20％的乙酸冰片酯、约0.0001％至约0.15％的乙酸冰片酯、约0.00025％至约0.15％的乙酸冰片酯、约0.001％至约0.06％的乙酸冰片酯)。在一些实施方案中，该组合物可以包含以重量计为组合物的少于约0.3％(例如，少于约0.15％、少于约0.015％、约0.0001％至约0.015％、约0.00025％至约0.015％)的乙酸冰片酯。在一些实施方案中，本公开的组合物可以包含以重量计为组合物的多于约0.0001％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药(例如，乙酸冰片酯)(例如，多于约0.00025％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.0001％至约1％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.0001％至约0.5％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.0001％至约0.3％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.0001％至约0.2％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.0001％至约0.1％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.0001％至约0.001％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.001％至约0.01％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.01％至约0.1％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.1％至约1％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.01％至约0.3％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.1％至约0.3％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；约0.00025％至约0.20％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药；0.0005％至约0.20％的冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的
rzedowskii、亚利桑那州梧桐(platanus wrightii)、二球悬铃木(platanus acerifolia)，或其任何组合。
[0058]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物进一步包含类黄酮。类黄酮的量可以在约0.001％至约0.1％的范围内。类黄酮具有广泛的生物和药物活性，包括抗氧化剂和抗炎活性。在某些实施方案中，类黄酮包括儿茶素、表儿茶素、芦丁、木犀草素、芹菜素、山奈酚、杨梅素、槲皮素、槲皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮素、橙皮苷、花旗松素、染料木苷、染料木黄酮、大豆苷元、矢车菊素、芹菜定、柑橘黄酮、非瑟酮、高良姜素、异鼠李素、藿香黄酮醇、甲基鼠李素、吡喃并黄酮醇、氟烷代黄酮醇(fluranoflavonol)、圣草酚、高圣草素、花旗松素、没食子儿茶素、儿茶素3
‑
没食子酸酯、没食子儿茶素3
‑
没食子酸酯、表没食子儿茶素、表儿茶素3
‑
没食子酸酯、表没食子儿茶素3
‑
没食子酸酯、茶黄素、茶红素、原花色素、飞燕草素(dephinidin)、锦葵色素、天竺葵色素、芍药素、牵牛花色素、异黄酮、黄豆黄素、异黄烷、异黄烷二醇(isoflavandiol)、异黄烯(isoflavene)、香豆素、紫檀素、杨梅苷、根皮苷，或其任何组合。在某些实施方案中，类黄酮包括柑橘精油(例如，柑橘(citrus reticulata))，如y yang等人,j food sc 12(217):2840
‑
2846(将其通过引入以其全文特此并入)中所公开，其中单萜烃占精油总组成的至少75％或至少85％。单萜浓度可以使用如njoroge等人(journal of essential oil research 18:659,2006)(将其通过引入以其全文特此并入)所述的方法测量。
[0059]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物可以进一步包含倍半萜烯醇和/或单环倍半萜烯。倍半萜烯的量可以以重量计在组合物的约0.001％至约0.1％的范围内。倍半萜烯具有广泛的生物和药物活性，包括增加皮肤水合作用、抗微生物活性和抗真菌活性。在某些实施方案中，倍半萜烯可以包括橙花叔醇，一种来自酸橙(citrus aurantum var sp)、没药醇、广藿香醇、α
‑
檀香醇、姜烯或其组合的精油。在一些实施方案中，倍半萜烯醇或单环包含橙花叔醇，一种来自苦橙(citrus aurantum)(例如，苦橙树(citrus aurantiumvar.amata))和/或热带野生柑橘(citrus bigaradia)、没药醇、广藿香醇、α
‑
檀香醇、姜烯或其组合的精油。在某些实施方式中，倍半萜烯醇和/或单环倍半萜烯是橙花油。
[0060]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物进一步包含生物膜抑制剂。生物膜抑制剂的量可以在约0.001％至约0.16％的范围内。在某些实施方案中，生物膜抑制剂包含唇形科(lamiaceae)精油、藤黄属(garcinia)提取物、东革阿里(eurycoma longifolia)提取物，或其任何组合。唇形科精油的实例包括来自以下的精油：留兰香(mentha spicata)、唇萼薄荷(mentha pulegium)、辣薄荷(mentha piperita)、水薄荷(mentha aquatica)、野薄荷(mentha arvensis)、假薄荷(mentha asiatica)、澳洲薄荷(mentha australis)、加拿大薄荷(mentha canadensis)、哈特普列薄荷(mentha cervina)、柠檬薄荷(mentha citrata)、皱叶薄荷(mentha crispata)、兴安薄荷(mentha dahurica)、纤悉薄荷(mentha diemenica)、森林薄荷(mentha laxiflora)、欧洲薄荷(mentha longifolia)、科西嘉薄荷(mentha requienii)、花园薄荷(mentha sachalicnensis)、东北薄荷(mentha satureioides)、花叶薄荷(mentha suavenolens)、灰薄荷(mentha vagans)、香蜂花(melissa officinalis)、美国薄荷(monarda fistulosa)，或其任何组合。藤黄属植物是抗氧化剂氧杂蒽酮的来源，具有抗微生物和抗炎特性。氧杂蒽酮的实例包括y
‑
倒捻子素、藤黄酮
‑
d、藤黄苷和smeathxanthone。藤黄属提取物的实例包括来自以下的提取物：山竹
(garcinia mangostana)、garcinia travancorica、藤黄果(garcinia cambogia)、可乐藤黄(garcinia kola)、锡兰藤黄(garcinia zeylanica)、大叶藤黄(garcinia xanthochymus)，或其任何组合。
[0061]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物进一步包含细胞膜活性植物甾醇。植物甾醇的量可以在约0.001％至约0.1％的范围内。植物甾醇可以抑制致病菌的生长，并具有抑制存在于致病菌株(如某些葡萄球菌属、梭菌属和加德纳菌属)中的成孔毒素(如阴道溶细胞素、白细胞毒素和其他胆固醇依赖性细胞毒素)活性的潜力。在某些实施方案中，植物甾醇包括芹菜素、β
‑
谷甾醇、菜油甾醇、菜子甾醇、豆甾醇、谷甾醇，或其任何组合。植物甾醇来源的实例包括人参(西洋参)种子提取物、胡萝卜、山药或芫荽提取物、姜根提取物、紫茉莉(mirabilis jalap)，或其任何组合。
[0062]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物进一步包含益生元香料提取物。益生元香料提取物的量可以在约0.001％至约0.02％的范围内。示例性益生元香料提取物包括来自以下的提取物：姜、黑胡椒、辣椒、肉桂、牛至、迷迭香、姜黄，或其任何组合。
[0063]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物进一步包含增粘剂。粘度是液体的一种特性，其与流动阻力密切相关。它可以由库艾特流来定义，库艾特流是粘性流体在两个平行板之间的空间中的层流，其中一个板相对于另一个板移动。流动是由作用在流体上的黏滞力和平行于板施加的压力梯度驱动的。
[0064]
局部、等渗组合物可以包含一种或多种流变剂。在一些实施方案中，该组合物可以包含一种或多种基于非纤维素的流变剂。在一些实施方案中，局部、等渗组合物包含选自以下的流变剂：泊洛沙姆、聚丁烯、聚卡波非、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮聚合物、聚噁唑啉聚合物，及其组合。
[0065]
在一些实施方案中，本公开的组合物进一步包含一种或多种湿润剂，如甘油、己二醇、阿拉伯半乳聚糖、辛二醇，或其组合。在某些实施方案中，组合物可以包含湿润剂，其是来自水晶兰属(例如，松下兰(monotropa hypopitys))的植物提取物，如描述于yamada的日本技术号2009191075a中的那些，将其通过引入以其全文特此并入。
[0066]
在一些实施方案中，本公开的组合物进一步包含一种或多种抗炎剂和/或一种或多种舒缓剂。特定的抗炎剂和/或舒缓剂包括icam抑制剂(例如，cd11a、埃兹蛋白(ezr)、cd18、甘草次酸、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯)、nfκb抑制剂(例如，杂环噻唑、硫辛酸、依法珠单抗、4
‑
[(4
‑
甲基苯基)硫代]噻吩并[2,3
‑
c]吡啶
‑2‑
甲酰胺、水飞蓟宾、芪类、( )
‑
表没食子酰儿茶素
‑
没食子酸酯[( )
‑
egcg])、细胞因子抑制剂tslp抑制剂、il
‑
25抑制剂、il
‑
33抑制剂、il
‑
1抑制剂、tnf抑制剂(例如，tnf
‑
α抑制剂、tnf
‑
β抑制剂)、槲皮素及其同种型(例如，异槲皮素等)、非甾体抗炎药(例如，阿司匹林)，以及来自豇豆属(vign)(例如，豇豆卡拉卡拉(vigna caracalla))的植物提取物、来自杜鹃花属(rhododendron)(例如，杜鹃花科(rhododendron aceae))的植物提取物、来自如t yamada的jp 2009191075(将其通过引入以其全文特此并入)中所公开的亚科水晶兰科(如allotropa virgate)的植物提取物，及其组合。在各种实施方案中，可以存在抗炎剂和/或舒缓剂，其量以重量计在组合物的约0.0001％至约10％(例如约0.001％至约5％)。
[0067]
提取物可以通过酶提取、溶剂提取、蒸汽蒸馏或本领域已知的任何其他方法制备。在一些实施方案中，本发明的局部组合物中的至少一种包含通过蒸汽蒸馏获得的任何前述
植物和生物材料的提取物(每一种被认为是不同的实施方案)。在一些实施方案中，本发明的局部组合物中的至少一种包含通过用水(例如，碱性、中性或酸性)提取获得的任何前述植物和生物材料的提取物(每一种被认为是不同的实施方案)。提取的水可以进一步包括与水混溶的共溶剂，包括低级醇(例如，c1‑6)，如甲醇、乙醇、异丙醇、丙醇、丁醇(典型地，乙醇)。在一些实施方案中，本发明的局部组合物中的至少一种包含通过用溶剂体系提取获得的任何前述植物和生物材料的提取物(每一种被认为是不同的实施方案)，该溶剂体系包含约5％％
‑
95％(v/v)或10％
‑
90％(v/v)或20％
‑
80％(v/v)或40％
‑
60％(v/v)的水(例如，碱性、中性或酸性)和约5％
‑
95％(v/v)或10％
‑
90％(v/v)或20％
‑
80％(v/v)或40％
‑
60％(v/v)的乙醇。在一些实施方案中，本发明的局部组合物中的至少一种包含通过用有机溶剂(例如，非极性、极性非质子或极性质子)提取获得的任何前述植物和生物材料的提取物(每一种被认为是不同的实施方案)。合适的溶剂包括己烷和其他c1‑
12
或c5‑8烃、低级醇、c2‑
16
醚(例如，乙醚)、c3‑
12
酯(例如，乙酸乙酯)、c2‑
12
(例如，丙酮、丁酮)、二氧化碳(液体或超临界)。生物提取物可以在真空或大气压下干燥，以除去水和提取溶剂。生物提取物可以通过冻干法干燥。生物提取物可以通过活性炭或木炭和/或通过过滤器和/或微过滤器，以除去细菌和其他生物材料。
[0068]
在某些实施方案中，将本公开的组合物配制成具有最适合靶组织(例如，肛门生殖器区域)的粘度，并模拟正常生殖器流体的特性。例如，可以将配制成凝胶施加至粘膜的组合物设计成具有与正常粘液一致或相似的粘度值，并表现出非牛顿、剪切变稀(假塑性)流动特性。基于特征(如粘性、黏着性、峰化、橡胶性、厚度、光滑度和滑溜性)定量比较非处方阴道产品的标准化方法是本领域已知的(mahan等人,contraception,84:184,2011)。在一些实施方案中，配制成凝胶施加至粘膜的组合物可以强化粘液质量和/或身体表面的粘蛋白覆盖。在某些实施方式中，这些组合物可以刺激泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域中酸性屏障的产生或提供，并具有改善的粘膜粘附，这可以增加该组合物的一种或多种活性组分的生物利用度，并对生殖器微生物组产生有益的影响，如n peppas等人,j biomater sci polym ed.20(2209):1
‑
20中所公开，将其通过引入以其全文特此并入，并且特别是关于粘膜粘附载体的开发。
[0069]
对于施加至皮肤(如外阴、会阴或阴茎)或阴道内的组合物，可以添加一定量的增粘剂，其在施加最小的物理压力时使该组合物容易地铺展以形成薄层，并具有足够的粘度和剪切变稀特性，使得该组合物在局部施用时不会从生殖器组织中“流掉或流出”。在生殖器表面(例如，外阴、阴道、阴茎、包皮表面)处保持长时间生物活性的粘膜粘附制剂是本领域已知的(由khutoryanskiy,macromol.biosci.11:748,2011；brooks,front.chem.3:65,2015综述)。粘膜粘附制剂必须具有与生理粘蛋白和分泌物粘液主动混合和相互作用的聚合物组成。一些常见的胶凝剂不与天然粘蛋白缠结，因此不是粘膜粘附的，并且快速地从上皮中丢失。
[0070]
本公开的组合物可以包含增粘剂，其量以重量计在组合物的例如约0.05％至约10％范围。在某些实施方案中，粘度增强剂包括表面活性纤维素或树胶。表面活性纤维素和树胶也可以起到乳化作用，并将颗粒和精油拉进溶液中。在某些实施方案中，局部、等渗组合物中不需要或不包括可能对细胞具有苛刻影响的另外的表面活性剂。在某些实施方案中，增粘剂包括瓜尔胶、甲基纤维素、乙基纤维素、乙基甲基纤维素、乙基羟乙基纤维素、羧
甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)、羟乙基纤维素、十六烷基羟乙基纤维素、羟丙基瓜耳胶糖胺聚糖(例如，透明质酸)、非离子三嵌段共聚物如泊咯沙姆、明胶、藻酸盐、角叉菜胶和琼脂，或其任何组合。在一些实施方案中，这些组合物可以包含增粘剂，其包含糖胺聚糖(例如，透明质酸)、非离子三嵌段共聚物如泊咯沙姆、明胶、角叉菜胶、琼脂及其组合。
[0071]
在某些实施方案中，局部、等渗组合物可以进一步包含ph调整剂，以将组合物的最终ph调节至靶或所需ph。ph调节剂可以包含酸化剂、碱化剂和/或酸化剂和碱化剂两者。在某些实施方案中，ph调整剂的量在约0.01％至约1％的范围内。示例性酸化剂包括但不限于有机酸，如柠檬酸、乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、己酸、草酸、马来酸、苯甲酸、碳酸等。示例性碱化剂包括氨、碳酸铵、二乙醇胺、单乙醇胺、氢氧化钾、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、硼酸钠、碳酸钠、氢氧化钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、三乙醇胺，或其任何组合。在某些实施方案中，局部、等渗组合物的ph被配制成与正常、生理流体ph(例如，宫颈
‑
阴道分泌物、精液)或生殖器组织的上皮表面，或肛门生殖器上皮(例如，粘膜、皮肤)相匹配的ph。在某些实施方案中，局部、等渗组合物的ph小于约6.8或小于约6.5或小于约6.2或小于约6.0或小于约5.7或小于约5.5。在某些实施方案中，局部等渗组合物的ph是约3.5至约7.5、约3.5至约6.8、约3.5至约6.0、约3.5至约5.7，或约6至约8。在具体实施方案中，局部、等渗组合物的ph是约4.5、约5、约6.5或约6.8。具有约3.5至约6的ph的局部、等渗组合物特别适合施用至年龄为青春期至绝经期/男性更年期(例如，约18岁至约50岁)的受试者，或至少一岁的儿童。在某些实施方案中，用于施用至大于约12岁(例如，约12岁至约50岁、大于约50岁、大于60岁、大于70岁、大于80岁、大于90岁、大于100岁)的受试者的等渗、局部组合物在泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域中具有约4.5或约4.8的ph。在某些实施方案中，用于施用至至少一岁儿童的等渗、局部组合物在泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域中具有约5的ph。具有约5至约7的ph的局部、等渗组合物特别适合施用至年龄小于约12个月大的婴儿、约18岁至约50岁试图怀有孩子的受试者，或至少约60岁的老人。在某些实施方案中，用于施用至婴儿的局部、等渗组合物在泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域中具有约6.5的ph。在某些实施方案中，用于施用至约18岁至约50岁试图怀有孩子的受试者的局部、等渗组合物在泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域中具有约6.8的ph。
[0072]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物进一步包含缓冲剂。缓冲剂的量可以以重量计在组合物的约0.01％至约0.9％的范围内。缓冲剂是指一种化合物或化合物的混合物，当存在于溶液中时，其在添加少量酸或碱时或用溶剂或体液稀释时抵抗溶液ph的变化。缓冲容量是在向溶液中添加酸或碱时对溶液ph变化的抵抗力的量度。选择缓冲剂(例如，共轭酸碱对)的总量，使得组合物的ph维持在所需的ph或ph值范围内。因此，缓冲能力的量越大，则组合物的ph越耐变化。在某些实施方案中，缓冲剂含有中和氢氧(oh
‑
)离子的酸性物质和中和氢(h

)离子的碱性物质。然而，缓冲剂的酸性和碱性物质不应通过中和反应相互消耗。
[0073]
在某些实施方案中，缓冲剂是包含弱酸和弱酸盐或弱碱和弱碱盐的简单缓冲溶液。因此，缓冲剂可以包括弱酸
‑
碱共轭对或弱碱
‑
酸共轭对。弱酸/弱酸盐和弱碱/弱碱盐对的实例包括柠檬酸/柠檬酸钠、乳酸/乳酸钠、乙酸/乙酸钠、磷酸一钠/磷酸二钠、丙酸/丙酸钠、丁酸/丁酸钠、碳酸/碳酸氢钠、苹果酸/苹果酸钠、抗坏血酸/抗坏血酸钠、苯甲酸/苯甲
酸钠、琥珀酸/琥珀酸钠和硼酸钠/硼酸。在某些实施方案中，缓冲剂包含不相关的弱酸
‑
碱对。此类组合的实例包括磷酸二钠/柠檬酸、磷酸二钠/乳酸、磷酸一钠/乳酸钠、磷酸一钠/柠檬酸钠、柠檬酸钠/乳酸、乳酸钠/柠檬酸、磷酸二氢钾/柠檬酸、磷酸二氢钾/乳酸、磷酸二氢钾/乳酸钠、磷酸二氢钾/柠檬酸钠、柠檬酸二氢钾/乳酸和乳酸钾/柠檬酸。另外，对于多价阴离子，可以使用钙盐而不是钠盐(例如，柠檬酸钙)。实例缓冲剂还可以包括葡萄糖酸内酯/葡萄糖酸。
[0074]
在某些实施方案中，选择缓冲剂，使得缓冲剂的酸形式具有与组合物的所需ph相同或接近的pka，或在所需ph值范围内的ph，对生理上出现在生殖器区域的表面和流体(例如，阴道粘蛋白
‑
酸性屏障、宫颈
‑
阴道分泌物、精液、月经流或其组合)具有相似的缓冲能力，或维持靶上皮表面的ph(rastogi等人,contraception.93:337,2016)。在某些实施方案中，缓冲剂包含单羧酸盐、二羧酸盐、羧酸或其组合。在一些实施方案中，缓冲剂可以包含乙酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、硝酸盐、磷酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、氨丁三醇或其任何组合。在一些实施方案中，缓冲剂包含乳酸、乳酸钠、磷酸钠(一元、二元或两者)、磷酸钾(一元、二元或两者)、柠檬酸钠、柠檬酸钾、柠檬酸钙、乙酸、乙酸钠、柠檬酸、柠檬酸二钠、柠檬酸三钠、硼酸/钠、琥珀酸、琥珀酸钠、葡萄糖酸内酯、琥珀酸二钠、酒石酸、酒石酸钠、抗坏血酸钠、抗坏血酸、氨丁三醇(tris)或其任何组合。在某些实施方案中，缓冲剂包含柠檬酸和磷酸二钠、乳酸和乳酸钠、葡萄糖酸内酯或磷酸一钠或磷酸二钠和乳酸。
[0075]
本公开的局部组合物对它们将接触的靶生殖器流体或组织是特别等渗的。张力是由半透膜隔开的两种溶液的有效渗透压梯度(如由两种溶液的水势所定义)的量度。在描述浸入外部溶液中的细胞的响应时通常使用张力。换句话说，张力是溶液的相对浓度，其决定了流体通过组织中的细胞膜扩散的方向和程度。血液通常具有对应于0.9％氯化钠溶液的渗透压(约280mosm/kg)。然而，发生在生殖器区域的生理流体的渗透压可以变化很大，从宫颈
‑
阴道流体的低端(例如，约128mosm/kg)至经血的约280mosm/kg，至精液的更高水平(例如，约320 mosm/kg)。当组合物(例如，溶液或凝胶)的张力与它将接触的生理流体的张力相匹配时，它被认为是等渗的。当盐(离子)的量在组合物与生理流体之间相等时，该组合物与体液等渗。在生理流体中，张力平衡通过水移动穿过细胞膜，但盐和离子留在它们原来的流体中而达到。当活细胞与溶液接触时，如果细胞没有水的净增加或损失，或者细胞超微结构没有其他变化，即使单个水分子可以自由地移动穿过细胞膜，所述溶液也与活细胞等渗。
[0076]
高渗溶液导致水从细胞中净移动(随着水移动，与细胞外的高盐水平形成平衡)。细胞的这种脱水是浓度依赖性的，并导致渗透应力，这可以增加活性氧物种、引起细胞支架重排，并在暴露的几分钟内损害dna和线粒体功能。大多数目前的生殖器产品是高渗的，在接触时导致上皮细胞和精子死亡。低渗溶液导致水净流入细胞，并导致细胞破裂和死亡。生理流体中的盐含量与血液和组织中发现的盐含量之间的一些偏差可能有所帮助。例如，作为正常阴道功能的一部分，宫颈
‑
阴道流体的较低渗透压促进阴道上皮细胞溶解和死亡。在另一个实例中，精液的较高渗透压可以保护精子细胞免受在阴道内射精和阴道性交期间流体混合后宫颈
‑
阴道分泌物的较低渗透压的影响。
[0077]
与张力有关的是渗透，其是溶剂通过半透膜从溶质浓度较高的区域移动到溶质浓度较低的区域，以产生平衡。溶液的渗透压是阻止溶剂流过半透膜所必须施加的压力。
handbook of food,drug,and cosmetic excipients,crc press llc(s.c.smolinski编,1992)中描述。
[0091]
本公开的组合物可以配制成液体、半固体、肥皂、凝胶、胶状物、膜、泡沫、乳膏、灌洗剂、软膏、洗剂、喷雾剂、气雾剂、悬浮液、乳液或糊剂。在某些实施方案中，局部、等渗组合物以单次使用或单位剂量形式配制。
[0092]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物被整合到卫生棉条、阴道环、宫颈杯、隔膜、避孕套、擦拭物、橡皮布、内衣或尿布中。在某些实施方案中，使用注射器、滚球、泡沫分配器、喷雾瓶、气雾剂分配器或泵分配器来施用局部、等渗组合物。
[0093]
在某些实施方案中，本公开的组合物被整合到微生物群样品收集和回收系统(如无菌拭子或细胞刷)中。在某些实施方案中，本公开的组合物用于促进来自健康供体的所需胃肠道、阴道、生殖器、生殖道、泌尿道和/或肛门生殖器微生物群的移植、储存和培养，以用于治疗受影响接受者的微生物生物失调。例如，可以从健康使用者的阴道中收集使用本公开组合物的阴道冲洗剂，并转移到肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域具有生态失调微生物组的受试者，以促进有益的微生物组移植。此类流程描述于a lev
‑
sagie,et al.,nature medicine 25(2019):1500
‑
1504中，将其通过引用以其全文特此并入。在另一个实例中，使用本公开的组合物，父母可以使用擦拭物来收集有益的生殖器微生物组物种，以经由局部施用将这些物种转移到通过剖腹产出生的婴儿。在某些实施方案中，该组合物专为个体接受者和供者的特征而定制，以使微生物群移植对每个个体的功效最大化(例如，可以将该组合物配制用于在使用者微生物组中产生特定细菌)。在某些实施方案中，该组合物将维持有益的微生物，如嗜酸乳杆菌、詹氏乳杆菌、加氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、短乳杆菌、干酪乳杆菌、德氏乳杆菌、阴道乳杆菌、唾液乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌，及其组合。另外，在收集与植入之间的时间间隔期间，组合物也可以维持以下其他细菌物种：纤毛菌属、明串珠菌属、片球菌属、艾克曼菌属(akkermansia)、链球菌属、粪杆菌属(faecalibacterium)和魏斯氏菌属。在某些实施方案中，本公开的组合物可以抑制和/或最小化具有致病性或可能具有致病性的生物体的生长，包括物种惰性乳杆菌，或来自以下的物种：普氏菌属、埃格特菌属、加德纳菌属、奇异菌属、巨球菌属、动弯杆菌属、mageeibacillus菌属、孪生菌属、韦荣氏球菌属、sneathia、梭菌属，及其组合。生长抑制和/或最小化可能发生在微生物移植样品储存介质中。
[0094]
在某些实施方案中，本公开的组合物可以用于添加并促进与卫生棉条和/或可重复使用的硅装置(如月经杯)相关的植入过程，以用于控制女性的自然月经流量或产后恶露。还提供了试剂盒，其包括用于插入阴道以控制自然月经流量的装置，如卫生棉条和/或这些可重复使用的硅装置，其中该装置包装在本公开的组合物中。例如，这些组合物可以用用于卫生棉条润滑剂的ph平衡凝胶配制。这些凝胶可以含有乳酸缓冲液，该乳酸缓冲液被设计成将阴道ph维持在3.8与4.2之间约5至约10小时或约6至约9小时或约8小时。
[0095]
这些组合物可以用热响应性聚合物配制，这些热响应性聚合物经历相变，表现出响应于体温、ph和生理环境中存在的特定离子的溶胶
‑
凝胶转变。此类热响应性聚合物可以延长组合物在泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域(例如，阴道)中的停留时间。示例性热响应性聚合物包括泊洛沙姆、苯乙烯
‑
丁二烯嵌段共聚物、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑聚氯乙烯、增塑尼龙、增塑聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚乙烯、聚丙烯腈、聚三氟
氯乙烯、聚
‑
4,4'
‑
异丙烯二亚苯基碳酸酯、聚乙烯乙烯基酯、聚氯乙烯
‑
富马酸二乙酯，及其组合。
[0096]
在各种实施方式中，这些组合物进一步包含一种或多种缓释聚合物。合适的缓释聚合物包括海藻酸钠(例如，含氯化钡)、氯化钡、聚
‑
l
‑
赖氨酸、聚乙烯胺、硫酸鱼精蛋白，及其组合。
[0097]
阴道环或阴道栓是插入阴道以实现活性组分受控释放的装置。药物阴道环可以由382医用级弹性体制成。阴道环最常用的聚合物是聚(二甲基硅氧烷)或硅装置，或乙烯醋酸乙烯酯。另外，可生物降解的聚合物(如聚己内酯)已用于制备这些装置。这些通常是聚合物环，其中药物(例如，冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药，如乙酸冰片酯，益生元寡糖，金属辅助因子)和/或组合物均匀地分散。为了实现持续释放，典型地开发了两种类型的系统用于阴道环：夹层和储层类型。在夹层类型中，活性组分的窄层被放置在非药物中心核心与非药物外带之间。在储层类型中，具有活性组分的中心核心被无药物聚合物层(例如，羟丙甲纤维素)包封。
[0098]
这些组合物和/或活性成分(例如，冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药，如乙酸冰片酯，益生元寡糖，金属辅助因子)也可以被配制到阴道栓剂、胚珠或阴道栓中。在这些实施方案中，该阴道栓剂、胚珠或阴道栓可以用以下配制：合成甘油三酯(例如，witepsol h
‑
15)、羟丙甲纤维素、聚乙二醇聚合物(例如peg 1000、4000)、山梨糖醇单硬脂酸酯(span 60)、peg
‑
35蓖麻油、peg 400、peg 3350、可可脂、聚乙烯亚胺的混合物；甘油一酯/甘油二酯和甘油三酯(例如suppocire、ovucire)、琼脂、丙二醇、羟丙甲纤维素、明胶、甘油、可可脂、蜂蜡、聚氧乙烯40硬脂酸酯、聚乙烯醇、甲基丙烯酸羟乙酯、聚丙烯酸、聚氧乙烯的混合物；及其组合。
[0099]
在一些实施方案中，该组合物可以被配制成乳液。该乳液可以是例如，油包水、水包油、水包硅、硅包水、油包多元醇、多元醇包油、油包甘油、甘油包油、甘油包硅、硅包甘油、多元醇包硅，或硅包多元醇乳液。本公开的局部等渗制剂可以用作乳液的水相(例如，内相、不连续相)。在乳液中，应当理解，本文所用组分(例如，冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药，如乙酸冰片酯，益生元寡糖，金属辅助因子)的重量百分比是指组合物的重量百分比(而不是相本身的重量百分比)。非水相可以包含饱和(月桂酸、肉豆蔻酸和癸酸)和不饱和脂肪酸(油酸、亚油酸和亚麻酸)、表面活性剂和辅助表面活性剂。乳液中的示例性组分包括脱水山梨糖醇油酸酯(span80)、脱水山梨醇三油酸酯(span85)、聚乙二醇山梨糖醇单月桂酸酯(tween80)、大豆油、角鲨烯、卵磷脂、油酸、中链甘油三酯、聚氧乙烯40氢化蓖麻油、聚氧乙烯35蓖麻油、甘油、丙二醇，及其组合。
[0100]
在某些实施方式中，该乳液是皮克林乳液。典型地，皮克林乳液是通过固体颗粒稳定的乳液，这些固体颗粒包括纳米纤维素、氧化石墨烯、碳纳米管、碳灯黑、锂皂石、蒙脱石、二氧化硅纳米颗粒、碳酸钙、二氧化钛、磁性颗粒、聚合物颗粒，及其组合。
[0101]
在一些实施方案中，这些组合物或活性成分(例如，冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药，如乙酸冰片酯，益生元寡糖，金属辅助因子)被配制成片剂。例如，该组合物可以是片剂形式，如基于壳聚糖和/或海藻酸钠的生物粘附片剂。在某些实施方案中，该片剂进一步包含粘膜粘附剂。这些组合物或活性成分(例如，冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药，如乙酸冰片酯，益生元寡糖，金属辅助因子)可以被配制成阴道
生物粘附片剂。阴道生物粘附片剂可以包含羟丙基纤维素、聚丙烯酸、卡波姆
‑
934(carbopol
‑
934)，及其组合。
[0102]
在一些实施方案中，这些组合物或活性成分(例如，冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药，如乙酸冰片酯，益生元寡糖，金属辅助因子)被配制成脂质体(例如，阴道脂质体)。阴道脂质体包括基于卵磷脂的脂质体，其可以结合生物粘附卡波姆水凝胶。在一些实施方案中，该组合物包含泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的热敏凝胶，并且是负载活性成分(例如，冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药，如乙酸冰片酯，益生元寡糖，金属辅助因子)的阳离子脂质体的形式。
[0103]
本公开的组合物(例如，凝胶)、涂抹器和/或试剂盒可以经受臭氧灭菌。其中由于臭氧气体的氧化潜力，本公开的实施方案可以暴露于臭氧气体。改变不同工艺参数(例如，暴露时间、气体浓度、湿度)的可能性允许灭菌方案适应不同类型的材料。
[0104]
根据本公开的示例性制剂在表1
‑
7中提供。
[0105]
表1：润滑剂，ph 4.5，渗透压150mosm/kg
[0106][0107][0108]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比可以通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。例如，在此实施方案中，该组合物可以包含如由mncl2·
4h2o(mw＝197.9g/mol)添加的0.0046％(w/w)mncl2(mw＝125.9g/mol)。因此，每
100g制剂添加0.00723g水合物。
[0109]
表2：发泡凝胶，ph 4.5，渗透压120mosm/kg
[0110][0111][0112]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比可以通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0113]
椰油酰胺丙基甜菜碱的指定重量百分比是来自可向每种溶液中添加的36％的椰油酰胺丙基甜菜碱溶液的重量百分比。
[0114]
表3：擦拭制剂，ph 6.5(婴儿0
‑
12个月)或ph 5(儿童>1岁)，180mosm/kg
[0115][0116][0117]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比可以通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0118]
椰油酰胺丙基甜菜碱的指定重量百分比是来自可向每种溶液中添加的36％的椰油酰胺丙基甜菜碱溶液的重量百分比。
[0119]
表4：润滑剂，ph 6.8，渗透压340mosm/kg
[0120][0121][0122]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比可以通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0123]
表5：灌洗制剂，ph 4.5
[0124][0125]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比可以通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0126]
表6：灌洗制剂，ph 4.5
[0127]
[0128][0129]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比可以通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0130]
表7：发泡凝胶制剂，ph 4.6
[0131]
[0132][0133]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比可以通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0134]
椰油酰胺丙基甜菜碱的指定重量百分比是来自可向每种溶液中添加的36％的椰油酰胺丙基甜菜碱溶液的重量百分比。
[0135]
应当理解，组分可以具有多种用途，如本文所述的那些。例如，柠檬酸可以被认为是ph调整剂和缓冲剂。
[0136]
体外和体内活性
[0137]
(1)评估生殖器微生物群
[0138]
为了评估本公开的局部、等渗组合物是否对生殖器微生物群有害，可以使用本领域已知的方法进行正常生殖器微生物群的测试。
[0139]
本文公开的任何组合物对生殖器微生物群(例如，乳杆菌物种)的影响可以通过测量最小抑制浓度(防止微生物过夜培养后可见生长的最低浓度)或最小杀微生物浓度(将培养物的活力降低99.99％所需的最低浓度)来确定。
[0140]
在一些实施方案中，本文公开的任何组合物对生殖器微生物群(例如，乳杆菌物种)的影响可以通过dna提取和16s rrna基因测序来确定，并且阴道微生物组的操作分类单位(otu)分配和群落状态(cst)可以在施用后使用jensen
‑
shannon散度和ward连锁层次聚类来定义，如x hong等人,peerj 7(2019):e8131中所公开，将其通过引用以其全文特此并入。
[0141]
以下体征和症状均与生殖器微生物组功能相关，并且可以用于测定产品的有效性。阴道感染与生殖器微生物组的乳杆菌优势高度相关。可以通过在用于检测念珠菌病的氢氧化钾和用于检测运动性滴虫和线索细胞的盐水中检查湿涂片来确定感染。细菌性阴道病(bv)也与乳杆菌优势相关。患有bv的女性具有生殖器微生物组的生物失调。可以根据amsel临床标准或nugent测试或h2o2和白细胞酯酶水平来评估bv诊断。典型地，健康的阴道微生物组将具有较低水平的bv或其他感染。bv诊断测试包括：nugent评分、amsel标准、线索细胞存在、气味测试和更新诊断测试(aptima细菌性阴道病和aptima念珠菌/滴虫阴道炎测定)。“amsel标准”要求bv满足以下四个标准中的三个：第一，阴道ph大于ph 4.5；第二，阴道流体中存在线索细胞；第三，乳白色、均匀的阴道分泌物；最后，在向阴道流体中添加10％氢氧化钾后释放出胺(鱼腥)气味。实验室诊断bv的合适方案包括d.money.can j infect dis med microbiol 16(2005):77
‑
79中公开的那些，将其通过引用以其全文特此并入，并且特别是关于bv诊断方案。
[0142]
使用该产品后的阴道分泌物测量也可以使用比色或其他测定来测量，以用于增加d
‑
乳酸和/或淀粉酶作为健康微生物组的指标，如j leizer等人,reprod sci.25(2018):854
‑
860或d nasioudis等人,reprod.sci 22(2015):1393
‑
1398中所公开。
[0143]
阴道乳杆菌优势也与高风险hpv感染和持续性、生殖器疱疹和hiv感染有关。测量
患者的std水平可能有助于确定凝胶的功效。若干报道已显示，具有健康生殖器微生物组的女性cvf中的抗hiv水平较高，如m torcia,int j mol sci 20(2019):e266,s placios等人,minerva ginecol 70(2018):138
‑
143和r hemalatha等人,indian j med res 138(2013):354
‑
359中所示，将其各自通过引用以其全文特此并入。
[0144]
阴道ph可以通过石蕊试纸、阴道手套、电极或纳米传感器来测量，如美国专利号10,436,745中所公开，将其通过引用以其全文特此并入，并且特别是关于ph纳米传感器。这些测量可以用于评估令人烦恼的阴道症状和感染。例如，阴道ph升高对于检测女性的bv和生物失调是相对敏感的。
[0145]
在没有乳杆菌优势的女性中，阴道令人烦恼的症状表现可能会增加。阴道症状水平和性功能可以在产品使用后使用公布的工具进行跟踪，如b ettinger等人,menopause 5(2008):885
‑
889中所公开，将其通过引用以其全文特此并入。此外，阴道代谢组学可以用于确定生殖器微生物组的健康，如t.nelson,front physiol 6(2015):253中所公开，将其通过引用以其全文特此并入。
[0146]
生物胺和代谢物也是bv和生物失调的生物标记物，因为它们通过以下促进bv相关阴道分类群的生长：(i)消耗细胞内氢离子并改变细菌耐酸性的氨基酸脱羧作用；(ii)限制宿主免疫对泌尿生殖器病原体的生长和抗性；和iii)与许多宿主疾病状态(包括std、癌症和痴呆)相关。为了测量，可以在无菌分子水中从阴道拭子洗脱样品，并进行液体和气相色谱质谱分析。
[0147]
致病菌的存在也可以通过测量在使用本公开组合物后从受试者获得的阴道洗液中内毒素、lps的浓度和致病菌的数量来评估(参见例如，aroutcheva等人,anaerobe 14:256,2008)。高lps浓度产生有毒的阴道环境，从而导致上皮和配子(例如精子)损伤。即使非常低水平的lps(例如，0.1μ/mg)也会快速影响精子功能(参见，li等人,tohoku journal of experimental medicine 238:105,2016，将其通过引用以其全文并入本文)。
[0148]
可以用于评估暴露于本公开的局部、等渗组合物后生殖器微生物群变化的其他方法包括利用纳米孔dna测序(参见例如，romero等人,microbiome 2:4,2014；macklaim等人,microb.ecol.health dis.26:27799,2015)、物种特异性定量pcr(zozaya
‑
hinchliffe等人,j.clin.microbiol.48:1812,2010，将其各自通过引用以其全文并入本文)和使用从受试者(例如，洗液、拭子)获得的细菌样品的系统发育微阵列(paliy和agans,fems microbiol.ecol.79:2,2012；chen等人,nat commun.8:875,2017，将其各自通过引用以其全文并入本文)，进行16s rrna基因测序、鸟枪法宏基因组基因测序、微生物/宿主代谢组学分析和第三代测序。
[0149]
在某些实施方案中，本公开的组合物不会使正常生殖器微生物群群体在暴露于待在受试者体内使用的组合物浓度或量时(例如，卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌，或其任何组合)减少多于约35％、约30％、约25％、约24％、约23％、约22％、约21％、约20％、约19％、约18％、约17％、约16％、约15％、约14％、约13％、约12％、约11％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％。
[0150]
在某些实施方案中，本发明的组合物不会干扰产酸细菌的生长和生殖器微生物组(例如，乳杆菌)的流体或溶液的功能培养基酸化(参见，boskey等人,infect immun.67:5170,1999，将其通过引用以其全文并入本文)。
[0151]
在某些实施方案中，本公开的组合物不会促进肛门生殖器区域的致病菌生长多于约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约25％、约30％或约35％。在某些实施方案中，该致病菌选自普氏菌属、埃格特菌属、加德纳菌属、奇异菌属、巨球菌属、mageeibacillus菌属、动弯杆菌属、拟杆菌属、消化链球菌属(peptostreptococcus)、梭菌属、、韦荣氏球菌属、卟啉单胞菌属和真杆菌属(eubacterium)的致病菌株。
[0152]
(2)评估生殖器刺激、炎症和细胞死亡
[0153]
生殖器组织(如阴道粘膜或阴茎包皮细胞)的刺激、炎症或细胞死亡，可以使用以下在体外或体内进行评估：人类或动物阴道
‑
外宫颈、尿道或包皮组织外植体；阴道、宫颈或外阴细胞单层；阴茎上皮或尿道上皮；皮肤细胞单层；蛞蝓粘膜刺激测定；或其他等效方法。
[0154]
例如，蛞蝓粘膜刺激测定(smi)是检测即便是轻度的粘膜刺激的效力的敏感系统(adriaens等人,sex.transm.dis.35:512,2008，将其通过引用以其全文并入本文)。smi测定使用蛞蝓(西班牙蛞蝓(arion lusitanicus))作为测试生物体。蛞蝓的体壁由粘膜表面组成，该粘膜表面包括覆盖上皮下结缔组织的粘液分泌细胞。放置在刺激性物质上的蛞蝓将主动地产生粘液，作为抵御有害物质的保护机制。另外，蛞蝓表面的组织损伤导致蛋白质和酶的释放。用蛋白质定量试剂盒测定所收集样品中的蛋白质浓度。与阴性对照相比，如果本公开的组合物不导致粘液产生增加，或蛋白质和酶释放增加，则认为其是无刺激性的。
[0155]
从正常人类来源的阴道
‑
外宫颈上皮细胞产生的人类器官型阴道
‑
外宫颈组织模型也可以用于评估局部施加产品的刺激性，宫颈或阴道上皮单层也是如此(ayehunie等人,toxicology 279:130,2011；ayehunie等人,2007,toxicology 279:130,2007；trifonova等人,antimicrob.agents chemother.50:4005,2006；fichorova等人,mbio 2:e00168,2011，将其各自通过引用以其全文并入本文)。细胞损伤标记物的释放(例如，cd4、il
‑
1β、cxcl8、ccl2、ccl21、emp1增加；bpi降低)和炎症介质(如il
‑
1、il
‑
8、tlr4)的产生可以用作刺激和促炎症的标记物(还参见，fichorova等人,toxicol.appl.pharmacol.285:198,2015；doncel等人,j.acquir.immune defic.syndr.37(suppl.3):s174,2004；fichorova等人,biol.reprod.71:761,2004；moench等人,bmc infect.dis.10:331,2010，将其各自通过引用以其全文并入本文)。上皮完整性和免疫功能的生物标记物已在阴道产品安全性的多项临床研究中得到验证(mauck等人,aids res.hum.retroviruses 29:1475,2013；fichorova等人,mbio,6:e00221,2015；fichorova等人,cytokine 55:134,2011；mauck等人j.acquir.immune defic.syndr.49:243,2008；morrison等人,j.acquir.immune defic.syndr.66:109,2014；schwartz等人,contraception 74:133,2006；keller等人,j.antimicr.chemother.51:1099,2003，将其各自通过引用以其全文并入本文)。如果本公开的组合物不会导致多于25％的细胞损伤标记物的释放或促炎介质的表达高于阴性对照(例如，合成的tlr2/6配体)所导致的水平，则可以认为该组合物是非刺激性和非炎性的。在一些实施方案中，与对照相比，如果将本公开的组合物施用到特定区域不会增加炎性体和/或细胞因子的产生(例如，多于约1％、多于约5％、多于约10％、多于约15％、多于约20％、多于约25％)，则可以认为该组合物对生殖器皮肤和/或粘膜是非刺激性和非炎性的。例如，对照参考水平可以是所指示的生物标记物的水平，该水平表示为取自健康受试者对照群体的样品的生物标记物水平的平均值。在一些实施方案中，对照参考水平可以是所指示的生物
标记物的水平，该水平表示为从给定对照制剂的受试者测量的生物标记物水平的平均值。用于确定参考水平的合适的样品或参考包括健康细胞。在一些实施方案中，用于确定所指示的生物标记物的参考水平的参考可以源自受试者、健康受试者或受试者群体。
[0156]
在将生殖器组织或流体暴露于用于清洁和润滑肛门生殖器区域的组合物后，可以确定来自阴道上皮细胞的健康粘蛋白和粘液，以及粘蛋白调节酶的产生(糖苷酶)。目前的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器产品可能通过改变粘蛋白的产生和增强粘蛋白降解来破坏生殖器皮肤表面或阴道、阴茎和尿道粘膜的天然粘液保护屏障。特别地，粘蛋白降解可能发生在暴露于某些致病菌或用于生殖器区域的产品中常见的某些成分(例如，卡波姆和油)之后。在暴露于本公开的组合物后，可以通过测试使用覆盖宫颈底部的softcup或类似月经杯装置收集的cvf样品，并进行用于测量粘蛋白的elisa测定(酶联免疫吸附测定)和用于测量碳水化合物结构的ella测定(酶联凝集素测定)来确定阴道的粘蛋白质量，如moncla等人(plos one 11:e0158687,2016，将其各自通过引用以其全文并入本文)所述。可以进行糖苷酶测定以测量酶的比活性，如moncla等人(plos one 11:e0158687,2016，将其各自通过引用以其全文并入本文)所述。如果本公开的组合物不抑制粘液粘度或产生(例如，多于约1％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％或约35％)，或增加糖苷酶的产生(例如，多于约1％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％或约35％)，则认为该组合物对生殖器粘蛋白和粘液无害(参见，moncla等人,plos one 11:e0158687,2016，将其通过引用以其全文并入本文)。还可以在阴道感染易感性模型(如小鼠生殖器疱疹传播模型)中测试本公开组合物的效果(参见例如,moench等人,bmc infect.dis.10:331,2010)。对感染传播的易感性增加可能是由阴道上皮细胞的损伤引起的。
[0157]
使用组织模型(例如人类外植体或细胞单层)的局部组合物对组织活力的影响也可以使用mtt比色测定技术来评估。mtt测定是用于评估细胞代谢活性的比色测定。在限定条件下，nad(p)h依赖性细胞氧化还原酶可以反映存在的活细胞的数量。这些酶能够将四唑鎓染料mtt 3
‑
(4,5
‑
二甲基噻唑
‑2‑
基)
‑
2,5
‑
二苯基四唑鎓溴化物还原成其不可溶的甲瓒，其具有紫色。mtt测定可以用于测量组合物的细胞毒性或对细胞活力的影响(ayehunie等人,2011)。
[0158]
另外，组织的氧化应激和抗氧化剂潜力可以通过常用方法(如tbars测定)来确定，以评估各种实施方案对组织健康的影响。因为活性氧(ros)具有极短的半衰期，因此它们难以直接测量。相反，由氧化应激产生的损害的几种产物，如硫代巴比妥酸反应物质(tbars)可以被测量。tbars作为脂质过氧化的副产品(即，作为脂肪的降解产物)形成，其可以通过使用硫代巴比妥酸作为试剂的tbars测定来检测。
[0159]
体内兔阴道刺激(rvi)模型也可以用于评估制剂的刺激和炎症特征(eckstein等人,j.reprod.fertil.20:85,1969)。此模型基于对红斑、水肿和溃疡的宏观观察，以及对动物暴露于测试材料后收集的组织的组织病理学分析。与对照媒介物相比，本公开的非刺激性和安全的组合物不会显示出负面的宏观或组织病理学影响。还描述了一种扩展的rvi模型，其具有定量核酸酶保护测定(qnpa)，以量化代表白细胞分化标记物、toll样受体(tlr)、细胞因子、趋化因子、上皮修复、杀微生物剂和血管标记物的25个基因的mrna水平(参见，fichorova等人,toxicol.appl.pharmacol.285:198,2015)。
[0160]
可以使用敏化测试评估本公开的组合物在长时间暴露后在受试者中引起致敏作
用或过敏反应的可能性。示例性测试包括豚鼠测试，如magnusson
‑
kligman豚鼠最大化测试(j.invest.dermatol.52:268,1969)、buehler的闭塞斑贴测试(arch.dermatol.91:171,1965)，和开放上皮测试(kero等人,contact dermatitis 6:341,1980)。鼠局部淋巴结测定(llna)是另一种用于鉴定皮肤敏化化学物质的方法。与豚鼠测试相反，此测定依赖于皮肤敏化、特别是引流淋巴结中的淋巴细胞增殖(这是皮肤敏化反应的标志)的诱导期而不是诱发期所诱导事件的测量，(kimber等人,contact dermatitis 21:215,1989；basketter等人,food chem.toxicol.34:985,1996)。人重复性损伤斑贴测试(hript)可以作为皮肤敏化剂安全性评估中的验证性测试进行。敏化是一个过程，通过该过程，人类通过反复暴露于某种物质，随着时间推移对该物质产生增加的过敏反应。它与刺激不同，因为它涉及免疫应答。皮肤敏化反应通常以红斑伴有各种皮肤后遗症(如水肿、丘疹、水疱、大疱和/或瘙痒)中的一种或多种为特征(mcnamee等人,regul.toxicol.pharmacol.52:24,2008)。
[0161]
在又一个实例中，在使用本公开的组合物后对女性进行体内阴道镜检查可以鉴定炎症或刺激的迹象。用户调查也可以用于对相同的症状进行评分(van damme等人,lancet 360:971,2002；bunge等人,j.acquir.immune defic.syndr.60:337,2012)。
[0162]
刺激性局部产品可能触发促炎细胞因子(例如，tlr、il
‑
1、il
‑
6、il
‑
8、tnf
‑
α、ifn
‑
γ、il
‑
17)和炎性体(例如，nlrp3和nlrc4)的释放。细胞因子和炎性体可以使用酶联免疫吸附测定(elisa)、定量pcr或其他分子测定来测量。如果一种产品不引起促炎细胞因子或炎性体的表达增加，则认为该产品是非炎症性的(rabeony等人,eur.j.immunol.45:2847,2015)。
[0163]
在某些实施方案中，与未治疗的对照受试者相比，本公开的组合物不会在受试者的肛门生殖器区域中诱导大于约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％、约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％或约30％的刺激或炎症可能性，优选地如使用adriaens等人(2008)的蛞蝓粘膜刺激测试所测量。
[0164]
在某些实施方案中，本公开的组合物不会影响精子活力或功能。在某些实施方案中，本公开的组合物被设计成在女性排卵前后的能育窗口期模拟阴道环境，并且不会对精子活力或功能产生负面影响。用于评估精子存活和功能的测定或模型，包括例如，精子运动性测定(例如，主观或计算机辅助)、精子活力研究、体外受精和胚胎发育动物模型、精子的膜完整性、培养中存活时间、宫颈粘液渗透、脂质过氧化、精子获能、透明带识别、顶体反应和精子
‑
卵母细胞融合，以及精子染色质测试(在例如，vasan,indian j.urol.27:41,2011；oehninger等人,fertil.steril.102:1528,2014；mortimer等人,hum.reprod.update 19(增刊1):i1
‑
i45；2013中综述，将其各自通过引用以其全文并入)。另外的测试可以包括性交后测试，以评估宫颈管中精子的存在，甚至动物模型或临床试验中女性的妊娠结局。
[0165]
精子运动性是一种可以用于评估精子功能从而评估受精潜力的功能。精子的运动性表示为运动精子的总百分比、前向运动精子(向前游动)的总百分比，或前向运动精子的速度。这些测量可以通过各种测定来进行，但以两种方式之一便利地测定。当将精子放置在血细胞计数器中或显微镜载玻片上时，使用相差显微镜进行主观视觉测定，或者使用计算机辅助精液分析仪。在相差显微镜检查下，进行运动精子和总精子计数，并且将速度评估为
快速、中等或慢速。更具体的精子运动性是运动性等级，其中精子的运动性被分成四个不同的等级(cooper等人,human reprod.update 16:231,2010，将其通过引用以其全文并入)。a级是指具有前向运动性的精子，其是最强的，并且在直线上游动最快。b级是指具有非线性运动性的精子；其向前移动，但倾向于以更曲线或弯曲的运动行进。c级精子具有非前向运动性，因为尽管有尾部运动，但它们不会向前移动。d级精子是不运动的。使用计算机辅助精液分析仪(如ivos hamilton thorne，马萨诸塞州的贝弗利)，客观地确定样品中个体精子细胞的运动性特征(hum.reprod.13:142,1998)。简而言之，将精子样品放置在为分析仪设计的载玻片或腔室上。分析仪跟踪个体精子细胞并确定精子的运动性和速度。数据可以表示为总运动性的百分比，还获得了路径速度和轨道速率的测量。已知精子的速度经常受到介质粘度的影响，并且与该介质的毒理学是分开的，如j elgeti等人,biophys j 99(2010):1018
‑
1026中所述，将其通过引用以其全文特此并入。
[0166]
人类精子存活测定典型地用于人类体外受精(ivf)项目，如c de jonge等人,j androl 24(2003):16
‑
18和a hossain等人,adv urol 2010(2010):136898中所述，将其各自通过引用以其全文特此并入。它还被提议作为任何局部产品的敏感细胞毒性测定，因为精子在其他细胞单层类型之前显示出损伤。该测试需要用10％的产品进行24小时的精子悬浮培养，并在气候控制的环境中评估培养结束时精子的运动百分比、前向运动性和/或总运动性。也可以用公牛精子重复该测试，以用于控制个体精子样品的效果。在某些实施方案中，与对照相比，如果对受试者施用本公开的组合物不会导致精子存活降低大于约0.5％、大于约1％、大于约2％、大于约3％、大于约4％、大于约5％、大于约6％、大于约7％、大于约8％、大于约9％、大于约10％、大于约11％、大于约12％、大于约13％、大于约14％、大于约15％或大于20％，则认为这些组合物对精子没有毒性。
[0167]
可以使用几种不同的方法来测量精子活力。举例来说，这些方法中的两种用膜排除染色剂染色并测量atp水平。简而言之，将精子样品与可行的染料(如hoechst 33258或曙红
‑
苯胺黑染色剂)一起孵育。将细胞放置在血细胞计数器中，并用显微镜检查。细胞膜破裂的死精子被这些染料染色。将未染色的细胞数量除以计数的细胞总数量，以得出活细胞百分比。精子样品中的atp水平通过溶解精子并将溶解物与荧光素酶孵育来测量，荧光素酶是一种从萤火虫中获得的酶，其在atp存在下发荧光。在光度计中测量荧光。将样品中的荧光量与标准曲线中的荧光量进行比较，允许确定样品中存在的活精子的数量。
[0168]
精子的膜完整性典型地通过低渗透膨胀测试来测定，该测试测量精子在暴露于非等渗环境时泵送水或盐的能力。简而言之，在低渗透膨胀测试中，将精子悬浮在75mm果糖和25mm柠檬酸钠的溶液中，这是一种低渗透(150mosm)溶液。具有完整、健康膜的精子将盐泵出细胞，从而导致膜随着细胞变小而收缩。精子尾部在这层更紧的膜内卷曲。因此，尾部卷曲的精子被视为活的、健康的精子，具有正常的膜。当与存在的精子总数进行比较时，可以确定功能性精子的百分比。
[0169]
膜完整性的程度优选地通过脂质过氧化(lpo)测量来确定，该测量评估由处理过程中释放的自由基产生的精子膜损伤。脂质膜过氧化是通过将精子与硫酸亚铁和抗坏血酸在37℃水浴中孵育1小时来测定的。用冰冷的三氯乙酸沉淀蛋白质。通过离心收集上清液，并通过用硫代巴比妥酸和naoh煮沸进行反应。与mda标准相比，通过测量534nm处的吸光度来量化所得丙二醛(mda)的形成(bell等人,j.andrology 14:472,l993，将其通过引用以其
全文并入本文)。lpo表示为nm mda/108个精子。如果暴露导致lpo产生减少，则本公开的组合物对精子具有稳定作用。
[0170]
染色质dna的稳定性使用精子染色质结构测定(scsa)来测定。精子细胞对氧化应激非常敏感，从而导致精子染色质(dna)损伤(whittington等人,int.j.andrology 22:236,1999；pasqualotto等人,fertility and sterility 73:459,2000；kodama等人,fertility and sterility 68:519,1997，将其各自通过引用以其全文并入本文)。这种损伤在精子细胞中可能很严重，因为它们几乎不包含发生后修复dna损伤的机制。精子染色质测定是基于吖啶橙染色对单链和双链dna的异染性染色(evenson等人,human reprod.14:1039,1999；evenson等人,j.andrology 23:25,2002，将其各自通过引用以其全文并入)。用氩激光激发使插入双链dna的吖啶橙发出绿色荧光，而红色荧光是由单链dna发出的。样品中的dna变性程度表示为α，并通过式α＝红色/(红色 绿色)计算。终点测量是dna碎片指数(dfi)。<15％dfi的dfi指示优异至良好的精子dna完整性。将新鲜精子样品在测试组合物存在下孵育一段时间，快速冷冻，随后测定dna断裂(参见例如，evenson等人,j.androl.23:25,2002，将其通过引用以其全文并入本文)。用于染色质dna稳定性的其他dna测定包括末端脱氧核苷酸转移酶介导的荧光素
‑
dutp缺口末端标记(tunel)测试；comet测定和精子染色质分散，如d evenson,anim reprod sci 169(2016):56
‑
75中所公开，将其通过引用以其全文特此并入。
[0171]
体外受精率是通过测量动物模型(如牛或鼠模型)中卵母细胞体外受精的百分比来确定的。例如，将成熟的牛卵母细胞在m199培养基中加7.5％胎牛血清和50μg/ml促黄体激素体外培养22小时。在培养4小时后，通过添加10iu的肝素对精子进行化学获能，并与牛卵母细胞孵育24小时。在孵育结束时，将卵母细胞用醋酸地衣红染色剂或等同形式染色，以确定受精的卵母细胞百分比。可替代地，可以将受精的卵母细胞在培养中放置2天，在此期间发生分裂，并计数分裂胚胎(即，2个或更多个细胞)的数量。
[0172]
精子培养中的存活时间(失去运动性的时间)是建立精子功能的另一种方便的方法。简而言之，将等份的精子放置在ph 7.4的培养基(如tyrode培养基)中，并在37℃，5％co2下，在潮湿的气氛中孵育。以定时间隔(例如每2小时)，培养物中运动精子的百分比通过使用倒置显微镜或计算机辅助精子分析仪的视觉分析来确定。作为终点，当少于5％的细胞具有前向运动性时，精子样品被认为不再具有活性。
[0173]
精子功能的另一个参数是精子向上游入宫颈粘液柱或代用品中的能力(在ola等人,hum.reprod.18:1037
‑
1046,2003中综述，将其通过引用以其全文并入)。这种宫颈粘液渗透测试可以在体外或体内进行。将精子放置在轨道的一端，并且在给定的时间段后，确定精子已渗透到粘液中的距离。宫颈粘液渗透研究为用于生殖目的的装置提供有价值的生物相容性数据。牛宫颈粘液渗透研究是一项评估精子渗透到宫颈粘液中的优异的体外测定。bergman等人(fertility and sterility 36:363
‑
367,1981，将其通过引用以其全文并入本文)发现，由于人类和牛宫颈粘液的流变学和生物物理学组成相似，因此精子渗透到冷冻的牛宫颈粘液和新鲜的人类宫颈粘液中之间具有极好的相关性(r＝0.98)(bergman等人,fertil.steril.36:363
‑
367,1981；keel等人,arch.androl.44:109
‑
115,2000，将其各自通过引用以其全文并入本文)。这些测定可以用于评估本公开各方面(如涂抹器、组合物和试剂盒)的细胞毒性，方法是将实施方案(例如涂抹器)在含有组合物(例如按溶液体积计的
10％的组合物)、宫颈粘液和精子溶液的混合物的容器中孵育，以确定来自该装置的浸出产物对精子渗透到宫颈粘液中的毒性。精子渗透的毒性也可以通过以下来测量：将本公开的组合物放置在涂抹器(例如，如本文所述的涂抹器)中，并用该涂抹器孵育组合物一段设定的时间(例如多于10min、多于20min、多于25min、30min)，然后将孵育的组合物与宫颈粘液和精子混合，以形成溶液。此溶液可以用于评估随后精子渗透到粘液中，以确定精子暴露于组合物的影响和/或鉴定从涂抹器进入组合物中的任何浸出化学物质的存在。在某些实施方案中，如果精子渗透的减少不大于约0.5％、大于约1％、大于约2％、大于约3％、大于约4％、大于约5％、大于约6％、大于约7％、大于约8％、大于约9％、大于约10％、大于约11％、大于约12％、大于约13％、大于约14％、大于约15％的对照，则本公开的组合物对精子没有毒性。
[0174]
可替代地，可以在女性体内测量精子对粘液的渗透。在性交后的不同时间，取出宫颈粘液样品，并用显微镜检查样品中存在的精子数量。在性交后测试中，如果在暴露于本公开组合物后的粘液样品中比在暴露于对照润滑剂后的患者粘液样品中看到更多速度更快的精子，则建立了改善的精子功能。
[0175]
精子功能潜力的其他测定包括精子渗透和半透明带测定。在精子渗透测定中，测量精子渗透到卵母细胞中的能力。简而言之，使用可商业获得的无透明带仓鼠卵母细胞(embryotech laboratories，马萨诸塞州的黑弗里尔)。仓鼠卵母细胞在此测定中适用于任何物种的精子。将获能精子(如用牛血清白蛋白培养18小时的那些)用仓鼠卵母细胞孵育3小时。在孵育后，将卵母细胞用乙酰唑胺或等同染色剂染色，并用显微镜计数渗透每个卵母细胞的精子数量。半透明带测定测量精子获能和与卵母细胞结合的能力。简而言之，在此测定中，活的正常精子在含有牛血清白蛋白的培养基中孵育，这触发了获能。然后将精子与死亡的卵母细胞一起孵育，这些死亡的卵母细胞被透明带(卵母细胞的无细胞涂层)包围。获能精子与透明带结合，并用显微镜计数结合精子的数量。
[0176]
在某些实施方案中，与暴露于对照介质的精子相比，如果在暴露于本公开组合物的10％溶液后，精子保持至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的运动性，则该组合物对精子无毒。
[0177]
在某些实施方案中，本公开的局部、等渗组合物：(i)对泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器粘膜或皮肤无刺激性；(ii)不促进泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的致病菌生长；(iii)不使生殖器区域的健康微生物群减少多于约25％；(iv)不破坏或减少由泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器粘膜或皮肤产生的粘蛋白；(v)不会导致泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器粘膜和/或皮肤生殖器组织的炎症增加多于约20％；(vi)不破坏生殖器流体功能；(vii)对精子无毒；(viv)对生殖器组织中发现的乳杆菌物种的生长具有益生作用；(viv)将阴道、细菌、真菌或病毒感染率降低5％或更多；或其任何组合。
[0178]
使用的方法
[0179]
生殖器微生物群的破坏可能导致生殖器不适、气味、灼热、性交困难、疤痕、刺激、炎症、感染、不孕症、不良生殖结局的问题，并增加自身免疫性疾病、性传播感染、癌症和/或痴呆的风险。生殖器微生物群的破坏可能由多种因素引起，包括疾病(例如，糖尿病)；硬化性苔藓；自身免疫性疾病，如银屑病；间质性膀胱炎；激素变化(例如，怀孕、青春期、产后、绝经期、男性更年期)；尿失禁；生育力治疗；性别再分配疗法(例如，激素替代疗法和/或变性
手术)；性启蒙和引入新的性伴侣；分娩；免疫抑制；癌症疗法；使用碱性肥皂和洗液；或使用刺激性润滑剂、灌洗器、乳液或药物。本公开的局部组合物对泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域和/或生殖器流体具有特异性的ph和等渗性；支持、促进或增强特定的生殖器微生物群；对泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域无刺激性；不破坏正常肛门生殖器粘蛋白的产生；因此，可用于泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的各种应用。
[0180]
不希望受理论束缚，本公开的组合物改善了育龄和绝经后的女性；以及青春期前的女孩的生殖器组织中的乳杆菌优势。定期使用有益的生殖器微生物组还减少病原体、降低阴道ph，和/或提高女性性功能指数得分。这些组合物可以降低阴道感染率和/或泌尿道感染，尤其是在易于加重这些症状的环境中的女性中。需要这些组合物的患者可以是女性，包括处于低资源环境(如军事部署、自然灾害环境)或低收入社区的女性、患有痴呆的老年女性、患有硬化性苔藓的青春期前女孩、患有间质性膀胱炎的女性，以及患有诱发性前庭痛的女性。
[0181]
在大多数实施方案中，提供了在女性周期或生命的不同阶段ph平衡的组合物。例如，对于女性周期或生命的大多数阶段，这些组合物可以具有(例如，4
‑
5、约4.5、约4.8)的酸性ph。在其他实施方案中，这些组合物可以具有更接近中性或碱性ph(例如，约6至约7、约6.5至约6.8、约6.5至约7、约6.7至约6.9、约6.8)，以用于在排卵期间增强生育力。
[0182]
在一个方面，本公开提供了一种使受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域水合或滋润的方法，其包括向该受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域局部施用有效量的本公开的局部、等渗组合物。该方法可以用于使生殖器组织，包括会阴、阴茎或外阴/阴道水合或滋润。阴茎皮肤的刺激和湿润并保护阴茎的健康粘蛋白分泌物的破坏可能会增加干燥、粗糙和炎症，从而导致疼痛和不适。阴道性交将阴茎表面引入非常低的ph环境，可能会刺激阴茎皮肤。类似地，在高ph和高渗精液射精到女性生殖器区域之中/之上后，可能发生外阴周围的阴道皮肤的刺激，从而导致灼热和性交后疼痛。连续冲洗和清洁泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域，特别是用碱性肥皂或洗液，也可能刺激和干燥泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域。通过使泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域水合或滋润并缓冲ph，本公开的局部、等渗组合物可以用于促进、增强、保护肛门生殖器上皮和微生物群。在某些实施方案中，局部、等渗组合物进一步包含另外的治疗剂，如局部疼痛缓解剂。
[0183]
在另一个方面，本公开提供了一种调理受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域皮肤的方法，其包括向该受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域局部施用有效量的本公开的局部、等渗组合物。在更年期和怀孕期间发生的全身雌激素水平的降低可能会导致干燥、薄、脆弱的外阴皮肤和阴道干燥。随着男性年龄的增长，阴茎上皮组织发生的衰老与身体其他部位相似。然而，阴茎中需要高含量的弹性纤维和胶原蛋白，以允许阴茎大小的重复和规则的膨胀和收缩。本公开的局部、等渗组合物可以用于生殖器皮肤和粘膜调理以及生殖器微生物组支持，特别是在衰老的受试者(例如，约50岁或更老、约60岁或更老、约70岁或更老、约80岁或更老、约90岁或更老、约100岁或更老)中或经历绝经期或男性更年期的受试者中。在某些实施方案中，局部、等渗组合物进一步包含另外的治疗剂，如激素、勃起功能障碍治疗或勃起增强药物、早泄药物，或其组合。此外，如硬化性苔藓、糖尿病和自身免疫性疾病的疾病可能使生殖器上皮表面对炎症和刺激产生高度反应。本公开的局部、等渗组合物可以用于患有系统性或局部性上皮疾病的患者的生殖器皮肤和粘膜调理
以及生殖器微生物组支持。
[0184]
在另一个方面，本公开提供了一种润滑受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的方法，其包括向该受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域局部施用有效量的本公开的局部、等渗组合物。在某些实施方案中，泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域是会阴、阴道、外阴、阴蒂、阴茎、阴囊或肛门。局部、等渗组合物可以在性活动之前、期间和/或之后施用至受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域。性活动包括口交、插入性行为(例如，阴道性交、肛门性交)、非插入性行为、生殖器与身体部位(例如，手、脚)的接触、生殖器与物体(例如，性玩具)的接触、手淫、干磨蹭(生殖器摩擦)，或其任何组合。在某些实施方案中，将局部、等渗组合物施用至受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域，以用于性玩具。在另外的实施方案中，作为对泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域施用的替代或补充，将局部、等渗组合物施用至医疗装置、避孕装置或性玩具。例如，在与受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域接触之前，可以将局部、等渗组合物施用至避孕套的内部或外部、性玩具的内部或外部、月经杯的外部、隔膜的外部，或阴道超声或窥镜的外部。在阴道、异性性交过程中，阴茎被引入低ph阴道分泌物。性交经常导致生物失调和厌氧菌产生难闻的胺。大多数商业润滑剂含有刺激性和破坏性成分，如光
‑
氧化油、硅酮和化学物质，并且是高渗的(例如，是生理流体水平的五倍)，当在性活动(如性交或手淫)期间使用时，这些成分可能会进一步刺激泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域。本公开的局部、等渗组合物可以提供泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器润滑和生殖器微生物组支持，而不会刺激受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域。在某些实施方案中，局部、等渗组合物进一步包含另外的治疗剂，如激素、用于治疗阴道萎缩(例如，更年期的泌尿生殖系统综合征)的药物、用于增强性反应(例如，性高潮潜伏期)的药物、勃起功能障碍治疗或勃起增强药物、用于早泄的药物、增强血管舒张的药物、用于预防std的杀微生物剂、化学避孕药，或其组合。
[0185]
因此，在另一个方面，本公开提供了一种清洁受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的方法，其包括向该受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域局部施用有效量的本公开的局部、等渗组合物。使用强碱性肥皂和洗液(ph约8
‑
11)来清洁泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域(例如，阴茎或外阴/阴道)可能会破坏微生物群，从而导致令人不愉快的生殖器气味、刺激和bv。精液、汗液和一些润滑剂还具有碱性ph。许多商业尿布擦拭物具有非常酸性的ph(例如，ph 2.8)或碱性的ph(例如，ph 8)，使用后可以分别降低或升高泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的正常皮肤ph(priestly等人,pediatr.dermatol.13:14,1996)。正常的阴茎皮肤具有约4.5
‑
6的ph。由于微生物群中的乳酸杆菌，外阴/阴道的正常ph通常是酸性的，尽管外阴ph高于阴道ph。然而，女性生殖器区域的ph取决于生命阶段和月经周期阶段而改变。在月经周期的大部分时间里，女性生殖器区域的ph通常为约4.5。然而，在排卵期间，宫颈分泌物在约ph 6至约ph 7下变得更加中性(这有助于精子快速运输通过宫颈)。在怀孕和更年期期间，这些分泌物的ph通常为约5。这些状态容易导致阴道生物失调。绝经后女性的bv发病率高(接近50％)，并且在更年期后，bv发病率随时间推移而增加。暴露于与bv或生物失调相关的碱性ph值可能会破坏生殖器微生物群，从而导致致病菌的生长增加和令人不快的生物胺的产生、阴道症状、性传播疾病和癌症增加。由于内在的生理原因、体重增加或频繁运动，加上阴茎或阴道微生物组不平衡，腹股
沟区域中出汗增加的个体，也可能具有增加的令人不快的生殖器气味，这可能会影响生活质量。此外，由于在包皮穹窿中收集分泌物，因此生殖器气味难闻和生物失调在未经割礼的男性中更显著。本公开的局部组合物是非刺激性的，并且对目标泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域具有特异性的ph和等渗性。
[0186]
在另一个方面，本公开提供了一种减少受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的刺激或炎症的方法，其包括向该受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域局部施用有效量的本公开的局部、等渗组合物。
[0187]
在另一个方面，本公开提供了一种防止宫颈癌的方法，其中将本公开的组合物施用至有需要的受试者。施用这些组合物可以作为有益生殖器微生物群生长的益生元，并增强高危hpv的清除。
[0188]
在另一个方面，本公开提供了一种减少患有绝经后bv、尿失禁、盆底脱垂或其他形式的盆底疾病的老年女性的令人烦恼的阴道症状的方法，其中将本公开的组合物施用至有需要的受试者，包括任选地同时使用阴道栓进行脱垂管理。
[0189]
在另一个方面，本公开提供了一种减少令人烦恼的阴茎皮肤状况的方法，这些状况导致发红、粗糙、结痂、脱皮、瘙痒和气味，其中将本公开的组合物施用至有需要的受试者。
[0190]
在另一个方面，本公开提供了一种通过减少摩擦、刺激、疼痛和性高潮潜伏期来增强性享受和快感的方法，其中将本公开的组合物施用至有需要的受试者。
[0191]
在另一个方面，本公开提供了一种通过增强分娩前母亲阴道中的乳杆菌优势来降低后代1型糖尿病的方法，其中将本公开的组合物施用至有需要的母亲。后代中的疾病(如1型糖尿病)之间的联系与母亲的生殖器微生物组相关，如m.tejesvi等人,sci rep 9(2019):959中所公开，将其通过引入以其全文特此并入，并且特别是关于二元体成员中阴道微生物组与1型糖尿病之间的联系。
[0192]
在另一个方面，本公开提供了一种在性别再分配手术后优化、建立和维持健康微生物组的方法，其包括向有需要的受试者施用本公开的组合物。
[0193]
在又一个方面中，本公开提供了一种支持、增强或促进受试者生殖器微生物群的方法，其包括向该受试者的生殖器区域局部施用有效量的本公开的局部、等渗组合物。在某些实施方案中，局部、等渗组合物是乳杆菌物种生长的益生元。在某些实施方案中，局部、等渗组合物可以进一步包含至少一种益生菌物种(例如，乳杆菌物种)。
[0194]
在又一个方面中，本公开提供了一种系统，用于在整个生殖周期中水合、调理、清洁或润滑性二元体的一个成员或两个成员的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的方法，以便增强生殖结局。在某些实施方案中，性二元体包括至少一个女性。在某些实施方案中，性二元体是异性恋二元体。生殖周期是指产生卵母细胞(卵巢周期)和为妊娠准备子宫(子宫周期)所需的月经周期或激素变化。卵巢周期包括卵泡期(排卵前期)、排卵和黄体期(排卵后期)。子宫周期包括月经、增殖期和分泌期。此系统的实施方案以与阴茎、阴蒂、阴道和/或外阴生态系统、泌尿生殖器生态系统、宫颈流体、精子和精液的健康功能一致的ph和张力，提供泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器的清洁和润滑。该系统可以以与宫颈流体和射精后阴道中精子的健康功能一致的ph和渗透压，提供泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器的清洁和润滑。在周期的非生育期(例如，卵泡期)，性二元体的一个或两个成员使用本公开组
合物的具体实施方案(步骤1)。在某些实施方案中，卵泡期是指从月经周期的第0天直到生育窗口的时间段。这些组合物用于清洁，并作为免洗调理剂来优化健康的生殖器微生物组，并且作为性交润滑剂在性交或性活动之前施加至阴道腔。这些组合物是缓冲的、粘膜粘附的，并且具有约150mosmo/kg的张力和约4.5的ph。然后在生育期使用本公开组合物的其他实施方案(步骤2)。如本文所用，生育窗口或生育期包括在排卵和排卵前约24至约36小时出现的促黄体激素激增。在某些实施方案中，生育期是指排卵前约6天、约5天、约4天、约3天、约2天或约1天至排卵后约24小时或约36小时的一段时间。这些组合物用于清洁，并作为免洗调理剂来增强健康的生殖器微生物组，并且作为性交润滑剂在性交或性活动之前施加至阴道腔。这些组合物具有约240mosmo/kg的张力和约5至约6.8的ph。在某些实施方案中，在阴道的较低ph下，精子功能通过具有增强的抗氧化活性和改善的宫颈粘液质量的组合物来保护，以支持精子快速运输出酸性的阴道环境。在通过比典型宫颈粘液(例如ph 6.8)的ph更低(例如ph＝5)的组合物运输过程中保护射精后精子，可以限制母亲随后的生物失调和bv风险。在某些实施方案中，从排卵后约36小时起，停止使用步骤2的组合物(例如，黄体期)，并使用步骤1的组合物来促进阴道腔回到酸性、低渗环境。在某些实施方案中，生育窗口之外的时间段，包括生育窗口之前、之后或之前和之后两者，被称为非生育期或时间。一些目前的生育润滑剂被设计成在精子通过阴道和宫颈运输到卵子的过程中保护精子。然而，这些产品较高的ph(通常>7)和较高的张力(正常cvf的三倍)可能会破坏健康的阴道清洁和功能，因为它们的用量等于射精的量，从而破坏性交过程中出现的cvf
‑
精液的正常平衡。通常，cvf和精液的混合产生与血液和身体组织的ph和张力几乎完全相匹配的ph和张力。本公开的组合物和系统不会破坏这种良好的平衡，这种平衡可以保护女性免于生物失调，例如，在任何由此产生的怀孕期间。在某些实施方案中，本公开的组合物将阴道中流体(例如，cvf、精液)的性交后混合物调节至约6的ph和约240mosmo/kg的张力。在某些实施方案中，本公开的组合物将阴道中流体(例如，cvf、精液)的性交后混合物调节至4至约6或4.5至约5.5或约5的ph。这些调节可以将环境的张力调节至约240mosmo/kg。典型地，在暴露于组合物的较低ph下30分钟或精子运输通过人类阴道所需的时间内，精子功能得以保持。此类机制在f.nakano,medical express 2(2015):issn 2318
‑
8111中讨论，将其通过引入以其全文特此并入。
[0195]
在某些实施方案中，局部、等渗组合物的ph被配制成与正常、生理生殖器流体ph(例如，cvf、尿道分泌物、精液)相匹配的ph或适合特定使用方法的ph。在某些实施方案中，局部、等渗组合物的ph范围为约3.5至约6.8。在具体实施方案中，局部、等渗组合物的ph是约4.5、5、约5.5、约6.5或约6.8。具有范围为约3.5至约6.8的ph的局部、等渗组合物特别适合施用至年龄为青春期至绝经期/男性更年期(例如，约18岁至约50岁、约18岁至约55岁、约18岁至约60岁)的受试者，或至少一岁的儿童。在某些实施方案中，局部、等渗组合物的ph范围为约5至约8。在具体实施方案中，局部、等渗组合物的ph是约6或约6.8。ph范围为约5至约7的局部、等渗组合物特别适用于施用至年龄为0至约12个月大的婴儿、至少约60岁的老年人、正在积极试图怀孕的育龄(例如，范围为约18岁至约50岁)成人(男性或女性)，或正在积极试图怀孕的异性恋二元体的两个成员。
[0196]
本公开中提供的方法可以用于哺乳动物受试者(例如，牛、犬、猫、马、猪、绵羊、禽类、啮齿动物、兔类动物、山羊、非人类灵长类动物)，优选人类受试者。在某些实施方案中，
该受试者是男性、女性、间性受试者、非二元性别受试者，或任何其他性别名称的受试者。在某些实施方案中，该受试者是婴儿、儿童或成年人。在某些实施方案中，该受试者是试图怀孕的生殖年龄(例如，范围为约18岁至约50岁)的成年男性，或试图怀孕的生殖年龄(例如，范围为约18岁至约50岁)的成年女性。在某些实施方案中，该受试者是绝经期的女性或男性更年期的男性。在某些实施方案中，该受试者是婴儿(年龄为0至约12个月大)、至少1岁大的儿童；范围为约18岁至约50岁、约18至约55岁，或约18至约60岁的成人；或者至少约50岁、至少约55岁、至少约60岁或至少约65岁的老年人。在某些实施方案中，老年人至少约60岁。在某些实施方案中，老年人至少约70岁。在某些实施方案中，老年人至少80岁。
[0197]
在本公开提供的任何实施方案中，局部、等渗组合物可以作为治疗方案的一部分施用至个体受试者，作为治疗方案的一部分施用至非一元性关系(例如，性二元体、性三元体)的成员，或者施用至非性二元体的两个成员。在某些实施方案中，性二元体是同性恋二元体、异性恋二元体或其他性取向二元体。在某些实施方案中，非性二元体是父母
‑
儿童二元体(例如，母亲
‑
儿童或父亲
‑
儿童)、护理者
‑
儿童二元体、护理者
‑
成人患者二元体，或护理者
‑
老年患者二元体。
[0198]
如hhm janneke等人,(2019)doi:10.1111/1471
‑
0528.15870(将其通过引用以其全文特此并入)中所讨论，阴道益生菌通常涉及将乳杆菌菌株直接添加到泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域，但具有包括调节屏障在内的显著缺点。本公开的部分前提是主要集中于为肛门生殖器和/或泌尿生殖器微生物组中的健康生长(例如乳杆菌生长)创造最佳微生物环境的组合物。在一些实施方案中，这些组合物可以用于治疗或预防有需要的受试者中与泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的生物失调相关的疾病、障碍或病症。用于治疗或预防有需要的受试者中与泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的生物失调相关的疾病、障碍或病症的治疗方法可以包括将本公开的组合物(例如，包含乙酸冰片酯、益生元寡糖和金属辅助因子的局部等渗组合物)施用至该受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域。在一些实施方案中，泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域是阴道。在一些实施方案中，该组合物局部施用至阴道。该方法可以进一步包括在应用之前测量阴道的ph(例如，用ph纳米传感器或其他方法)，并施用组合物以影响微生物组环境的ph，以便在生理上优化乳杆菌优势。在各种实施方案中，与泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的生物失调相关的疾病、障碍或病症可以选自糖尿病、硬化性苔藓、尿失禁、诱发性前庭痛、外阴痛、更年期生殖器综合征、间质性膀胱炎、自身免疫性生殖器疾病、性交困难或不孕症。在几个实施方案中，这些组合物可以降低阴道感染率和/或泌尿道感染。在各种实施方案中，与泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的生物失调相关的疾病、障碍或病症可以选自性传播疾病(例如，hpv、hsv、hiv)、宫颈癌、盆底障碍、更年期的泌尿生殖系统综合征、诱发性前庭痛、外阴痛、间质性膀胱炎、自身免疫性生殖器疾病、性交困难、bv或不孕症。在几个实施方案中，这些组合物可以降低阴道感染率和/或泌尿道感染。在几个实施方案中，这些组合物降低高风险hpv的持续性。类似地，肛门微生物组具有一定的耐受性，其中这些组合物可以用于促进其中的健康生长。表面ph和人类直肠粘膜的测量已在体外测量为具有约6.26至约6.98的ph，如n mcneil,gut 28(1987):707
‑
713中所示，将其通过引用以其全文特此并入。直肠已显示具有7.9的较大碱性ph，如w bitterman等人,gastroenterology 53(1967):288
‑
290中所示，将其通过引用以其全文特此并入。在一些实施方案中，用于处理肛门微生物组的组合
物(例如，润滑剂)可以具有约5.5至约8(例如，约5.5至约7、约5.8和约6.2)的ph。
[0199]
在又一个方面中，本公开提供了一种用于从供体二元体成员收集生殖器微生物组的方法，其包括向该供体二元体成员的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域局部施用有效量的本公开的局部、等渗组合物，并从受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域收集该局部、等渗组合物。在某些实施方案中，将局部、等渗组合物收集在容器中。在某些实施方案中，将局部、等渗组合物经由擦拭物、粘合辊、毯状物(blanket)、内衣、尿布、膜或气雾剂施用。在一些实施方案中，将该组合物整合到卫生棉条、阴道环、宫颈杯、隔膜或避孕套中，其中该组合物将在插入泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域时将释放。
[0200]
在某些实施方案中，测定收集的局部、等渗组合物中致病微生物的存在；培养以鉴定和繁殖有益微生物(例如，乳酸杆菌)；或两者。在某些实施方案中，将有益微生物分离并作为益生菌或通过阴道菌群转移添加到单独的本公开的局部、等渗组合物中，以用于施用至接受者二元体成员或其他无关个体。在某些实施方案中，供体二元体成员和接受者二元体成员是性二元体(例如，异性恋二元体、同性恋二元体或其他性取向二元体)的成员。
[0201]
本文所述组合物的单个组分(例如，益生元寡糖、金属辅助因子、乙酸冰片酯、包含乙酸冰片酯的精油)可以用于有需要的受试者的应用。在一些实施方案中，这些单个组分(例如，益生元寡糖、金属辅助因子、乙酸冰片酯、包含乙酸冰片酯的精油)可以用于制备药物(例如，局部组合物、等渗组合物、局部等渗组合物)以治疗有需要的受试者。例如，可以向受试者施用这些单个组分或药物，以便使受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域水合和/或润滑受试者的肛门生殖器区域和/或清洁受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域和/或减少受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的刺激或炎症和/或增强受试者的生殖器微生物群。在某些实施方案中，本文所述的单个组分和组合物可以用于治疗或预防有需要的受试者的生物失调。
[0202]
涂抹器
[0203]
本公开还包括涂抹器，其可以用于施用至受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域(例如，阴道)。如图1所示，涂抹器1包括储存部分2和递送部分14和15。储存部分2包括被配置成容纳组合物(例如，如本文公开用于施加至泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的组合物)的内部贮存器。储存部分2包括带夹持元件5的球状物4和将储存部分2连接到递送部分14的连接器6。连接器部分可以被配置成通过一个或多个可移除的连接器(如两个元件上的螺纹、咬合连接等)连接到递送部分14。当连接时，内部贮存器与递送部分14和15中的内部流动元件流体连通。使用者施加至球状物4上的力导致内部贮存器内的组合物流过递送部分14和15并流出出口孔16。递送部分14具有中心轴线11，递送部分15具有中心轴线10。这两个轴线以例如小于约90
°
或小于约60
°
或小于约45
°
或小于约30
°
或小于约20
°
的角度13相对于彼此成角度。在一些实施方案中，轴线10与轴线11之间的角度可移动，使得它可以由使用者设置。递送元件15的尺寸适于插入使用者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域。例如，递送元件15可以围绕其主轴10大致上为圆柱形，并在出口孔16处包括圆形远端。在一些实施方案中，递送元件15包括止动件17，该止动件向使用者指示装置的最大插入深度。在所描绘的实施方案中，止动件17包括围绕递送元件15周围的两个环形圈，以防止涂抹器进一步插入。在一些实施方案中，递送元件在出口孔16与止动件17之间的长度(即，沿着轴线10的长度)小于约10cm或小于约9cm或小于约8cm或小于约7cm或小于约6cm或小于
约5cm。在一些实施方案中，递送元件15的最大周长小于约8cm或约7cm或约6cm或小于约5cm或小于约4cm或小于约3cm。图2示出了涂抹器1的使用。使用者50用其手51握住储存部分2。由于递送部分中的多个轴线，可以容易地插入递送部分15以将组合物施加至使用者，而递送部分14则不容易。可以看出，将储存在储存部分15中的组合物施加至泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域可以以单手插入泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域进行，而不必脱去衣服或伸展患者的腿。内部贮存器可以容纳一定量的组合物，用于一次使用或多次使用。在一些实施方案中，内部贮存器可以具有5ml至约60ml或约10ml至约50ml或约15ml至约30ml或约20ml至约25ml的容积。
[0204]
涂抹器1可以进一步包括能够指示周围环境ph的传感器。例如，涂抹器可以包括石蕊染料，其在插入后能够可视地显示关于泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域环境的ph信息。在一些实施方案中，涂抹器可以包括纳米传感器60，如在美国专利号10,436,745所公开的纳米传感器，将其通过引用以其全文特此并入，并且特别是关于ph纳米传感器。典型地，纳米传感器能够测量周围环境(例如，肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域)的ph。在测量后，纳米传感器可以能够将ph测量值(例如，用蓝牙、射频识别)与外部装置(如膝上型电脑、平板电脑、计算机、服务器和/或智能电话)进行通信62。纳米传感器可以传输测量的ph值或与ph有关的信息。例如，传感器可以根据使用者设置传输二进制信号和/或三进制信号。外部装置可以被配置成解释、显示和跟踪此类测量。
[0205]
在一些实施方案中，涂抹器可以具有可操作地连接到纳米传感器的显示器61。在所描绘的实施方案中，显示器61示出“ ”符号，表示ph高于某值(在二进制信号设置中)，或高于某范围(在三进制信号设置中)。在一些实施方案中，显示器可以显示从纳米传感器测量的ph。在各种实施方案中，传感器可以显示二进制显示符号(例如，对于低于某一水平如约4.8的ph测量值为“ ”，并且对于高于和/或等于该水平如约4.8的ph测量值为
“‑”
)。在一些实施方案中，显示器可以被配置成显示三元显示符号(例如，如果测量的ph为某个ph或在特定ph范围内，则为“0”，如果ph低于该特定ph或ph范围，则为
“‑”
，并且如果测量的ph高于该特定ph或ph范围，则为“ ”)。在一些实施方案中，显示器被配置成显示三元符号，其中该特定ph范围为约4.5至约5。
[0206]
另一种涂抹器在图3a
‑
c中示出。涂抹器20以储存(图3a)、即将施加(图3b)和处置(图3c)配置示出。涂抹器20包括容器25，如包括由接缝29限定的内部贮存器26的袋子或小袋。该小袋用封闭件28可移除地密封。涂抹器20可以包括用于施加的组合物27，例如像，如本文所公开的组合物。涂抹器部分22(在本文中也称为递送元件)包括止动件23，以及从涂抹器部分22的远端延伸到出口孔33的内部流动室。涂抹器部分22可以包括纳米传感器24。在一些实施方案中，涂抹器部分可以包括能够传输环境的ph信息的测量装置(例如，石蕊试纸)。在储存配置(图3a)中，涂抹器部分22包含在内部贮存器内。可扭转的帽被连接到容器25上的切口30，从而允许在界面31处在储存期间密封涂抹器。在所描绘的实施方案中，帽21被设置在涂抹器部分22的出口孔33的近端。涂抹器部分可以通过例如，在远离内部贮存器26的方向上向帽21施加力，而被强制地从容器25移除。这种力可以破坏帽21与切口30之间的界面31，从而允许涂抹器从内部贮存器26被移除。在一些实施方案中，涂抹器部分22在出口孔33与止动件23之间的长度(即，沿着主轴的长度)小于约10cm或小于约9cm或小于约8cm或小于约7cm或小于约6cm或小于约5cm。在一些实施方案中，涂抹器部分22的最大周长小于
约8cm或约7cm或约6cm或小于约5cm或小于约4cm或小于约3cm。内部贮存器可以容纳一定量的组合物，用于一次使用或多次使用。在一些实施方案中，内部贮存器可以具有5ml至约60ml或约10ml至约50ml或约15ml至约30ml或约20ml至约25ml的容积。
[0207]
在图3b中可以看出，涂抹器可以从容器中拉出，其中止动件23和切口30适于防止涂抹器部分22完全移除，并保持出口孔32与内部贮存器26流体连通。图3b示出了涂抹器20，其中涂抹器部分22从内部贮存器26移除。一旦处于这种配置，可以通过移除帽21，例如通过扭转帽以暴露出口孔32，而将涂抹器20置于施加配置中。在施加配置中，组合物27可以在适当插入后施加至例如，肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域。在一些实施方案中，通过向容器29施加力(例如，通过挤压容器29)，组合物27可以通过出口孔32排出。可以看出，纳米传感器24能够用外部装置连通43。在施加后，可以通过将涂抹器部分22放回到内部贮存器26中并完全密封封闭件28，而将涂抹器20转换成储存模式。在一些实施方案中，纳米传感器24能够与储存和/或处置配置中的外部装置连通。在一些实施方案中，纳米传感器24可以与位于施加部分22上的显示器连通。
[0208]
现在参考图4a和b，涂抹器30包括容器31，该容器包括能够容纳组合物的内部贮存器32。在一些实施方案中，该组合物可以是本公开的组合物。容器31包括具有远端34的支撑件33，该支撑件被配置成以支撑远端35放置在内部贮存器32内。支撑件33内是与内部贮存器32流体连通的流动室，该流动室从远端35延伸至远端37。如图4b所示，可以包括传感器38(例如，纳米传感器38)的具有出口孔37的涂抹器部分36(在本文中也称为递送元件)在尺寸上被配置成放置在容器31上的支撑件33上并可移除地附接在该支撑件上。涂抹器部分36可以被放置并固定在支撑件30上，涂抹器部分36相对于容器31旋转42。涂抹器部分36的这种固定可以经由支撑件30与涂抹器部分36之间的互补螺纹来实现。传感器38可以被配置成将ph信息43传输到外部装置和/或将ph信息发送到显示器44。在一些实施方案中，涂抹器部分36的长度(即，沿着主轴的长度)小于约10cm或小于约9cm或小于约8cm或小于约7cm或小于约6cm或小于约5cm。在一些实施方案中，涂抹器部分36的最大周长小于约8cm或约7cm或约6cm或小于约5cm或小于约4cm或小于约3cm。内部贮存器可以容纳一定量的组合物，用于一次使用或多次使用。在一些实施方案中，内部贮存器可以具有约5ml至约60ml或约10ml至约50ml或约15ml至约30ml或约20ml至约25ml的容积。
[0209]
在一些实施方案中，可以使用阴道或局部膜递送本公开的组合物，其中该组合物能够从膜扩散到其周围环境中。合适的成膜剂包括壳聚糖、羟丙基甲基纤维素和这些聚合物的共混物(例如，使用40％peg 400作为增塑剂)、具有角叉菜胶(κ
‑
、λ
‑
和ι
‑
)的聚合物基质/壳聚糖、果胶和结冷胶、羟丙基纤维素和海藻酸钠作为聚合物以及丙二醇和聚乙二醇
‑
400作为增塑剂、聚乙烯醇、泊洛沙姆407和188、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮k
‑
90、羟丙基甲基纤维素和eudragit聚合物(例如，eudragit rl100)和丙二醇作为增塑剂、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、聚环氧乙烷、甘油、聚(2
‑
噁唑啉)/聚噁唑啉聚合物及其组合。
[0210]
涂抹器(或其任何部分，如容器和/或涂抹器元件)可以由本领域已知的那些材料形成。在一些实施方案中，涂抹器的部分或整个涂抹器可以由低废品率包装材料(如可生物降解的塑料)制成。合适的可生物降解的塑料可以是基于生物的塑料，如聚羟基烷酸酯(pha)、聚乳酸(pla)、淀粉共混物、基于纤维素的塑料、基于木质素的聚合物复合材料，及其
组合。可生物降解的塑料也可以是基于石油的，如聚乙醇酸(pga)、聚丁二酸丁二醇酯(pbs)、聚己内酯(pcl)、聚(乙烯醇)(pva、pvoh)、聚己二酸对苯二甲酸丁二酯(pbat)，及其组合。在一些实施方案中，涂抹器的部分(例如，涂抹器元件)由纸和/或纸板构成。
[0211]
实施例
[0212]
实施例1：发泡洗液和生殖器益生元调理剂
[0213]
鉴定了6名年龄范围为22
‑
60岁的经割礼的白人男性的基线ph水平。
[0214]
选择左肘窝样品作为对照，其中在样品采集前10小时或更长时间内没有受试者淋浴。从这些样品中，发现这些受试者的ph(平均值
±
sd)为4.52
±
0.52。
[0215]
测量了几个位置处的阴茎ph水平。平均ph值为4.96 /
‑
0.52(在背根处)；5.30 /
‑
0.52(围绕龟头冠的周围)；和5.24 /
‑
0.52(在尿道外口上)。在6名男性中，5名男性的阴茎ph在尿道处高于背根处。阴茎ph水平显示出向阴茎远端向前移动的较高ph梯度(p<0.05)，其中龟头、冠沟和尿道外口的ph高于阴茎(和前臂对照)的远端根。每个测量位置处的平均ph值和标准偏差在图5中示出。
[0216]
使用阴茎发泡洗液，随后使用适用于阴茎的免洗调理润滑剂，评估了益生元生殖器护理系统对这些位置处的ph的影响(n＝4)。还测量了领先的商业产品，其含有已知有害健康微生物组物种的成分。特别是将nivea men deep active clean(列出的成分：水、月桂醇聚醚硫酸酯钠、椰油酰胺丙基甜菜碱、丙烯酸酯共聚物、peg
‑
7椰酸甘油酯、香料、木炭粉、peg
‑
200氢化甘油棕榈油酸酯、peg
‑
40氢化蓖麻油、peg
‑
3二硬脂酸酯、edta三钠、氢氧化钠、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、羟苯乙酯)以及随后astroglide润滑剂(列出的成分：纯化水、甘油、丙二醇、聚季铵盐15、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯)与本公开的制剂进行了比较。在这些实验中，测得的阴茎发泡洗液和免洗调理润滑剂的组分在表8中示出。
[0217]
表8
[0218]
[0219][0220]
评估了制剂a发泡洗液和作为免洗调理剂的制剂b对阴茎ph的影响。在基线时以及在用每种产品处理三天后测量阴茎ph。结果在图6中示出。
[0221]
对于所有测量均观察到处理类型对ph值的显著影响(p<0.05)。在尿道外口处，与在基线时和使用益生元制剂a/b后观察到的ph水平相比，妮维雅/艾丝兰(nivea/astroglide)处理3天显著提高了阴茎ph水平(平均值 /
‑
sd)。这些商业产品还强烈地升高了阴茎ph(接近ph 6；p<0.01)，高于在未洗涤的肘前窝对照中发现的ph。
[0222]
阴茎(特别是来自远端部位)的厌氧细菌感染与以下相关：伴侣的阴道感染；以及男性的std和hiv更大风险。升高的阴茎ph水平可能与人类生殖器官的健康微生物物种的减少相关。应用升高皮肤ph的产品往往会破坏皮肤的正常保护性糖萼。其他研究已显示较高的皮肤ph与疾病之间的关联性。可以看出，本公开的组合物具有在其应用后使阴茎ph变化最小化的效果。
[0223]
实例2：制剂
[0224]
已经用如表9(洗液)和表10(调理剂)中所示的组分制备了几种洗涤和调理制剂。
[0225]
表9
[0226]
[0227][0228]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0229]
椰油酰胺丙基甜菜碱的指定重量百分比是来自向每种溶液中添加的36％的椰油酰胺丙基甜菜碱溶液的重量百分比。
[0230]
表10
[0231]
[0232][0233]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0234]
实例3：对绝经后妇女的测量
[0235]
使用纯乙酸冰片酯或在精油中的乙酸冰片酯的本公开的几种阴道洗液和润滑剂配方(制剂b2、制剂d 71519c)，在用于两名均经历激素替代疗法(hrt)的绝经后女性(年龄为59岁和46岁)时，具有显著的令人惊讶的效果：
[0236]
1)与没有处理或用可商业获得的产品(如astroglide、ky和replens)处理相比，提高了性兴奋并减少了性高潮潜伏期；和
[0237]
2)与没有处理或用可商业获得的产品(如astroglide、ky和replens)处理相比的长期润滑、水合和舒适性。
[0238]
如dl rowland等人,j sex med 15(2018):1463
‑
1471、a.huang等人,menopause 17(2010):121
‑
126、e.erekson等人,menopause:the journal of the north american menopause society 20(2013):973
‑
979、b.ettinger,menopause 15(2008):889
‑
889、e.gerstenberger等人,jour of sexual med 7(2010):3096
‑
3103中所公开地测量参数，将其各自通过引用以其全文特此并入。
[0239]
实例4：组合物对小鼠体外受精和胚胎发育(ivf
‑
mea)的影响
[0240]
用表11中示出的组分制备了两种局部等渗组合物。制剂d6具有以重量计为组合物的0.02％的总乙酸冰片酯含量。
[0241]
表11
[0242][0243]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0244]
在体外受精(ivf)培养基中制备了表11中的10％体积/体积浓度的组合物。将小鼠卵母细胞与小鼠精子一起放置在制剂d6中4小时。在37℃和5.0％co2下孵育4小时后，洗涤21个已受精的小鼠卵母细胞，并转移到培养基中，在37℃和5.0％co2下培养96小时。将暴露于10％制剂溶液后的结果与放入精子并在对照培养基中受精4小时的小鼠卵子进行比较。在37℃和5.0％co2下孵育4小时后，洗涤21个已受精的小鼠卵母细胞，并转移到培养基中，在37℃和5.0％co2下培养96小时。使用制剂d6孵育4小时导致83％的卵母细胞受精，而对照组为96％。暴露于d6和对照的100％卵母细胞发育为囊胚。
[0245]
为了被认为是无毒的，制剂组中在4小时内受精的卵母细胞的百分比应当是对照组中发现的受精的卵母细胞的80％或更多，并且制剂组中在96小时发育成扩张囊胚的卵母细胞的百分比必须不少于对照组中发现的发育成扩张囊胚的卵母细胞的80％。10％浓度的4小时暴露测试的结果在表12中示出。可以看出，制剂d6是无毒的。
[0246]
表12
[0247][0248]
实例5：组合物对小鼠胚胎发育(mea)的影响
[0249]
在m2培养基中制备了表11中的10％体积/体积浓度的组合物。在37℃和5.0％co2下，将单细胞小鼠胚胎放置在制剂d6中30分钟，或单独放置在培养基中(对照)。然后将胚胎转移到培养基中，并在37℃和5.0％co2下孵育96小时。将单细胞小鼠胚胎暴露于10％制剂溶液30分钟后的结果与对照培养基中的单细胞小鼠胚胎进行比较。对于对照和测试设置两者，30分钟的孵育导致100％的卵母细胞在24小时内经历分裂，并且100％的卵母细胞在96小时内转化为扩张囊胚。
[0250]
为了被认为是无毒的，制剂组中在96或120小时发育为扩张囊胚的卵母细胞数量必须不少于对照组中发现的数量的80％。10％浓度的4小时暴露测试的结果在表13中示出。可以看出，制剂d6是无毒的。
[0251]
表13
[0252][0253]
实例6：人类精子运动性测量
[0254]
从健康的正常精子供体获得精液样品。在建议的48
‑
96小时禁欲期后，在无润滑剂的情况下通过手淫产生样本，放入无菌塑料容器中。将样本液化，然后在30分钟内处理。通过密度梯度分离将精子从液化精液分开。然后将洗涤的精子重悬于精子洗涤介质中。将制剂d添加到精子样品的等分试样中以实现10％v/v浓度。将来自同一精子样品但不含制剂d6的等分试样用作仅培养基对照。将样品在同一培养箱中于32℃和5％co2下孵育24小时。在暴露于测试项目30分钟后，精子运动性必须≥对照的80％，才被认为是无毒。初始和24小时后的精子运动性测量在表14中示出。
[0255]
表14
[0256] 初始运动性24小时运动性对照97％97％制剂d697％(对照的100％)97％(对照的100％)
[0257]
实例7：牛精子运动性研究
[0258]
汇集了来自2头公牛的商业冷冻保存的精子并用于所有重复试验。将精液吸管(0.5ml)解冻，并使用商业牛精液冷冻培养基将精子浓度调节至1000万个精子/ml。
[0259]
将含有精子的吸管解冻用于研究，其中将它们与具有表15中凝胶组合物之一的10％凝胶处理物混合，并在39℃下于co2培养箱中孵育30分钟。表15中还提供了每种制剂的乙酸冰片酯含量(来自包含乙酸冰片酯的精油)。
[0260]
表15
[0261]
[0262][0263]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0264]
在孵育并彻底混合样品后，使用hamilton thorne ivos分析仪，从计算机辅助精子分析(casa)治疗组中取出重复等分试样。简而言之，对于每次复制，将5μl样品装载到microcell精子计数室上。将casa阶段设定为39℃以进行分析。分析每个样品最少5个视野，以测量精子运动性和浓度。分析包括运动精子％、前向运动精子％，和总运动精子浓度，以及精子运动的许多测量，包括速度和横向头位移。在暴露于测试项目30分钟后，精子运动性参数必须≥对照的80％。
[0265]
通常，80％或更高的运动性被fda视为是可接受的。确定了10和30分钟时运动精子的总百分比以及10和30％时前向运动精子的总百分比。运动精子的总百分比结果在图7a中
示出，并且前向运动精子的总百分比结果在图7b中示出。可以看出，添加ph 4.5或4.8的柠檬酸对精子功能具有显著的负面有害影响。除此之外，所有制剂均支持高水平的精子总运动性和前向运动性，其中一些制剂表现出等于或大于对照的精子功能。
[0266]
还用如表16所示的组分制备了ph为6.8的制剂，并进行了运动性测量。这些组合物的运动性测量结果在图8a和8b中示出。
[0267]
表16
[0268][0269][0270]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0271]
还对表17中示出的组合物进行了运动性测量。
[0272]
表17
[0273][0274]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0275]
测量了表17中公开的组合物对精子运动性的影响，如表18所示。
[0276]
表18
[0277][0278]
实施例8：制剂
[0279]
用如表19所示的组分配制了几种组合物。
[0280]
表19
[0281][0282][0283]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0284]
实例9：润滑剂的安全测试
[0285]
用不同浓度的(
‑
)
‑
乙酸冰片酯制备了润滑剂制剂。这些制剂在表20中示出。
[0286]
表20
[0287][0288][0289]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0290]
在性二元体的性交过程中使用每种润滑剂。除了包含按重量计纯化的0.015％(
‑
)
‑
乙酸冰片酯的组合物有时会导致性二元体成员的短期轻度粘膜刺激之外，未观察到其他不良效应。
[0291]
实例10：组合物的粘液粘附潜力
[0292]
用如表21所示的组分制备了制剂。
[0293]
表21
[0294][0295][0296]
*金属辅助因子(即，氯化镁)的指定重量百分比通过添加适量的金属盐水合物(例如，氯化镁(ii)四水合物)来实现。
[0297]
使用天然猪胃粘蛋白溶液在体外确定了该制剂和两种竞争性产品的粘膜粘附性潜力。胃粘蛋白的特性和行为与来自其他区域的粘膜(如泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的粘膜)相似(如果不相同的话)。当两种组分(一种来源于生物)通过界面力(包括电荷和聚合物链缠结)结合在一起时，就会发生粘膜粘附。粘膜粘附特性可以使每种制剂与阴道表面更好地接触。优异的粘膜粘附潜力表明该组合物能够更好地保留在阴道中，从而有助于补充阴道分泌物和水分。另外，如果用于具有增加的粘膜粘附潜力的药物递送组合物，则将在停留时间和活性剂递送方面具有优势。
[0298]
通过测量粘蛋白
‑
阴道保湿凝胶溶液中由于协同作用引起的粘度变化，对几种组合物的粘膜粘附水平进行了定量，如d ivarsson等人,colloids and surfaces b 92(2012):353
‑
359中所述，将其通过引用以其全文特此并入，并且特别是关于粘蛋白
‑
阴道保湿凝胶溶液。通过将每种测试组合物与来自猪胃ii型(sigma
‑
aldrich)的8％粘蛋白共混合，评估了组合物的粘膜粘附强度。用0.9％nacl溶液(盐水)制备了粘蛋白溶液。在室温下，
将8％粘蛋白溶液与测试润滑剂(表21的replens、rephresh、pl1116ssb制剂)之一混合，以提供最终浓度为25％(wt/wt)的凝胶/粘蛋白溶液。replens润滑剂包含聚卡波非、矿物油、氢化棕榈油甘油酯、甘油、b型卡波姆均聚物、氢氧化钠和山梨酸，并具有2.95的ph。rephresh润滑剂包含纯化水usp、甘油、聚卡波非、carbopol 974p、尼泊金乙酯钠、尼泊金甲酯钠、尼泊金丙酯钠和氢氧化钠，并具有3.46的ph。通过测量润滑剂/粘蛋白溶液的1ml液滴在取向为45
°
的未涂布纸板表面上行进90mm所需的时间，将8％纯粘蛋白溶液的相对粘度与三种所得粘蛋白
‑
凝胶溶液的相对粘度进行了比较。一式两份地进行了该实验。
[0299]
粘膜粘附因凝胶类型而异。rephresh显示无粘膜粘附，表现为与对照相比溶液粘度无变化(p＝0.92)。与对照相比，replens显示行进90mm所需时间的小幅但显著(p＝0.04)增加大约2.75倍(5.5秒相比于2秒)。相比之下，与对照相比，本公开的pl1116ssb制剂显示出相对粘度增加8.5倍(p<0.001)(17秒相比于2秒)。表明本公开的组合物具有高的粘膜粘附潜力(参见图9)。不能基于净凝胶的粘度差异来解释粘度差异。replens粘性比pl1116ssb制剂大大约5倍，而rephresh大20倍。
[0300]
具体实施方案
[0301]
以下描述了非限制性的具体实施方案，其中的每一个均被认为在本公开的范围内。
[0302]
具体实施方案1.一种局部、等渗组合物，其包含：
[0303]
(a)益生元寡糖，其量以重量计在组合物的约0.001％至约5％范围；
[0304]
(b)金属辅助因子，其量以重量计在组合物的约0.0001％至约0.1％范围；以及
[0305]
(c)冰片、其药学上可接受的盐，或任何前述物质的前药(例如，酯前药，如乙酸冰片酯)，其量以重量计在组合物的约0.00025％至约0.15％范围；
[0306]
其中该组合物的ph范围为约3.5至约8。
[0307]
具体实施方案2.如具体实施方案1所述的局部、等渗组合物，其中该益生元寡糖包括棉子糖、乳果糖、海藻糖、低聚半乳糖、α
‑
葡聚糖寡糖、β
‑
葡聚糖寡糖、低聚果糖、低聚异麦芽糖、麦芽糖、菊粉、果胶，或其任何组合。
[0308]
具体实施方案3.如具体实施方案1或2所述的局部、等渗组合物，其中该金属辅助因子包括锌、硒、锰、钴、铁、铜，或其任何组合。
[0309]
具体实施方案4.如具体实施方案1
‑
3中任一项所述的局部、等渗组合物，其中该组合物包含乙酸冰片酯，其量以重量计在组合物的约0.00025％至约0.15％范围。
[0310]
具体实施方案5.如权利要求4所述的局部、等渗组合物，其中该组合物包含约0.005％至约0.5％的精油，该精油包含以精油重量计的所述乙酸冰片酯。
[0311]
具体实施方案6.根据具体实施方案1
‑
5中任一项所述的局部组合物，其中包含乙酸冰片酯的精油包括来自以下的精油：欧刺柏、火云刺柏、洛基山圆柏、西伯利亚冷杉、欧洲冷杉、香脂冷杉、弗雷泽冷杉、大冷杉、西藏冷杉、朝鲜冷杉、壮丽冷衫、高加索冷杉、红冷杉、西班牙冷杉、落矶山冷杉、科罗拉多冷杉、花旗松、迷迭香、三裂叶豚草、矮赤松、罗马尼亚一枝黄花、黑果茶藨、月桂，或其任何组合。
[0312]
具体实施方案7.如具体实施方案1
‑
6中任一项所述的局部等渗组合物，其进一步包含倍半萜烯醇和/或单环倍半萜烯。
[0313]
具体实施方案8.根据具体实施方案7所述的局部等渗组合物，其中该倍半萜烯醇
或单环倍半萜烯包含橙花叔醇，一种来自citrus aurantum(例如，苦橙树(citrus aurantiumvar.amata))和/或热带野生柑橘(citrus bigaradia)、没药醇、广藿香醇、α
‑
檀香醇、姜烯或其组合的精油。
[0314]
具体实施方案9.如具体实施方案8所述的局部、等渗组合物，其中组合物包含没药烯，其量以重量计在组合物的约0.0001％至约0.1％范围。
[0315]
具体实施方案10.如具体实施方案1
‑
9中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一步包含类黄酮，其量以重量计在组合物的约0.001％至约0.1％范围。
[0316]
具体实施方案11.如具体实施方案10所述的局部、等渗组合物，其中该类黄酮包括儿茶素、表儿茶素、芦丁、木犀草素、芹菜素、山奈酚、杨梅素、槲皮素、槲皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮素、橙皮苷、花旗松素、染料木苷、染料木黄酮、大豆苷元、矢车菊素、芹菜定、柑橘黄酮、非瑟酮、高良姜素、异鼠李素、藿香黄酮醇、甲基鼠李素、吡喃并黄酮醇、氟烷代黄酮醇、圣草酚、高圣草素、花旗松素、没食子儿茶素、儿茶素3
‑
没食子酸酯、没食子儿茶素3
‑
没食子酸酯、表没食子儿茶素、表儿茶素3
‑
没食子酸酯、表没食子儿茶素3
‑
没食子酸酯、茶黄素、茶红素、原花色素、飞燕草素、锦葵色素、天竺葵色素、芍药素、牵牛花色素、异黄酮、黄豆黄素、异黄烷、异黄烷二醇、异黄烯、香豆素、紫檀素、杨梅苷、根皮苷，或其任何组合。
[0317]
具体实施方案12.如具体实施方案1
‑
11中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一步包含生物膜抑制剂，其量以重量计在组合物的约0.001％至约0.16％范围。
[0318]
具体实施方案13.如具体实施方案12所述的局部、等渗组合物，其中该生物膜抑制剂包含唇形科精油、藤黄属提取物、东革阿里提取物，或其任何组合。
[0319]
具体实施方案14.如具体实施方案13所述的局部、等渗组合物，其中该唇形科精油包括来自以下的精油：留兰香、唇萼薄荷、辣薄荷、水薄荷、野薄荷、假薄荷、澳洲薄荷、加拿大薄荷、哈特普列薄荷、柠檬薄荷、皱叶薄荷、兴安薄荷、纤悉薄荷、森林薄荷、欧洲薄荷、科西嘉薄荷、花园薄荷、东北薄荷、花叶薄荷、灰薄荷、香蜂花、美国薄荷，或其任何组合。
[0320]
具体实施方案15.如具体实施方案13或14所述的局部、等渗组合物，其中该藤黄属提取物包括来自以下的提取物：山竹、garcinia travancorica、藤黄果、可乐藤黄、锡兰藤黄、大叶藤黄，或其任何组合。
[0321]
具体实施方案16.如具体实施方案13所述的局部、等渗组合物，其中该藤黄属提取物包括选自y
‑
倒捻子素、藤黄酮
‑
d、藤黄苷和smeathxanthone的氧杂蒽酮。
[0322]
具体实施方案17.如具体实施方案1
‑
16中任一项所述的局部等渗组合物，其中该组合物进一步包含益生元香料提取物，其量以重量计在组合物的约0.001％至约0.02％范围。
[0323]
具体实施方案18.如具体实施方案17所述的局部、等渗组合物，其中该益生元香料提取物包括来自以下的提取物：姜、黑胡椒、辣椒、肉桂、牛至、迷迭香、姜黄，或其任何组合。
[0324]
具体实施方案19.如具体实施方案1
‑
18中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一步包含植物甾醇，其量以重量计在组合物的约0.001％至约0.1％范围。
[0325]
具体实施方案20.如具体实施方案19所述的局部、等渗组合物，其中该植物甾醇包括芹菜素、β
‑
谷甾醇、菜油甾醇、菜子甾醇、豆甾醇、谷甾醇，或其任何组合。
[0326]
具体实施方案21.如具体实施方案1
‑
20中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一步包含增粘剂，其量以重量计在组合物的约0.1％至约10％范围。
[0327]
具体实施方案22.如具体实施方案21所述的局部、等渗组合物，其中该粘度增强剂包括瓜尔胶、甲基纤维素、乙基纤维素、乙基甲基纤维素、乙基羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)、羟乙基纤维素、十六烷基羟乙基纤维素、羟丙基瓜耳胶糖胺聚糖(例如，透明质酸)、离子三嵌段共聚物如泊咯沙姆、明胶、藻酸盐、角叉菜胶和琼脂，或其任何组合。
[0328]
具体实施方案23.如具体实施方案1
‑
22中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一步包含ph调整剂，其量以重量计在组合物的约0.01％至约1％范围。
[0329]
具体实施方案24.如具体实施方案23所述的局部、等渗组合物，其中该ph调整剂包括柠檬酸、乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、己酸、草酸、马来酸、苯甲酸、碳酸、氨、碳酸铵、二乙醇胺、单乙醇胺、氢氧化钾、磷酸氢二钾、碳酸氢钠、硼酸钠、碳酸钠、氢氧化钠、乳酸钠、磷酸氢二钠、三乙醇胺，或其任何组合。
[0330]
具体实施方案25.如具体实施方案1
‑
24中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一步包含缓冲剂，其量以重量计在组合物的约0.01％至约0.9％范围。
[0331]
具体实施方案26.如具体实施方案25所述的局部、等渗组合物，其中该缓冲剂包含乳酸和乳酸钠、柠檬酸和磷酸二钠、葡萄糖酸内酯、柠檬酸和磷酸一钠，或柠檬酸、磷酸一钠和磷酸二钠。
[0332]
具体实施方案27.如具体实施方案1
‑
26中任一项所述的局部、等渗组合物，其中所述组合物与生殖器皮肤和/或粘膜的生理流体等渗。
[0333]
具体实施方案28.如具体实施方案1
‑
27中任一项所述的局部、等渗组合物，其中所述组合物与生理生殖器皮肤屏障功能等渗。
[0334]
具体实施方案29.如具体实施方案28所述的局部、等渗组合物，其中所述生理生殖器流体选自宫颈
‑
阴道流体、尿道分泌物、精液或耻垢。
[0335]
具体实施方案30.如具体实施方案1
‑
29中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一步包含渗透压调节剂，其中该局部等渗组合物具有约120mosm/kg至约450mosm/kg的渗透压。
[0336]
具体实施方案31.如具体实施方案1
‑
30中任一项所述的局部、等渗组合物，其中该局部等渗组合物具有约150mosm/kg或约240mosm/kg的渗透压。
[0337]
具体实施方案32.如具体实施方案30或31所述的局部、等渗组合物，其中该渗透压调节剂包括葡萄糖、蔗糖、氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸钠、氯化镁、右旋糖、甘露醇或其任何组合。
[0338]
具体实施方案33.如具体实施方案1
‑
32中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一步包含防腐剂，其量以重量计在组合物的约0.001％至约4％范围。
[0339]
具体实施方案34.如具体实施方案33所述的局部、等渗组合物，其中该防腐剂包括辛二醇、蔓越莓提取物、二氯苄醇、葡萄糖酸内酯、绿茶提取物、橄榄苦苷、戊二醇、苯乙醇、石榴提取物、苯甲酸、苄醇、二氢乙酸、乙基己基甘油、乳杆菌发酵产物、戊二醇、山梨酸钾、苯甲酸钠、脱氢醋酸钠、水杨酸钠、苯甲酸钾、丙二醇、白藜芦醇、乙内酰脲，或其任何组合。
[0340]
具体实施方案35.如具体实施方案1
‑
34中任一项所述的局部、等渗组合物，其中该局部、等渗组合物包含以重量计在组合物的约88％至约98％的溶剂，并且该溶剂包含水。
[0341]
具体实施方案36.如具体实施方案1
‑
35中任一项所述的局部、等渗组合物，其进一
步包含药物、肛门生殖器和/或泌尿生殖器益生菌物质，或两者。
[0342]
具体实施方案37.如具体实施方案36所述的局部、等渗组合物，其中该药物是激素、抗病毒剂、抗真菌剂、抗炎剂、抗生素、勃起功能障碍治疗药物、疫苗、更年期的泌尿生殖系统综合征的疗法、用于治疗硬化性苔藓的活性成分、用于治疗间质性膀胱炎的活性成分、用于治疗尿失禁的活性成分，或其任何组合。
[0343]
具体实施方案38.如具体实施方案1
‑
37中任一项所述的局部、等渗组合物，其中该组合物的ph是约3.5至约6.8。
[0344]
具体实施方案39.如具体实施方案38所述的局部、等渗组合物，其中该组合物的ph是约4.5。
[0345]
具体实施方案40.如具体实施方案1
‑
37中任一项所述的局部、等渗组合物，其中该组合物的ph是约6至约8。
[0346]
具体实施方案41.如具体实施方案40所述的局部、等渗组合物，其中该组合物的ph是约6.8。
[0347]
具体实施方案42.如具体实施方案1
‑
41中任一项所述的局部、等渗组合物，其中该组合物：
[0348]
(1)使泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域水合；
[0349]
(2)润滑泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域；
[0350]
(3)清洁泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域；
[0351]
(4)减少泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的刺激和/或炎症；
[0352]
(5)维持和/或支持和/或增强健康的生殖器和生殖道微生物群；
[0353]
(6)支持和/或增强生殖器组织功能；
[0354]
(7)支持和/或增强生殖器流体功能；
[0355]
(8)支持和/或增强精子活力和/或功能；
[0356]
(9)校正和/或恢复最佳的生殖器ph；
[0357]
(10)减少令人烦恼的生殖器症状；
[0358]
或其任何组合。
[0359]
具体实施方案43.如具体实施方案1
‑
42中任一项所述的局部、等渗组合物，其中该组合物配制成液体、半固体、凝胶、胶状物、膜、泡沫、乳膏、灌洗剂、软膏、乳液、喷雾剂、悬浮液、乳液、气雾剂、栓剂、颗粒悬浮液、胶囊、肥皂、悬浮液、乳液、栓剂或糊剂。
[0360]
具体实施方案44.一种使受试者的肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域水合的方法，其包括向该受试者的肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域局部施用有效量的如具体实施方案1
‑
43中任一项所述的局部、等渗组合物。
[0361]
具体实施方案45.一种润滑受试者的肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域的方法，其包括向该受试者的肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域局部施用有效量的如具体实施方案1
‑
43中任一项所述的局部、等渗组合物。
[0362]
具体实施方案46.一种清洁受试者的肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域的方法，其包括向该受试者的肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域局部施用有效量的如具体实施方案1
‑
43中任一项所述的局部、等渗组合物。
[0363]
具体实施方案47.一种减少受试者的肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域的刺激或
炎症的方法，其包括向该受试者的肛门生殖器和/或泌尿生殖器区域局部施用有效量的如具体实施方案1
‑
43中任一项所述的局部、等渗组合物。
[0364]
具体实施方案48.一种增强受试者的生殖器微生物群(例如，有益的生殖器微生物群，如乳杆菌物种)的方法(例如益生元)，其包括向该受试者的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域局部施用有效量的如具体实施方案1
‑
43中任一项所述的局部、等渗组合物。
[0365]
具体实施方案49.如具体实施方案44
‑
48中任一项所述的方法，其中该受试者是人类男性。
[0366]
具体实施方案50.如具体实施方案44
‑
48中任一项所述的方法，其中该受试者是人类女性。
[0367]
具体实施方案51.如具体实施方案44
‑
48中任一项所述的方法，其中该受试者是间性个体或非二元性别个体。
[0368]
具体实施方案52.如具体实施方案44
‑
48中任一项所述的方法，其中该受试者正在经历性别再分配和/或已经历性别再分配。
[0369]
具体实施方案53.如具体实施方案44
‑
48中任一项所述的方法，其中所述应用发生在该受试者手淫期间。
[0370]
具体实施方案54.如具体实施方案44
‑
53中任一项所述的方法，其中该局部、等渗组合物具有约3.5至约6.8的ph，并且该受试者是约12岁或以上的人类成人。
[0371]
具体实施方案55.如具体实施方案54所述的方法，其中该人类成人是非一元性关系的成员。
[0372]
具体实施方案56.如具体实施方案55所述的方法，其中该非一元性关系包括性二元体或性三元体。
[0373]
具体实施方案57.如具体实施方案56所述的方法，其中将该局部、等渗组合物施用至性二元体的两个成员，并且其中该性二元体的两个成员均处于青春期或更年长。
[0374]
具体实施方案58.如具体实施方案48
‑
57中任一项所述的方法，其中该局部、等渗组合物在性活动之前、期间或之后施用。
[0375]
具体实施方案59.如具体实施方案48
‑
58中任一项所述的方法，其中该局部、等渗组合物具有约6至约8的ph，并且该受试者是0至约12个月龄的婴儿、约18岁至约50岁正在积极试图怀孕的成年人，或至少约60岁的老年人。
[0376]
具体实施方案60.如具体实施方案59所述的方法，其中该受试者是约18岁至约50岁正在积极试图怀孕的成年人，高于50岁(例如，高于60岁、高于70岁、高于80岁、高于90岁、高于100岁)，并且是非一元性关系的成员。
[0377]
具体实施方案61.如具体实施方案60所述的方法，其中该非一元性关系包括性二元体或性三元体。
[0378]
具体实施方案62.如具体实施方案61所述的方法，其中将该局部、等渗组合物施用至性二元体的两个成员。
[0379]
具体实施方案63.如具体实施方案59
‑
62中任一项所述的方法，其中该局部、等渗组合物在性活动之前、期间或之后施用。
[0380]
具体实施方案64.如具体实施方案1
‑
40中任一项所述的局部、等渗组合物，其中该组合物经由滚球、擦拭物、毯状物、内衣、气雾剂、膜或尿布施用。
[0381]
具体实施方案65.一种用于植入和/或插入受试者的肛门生殖器区域和/或泌尿生殖器区域的装置；其中该装置被配置成释放根据权利要求1
‑
40中任一项所述的组合物；并且所述装置是卫生棉条、阴道环、宫颈杯、隔膜或避孕套。
[0382]
具体实施方案66.一种水合、调理、清洁或润滑性二元体的两个成员的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域的方法，其中该性二元体包括至少一个女性受试者，该方法包括：
[0383]
(a)在女性受试者的非生育期期间，将有效量的如具体实施方案1
‑
43中任一项所述的局部、等渗组合物施用至性二元体的两个成员的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域，其中在非生育期期间施用的该局部、等渗组合物具有约4.5的ph和约150mosm/kg的张力。
[0384]
(b)在女性受试者的生育期期间，将有效量的如具体实施方案1
‑
43中任一项所述的局部、等渗组合物施用至性二元体的两个成员的泌尿生殖器区域和/或肛门生殖器区域，其中在生育期期间施用的该局部、等渗组合物具有约6.8的ph和约240mosm/kg的张力。
[0385]
具体实施方案67.如具体实施方案66所述的方法，其中该性二元体是异性恋二元体。
[0386]
具体实施方案68.如具体实施方案66或67所述的方法，其中该性二元体的两个成员为约18至约50岁，并正在试图怀孕。
[0387]
上述不同的实施方案可以组合以提供另外的实施方案。将在本说明书中引用的和/或在申请数据表中列举的所有美国专利、美国专利申请公开案、美国专利申请、外国专利、外国专利申请和非专利公开案通过引用以其全文并入本文。如果必要的话，可以修改实施方案的方面，以采用不同专利、申请和公开的概念以提供又另外的实施方案。
[0388]
根据上文详细说明，可以对实施方案作出这些和其他改变。总体上，在以下权利要求书中，所使用的术语不应解读为将权利要求书限制为说明书和权利要求书中公开的具体实施方案，而应解读为包括所有可能的实施方案连同这些权利要求所享有的等效权利的全部范围。因此，权利要求书不受本公开文本的限制。