一株具有溶磷功能的甲基杆菌H41在防治柑橘胶孢炭疽菌上的应用的制作方法

本发明涉及农业微生物，特别涉及一株具有溶磷功能的甲基杆菌h41在防治柑橘胶孢炭疽菌上的应用。

背景技术：

1、柑橘（

citrus spp.）是全球种植面积最广、产量最高的水果作物之一，在农业生产和国际贸易中占有举足轻重的地位。根据联合国粮食及农业组织的统计，2021年全球柑橘种植面积约为1020万公顷，年产量达到1.58亿吨。柑橘果实富含维生素c、类黄酮、类胡萝卜素及多种有机酸，风味独特，在增强机体免疫力、抗氧化等方面具有重要的营养与保健价值。然而，柑橘在生产过程中极易受到多种病害的威胁，其中由柑橘胶炭疽菌（

colletotrichum gloeosporioides）引起的柑橘炭疽病分布广泛、危害严重。该病原菌可侵染叶片、枝梢、花器和果实，导致落叶、枯梢、落果及采后腐烂，在高温多湿条件下迅速流行，一般年份可造成10%~30%的产量损失，病害大发生时减产可达50%~80%，甚至局部绝收。

2、长期以来，对于柑橘胶炭疽菌的防治主要依赖化学农药，如苯并咪唑类、甾醇脱甲基抑制剂类杀菌剂等。化学防治虽然见效较快，但长期大量使用会导致病原菌抗药性增强、防治效果逐年下降；同时，化学农药在果实和土壤中的残留会引发食品安全隐患与环境污染，并破坏果园微生态平衡，杀伤天敌和有益微生物。在农业绿色可持续发展的需求驱动下，利用微生物资源防治作物病害成为一条极具前景的替代途径。微生物，特别是与植物长期共生的内生菌，能够定殖于植物组织内部，通过产生抗菌活性物质、竞争生态位、诱导植物系统抗性等机制抵御病原菌的侵染；同时，这些有益内生菌还能通过分泌铁载体、吲哚乙酸（iaa）、溶解土壤中难溶性磷等途径直接或间接促进植物生长，提升作物综合抗逆能力和产量品质。

3、随着微生物菌剂在市场上的推广应用不断深入，现有产品菌种同质化严重、田间效果稳定性差的问题日益突出，导致实际使用效果往往不尽如人意。在此背景下，从特殊生境中挖掘兼具高效抗病活性和稳定促生功能的新微生物资源，成为突破当前技术瓶颈、开发差异化微生物新产品的关键。

技术实现思路

1、本发明提供了一株具有溶磷功能的甲基杆菌h41在防治柑橘胶孢炭疽菌上的应用，为防治柑橘胶孢炭疽菌提供微生物菌种新资源。

2、本发明的第一个目的是提供一株分离于沃柑叶片的内生菌甲基杆菌（

methylobacterium sp.）h41，该菌株于2026年7月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（gdmcc），地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为gdmcc no:68731。

3、所述的甲基杆菌h41的鉴定特征：菌株h41为革兰氏阴性菌，在r2a培养基上单菌落近圆形、粉红色、表面有光泽、边缘整齐。菌株h41的16s rrna基因序列长度1385 bp，通过序列比对分析，该菌株与

methylobacterium phyllostachyos_bl47t具有最大相似性，为96.94%。基于比较基因组的分析结果，菌株h41与刚竹甲基杆菌模式菌种

methylobacterium

phyllostachyos_bl47t的平均核苷酸一致性（ani）为88.33%，数字dna-dna杂交值为37.5%。当两个细菌基因组ani值小于95%时，它们为不同物种。全基因组dna-dna杂交值为70%是原核生物物种划分的金标准。此外，使用ubcg v3.0构建菌株与参考模式菌株的基因组系统发育树结果表明，菌株h41与刚竹甲基杆菌

methylobacterium phyllostachyos bl47t是不同物种。

4、本发明发现菌株h41具有铁载体的能力，其as/ar 值0.8649，属于低产铁载体；菌株h41能矿化难溶性有机磷并具有固氮功能；本发明发现在红江橙叶片接种菌株h41能显著降低柑橘胶孢炭疽菌的发病程度，其抗病效率为41.11%。

5、本发明第二个目的是提供一种微生物制剂，含有上述的甲基杆菌h41的菌体和/或其培养物。

6、优选，所述微生物制剂为微生物肥料。

7、优选，所述培养物包括发酵液、发酵液的上清液等。

8、本发明第三个目的是提供上述甲基杆菌h41或上述微生物制剂在产铁载体中的应用。

9、本发明第四个目的是提供上述甲基杆菌h41或上述微生物制剂在促进土壤磷活化中的应用。

10、优选，所述磷活化包括矿化难溶性有机磷。

11、本发明第五个目的是提供上述甲基杆菌h41或上述微生物制剂在固氮中的应用。

12、本发明第六个目的是提供上述甲基杆菌h41或上述微生物制剂在抑制胶孢炭疽菌（

colletotrichum gloeosporioides）生长和/或防治由胶孢炭疽菌引起的柑橘炭疽病中的应用。

13、本发明第七个目的是提供上述甲基杆菌h41或上述微生物制剂在促进植物生长中的应用。

14、优选，所述植物为番茄。

15、本发明第八个目的是提供一种防治柑橘炭疽病的方法，是将上述甲基杆菌h41或上述微生物制剂施用于柑橘植株或其生长环境。

16、优选，所述的柑橘是红江橙。

17、本发明第九个目的是提供一种促进植物生长的方法，是将上述甲基杆菌h41或上述微生物制剂施用于植物或其生长环境。

18、优选，所述植物为番茄。

19、本发明相对于现有技术具有如下优点：

20、本发明于沃柑健康植株内部分离获得的一株内生细菌h41，其不同于刚竹甲基杆菌

methylobacterium phyllostachyos bl47t，经鉴定为甲基杆菌

methylobacterium sp.h41。该菌株对柑橘胶炭疽菌具有显著的拮抗作用（抗病效率高达41.11%），并表现出良好的产铁载体、固氮和溶磷能力，是一种兼具病害防治与植物生长促进功能的新微生物资源，在制备作物微生物肥料和微生物制剂等方面具有广阔的应用前景。将

methylobacterium sp.h41应用于柑橘胶炭疽菌的防治，能够有效弥补现有微生物菌剂产品同质化和效果不稳定的不足，为柑橘炭疽病绿色防控提供重要的物质基础。

21、

methylobacterium sp.h41，该菌株于2026年7月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（gdmcc），地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为gdmcc no:68731。